红掌组织培养研究

江苏农业科学２００９年第２期一６７一红掌组织培养研究束晓春，彭峰，李乃伟，何树兰，夏冰（江苏省中国科学院植物研究所，江苏南京２１００１４）

摘要：采用叶柄为外植体，对红掌盆栽品种Ａ＾∞ｍ组织培养的方法进行了研究，结果表明：（１）在春季和秋冬季分别进行初代培养时，诱导培养基中的激素水平不同，春季适宜的激素组合为６一ＢＡ１．Ｏ—１．５ｍｇ／Ｌ＋２，４一Ｄ０．１５—０．２ｍｇ／Ｌ，秋冬季适宜的激素处理为６一ＢＡＩ．Ｏ—１．５Ｉｎｇ／Ｌ＋２，４一ＤＯ．４一Ｏ．５Ｉｎｇ／Ｌ，秋冬季适宜的诱导培养基中２，

４一Ｄ水平比春季的高。（２）愈伤诱导培养的最佳基本培养基和蔗糖浓度分另ｌＪ为１／２Ｍｓ和３０∥Ｌ；光照是该品种红掌愈伤发生的必要条件。（３）外植体取材季节对红掌愈伤组织的分化增殖和试管苗的生根无明显的影响；适宜的愈伤分化和不定芽增殖配方为Ｍｓ＋６一ＢＡＯ．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡｏ．１ｍｇ／Ｌ，适宜的生根配方为Ｍｓ＋ｍＡ１．０Ⅱ∥Ｌ。

关键词：红掌；组织培养；取材季节；初代培养；分化培养；生根培养中图分类号：ｓ６８２．３９０．３６文献标志码：Ａ文章编号：１００２一１３０２ｆ２００９）０２一∞６７—０２

红掌（Ａ眦，Ｉ删啪口ｎ西∞ｏ，ｌ啪）为天南星科花烛属多年生附生常绿草本植物，原产于中南美洲哥伦比亚西南部，佛焰花序，其佛焰花苞硕大肥厚具蜡质色泽，有红、粉、白、绿、双色等，色泽鲜艳，造形奇特，应用范围广，经济价值高，是目前全球发展快、需求量较大的高档花卉品种。红掌可用种子和分株繁殖，但种子繁殖要经人工授粉才能获得种子，耗费人力，且进入开花期时间较长，种子宜随采随播．保存时间过长会影响其发芽率；而分株繁殖系数较低，很难满足规模化生产的需求。运用组织培养与快速繁殖技术能够快速、大量生产整齐一致的优质种苗。目前，组织培养是我国红掌快速繁殖和商业化生产的唯一途径。前人关于红掌组培的研究未见涉及外植体取材季节对组培条件的影响¨“Ｊ，本研究通过大量试验探索出了红掌组织培养中愈伤诱导、愈伤分化和不定芽增殖以及试管苗生根的适宜培养基配方和适宜的培养条件，着重探讨了不同外植体取材季节对红掌组培条件的影响，为红掌快速繁殖提供技术支持和参考依据。ｌ材料与方法１．１材料及消毒方法取中山植物园温室红掌盆栽品种Ａｒｉｚｏ吣的幼嫩叶柄（叶片尚未展开），用棉球蘸水擦净表面，置中性洗涤剂中振荡１５Ｉｎｉｎ，自来水冲洗３０ＩＩｌｉｎ，转入超净台里操作，７５％酒精浸泡１０８，无菌水冲洗１次，再用Ｏ．１％升汞振荡９ｒＩｌｉｎ，无菌水冲洗５—６次。无菌吸水纸吸干，切除两端与消毒液接触的伤口，然后将叶柄切成约１．５ｃｍ长的小段作为接种用的外植体。１．２愈伤诱导试验１．２．１春季试验春季试验在３月初取材进行初代培养。（１）分别选取ｌ／４ＭＳ、ｌ／２ＭＳ、３／４ＭＳ、ＭＳ４种基本培养基（均含６一ＢＡ１．Ｏｍｇ／Ｌ，２，４一Ｄ０．２Ｉｎｇ／Ｌ，蔗糖３０ｇ／Ｌ）作为愈收稿日期：２００８一１２—３０作者简介：束晓春（１９８２一）．女．江苏淮安人．研究实习员．主要从事园林植物组织培养方面的研究。１＇ｅｌ：（０２５）８４３４７ｌｌｌ；Ｅ．一ｒｎａｉｌ：ｉＢｌ—ｂｅ＠１６３．伽。伤诱导培养基，筛选出合适基本培养基。（２）在１／２Ｍｓ培养基中（６一ＢＡ１．０—ｎｇ／Ｌ，蔗糖３０ｇ／Ｌ），分别添加５种浓度的

２，４一Ｄ（０、Ｏ．１、Ｏ．１５、０．２、Ｏ．２５ｍ吕／Ｌ）作为愈伤诱导培养基，

筛选出合适的２．４一Ｄ浓度范围。（３）在ｌ／２Ｍｓ培养基中（２，４一ＤＯ．２Ｉ哕Ｌ，蔗糖３０∥Ｌ）分另Ⅱ添加５种浓度的６一ＢＡ

（０、０．５、１．Ｏ、１．５、２．Ｏｌｌ影Ｌ）作为愈伤诱导培养基，筛选出合适的６一ＢＡ浓度范围。（４）在ｌ／２Ｍｓ培养基中（６一ＢＡ１．Ｏ

ｍｇ／Ｌ，２，４一Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ）分别添加３种浓度的蔗糖（２０、３０、４０ｇ／Ｌ），筛选出合适的蔗糖浓度。（５）以ｌ／２Ｍｓ（６一ＢＡ１．Ｏｍｇ／Ｌ．２。４一ＤＯ．２ｍｇ／Ｌ，蔗糖３０ｇ／Ｌ）作为愈伤诱导培养基，分别进行光培养和暗培养．筛选出合适的光照条件。上述试验中，每种处理接种２０瓶，每瓶接种一个外植体。各培养基均含琼脂６．５ｇ／Ｌ，ｐＨ值５．６。培养条件为温度（２５±１）℃。，圯培养条件为光照１２ｈ／ｄ，光强３０００

ｂ【。

１．２．２秋冬季试验秋冬季试验在１０月中旬取材进行初代培养。取同样材料的幼嫩叶柄为外植体．接种入添加不同浓度的６一ＢＡ和２，４一Ｄ在ｌ／２Ｍｓ培养基（含蔗糖３０ｇ／Ｌ。ｐＨ值５．６）上进行单因素试验．以探索适宜的激索范围，试验采用光培养。培养的光照和温度条件与春季试验相同。当采用与春季试验相同的激素梯度水平时．未能成功诱导出愈伤组织。提高２，４一Ｄ浓度梯度水平后获得了愈伤组织。具体方法如下：（１）在ｌ／２Ｍｓ培养基中（含蔗糖３０∥Ｌ；６一ＢＡ１．Ｏ

ｌｌ∥Ｌ，ｐＨ值５．６）分别添加五种浓度的２，４一Ｄ（Ｏ．２５、０．３、

Ｏ．４、０．５、ｏ．６ｍｇ／Ｌ）．作为愈伤诱导培养基，筛选出合适的２，４一Ｄ浓度范围。（２）在ｌ／２ＭＳ培养基中（含蔗糖３０吕／Ｌ，２，４一Ｄ０．４叫Ｌ，ｐＨ值５．６）分别添加五种浓度的６一ＢＡ（Ｏ、

Ｏ．５、１．Ｏ、１．５、２．０ｍ∥Ｌ）作为愈伤诱导培养基，筛选出合适的

６一ＢＡ浓度范围。上述试验中，每个处理接种２０瓶，每瓶接种１个外植体。各培养基均含琼脂６．５ｇ／Ｌ，ｐＨ值５．６。培养条件为光照１２

ｈ／ｄ，光强３０００ｌｘ，温度（２５±１）℃。

１．２．３重复试验在第二、三、四年，分别在春季（３月初）和秋冬季（１０月中旬）进行了愈伤诱导的重复试验。共得到４组重复数据。

　万方数据～６８一江苏农业科学２００９年第２期１．３愈伤分化和不定芽增殖试验选取生长良好且状态一至的愈伤组织．切成同样大小直径０．５ｃｍ左右的的小块．接种至添加不同激素的分化和增殖培养基中。每个处理接种８瓶，每瓶接种一块愈伤。培养基配方如下：ＭＳ＋６一ＢＡ１．ＯⅡＩｇ／Ｌ＋２，４一ＤＯ．１ｌｎｇ／Ｌ；ＭＳ＋６

一ＢＡ１．Ｏ瑚ｌｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１皿Ｉｇ／Ｌ；ＭＳ＋６一ＢＡ０．５埘Ｉｇ／Ｌ＋２．４

一ＤＯ．１ｍｇ／Ｌ；ＭＳ＋６一ＢＡＯ．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１Ⅱｌｇ／Ｌ。

春季和秋冬季初代培养所获得的愈伤，均采用上述四种配方进行愈伤分化和不定芽增殖试验，各培养基中均含蔗糖３０ｇ／Ｌ、琼脂６．５ｇ／Ｌ，ｐＨ值５．６。培养条件为光照１２

ｈ／ｄ，光

强３０００ｌｘ，温度（２５±１）℃。

在第二、三、四年。分别对春季和秋冬季初代培养所得的愈伤组织进行了愈伤分化和不定芽增殖的重复试验，共得到４组重复数据。１．４生根试验将高度１．５ｃｍ以上已分化出完整茎叶的不定芽切下，转接到不同的生根培养基上。每个处理接种２Ｄ瓶，每瓶接种２株试管苗。培养基配方如下：ｌ／２Ｍｓ＋ＩＢＡＯ．５Ⅱ∥Ｌ；ｌ／２Ｍｓ

＋ＩＢＡ１．Ｏ硼吗／Ｌ；ＭＳ＋ｌＢＡ０．５珊ｌｇ／Ｌ；ＭＳ＋ＩＢＡ１．Ｏｒｎ∥Ｌ。

春季和秋冬季取材的外植体所获试管苗的生根试验，均采用上述四种配方，各培养基中均含蔗糖３０ｇ／Ｌ，琼脂６．５ｇ／Ｌ，ｐＨ值５．６。培养条件为光照１２ｈ／ｄ、光强３０００ｌ】【、温度（２５±１）℃。在第二、三、四年，分别对春季和秋冬季取材的外植体所得的试管苗进行了生根的重复试验，共得到４组重复数据。

２结果与分析２．１愈伤组织的诱导试验分别选择在春季（３月初）和秋冬季（１０月中旬）进行。在第二、三、四年，分别在春季（３月初）和秋冬季（１０月中旬）进行了愈伤诱导的重复试验。共得到４组重复数据。结果见表ｌ、表２、表３。在春季试验中，通过单因素试验探索出了适宜的基本培养基、蔗糖浓度、光照和激素水平，经邓肯氏多重极差测验分析，以１／２ＭＳ为基本培养基的愈伤发生率最高；３０ｇ／Ｌ的蔗糖浓度效果最好；光照是该品种红掌愈伤发生的必要条件，黑暗条件下的愈伤发生率为０；最佳激素处理为６一ＢＡ１．Ｏ一１．５ｎｌｇ／Ｌ＋２，４一Ｄ０．１５—０．２ｍｇ／Ｌ。光照条件下，在上述培养基上培养的叶柄外植体，接种ｌＯ—１４ｄ后开始膨大，在形态学下端切口处开始形成黄绿色的愈伤组织，愈伤状态致密，表面呈现沙粒状。在秋冬季（１０月中旬）取同样的外植体，在与春季试验所得的最佳基本培养基ｌ／２Ｍｓ、蔗糖和光照条件下进行了激素种类和梯度水平的单因素试验，采用与春季试验相同的激素梯度水平时，未能诱导出愈伤。在提高了２，４一Ｄ的浓度梯度水平之后，成功获得了愈伤组织，最佳的激素处理为６一ＢＡ１．Ｏ—１．５ＩＩｌｇ／Ｌ＋２，４一Ｄ０．４一Ｏ．５ｎ｜ｇ／Ｌ。最终得出春季适宜的诱导培养基是ｌ／２Ｍｓ＋６一ＢＡ１．Ｏ—１．５ｍｇ／Ｌ＋２，４一ＤＯ．１５—０．２ｍｇ／Ｌ；秋冬季适宜的诱导培养基是Ｉ／２Ｍｓ＋６一ＢＡ１．０一１．５皿Ｉｇ／Ｌ＋２，４一ＤＯ．４一Ｏ．５ｍｇ／Ｌ。表ｌ春季试验中不同的激素处理对叙伤诱导的影响注：平均数经邓肯氏多重撅差测验．同一列数字后的大写和小写字母分别表示在Ｏ．０ｌ％和Ｏ．０５％水平上的差异显著性。襄２春季试验中不同的基本培养基、蔗糖和光照处理对廒伤诱导的影晌注：平均数经邓肯氏多重极差测验，同一列数字后的大写和小写字母分别表示在ｏ．Ｏｌ％和０．０５％水平上的差异显著性。

寰３秋冬季试验中不同的激素处理对愈伤诱导的影响

注：平均数经邓肯氏多重极差测验，同一列数字后的大写和小写字母分别表示在Ｏ．０１％和０．晒％水平上的差异显著性。

２．２愈伤组织的分化和不定芽增殖在培养基（Ｍｓ＋６一ＢＡＯ．５ＩＩ拶７Ｌ＋ＩＢＡＯ．１Ｈｌｇ／Ｌ）上愈伤组织分化效果最好，２０ｄ后形成具有完整茎叶的健康小植株。把这些基部带有愈伤组织块的植株切割分离。接种到新的相同培养基上，则会从基部的愈伤组织上不断发生不（下转第６９页）

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