果胶酶高产菌的筛选及发酵条件的优化
果胶酶高产菌株的分离筛选及产酶条件优化
果胶酶高产菌株的分离筛选及产酶条件优化果胶酶是指分解果胶质的酶，是含有多种组分的复合酶。
果胶酶可裂解单糖之间的糖苷键，并脱去水分子，分解包裹在植物表皮的果胶，促使植物组织的分解。
这类酶广泛分布于高等植物和微生物中，在某些原生动物和昆虫中也有发现。
在微生物中，细菌、放线菌、酵母和霉菌都能代谢合成果胶酶。
果胶酶在工业生产领域是一种重要的新兴酶类。
据统计，目前果胶酶在全世界食品酶的销售额中占25%。
主要应用于食品工业的果汁加工和果汁果酒澄清、饲料工业以及造纸工业的纸浆脱胶和麻类加工。
1 材料与方法1．1 材料1．1．1 试验材料采集绵阳市采摘果园土壤及腐烂的苹果、梨、枣等水果的腐烂部分。
1．1．2培养基和试剂果胶酶初筛培养基: 果胶4 g，蛋白胨10 g，氯化钠0．5 g，刚果红0．15 g，琼脂20 g，定容至1 000mL，pH7．0，121 ℃灭菌20 min．2) 牛肉膏蛋白胨培养基: 牛肉膏3 g，NaCl 5 g，蛋白胨10 g，琼脂15 ～20 g，水1 000 mL，pH7．0 ～7．2，121 ℃灭菌20 min．3) PDA 培养基: 马铃薯200 g，蔗糖10 g，琼脂20 g，水1 000 mL，pH 值自然，121 ℃灭菌30 min．4) 发酵培养基: 桔皮粉10．0 g·L－1，( NH4)2SO420．0 g·L－1，KH2PO438 g·L－1，K2HPO4·3H2O2．0 g·L－1，pH5．5，121 ℃灭菌20 min．富集培养基：LB 培养基，蛋白胨 1.0 g，酵母膏0.5 g，NaCl 1.0 g，蒸馏水100 mL，灭菌。
筛选培养基：果胶1.0 g，（NH4）2SO40.2 g，KH2PO40.2 g，MgSO4·7H2O 0.02 g，调pH 至中性，琼脂2.0 g，蒸馏水100 mL，灭菌，倾倒平板。
果胶酶生产菌株的筛选过程
果胶酶生产菌株的筛选过程
果胶酶是一种水解果胶的酶，广泛应用于饮料、果汁、果酱等果蔬加工行业，因此具
有广阔的市场前景。
果胶酶的生产需要先筛选出高效的产酶菌株，这是整个生产链中的重
要环节之一。
本文将介绍果胶酶生产菌株的筛选过程。
一、菌株筛选的目的
菌株筛选的目的是选择能够高效稳定产生果胶酶的菌株，并进行进一步的优化。
其中，首先对原料的化学成分进行分析，确定产酶菌株种类；然后利用生物学方法进行初步筛选，筛选出具有较高产酶活力的菌株；最后通过构建适合产酶环境的基因工程菌株，提高果胶
酶产量及质量。
二、原料分析
果胶酶生产的原材料主要是果胶。
在根据应用对象的要求确定产酶菌株种类前，需要
对果胶的化学成分进行分析。
化学成分分析涉及果胶的多种指标，如果胶的含量、分子量、分枝度等。
三、生物学初筛
四、构建基因工程菌株
生物学初筛之后，还需要进一步构建基因工程菌株，进一步提高产酶能力。
通常采用
两种策略：一是通过原位突变构建高酶力突变菌株；二是将产酶基因转化到优良的生产菌
株中，形成高产酶菌株。
这两种策略的原理是一样的，都是通过改变产酶基因的表达水平，实现在原生菌株中快速构建高效产酶菌株的目的。
以上就是果胶酶生产菌株的筛选过程的详细介绍。
通过该过程的步骤，可以产生高效、稳定、可持续产酶的菌株，促进果胶酶的产业化发展。
产果胶酶菌株的筛选
产果胶酶菌株的筛选果胶是植物细胞壁的主要成分之一，它是一种高分子多糖，具有黏性和凝胶性。
果胶酶是一类能够水解果胶的酶，广泛应用于食品、医药、化妆品、纺织等行业。
因此，寻找高效产果胶酶的菌株成为了科研工作者的研究热点。
筛选方法1.土壤样品的采集首先需要采集一些土壤样品，这些土壤样品应当来源于果园、蔬菜园、花卉园等植物种植区域，这些地方的土壤中含有丰富的细菌和真菌。
采集土壤样品时，应当使用无菌的采样器具，并将样品放入无菌的袋子中保存。
2.菌落筛选将采集的土壤样品分别加入到含有果胶的培养基中，然后进行培养。
在培养的过程中，需要留意是否出现了产果胶酶的菌落。
产果胶酶的菌落通常呈现透明、半透明或者白色。
在筛选过程中，应当选择产酶量高、生长快速的菌落。
3.酶活筛选将筛选出来的菌株进行酶活测定，通过测定酶活量的大小来评估菌株的产酶能力。
酶活测定可以通过测定果胶酶在一定时间内水解果胶的产物的数量来进行。
酶活测定的结果可以帮助我们筛选出产酶量高、产酶速度快的菌株。
4.生理生化特性检测在酶活筛选的基础上，对菌株的生理生化特性进行检测。
包括菌株的生长速度、温度、pH值、产酸能力、氧气需求量、氧气耐受性、抗生素敏感性等。
这些检测可以帮助我们更全面地了解菌株的生长特性和产酶能力。
5.分子生物学检测分子生物学检测是一种更加精确的检测方法，可以帮助我们确定菌株的种属和亲缘关系。
包括菌株的16S rRNA基因序列测定、PCR扩增、电泳分析等。
这些检测可以帮助我们更加准确地确定产酶菌株的种属和亲缘关系。
结果和讨论通过以上筛选方法，我们可以筛选出高效产果胶酶的菌株。
这些菌株可以应用于食品、医药、化妆品等行业，为这些行业的发展提供了有力的支持。
此外，我们也可以通过深入研究这些菌株的生长特性和产酶机制，进一步提高产酶效率，为产业发展提供更大的推动力。
果胶酶高产菌株的激光选育及发酵条件的优化
果胶酶高产菌株的激光选育及发酵条件的优化朱宏莉;宋纪蓉;张嘉;黄洁;徐抗震【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2005(026)012【摘要】利用氦氖激光诱变原生质体筛选到了一株产果胶酶性能稳定且酶活明显提高的突变株ZH-2.其最适发酵条件为:以2%桔皮粉+1%乳糖作碳源,以1%(NH4)2SO4+0.3%酵母膏作氮源,在起始pH7.0,33℃摇床发酵32h左右达产酶高峰.分析ZH-2所产果胶酶的性质得出,酶作用最适条件为:pH6.5,50℃,以聚半乳糖醛酸为底物,酶的热稳定性实验显示,50℃保温60min后,酶活力基本不变.【总页数】5页(P160-164)【作者】朱宏莉;宋纪蓉;张嘉;黄洁;徐抗震【作者单位】西北大学生命科学学院,陕西,西安,710069;西北大学化工学院,陕西,西安,710069;西北大学化工学院,陕西,西安,710069;西北大学生命科学学院,陕西,西安,710069;西北大学化工学院,陕西,西安,710069;西北大学化工学院,陕西,西安,710069【正文语种】中文【中图分类】Q93【相关文献】1.高产果胶酶菌株选育及发酵产酶条件优化的研究进展 [J], 蒋红菊;杨加志;宋加妹;刘备备;刘晓丽;孙东平2.达托霉素高产菌株选育及发酵条件优化 [J], 王一芩;阎永贞;胡兵;廖锦秀;汤飞;周华;曹荣月3.γ-聚谷氨酸高产菌株选育及发酵条件优化 [J], 罗丽娟;王刚;万玉军;关统伟;李南臻;庹有朋;吴泽;苟红梅4.果胶酶高产菌株EIM－6的筛选鉴定及其液体发酵产酶条件优化 [J], 杨欣伟;林伟铃;田宝玉;柯崇榕;黄薇;黄建忠5.果胶酶高产菌株EIM-4的鉴定及其液体发酵条件优化 [J], 柯崇榕;田宝玉;杨欣伟;林伟铃;黄薇;黄建忠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
果胶酶高产菌种的紫外诱变选育及其培养条件的响应面法优化
果胶酶高产菌种的紫外诱变选育及其培养条件的响应面法优化林伟铃;田宝玉;秦勇;吕睿瑞;王春香;强慧妮;黄建忠【期刊名称】《工业微生物》【年(卷),期】2010(040)002【摘要】以果胶酶产生菌黑曲霉EIM6为出发菌株,初始果胶酶活为14 539 U/mL,经紫外诱变反复处理,摇瓶复筛和遗传稳定性试验,最终获得一株果胶酶高产菌株EIMU2.EIMU2菌株的形态特征发生了明显的改变,相较于原出发菌株EIM6,孢子色泽更黑,孢子团也较出发菌株大,菌丝与孢子上凝结有更多的液珠.复筛后EIMU2酶活为32 161 U/mL,较原出发菌株提高了1.212倍.进一步通过响应面法对EIMU2菌株的液体发酵培养条件进行优化.优化后的培养条件为甜菜渣1.83%,花生饼粉1.69%,(NH4)2SO4 0.5%,K2HPO4 0.3%,CaCO3 0.2%,MgSO4 0.15% (w/v),接种量6% (v/v),装液量21.36 mL.优化的突变菌株产酶活性进一步提高至98 794.3 U/mL,提高了2.07倍.【总页数】5页(P5-9)【作者】林伟铃;田宝玉;秦勇;吕睿瑞;王春香;强慧妮;黄建忠【作者单位】福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108【正文语种】中文【相关文献】1.紫外诱变黑曲霉筛选高产果胶酶菌种 [J], 佘秋生;杨海波;杨冠军;薛银磊;祝小龙;单林娜2.12C6+离子束诱变选育温度耐受螺旋藻高产藻株及其培养条件的优化 [J], 王丽娟; 郑天翔; 杨宋琪; 李欣; 罗光宏3.利用木糖高产谷胱甘肽酵母菌株的诱变选育及培养条件优化 [J], 王晓琼;陈叶福;梁音;杨旭;肖冬光4.复合诱变选育壳聚糖酶高产菌种及产酶条件优化 [J], 王俊芳;张震;申梦雨;王刚5.人参叶中高产皂苷菌种的筛选及培养条件优化 [J], 冯颖;陶亮;肖学爱;赵存朝;李畅;田洋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
果胶酶高产菌株EIM_4的鉴定及其液体发酵条件优化
业,2000,26(4):82-85.[3]Feron G,Du fosse L ,Pierard E ,et al.Production ,identification and toxicity of γ-decalactone and 4-hydroxyde -canoic acid from Sporidiobolus spp .[J ].Applied and E nvironmental Microbiology ,1996,62(8):2826-2831.[4]王建龙,施汉昌.聚乙烯醇包埋固定化微生物的研究及进展[J ].工业微生物,1998,28(2):35-39.[5]李峰,吕锡武.聚乙烯醇作为固定化细胞包埋剂的研究[J ].中国给水排水,2000,16(12):14-17.[6]牛红星,邱蔚然.用固定化啤酒酵母细胞合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱[J ].华东理工大学学报,2002,28(4):372-375.[7]W anikawa A.,H os oi K.,K ato T.C onversion of unsaturated fatty acids to precurs ors of γ-lactones by lactic acid bacteria during the production of maltwhisky[J ].Journal of the American Society of B rewing Chemists ,2000,58(2):51-56.[8]于伟,徐岩,喻晓蔚,等.生物法转化分离耦合制备γ-癸内酯[J ].化工进展,2007,26(8):1151-1154.[9]周瑾,李雪梅,吕春华,等.地霉属真菌和棒状杆菌属株协同发酵生产γ-癸内酯[J ].生物技术通讯,2003,14(1):39-41.[10]王聪,宋焕禄,吕跃钢.复合诱变选育γ-癸内酯生产菌株[J ].食品科学,2007,28(6):237-240.[11]李花子,王建龙,文湘华.聚乙烯醇-硼酸固定化方法的改进[J ].环境科学研究,2002,15(5):25-27.[12]Zhuge J.M odern Ferment M icroorganism Experimental T echnology [M ].Beijing :Chem ical Industry Press ,2005:223-225.果胶酶高产菌株EIM -4的鉴定及其液体发酵条件优化柯崇榕,田宝玉,杨欣伟,林伟铃,黄薇,黄建忠3(福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,福建福州350108)摘要:目的:通过了解高产果胶酶菌株EI M -4的背景信息及优化其最适的产酶条件,为下一步工业化生产提供依据。
果胶酶生产工艺
果胶酶生产工艺果胶酶是一种重要的工业酶，广泛应用于食品、制浆造纸、纺织、饲料、制药等领域。
果胶酶的生产工艺主要包括菌种选育、发酵、分离纯化和产品包装等步骤。
首先，果胶酶的生产需要选择优良的产菌菌种。
常用的产菌菌种有枯草杆菌、红霉菌等。
通过菌种选育，筛选出产酶效果好、产酶量高的菌种。
同时，为了提高果胶酶的产量和稳定性，还可以通过基因改造的方式对产菌菌种进行优化。
其次，果胶酶的生产主要依靠发酵技术。
发酵过程中需要控制好温度、pH、氧气供应和酶基质的添加等因素。
常用的发酵方式包括固体发酵和液体发酵。
固体发酵是将产菌菌种和固体底物（如玉米渣、苹果渣等）混合，进行发酵。
液体发酵是将产菌菌种和液体培养基（如葡萄糖、麦芽糊精等）放入发酵罐中，进行发酵。
发酵时间一般在24-48小时左右。
然后，果胶酶的生产需要进行分离纯化工艺。
首先要将发酵液进行澄清，去除其中的固体颗粒和胶体物质。
然后，通过离心、超滤、凝胶过滤等手段，将果胶酶从发酵液中分离出来。
最后，通过浓缩、冷冻干燥等操作，得到果胶酶的粉状或液状产品。
最后，果胶酶的产品还需要进行包装和质量控制。
果胶酶的包装一般采用塑料桶、塑料袋等容器进行封装，并在包装上标明产品名称、批号、生产日期等信息。
对于果胶酶的质量控制，需要检测其活力、纯度和稳定性等指标，保证产品的质量和安全。
综上所述，果胶酶的生产工艺包括菌种选育、发酵、分离纯化和产品包装等步骤。
通过科学的生产管理和工艺控制，可以提高果胶酶的产量和质量，满足市场需求。
同时，还可以通过技术创新和优化，提高果胶酶的生产效率和降低生产成本，推动果胶酶产业的发展。
产原果胶酶菌株的筛选及其产酶条件优化
Screening of strain producing protopectinase and optimizing the fermentation conditions
TIAN Ya-hong
(College of Life Science, Hebei United University, Tangshan 063000)
从土样中分离得到4株对底物有作用活性的 产酶菌株，各菌株的产酶情况如图1所示。编号为 WJ-2的原果胶酶活性明显高于其他菌株，所以选 用此菌株作为原果胶酶的实验菌株。观察菌落特 征，如图2所示。
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鲜甘薯渣为实验室提取淀粉和甘薯蛋白后剩 余残渣，于60 ℃烘干，备用。 豆粕粉：市售；原果胶：六偏磷酸钠洗涤法 制备[2]；其他化学试剂均为分析纯。 1.2 主要仪器 台式电热干燥箱、电子天平：天津泰斯特仪 器有限公司；YXJ-1离心机：江苏市金坛中大仪 器厂；TDA-8002电热恒温水浴锅：余姚市东方电 工仪器厂。 1.3 培养基 菌种筛选培养基：察氏培养基；产酶培养 基：豆粕粉1 g，K2HPO4 3.8 g，KH2PO4 0.2 g，水 100 mL，pH5.0~6.0，160 r/min。 1.4 菌种的分离及筛选 1.4.1 菌种来源 自唐山市水果批发市场一长期倾 倒腐烂水果的土壤中分离纯化得到。 1.4.2 菌种的分离及筛选 经稀释分离法筛选出 单菌株，进一步分离纯化后，接种发酵后测其原 果胶酶酶活。选取高酶活性的菌株接至察氏平板 内，观察菌落特征。 1.5 1 方法 粗酶液制备 将发酵液于常温下4000 r/
收稿日期：2011-10-19 基金项目：河北省唐山市科技局项目(10120201c)。 作者简介：田亚红(1979—)，女，河北无极人，硕士，讲师，主要从事发酵工艺优化的研究工作。
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酶 的总称 ， 同来 源 的果 胶酶其 特点也 不 同 ， 中微 不 其
生物来 源 的果 胶酶 主要有 聚半乳 糖醛 酸酶 （ Ｇ） 聚 Ｐ 、
半乳糖 醛酸裂 解酶 （ ＧＬ 、 甲基半 乳 糖 醛酸 裂 解 Ｐ ）聚
酶 （ ＭＧＬ 和 果胶 酯酶 （ Ｅ ｃ 果 胶 酶 的应用 十 分 Ｐ ） Ｐ ） ．
果胶 酶 （ ｅｔ ａｅ ） 指 能分 解 果 胶质 的多 种 ｐ ｃｉ ｓｓ 是 ｎ
பைடு நூலகம்
和 Ｆ ｓｒｕ ｎｌ ｏｍｅ进行 混合培 养 ， 生 的果 ｕａｉｍ ｍｏ ｉｆ ｙ ｉ 产
胶 酶 的活性可 以达到 １０ １ ６Ｕ ・ ， 单独 培养 ４ ． ｇ 是 Ａｓ ｅｇ ｌｕ ｉ ｅ ｐ ｒ ｉ ｓ ｇ ｒ活性 的 １ ７ ． ｌ ｎ ．倍 近年来 ， 随着 我 国果 汁和果酒 行业 的迅猛 发展 ， 对果胶 酶 的需求 日益 增 长 ， 胶 酶 制剂 的产 量和 质 果
．
ｐ ｏ ｕ ｅ ｙ ｔ ｅ ｓ ｒ ｉ ｎ ｅ ｈ ｐ ｉ ｕ ｃ ｎ ｉ ｏ ｅ ｃ ｅ ０ ７ ８ Ｕ ・ｍＬ ｒ ｄ ｃ ｄ ｂ ｈ ｔ ａ ｎ ｕ ｄ ｒｔ ｅ ｏ ｔ ｍ ｍ ｏ ｄ ｔ ｎ ｒ ａ ｈ ｄ １ ５ ｉ
Ｋｅ ｒ ｓ ｐ ｃ ｉ ａ ｅ ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ ｌ ｕ ｄ ｓ ｂ ｒ ｅ ｅ ｍｅ ｔ ｔ ｎ ｏ ｔ ｉｉ ｇ ｏ ｅ ｍｅ ｔ ｔ ｎ ｃ ｎ ｉ ｏ ｙ ｗｏ ｄ ： ｅ ｔ ｓ ； ｃ ｅ ｎ ｎ ；ｉ ｉ ｕ ｍｅ ｇ ｄ ｆ ｒ ｎ ａ ｉ ； ｐ ｉ ｚｎ ｆｆ ｒ ｎ ａ ｉ ｏ ｄ ｔ ｎ ｎ ｑ ｏ ｍ ｏ ｉ
中 图分 类 号 ： Ｑ ２ ． Ｔ ９５ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章 编 号 ：１０ —３５ ２ １ ）３０ １—５ ０ ３４ １ （０ ０ ０ —１ ７０
Ｓｃ ｅ ｎ ｎ ｆｐ ｃ ｉ ａ ｅ ｐ ｏ ｃｎ ｔ ａｎｓａ ｄ ｏ ｔｍ ｉｉ ｇ ｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｅ ｔｎ ｓ ｒ ｄｕ ｉ ｇ ｓ ｒ ｉ ｎ ｐ ｉ ｚｎ ｏ ｔ ｅ ｍ ｅ ｔ ｔｏ ｏ ｄ ｔｏ ｆｉｓ ｆ ｒ ｎ ａ ｉ ｎ ｃ ｎ ｉｉ ｎ
２１ ０ ０年 ６ 月 第 ３ １７ １１ 期 １ ～ ２
甘
肃
农
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大
学
学
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第 ４５卷 双 月 刊
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果 胶酶 高 产菌 的筛 选 及 发 酵条 件 的优 化
王 媛 ， 舜愈 ， 霞 ， 玉梅 ， 文军 韩 祝 蒋 盛
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（ 甘肃农业大学食品科学与工程学 院，甘肃 兰州 ７ ０ ７ ） ３０ ０
摘要： 采用平板分离法从腐烂的大枣 中筛选 出果胶酶的高产菌 株 ， 通过 Ｌｓ４ ）Ｅ （ ／ 交试验对该 菌种的深层液体
发酵条件进行优化． 结果表明 ： 该菌种深层液体发 酵最适 的发酵条件为葡萄糖添加量 １ ， 白胨 ０ ５ ， 蛋 ． 吐温 ６ ０ 添加量 ００ ０发酵培养基初始 ｐ ．３Ｖ ， Ｈ值 ４５ 发酵温度 ４ ．， Ｏ℃ ， 在此条件下菌株的产酶能力可以达到 １ ５ Ｈ ． ０７８Ｕ・ 关键词 ： 果胶酶 ， 筛选 ， 深层液态发酵 ， 酵条件优化 发
广泛 ， 主要 应 用 于 食 品 工 业 以及 饲 料 工 业 等 领 域
量 已经 远远不 能满 足食 品工业 的需 要． 目前 ， 国内发
酵生产 的 果 胶 酶 活 性 普 遍 较 低 ，导 致 生 产 成 本 增
加， 也在 一定程度 上 限制 了该 酶 的广 泛应用 ． 筛选果
中［］ 田英华 等［选 育 了 １ 高产果 胶酶 的黑 曲霉 。． 。 ］ 株