免疫层析法检测原理分类介绍
免疫层析法检测原理分类介绍
作者：佚名 文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司 点击数： 88 更新时间：2005-10-16
双抗体夹心
·以 hCG 试剂为例 金标为鼠源性抗β-hCG 单克隆抗体与胶体金的复合物，测试线包被羊抗α-hCG 多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。 妇女受孕的“指示剂” hCG 是一种肽，包含一条和FSH （促卵泡成熟激素），FLH 具有同源性的α链和一条高度特异的β链。当待测尿液或血清中含有一定量的hCG 时，样本通过层析作用到达金标位置hCG 的β链和单抗β-hCG 发生免疫反应，再层析到测试线位置，hCG 的α链和多抗
α-hCG 发生免疫反应，这样就把金标通过hCG 桥连到测试线上，达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗β-hCG 单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显色，这样就得到阳性结果。
当尿液或血清中不含 hCG 时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线则显色，这样就得到了阴性结果。当测试线和控制线均不显色时，表示试剂盒无效。
该产品检验灵敏度25mIU/ml hCG 。
测HbsAg 的HbsAg 产品的检测原理是双抗体夹心。
竞争反应原理
·以 MOP 为例（BSA 为牛血清白蛋白） 金标为鼠源性抗体Morphine 单抗和胶体金的复合物，T 线（为取得较强的免疫应答，故免疫
原采用Morphine-BSA 偶联物）包被Morphine-BSA 。C 线包被羊抗鼠抗体。
当待测尿液中含一定量以上的 Morphine时，样本到达金标位置，和单抗Morphine-BSA发生
免疫反应并完全饱和之，再层析到T线位置时，由于单抗Morphine-BSA lgG胶体金复合物已无空余的位点和测试线上的Morphine-BSA结合，故T线不显色，C线显色，这样得到的是阳性结果。
当待测尿液中不含 Morphine时，样本与金标不反应，再层析到T线位置时，固定在NC膜上
的Morphine-BSA会“捕捉”单抗 Morphine-BSA胶体金复合物，故T线显色，C线也显色，得到
阴性结果。当无C、T线时，表示试剂盒失效。
其它产品如 DPC、DTH、DME、DAM、DCO等依次类推。
应用proteinA金标的试剂盒检测原理
蛋白 A是金黄色葡萄球菌的一种胞壁蛋白，有与哺乳动物的lgG结合的特性，亲和力根据物种的差异而有区别。而人体中所有的抗体均是lgG因此能用来检测人体血液中的抗体用已知抗原测未知抗体。
·以IHI为例说明
HIV试剂盒金标为protein A-金标复合物,T线包被HIV抗原。C线包被鸡抗protein A多克隆抗体。
当待测血清中含有HIV抗体时，该抗体先和protein A胶体金复合物免疫结合，到T线位置时，该抗体又和固定在NC膜上的HIV抗原免疫结合，从而桥连protein A胶体金，T线显色。到达C线位置时，固定在NC膜上的鸡抗protein A 多抗桥连protein A多抗桥连protein A胶体金，C线显色，得到阳性结果。
若待测血清中不含HIV抗体，则T线上的HIV抗原和protein A不发生免疫结合，T线不显色，
艾康HIV1/2型抗体诊断试剂说明书
作者：佚名 文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司 点击数：
85 更新时间：2005-10-16
HIV
艾滋病毒1/2 型抗体乳胶层析法 全血/血清/血浆快速检测试剂盒 使用说明书
（产品编号： IHI-402）
本品是一种不需要任何仪器设备的全血检测法，是利用免疫层析分析原理、双抗原夹心法快速检测血液中是否含有HIV1/2 抗体，从而用于临床判断人体是否受到HIV1/2 型病毒的感染。 【测定原理】
ACON HIV1/2 试剂盒采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测血液中是否含有HI V1/2抗体，试剂盒中含有被事先固定于膜上测试区(T)的重组HIV 抗原和质控区(C)的相应抗体。
测试时，血标本滴入试剂盒加样孔（S ）内，血标本中的HIV1/2抗体与预包被在膜上的重组抗原-乳胶结合物反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析，在测试区（T ）与固定在膜上的重组HIV 抗原反应。如果血液中含有抗HIV-1或HIV-2抗体，在测试区内（T ）会出现一条红色条带，表明是阳性结果。如果在测试区内（T ）没有出现红色条带，则血液中不含有抗HIV1/2 抗体，表明是阴性结果。无论抗-HIV1/2抗体是否存在于血液中，混合物都会继续向上层析至质控区（C ），质控区的相应抗体与乳胶结合物反应出现一条红色条带。质控区内（C ）所显现的红色条带是判定层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
【包装组成】
l ACON HIV1/2 乳胶层析法全血/血清/血浆/检测试剂盒 (40人份)
l 反应缓冲液（5ml ） l 使用说明书一份
l 一次性使用吸管(40支)
【检测所需设备】
l 采血针
l 秒表
l 止血棉球
【标本收集】
血标本的采集：指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽可能立即使用，抗凝血应在24小时内使用以避免融血。
血清/血浆标本的收集：血清/血浆标本由静脉采血后离心获得，标本在2-8°C可保存一周。
如长期保存需冷冻。避免反复冻融
【操作步骤】
在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明，使用前将检测试剂盒和全血/血清/血浆标本恢复至室温（20-3 0oC），取出反应缓冲液并放置20分钟使其恢复至室温。
1．从原包装铝箔袋中取出试剂盒（注意：在打开铝箔袋前应先恢复至室温）。在1小时内应尽快地使用，特别是在室温高于30°C或是在高度潮湿的环境中应尽快地使用。
在一小时内测试将会得到最佳效果。
2．将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取指尖血或静脉血后滴入1滴全血/血清/血浆（约25ml）于加样孔S中，随后加入1 滴缓冲液于加样孔S 中。切勿将指尖血直接滴入加样孔内。
3．等待红色条带的出现，在15分钟左右读取测试结果。关键要注意，在红色条带出现以前，背景要清晰，特别当样本中含有低滴度的抗-HIV1/2抗体，会导致出现的T线颜色很淡，此时更需注意背景要清晰。在2 0分钟后读取的结果无效。
【结果判定】
阳性（+）：两条红色条带出现。一条位于测试区内（T），另一条位于质控区内（C）。
阴性（-）：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区内（T）
无红色条带出现。
无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。
注意：由于样本中抗-HIV 抗体滴度的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。
【灵敏度】
ACON HIV乳胶层析法全血/血清/血浆检测试剂盒在临床标本中用HIV 的EIA 的检测试剂盒进行比较，结果表明
ACON HIV 乳胶层析法全血/血清/血浆检测试剂盒对HIV-1和HIV-2抗体具有很高的灵敏度，其相对灵敏度达100%。
【特异性】
运用在ACON HIV乳胶层析法全血/血清/血浆检测试剂盒中的重组HIV抗原为病毒包膜上的糖蛋白。同EI A检测试剂盒相比，ACON HIV 乳胶层析法检测试剂盒对HIV-1 和HIV-2抗体具有很高的特异性，其相对特异性达99.6%。
【使用限制】
l ACON HIV1/2乳胶层析法检测试剂盒仅用于体外诊断，并适用于检测全血/血清/血浆样本中的抗-HIV1/ 2抗体。
l 这项测试仅表示样本中抗-HIV1/2 抗体的存在，而不能作为机体感染HIV-1或HIV-2的标准。
l 为了确保结果的准确性，可对样本用ELISA 或Western Blot 作进一步的分析。
49
艾康产品常见问题解答——测试标本
作者：佚名 文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司 点击数：
75 更新时间：2005-10-16
Q:1.艾康的产品一般用什么标本检测？
A:根据艾康检测产品与要求的不同，使用较多的检测标本有尿液，指尖、耳垂末梢血，静脉血，血清，血浆，阴道分泌物，尿道分泌物，大便。
Q:2.艾康的产品对标本的采集、保存有什么要求？
A: 指尖，耳垂末梢血采集后应该尽快使用，防止凝血；静脉采血过程尽量避免溶血；抗凝血在 24小时内使用，避免溶血；血清/血浆标本由静脉采血后离心获得，标本在2-8℃可保存一周；如长期保存需冷冻至-20℃，避免反复冻融；尿液标本必须采集新鲜尿液，若尿样呈可见的浑浊状，需要先离心、过滤或待其沉淀后去上清检测；宫颈取样时棉签事前不要用生理盐水浸润，这样会减少标本获得量，标本收集前应将阴道内粘性物质去除；取粪便标本时，在新鲜粪便的不同部位取样三次，保证取样具有代表性。
Q:3.全血/血清/血浆试剂使用指尖、耳垂末梢血和使用静脉血是否相同？
A:通常情况下，各种标本检测效果是相同的。指尖、耳垂末梢血量较少，检测时需加缓冲液，而且末梢血中含有一些组织液的成分，血液浓度较静脉血低。
Q:4.全血标本里加入抗凝剂时是否对检测结果有影响？
艾康产品常见问题解答—— 结果判定
作者：佚名 文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司 点击数：
67 更新时间：2005-10-16
Q:1.测试时，若未到判读时间出现的阴性结果，可否判为阴性？
A: 不可以。测试结果应按照说明书规定的时间判读，以防止漏检！例如用乙肝表面抗原血清 /血浆测试条检测时，强阳性结果会在15分钟内出现，弱阳性结果可能在15分钟以后出现，所以在说明书规定的判读时间内结果都是有效的。
Q:2.超过了判读时间结果还准确吗？
A:结果不准确，应按照说明书规定的时间判读。如果到判读时间为止，结果为阴性，判读时间以后，出现淡淡的线条，可能是有色标记物持续释放造成的，但是这种结果是无效的。
Q:3.当试剂进行检测时，可见红色的液体在膜上移动，这种情况正常吗？
A:这是标本在试剂上层析的正常现象，只要判读结果时，背景清晰就可以了。
Q:4.怎样知道试剂是否进行正常检测？T 线比C 线先出来是正常现象吗？ 为什么有的时候C 线会比平时弱一些？
A: 作为一个内部质控标准，若一条红色或紫红色的线条出现在质控区（ C 区）表明已加入足够的标本，试剂显示结果正常。如果判读时C 线没有出现，表明由于加样量不够或产品已经受潮，该次实验失败，请换新的试剂重新检测。T 线比C 线先出来，表明标本中待检物质的浓度结合能力强，这是正常现象，结果准确。C 线比平时稍弱的情况，一般会出现在强阳性标本检测时，因为T 线处包被的抗原或抗体结合了大
量的有色标记物的颗粒，相应到达C线位置的标记颗粒就会少一些，显色淡一些。只要有明显的C线存在，就表明测试过程正常，结果准确。您也可以用阴性血清血浆对这样的强阳性标本进行稀释，然后再检测，可以消除或改善这种情况。
Q:5.测试线的强度与标本的浓度成正比吗？
A:一般情况下，测试线的强度与标本的浓度成正相关，但不是正比关系，有时也会因外界环境和标本本身以及操作方法的影响。ACON的产品一般是定性产品，有T线就可以判断为阳性。
Q:6.ACON的产品都是有T线就判断为阳性吗？
A: 一般是这样的，但是有些产品特殊。如排卵检测试剂是T线的颜色与C线的颜色相似或T线的颜色比C线的颜色要深，判为阳性，T线比C线颜色弱，判为阴性；乙肝两对半检测试剂的第四、五两项，是采用竞争法配制的，如果没有T线，判为阳性，如果T线的颜色非常淡，与C线的颜色差别很大，判为弱阳性，如果T线和C线的颜色相近，判为阴性。（具体请参照产品的说明书）
Q:7.乙肝两对半的HBcAb阳性怎么解释？
A: 正常情况下，若用艾康公司乙肝两对半测得HBcAb阳性，表明的是传染病学意义；目前临床上用ELI SA检测HBcAb时，将标本做一定比例的稀释，结果表明的是诊断意义；所以有一定的差别。
色谱法分类
一、胶囊色谱(Micellar Chromatography,MC) 又称拟相液相色谱或假相液相色谱(Pseudophase LC)，是一种新型的液相色谱技术。特点是应用含有高于临界胶囊浓度的表面活性剂溶液作为流动相。所谓“胶囊”就是表面活性剂溶液的浓度超过其临界胶囊浓度(Critical MicelleConcentration,CMC)时形成的分子聚合体。通常每只胶囊由n个（一般为25～160个）表面活性剂单体分子组成，其形状为球形或椭圆球形。在CMC值以上的一个较大浓度范围内，胶囊溶液的某些物理性质（如表面张力、电导等等）以及胶囊本身的大小是不变的。构成胶囊的分子单体与溶液中自由的表面活性剂的分子单体之间存在着迅速的动态平衡。通常有正相与反相两种胶囊溶液。前者是由表面活性剂溶于极性溶剂所形成的亲水端位于外侧而亲脂端位于内部的胶囊；后者是指表面活性剂溶于非极性溶剂所形成的亲水端位于核心而亲脂基位于外面的胶囊。被分离组分与胶囊的相互作用和被分离组分与一般溶剂的作用方式不同，并且被分离组分和两种胶囊的作用也有差别。改变胶囊的类型、浓度、电荷性质等对被分离组分的色谱行为、淋洗次序以及分离效果均有较大影响。胶囊色谱就是充分运用了被分离组分和胶囊之间存在的静电作用、疏水作用、增溶作用和空间位阻作用以及其综合性的协同作用可获得一般液相色谱所不能达到的分离效果。适用于化学结构类似、性质差别细微的组分的分离和分析，是一种安全、无毒、经济的优越技术。 （一）原理：胶囊溶液是一种微型非均相体系(Microheterogenous system)。在胶囊色谱中，分离组分在固定相与水之间、胶囊与水相之间以及固定相与胶囊之间存在着分配平衡。组分的洗脱得为取决于三相之间分配系数的综合作用；同时定量地指出分离组分的容量因子k’的倒数值与胶囊浓度成正比，一般增加胶囊浓度即可获得较佳的分离效果。 （二）方法特点：与传统液相色谱的最大区别在于胶囊色谱流动相是由胶囊及其周围溶剂介质组成的一种微型的非均相体系，而常规流动相是一种均相体系。特点：1、高度的选择性：因分离组分与胶囊之间存在着静电、疏水以及空间效应的综合作用，只要通过流动相中胶囊浓度的改变，就可使分离选择性获得改善和提高。此外，通过适当固定相以及表面活性剂的选择也可提高分离选择性。 2、便于梯度洗脱：由于表面活性剂的浓度高于CMC后再增大浓度时，溶液中仅胶囊的浓度发生改变，而表面活性剂单体分子的浓度不变，不影响流动相与固定相的平衡过程，因而比传统的梯度洗脱技术大大缩短了分析时间，并减少了流动相的消耗，适用于常规。 3、提高检测灵敏度：胶囊流动相可增加某些化合物的荧光强度，从而提高检测灵敏度。还可稳定某些化合物在室温条件下发生的液体磷光。 4、因分离组分不易分出，故缺点是柱效低且不适于制备分离。 （三）常用表面活性剂：常用的阳离子表面活性剂主要有：溴化或氯化十六烷基三甲铵(Cetyltrimethylammoniumbromideor chloride,CTMAD或CTMAC)；阴离子表面活性剂有十二烷基硫酸钠(SDS)；非离子表面活性剂有Brij-35即(聚氧乙烯)35-十二烷基醚。 二、手性分离色谱(ChiralSeparationChromatography,CSC) 是采用色谱技术(TLC、GC和HPLC)分离测定光学异构体药物的有效方法。由于许多药物的对映体(Enantiomer)之间在药理、毒理乃至临床性质方面存在着较大差异，有必要对某些手性药物进行对映体的纯度检查。 （一）原理和方法：对映体化合物之间除了对偏振光的偏转方向恰好相反外，其理化性质是完全相同的，因而难以分离。传统方法（分步结晶法、酶消化法等）有很大局限性，特别是难以进行微量分离和测定。60年代前后，TLC、GC法逐渐用于对映体化合物的拆分。但这两种方法只能拆分不多的化合物，且需要较复杂的样品处理步骤，制备分离也难以进行。80年代初HPLC法迅速成为药物对映体分离和测定最为广泛应用的方法。 HPLC用于手性分离概括起来可分为两大途径：间接(CDR)和直接(CMPA、CSP)方法。
快速免疫学系列检测临床意义
快速免疫学系列检测临床意义 一、甲状腺系列： 检测项目： FT3（游离三碘甲状腺原氨酸）、FT4（游离甲状腺素）、hTSH（促甲状腺激素）、TGAb（抗甲状腺球蛋白抗体）、TMAb（抗甲状腺微粒体抗体） 临床意义： FT3：是循环中具有活性的甲状腺激素，能敏感而直接地反映甲状腺的功能。 增高：见于甲状腺机能亢进症； 降低：见于甲状腺机能减退症； FT4：是具有生物活性的甲状腺激素，可以更灵敏、更准确地反映甲状腺的功能状态。 增高：见于甲状腺机能亢进症； 降低：见于甲状腺机能减退症； hTSH：是由垂体前叶特异细胞合成和分泌的，是诊断原发性甲状腺功能减退最灵敏的指标，这种患者由于甲状腺和垂体间的负反馈作用减少，因此TSH常明显升高。 增高：见于原发性甲状腺机能减退症、异源促甲状腺激素综合征、垂体促甲状腺激素细胞肿瘤、地方性缺碘性或高碘性甲状腺肿、单纯性弥漫性甲状腺肿等； 降低：见于甲状腺功能亢进症、下丘脑性甲状腺机能减退症、肢端肥大症、非促甲状腺激素所致的甲状腺机能亢进症等。 TGAb：阳性见于桥本甲状腺炎、自家免疫性甲状腺疾病、原发性甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进患者等，桥本甲状腺炎患者阳性检出率高达80％--90％；某些肝脏病、各种胶原性疾病和重症肌无力；正常妇女随年龄的增长，阳性检出率增加，40岁以上妇女阳性率达18％。 TMAb：阳性见于桥本甲状腺炎、自家免疫性甲状腺疾病、原发性甲状腺功能亢进、原发性甲状腺功能减退。有些患者TG阴性，但TM阳性，因此两种抗体周时检测可提高抗甲状腺自身抗体的阳性检出率。 二、肿瘤系列： 检测项目： CEA（癌胚抗原）、AFP（甲胎蛋白）、PSA（前列腺特异性抗原） CA-125（肿瘤抗原125）、CA-153（肿瘤抗原CA-153）、CA-199（糖类抗原CA-199）临床意义： CEA：增高：见于原发性结肠癌（45％--80％）、直肠癌、胰腺癌、胆管癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系统的肿瘤等。也见于肠梗阻、胆道梗阻、尿毒症、胰腺炎、肝硬化、溃疡性结肠炎、消化性溃疡等，但均为暂时性增高。 AFP：显著增高：原发性肝癌； 明显升高：生殖腺胚胎癌；
色谱法的分类及其原理
色谱法的分类及其原理 （一）按两相状态 气相色谱法:1、气固色谱法 2、气液色谱法 液相色谱法:1、液固色谱法 2、液液色谱法 （二）按固定相的几何形式 1、柱色谱法(column chromatography) ：柱色谱法是将固定相装在一金属或玻璃柱中或是将固定相附着在毛细管内壁上做成色谱柱，试样从柱头到柱尾沿一个方向移动而进行分离的色谱法 2、纸色谱法（paper chromatography）：纸色谱法是利用滤纸作固定液的载体，把试样点在滤纸上，然后用溶剂展开，各组分在滤纸的不同位置以斑点形式显现，根据滤纸上斑点位置及大小进行定性和定量分析。 3、薄层色谱法(thin-layer chromatography, TLC) ：薄层色谱法是将适当粒度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，然后用与纸色谱法类似的方法操作以达到分离目的。 （三）按分离原理 按色谱法分离所依据的物理或物理化学性质的不同，又可将其分为：
1、吸附色谱法：利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法。适于分离不同种类的化合物（例如，分离醇类与芳香烃）。 2、分配色谱法：利用固定液对不同组分分配性能的差别而使之分离的色谱法称为分配色谱法。 3、离子交换色谱法：利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法，利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差异来实现分离。离子交换色谱主要是用来分离离子或可离解的化合物。它不仅广泛地应用于无机离子的分离，而且广泛地应用于有机和生物物质，如氨基酸、核酸、蛋白质等的分离。 4、尺寸排阻色谱法：是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法，体积大的分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻，较早的淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。这样，样品分子基本按其分子大小先后排阻，从柱中流出。被广泛应用于大分子分级，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。 5、亲和色谱法：相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相，利用与固定相不同程度的亲和性，使成分与杂质分离的色谱法。例如利用酶与基质（或抑制剂）、抗原与抗体，激素与受体、外源凝集素与多糖类及核酸的碱基对等之间的专一的相互作用，使相互作用物质之一方与不溶性担体形成共价结合化合物，
免疫层析法检测原理分类介绍
免疫层析法检测原理分类介绍 作者：佚名 文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司 点击数： 88 更新时间：2005-10-16 双抗体夹心 ·以 hCG 试剂为例 金标为鼠源性抗β-hCG 单克隆抗体与胶体金的复合物，测试线包被羊抗α-hCG 多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。 妇女受孕的“指示剂” hCG 是一种肽，包含一条和FSH （促卵泡成熟激素），FLH 具有同源性的α链和一条高度特异的β链。当待测尿液或血清中含有一定量的hCG 时，样本通过层析作用到达金标位置hCG 的β链和单抗β-hCG 发生免疫反应，再层析到测试线位置，hCG 的α链和多抗 α-hCG 发生免疫反应，这样就把金标通过hCG 桥连到测试线上，达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗β-hCG 单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显色，这样就得到阳性结果。 当尿液或血清中不含 hCG 时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线则显色，这样就得到了阴性结果。当测试线和控制线均不显色时，表示试剂盒无效。 该产品检验灵敏度25mIU/ml hCG 。 测HbsAg 的HbsAg 产品的检测原理是双抗体夹心。 竞争反应原理 ·以 MOP 为例（BSA 为牛血清白蛋白） 金标为鼠源性抗体Morphine 单抗和胶体金的复合物，T 线（为取得较强的免疫应答，故免疫 原采用Morphine-BSA 偶联物）包被Morphine-BSA 。C 线包被羊抗鼠抗体。
当待测尿液中含一定量以上的 Morphine时，样本到达金标位置，和单抗Morphine-BSA发生 免疫反应并完全饱和之，再层析到T线位置时，由于单抗Morphine-BSA lgG胶体金复合物已无空余的位点和测试线上的Morphine-BSA结合，故T线不显色，C线显色，这样得到的是阳性结果。 当待测尿液中不含 Morphine时，样本与金标不反应，再层析到T线位置时，固定在NC膜上 的Morphine-BSA会“捕捉”单抗 Morphine-BSA胶体金复合物，故T线显色，C线也显色，得到 阴性结果。当无C、T线时，表示试剂盒失效。 其它产品如 DPC、DTH、DME、DAM、DCO等依次类推。 应用proteinA金标的试剂盒检测原理 蛋白 A是金黄色葡萄球菌的一种胞壁蛋白，有与哺乳动物的lgG结合的特性，亲和力根据物种的差异而有区别。而人体中所有的抗体均是lgG因此能用来检测人体血液中的抗体用已知抗原测未知抗体。 ·以IHI为例说明 HIV试剂盒金标为protein A-金标复合物,T线包被HIV抗原。C线包被鸡抗protein A多克隆抗体。 当待测血清中含有HIV抗体时，该抗体先和protein A胶体金复合物免疫结合，到T线位置时，该抗体又和固定在NC膜上的HIV抗原免疫结合，从而桥连protein A胶体金，T线显色。到达C线位置时，固定在NC膜上的鸡抗protein A 多抗桥连protein A多抗桥连protein A胶体金，C线显色，得到阳性结果。 若待测血清中不含HIV抗体，则T线上的HIV抗原和protein A不发生免疫结合，T线不显色，
临床免疫学检验 名词解释整理
抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。 抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。 亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。 亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。 抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。 带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。 免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。 半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。 载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。 载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。 单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。 多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~ 基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。 凝集反应（agglutination reaction）：是指细菌和红细胞或红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。 ①直接~：在适当电解质参与下，细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合后出现肉眼可见的凝集现象，称为~。 ②间接~：可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体（如正常人O型红细胞、细菌、胶乳颗粒等）的表面，然后与相应抗体（抗原）作用，在适宜的电解质存在条件下出现特异性凝集现象，称为~。其敏感度高于直接凝集反应和沉淀反应。 正向间接凝集反应：用可溶性抗原致敏载体以检测标本中的待检抗体。 反向间接凝集反应：用特异性抗体致敏载体以检测标本中的待检抗原。 间接凝集抑制反应：用抗原致敏的载体颗粒及相应的抗体作为诊断试剂，检测标本中是否存
(推荐)高效液相色谱法的分类及原理
高效液相色谱法的分类及其分离原理 高效液相色谱法分为：液-固色谱法、液-液色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法。 1.液-固色谱法（液-固吸附色谱法） 固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分配的。 ①液-固色谱法的作用机制 吸附剂：一些多孔的固体颗粒物质，其表面常存在分散的吸附中心点。 流动相中的溶质分子X（液相）被流动相S带入色谱柱后，在随载液流动的过程中，发生如下交换反应： X（液相）+nS（吸附）<==>X（吸附）+nS（液相） 其作用机制是溶质分子X（液相）和溶剂分子S（液相）对吸附剂活性表面的竞争吸附。 吸附反应的平衡常数K为： K值较小：溶剂分子吸附力很强，被吸附的溶质分子很少，先流出色谱柱。 K值较大：表示该组分分子的吸附能力较强，后流出色谱柱。 发生在吸附剂表面上的吸附-解吸平衡，就是液-固色谱分离的基础。 ②液-固色谱法的吸附剂和流动相 常用的液-固色谱吸附剂：薄膜型硅胶、全多孔型硅胶、薄膜型氧化铝、全多孔型氧化铝、分子筛、聚酰胺等。 一般规律：对于固定相而言，非极性分子与极性吸附剂（如硅胶、氧化铜）之间的作用力很弱，分配比k较小，保留时间较短；但极性分子与极性吸附剂之间的作用力很强，分配比k大，保留时间长。 对流动相的基本要求： 试样要能够溶于流动相中 流动相粘度较小 流动相不能影响试样的检测 常用的流动相：甲醇、乙醚、苯、乙腈、乙酸乙酯、吡啶等。 ③液-固色谱法的应用 常用于分离极性不同的化合物、含有不同类型或不；数量官能团的有机化合物，以及有机化合物的不同的异构体；但液-固色谱法不宜用于分离同系物，因为液-固色谱对不同相对分子质量的同系物选择性不高。 2.液-液色谱法（液-液分配色谱法） 将液体固定液涂渍在担体上作为固定相。 ①液-液色谱法的作用机制 溶质在两相间进行分配时，在固定液中溶解度较小的组分较难进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较快；在固定液中溶解度较大的组分容易进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较慢，从而达到分离的目的。 液-液色谱法与液-液萃取法的基本原理相同，均服从分配定律：K=C固/C液 K值大的组分，保留时间长，后流出色谱柱。 ②正相色谱和反相色谱 正相分配色谱用极性物质作固定相，非极性溶剂（如苯、正己烷等）作流动相。 反相分配色谱用非极性物质作固定相，极性溶剂（如水、甲醇、己腈等）作流动相。
免疫层析实验
免疫层析实验 1．原理 金免疫层析试验（dot immunogold chromatographic assay，DICA）是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。本项技是将各种反应试剂分点固定在试纸条上，检测标本加在试纸条的一端，通过毛细血管作用使样品溶液在层析材料上泳动，样本中的待测物与层析材料中的反应试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），通过标记免疫技术显色。本项技术的特点是可进行单份标本检测且简便、快速、不需任何仪器设备，因此，发展非常迅速。 DICA也是GICA（goldimmunochromatography assay）GICA试剂为试纸条形式。在以塑料条上依次黏贴上以下几种组分，1--吸水纸，2--破璃纤维膜，抹上固定着干燥的金标抗体，3--硝酸纤维素膜，膜上包被着线条状抗体，4--吸水纸。 因为1，4都是吸水纸，由于吸水作用， 一，使样品液从1端向4端移动 二，当样品液达到2时，金标抗体被溶解，同时与标本中的抗原反应形成复合物 三，样品液继续移动至3 时，金标记的抗体复合物与膜上的抗体结合，呈现红色的线条 四，多余的金条抗体继续前移到4， 1 2 3 4 2.方法学类型 DICA多用于检测抗原，但亦可用于检测抗体。常见方法学类型有： 1)双抗体夹心法测抗原： 若图-2所示，G处为金标抗体(免疫金)，T处包被抗体，C处包被抗金标抗体，B处为吸水纸。测试时A端滴加待测标本，通过层析作用，待测标本向B端移动，流经G处时将金标抗体复溶，若待测标本中含待测抗原，即形成金标抗体-抗原复合物，移至T区时，形成金标抗体-抗原-抗体复合物，金标抗体被固定下来，在T区显示红色线条，呈阳性反应，多余的金标记抗体移至C区被抗金标抗体捕获，呈现红色质控线条。 图-2免疫层析试验双抗体夹心法测大分子抗原 2）竞争法测小分子抗原： 若图1-3所示,G处为金标抗体，T处包被标准抗原，C处包被抗免疫金抗体，测试时待测标本加于A端，若待测标本中含有待测抗原，流经G处时结合金标抗体，当混合物移至T 处时，因无足够游离的金标抗体与膜上标准抗原结合，T处无棕红色线条出现，实验结果为阳性，游离金标抗体或金标抗体复合物流经C处，与该处的抗金标抗体结合出现棕红色的质控带，若标本中不含待测抗原，金标抗体则与T处膜上的标准抗原结合，在T处出现棕
常用免疫学检验技术的基本原理
常用免疫学检验技术的基本原理 免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原。由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答，在生物体内产生特异性和非特异性T 细胞的克隆扩增，并分泌特异性的免疫球蛋白（抗体）。由于抗体－抗原的结合具有特异性和专一性的特点，这种检测可以定性、定位和定量地检测某一特异的蛋白（抗原或抗体）。免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于各种疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。 最初的免疫检测方法是将抗原或抗体的一方或双方在某种介质中进行扩散，通过观察抗原－抗体相遇时产生的沉淀反应，检测抗原或抗体，最终达到诊断的目的。这种扩散可以是蛋白的自然扩散，例如环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散实验。单向免疫扩散试验就是在凝胶中混入抗体，制成含有抗体的凝胶板，而将抗原加入凝胶板预先打好的小孔内，让抗原从小孔向四周的凝胶自然扩散，当一定浓度的抗原和凝胶中的抗体相遇时便能形成免疫复合物，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正比。 利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷的特性，可以利用人为的电场将抗原、抗体扩散，例如免疫电泳试验和双向免疫电泳。免疫电泳首先将抗原加入凝胶中电泳，将抗原各成分依次分散开。然后沿电泳方向平行挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原的混合抗体，让各抗原成分与相应抗体进行自然扩散，形成沉淀线。然后利用标准的抗原－抗体沉淀线进行抗原蛋白（或抗体）的鉴别。上述的方法都是利用肉眼观察抗原－抗体反应产生的沉淀，因此灵敏度有很大的局限。比浊法引入沉淀检测产生的免疫比浊法就是利用浊度计测量液体中抗原－抗体反应产生的浊度，根据标准曲线来计算抗原（或抗体）的含量。该方法不但大大提高了检测的灵敏度，且可对抗原、抗体进行定量的检测。
免疫学检验
1简述双抗体夹心法的原理。 DA连接于固相载体上的抗体和酶标抗体，与待检抗原上两个不同的抗原决定基结合，形成固相抗体一抗原一酶标抗体复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比。测定复合物中酶作用于加入的底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量。 2何谓金免疫测定技术?简述其技术类型及原理。 DA金免疫测定技术是指用胶体金颗粒作为标记物进行抗原抗体反应的一类免疫学测定技术，其主要技术类型有斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验。1)斑点金免疫渗滤试验：在以硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加标本、免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材料上，故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测目的，阳性反应在膜上呈现红色斑点。2)斑点金免疫层析试验：是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相合的以硝酸纤维素膜为载体的固相膜免疫分析技术，滴加在膜一端的标本溶液受载体膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体膜上某一区域的抗体或抗原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。 3简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。 单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。 4简述抗原抗体反应的原理。 答：抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合 5简述抗原抗体反应的类型。 答：抗原抗体反应分为五种类型：①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应；②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；③抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应；④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；⑤免疫标记的抗原抗体反应等。 6什么是带现象? 答：在抗原抗体反应等价带前后，由 于抗体或抗原过量(形成前带或后 带)，上清液中可测出游离的抗体或 抗原，形成的沉淀物少，不出现可见 反应，这种现象在做血清学试验时称 为带现象。 7影响抗原抗体反应的环境条件有哪 些?在实验中如何控制这些条件因 素? 答：环境条件包括：电解质，酸碱度 和温度。稳定条件：①电解质：常用 O．85％氯化钠或各种缓冲液作抗原 及抗体的稀释液及反应液；②酸碱 度：pH过高或过低都将影响抗原与抗 体的理化性质，抗原抗体反应一般在 pH为6～8时进行；③温度：一般以15， 40℃为宜，最佳反应温度为37℃。 8试述免疫血清应如何进行纯化。 免疫血清的纯化主要是指提纯免疫 血清中的IgG并去除无关的杂抗体。 提纯IgG类抗体的方法有：硫酸胺盐 析法粗提、离子交换层析法和亲和层 析法，采用亲和层析法提取IgG时， 可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白A交 联sephamse 4B制成层析柱。另外， 还可通过吸附法获得单价特异性抗 血清。方法是将不含特异性抗原的杂 抗原与戊二醛等双功能试剂混合制 成固相吸附剂，以吸附免疫血清中的 杂抗体，或将杂抗原交联于sephamse 4B上，通过亲和层析去除杂抗体。 9叙述杂交瘤技术的基本原理。 杂交瘤技术是在细胞融合技术的基 础上，将具有分泌特异性抗体能力的 致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨 髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种 杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特 性，即既能够分泌抗体又能在体外长 期繁殖，经过克隆化后成为单个细胞 克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。 10简述间接血凝试验的基本原理。 间接血凝试验是将可溶性抗原(或抗 体)吸附于人的0型红细胞或绵羊、家 兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞， 与相应抗体(或抗原)作用，在有电解 质存在的条件下，经过一定时间可出 现肉眼可见的红细胞凝集现象，又称 被动血凝试验 11何谓间接凝集反应？ 将可溶性抗原（或抗体）先吸附或偶 联于与免疫无关大小适当的颗粒表 面，使之成为致敏载体颗粒，然后与 相应抗体（或抗原）作用，在适宜电 解质存在条件下，出现特异性的凝 集现象，称为间接凝集反应 12间接凝集反应如何进行分类？各 试验的原理是什么 根据致敏载体用的是抗原或抗体分 为正向间接凝集试验和反向间接凝 集试验；根据载体种类，分为间接血 凝试验和胶乳间接凝集试验；根据反 应方式分为间接凝集试验、间接抑制 凝集试验和协同凝集试验,间接凝集 试验是用抗原致敏载体检测标本中 的相应抗体。将可溶性抗原与载体颗 粒结合，再与标本中的抗体反应，通 过抗体桥联，形成肉眼可见的凝集颗 粒或凝集块，为阳性反应。反向间接 凝集试验选用已知特异性抗体致敏 载体检测标本中的相应抗原。用特异 性抗体致敏颗粒，与样品中的待检抗 原反应，通过抗原桥联，形成肉眼可 见的凝集为阳性。临床上用于检测 HbsAg、AFP 等。间接凝集抑制试验 诊断试剂为已知抗原致敏的颗粒载 体及相应的抗体，用于检测标本中与 致敏抗原相同的抗原。将标本与抗体 试剂相反应，然后加入致敏抗原，若 出现凝集现象，说明标本中不存在相 应抗原;如未出现凝集现象，则说明 待检标本中含有相应抗原，凝集反应 被抑制。同理，用抗体致敏载体颗粒 及相应抗原作为诊断试剂，检测标本 中的抗体，称为反向间接凝集试验。 协同凝集试验与间接凝集反应的原 理相似，但所用载体为金黄色葡萄球 菌，该菌细胞壁上的SPA 能与特异性 抗体的IgG 的Fc 段结合（IgG3除 外），抗体的F(abˊ)2 段暴露在葡 萄球菌的表面，仍能与相应抗原特异 性结合。当这种葡萄球菌与IgG 抗体 连接时，就成为抗体致敏的载体颗 粒，若与相应抗原接触，即出现反向 间接凝集反应。间接血凝试验是以红 细胞作为载体的间接凝集试验，用已 知的抗原或抗体致敏红细胞，然后与 样品中的抗体或抗原在适宜条件下 反应，出现红细胞凝集者为阳性。根 据红细胞凝集的程度判断阳性反应 的强弱。胶乳凝集试验是以聚苯乙烯 胶乳微粒作为载体的间接凝集试验。 13 HAT培养基筛选杂交瘤细胞的机 制是什么？ 答：1.淋巴细胞：不能生长，5到7 天死亡；DNA的主要合成途径被A阻断 2.骨髓瘤细胞：不能生长，5到7天死 亡；HGPRT缺乏，DNA合成的旁路途经 受阻3.骨髓瘤细胞和脾细胞融合形 成杂交瘤细胞，可长期生长繁殖。利 用淋巴细胞的HGRT将Ｈ合成为嘌呤 碱并最终与Ｔ一起合成ＤＮＡ从淋 巴细胞获得产生某种抗体的遗传信 息，从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能 力 14 简述免疫系统的三个生理功能。 答：免疫系统的三个生理功能为免疫
重金属免疫学快速检测技术研究进展
重金属免疫学快速检测技术研究进展 本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！ 摘要：重金属免疫学检测技术作为一种新型检测技术，与传统检测方法相比具有灵敏、快速、携带方便、费用低的优点，可用于现场快速检测。概述近年来免疫学检测技术的最新研究进展，并对该类方法的发展趋势和在食品安全检测中的应用前景进行了展望。 关键词：重金属；免疫检测；酶联免疫吸附反应；胶体金免疫层析法；荧光偏振免疫分析法 随着全社会对食物安全和环境保护问题的关注不断提高，重金属污染已成为全球性的问题。环境污染方面所指的重金属主要指生物毒性显著的汞、镉、铅、铬以及类金属砷，还包括具有毒性的重金属铜、钴、镍、锡、钒等污染物[1]。这类有毒物质通过经由食物链浓缩且在身体不断累积，主要以慢性中毒和远期效应显出毒性，存在巨大的潜在危害。据国家环保局不完全统计，全国每年因重金属污染的粮食达×106万kg，造成的直接经济超过200亿元，受不同程度重金属污染的耕地约有2000万hm2，约占耕地总面积的
1/5[2]。中国水体重金属污染问题也十分突出，江河湖库底质的污染率高达%。重金属一旦污染环境，很难自然修复，且随食物链畜积和传递，对食品安全与群众的健康造成严重威胁[3]。 因此，近年来重金属污染越来越受到到人们的重视，针对重金属常用的传统检测方法包括电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、石墨炉原子吸收光谱法(GF-ASS)、火焰原子吸收法(FASS)以及紫外分光光度法(UV)等。传统检测方法具有省时、快速、准确、灵敏的优点，是的国家重金属安全检测的金标准。传统的检测方法准确、可信度高，但往往需要大型设备仪器和专业人员操作，有一定的时间地点局限性，不适合用于快速、现场定量检测。在突发性环境污染事件检测和大范围取样实时监测时，需要建立一种灵敏、高效、快速、方便的检测方法。因此，基于单克隆抗体的制备与应用[4]的免疫学检测技术，为实现环境及食品样品中重金属的快速定量或半定量检测提供了一个有效途径。本文综合论述了近几年来重金属检测中的样品前处理及免疫学检测技术，并对今后的研究发展方向做出展望。 1 样品前处理 重金属在实际样品中往往以化合物的形态存在，
免疫学检测原理
第二十一章免疫学检测原理 第一部分学习习题 一、填空题 1．抗原抗体反应的最大特点是_________。 2．颗粒性抗原与相应抗体结合后，可以发生_________反应；可溶性抗原与相应抗体结合后，在比例合适的情况下，可以发生_________反应。 3．细胞因子的检测可以分为_________、_________、_________三类。 二、多选题 [A型题] 1．抗原-抗体反应所不具有的特征是： A．分子表面的可逆结合 B．具有高度特异性 C．出现肉眼可见的反应需要适当的比例 D．二者结合后，立即出现可见反应 E. 二者反应受电解质、酸碱度和浓度的影响 2．检测可溶性抗原不能用： A．ELISA B．单向琼脂扩散 C．直接凝集反应 D．反向间接凝集反应 E．协同凝集试验 3.不属于抗原抗体反应的是： A. 酶联免疫吸附试验（ELISA） B．锡克试验
C．抗球蛋白试验 D．放射免疫分析法（RIA） E．E花环试验 4．乳胶妊娠诊断试验属于： A．协同凝集反应 B．反向间接凝集反应 C．直接凝集反应 D．间接凝集反应 E．间接凝集抑制反应 5．下列免疫学测定方法敏感性最高的是： A．沉淀反应 B．凝集反应 C．ELISA D．放射免疫测定 E．补体结合试验 6．抗原抗体反应最适宜的PH值为： A. 5—4.5 B．4.5—5 C．5—6 D．6—8 E．8—9 7．用免疫荧光技术间接法检测组织中的抗原，应将荧光素标记： A. 抗原 B相应抗 C．抗免疫球蛋白抗体 D．抗原-抗体复合物 E．抗C3抗体 8．用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是： A. 酶标抗A抗体 B．未标记的抗A抗体 C．酶标抗原A D．未标记的抗球蛋白抗体 E．酶标抗球蛋白抗体 9．用免疫荧光技术直接法检测病原微生物时，荧光素应标记在： A. 微生物上 B．抗人Ig抗体上 C．抗原-抗体复合物上 D.抗微生物抗体上 E．抗C3抗体上 10．诊断DTH的皮肤试验，在前臂内注射少量可溶性抗原后，观察时间为：
免疫层析技术
层析法概念 层析法(chromatography)的原理是利用混合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)而建立来的一种分离技术。 层析系统是由固定相(stationary phase) 和流动(Mobile Phase)相组成。固定相是固体物质或固定于固体物质上的成分。流动相是可以流动的物质，如水或各种溶剂。 层析过程：当待分离混合物随流动相通过固定相时，由于混合物各组分的理化性质的差异，与固定相相互作用弱的组分随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移的速度快；与固定相相互作用强的组分向前移动的速度慢。从而实现混合物中各组分的分离。 免疫层析法概念 免疫层析法(immunochromatography)是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。 免疫层析技术是建立在层析技术和抗原一抗体特异性免疫反应基础上的一项新兴免疫检测技术。 免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细管作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。游离物在C线处发生免疫反应。 分类 检测方法标记物质 TRFIA技术镧系稀土元素螯合物 上转换发光技术上转磷光材料（UCP） 荧光乳胶层析技术荧光胶乳颗粒 荧光微球免疫层析技术荧光微球 荧光QDS层析技术量子点 IMB层析技术免疫磁珠 新型胶体金技术纳米磁性微粒、核酸适配体
免疫学检验名解
免疫学检验：是利用免疫学的理论、技术，结合分子生物学及细胞生物学等的原理和技术，对样本中抗原、抗体、免疫细胞以及细胞因子等进行定性或定量检测的一门学科。 免疫学（Immunology)：是通过研究免疫系统的结构与功能，阐明免疫应答反应中机体的防卫功能和病理损伤的机制，为预防、诊断和治疗疾病提供理论基础的一门现代医学学科。 免疫系统（immune system):是执行免疫功能的组织系统，包括免疫器官、免疫细胞、免疫分子。 外周免疫器官：是成熟免疫细胞定居的场所，也是淋巴细胞针对外来抗原启动免疫应答的主要部位。包括：淋巴结、脾脏、扁桃体及粘膜免疫系统。 抗体（antibody，Ab）：是体液免疫应答产生的效应分子；免疫系统在Ag刺激下，由B淋巴细胞或记忆B细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布于血清、组织液等体液中。 补体（complement,C）：包括30余种组分，其广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面，是一个具有精密调控机制的蛋白质反应系统。血浆中补体成分在被激活前无生物学功能，经活化后具有酶活性和多种生物学效应。机体抗感染防御的主要机制。 细胞因子（cytokine）：是由免疫细胞及组织细胞分泌的在细胞间发挥相互调控作用的一类小分子可溶性多肽蛋白，通过结合相应受体调节细胞生长分化和效应，调控免疫应答。细胞因子和受体的检测对应了解集体的免疫状态和细胞功能具有重要意义。 免疫应答:是指机体免疫系统受到抗原刺激后识别和清除异物的整个过程。分为：固有免疫，适应性免疫。 固有免疫（Innate Immunity）：是生物体在长期种系进化过程中逐步形成的天然免疫体系,非特异性免疫。主要由组织屏障、固有免疫细胞、固有免疫分子组成。 适应性免疫（adaptive immunity)：是指体内T淋巴细胞和B淋巴细胞在接受抗原刺激后产生的免疫应答。又称获得性免疫或特异性免疫。具有特异性、耐受性和记忆性等特点。 ※抗原抗体反应（antigen-antibody reaction)：是指抗原与抗体之间发生的特异性结合反应。可发生在体内，也可发生在体外。 ※抗原表位（epitope)：指存在于抗原分子表面的，能与T/B细胞抗原受体或抗体特异性结合，决定抗原特异性的特殊化学基团。 ※共同抗原表位（common epitope ）：某些抗原分子中含多个抗原表位，而不同抗原之间可能含相同或相似的抗原表位。 ※共同抗原：含共同抗原表位的不同抗原。 ※交叉反应（cross-reaction）：某些抗原诱生的特异性抗体或活化淋巴细胞，不仅可与该抗原的表位特异性结合，还可与相应的共同抗原中相同或相似表位反应。 ※亲和力（affinity)：指抗体分子上一个抗原结合位点与对应的抗原表位之间相适应而存在着的引力，是抗原抗体间固有的结合力。 ※亲合力（avidity)：指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度，可表示抗原和抗体复合物的整体稳定性。 ※颗粒性抗原的制备：主要指细胞抗原、细菌抗原和寄生虫抗原，通过分离或纯培养既可获得。 ※可溶性抗原：具有免疫原性的各种可溶性物质，如蛋白质、细菌毒素、酶、补体等皆为良好的可溶抗原。但因这些蛋白质多为复杂的蛋白组分，免疫前需进行纯化。 ※多克隆抗体（polyclonal，Ab）：由机体的多个B细胞克隆产生的针对多个表位的混合抗体。一般是用Ag免疫动物获得的抗体，又称抗血清或免疫血清。 ※免疫佐剂（adjuvant）：指同抗原一起或预先注射到机体内，能增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强物质，简称佐剂。 ※单克隆抗体（monoclonal Ab, mAb）：是利用B淋巴细胞杂交瘤技术获得的，由识别一种抗原表位的B细胞杂交瘤克隆合成和分泌的，在理化性质、分子结构、遗传标记和生物学特性等均完全相同的特异性抗体。也称第二代抗体。（1975年Kohler和Milstein首先报道）
免疫层析各种方法法原理
双抗体夹心法原理 以HCG 为例（检测抗原） 此方法较常用，主要用于较大分子量的蛋白（抗原）的检测。要求两株抗体针对一个抗原的不同位点才可以。也有个别的检测项目（HIV）是双抗原夹心检测抗体的，原理类似。HCG 金标记αHCG 金-αHCG-HCG 金-αHCG-HCG -βHCG 金-αHCG -羊抗鼠IgG(Y3) 金-αHCG-HCG 羊抗鼠IgG （Y3） 显示红色显示红色 金标记αHCG 不显色显示红色 金-αHCG -羊抗鼠IgG 阴性反应 阳性反应 βHCG
以吗啡为例（检测抗原） 此方法主要用于小分子抗原（毒品、农药、肽链等）的检测。由于抗原分子量小不能直接固定于NC 膜上，常常用化学方法把小分子偶联到BSA 等大分子物质上再固定于NC 膜上。此结果与双抗原夹心法相反，阴性CT 两条都是红线，阳性只有C 线一条红线，T 线不显色。 金-吗啡抗体-吗啡吗啡-BSA 金标记吗啡抗体显示红色不显色金-吗啡抗体-吗啡羊抗鼠尿液(含 吗啡)显示红色 显示红色金标记吗啡抗体金-吗啡抗体-羊抗鼠 阴性尿液 抗体-吗阴性反应 阳性反应金标记吗啡抗体-吗啡-BSA
乙肝E 抗体为例 金标记e 抗体e 抗原e 抗体 金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体-羊抗鼠 不显色显示红色 金标记e 抗体e 抗原金标记e 抗体-e 抗原 金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体显示红色显示红色 金标记e 抗体-e 抗原 羊抗鼠 阳性反应 阴性反应
间接法原理检测抗体 此方法主要用于血清中抗体检测，纯化或者重组的抗原固定于NC 膜上，标记多为蛋白A(ProteinA 或叫SPA，与抗体Fc 端结合而与其它蛋白质不结合)或者鼠抗人（如检测为IgM，则标记为鼠抗人IgM）。此方法要求胶体金过量（待测样品往往含有大量多种抗体，所检测抗体所占份额很小），一般来说样品再加入前需要稀释或者加极少量后再加样品缓冲液。 一般斑点免疫渗滤法使用也是间接法。显示红色显示红色 金标记SPA 目的抗体杂抗体阳性反应抗原 杂抗体金标记SPA 抗原不显色显示红色 阴性反应
高效液相色谱法的分类及原理
高效液相色谱法地分类及其分离原理 高效液相色谱法分为：液固色谱法、液液色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法. .液固色谱法（液固吸附色谱法） 固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相上地吸附作用不同来进行分配地. ①液固色谱法地作用机制 吸附剂：一些多孔地固体颗粒物质，其表面常存在分散地吸附中心点. 流动相中地溶质分子（液相）被流动相带入色谱柱后，在随载液流动地过程中，发生如下交换反应： （液相）（吸附）<>（吸附）（液相） 其作用机制是溶质分子（液相）和溶剂分子（液相）对吸附剂活性表面地竞争吸附. 吸附反应地平衡常数为： 值较小：溶剂分子吸附力很强，被吸附地溶质分子很少，先流出色谱柱. 值较大：表示该组分分子地吸附能力较强，后流出色谱柱. 发生在吸附剂表面上地吸附解吸平衡，就是液固色谱分离地基础.资料个人收集整理，勿做商业用途 ②液固色谱法地吸附剂和流动相 常用地液固色谱吸附剂：薄膜型硅胶、全多孔型硅胶、薄膜型氧化铝、全多孔型氧化铝、分子筛、聚酰胺等. 一般规律：对于固定相而言，非极性分子与极性吸附剂（如硅胶、氧化铜）之间地作用力很弱，分配比较小，保留时间较短；但极性分子与极性吸附剂之间地作用力很强，分配比大，保留时间长.资料个人收集整理，勿做商业用途 对流动相地基本要求： 试样要能够溶于流动相中 流动相粘度较小 流动相不能影响试样地检测 常用地流动相：甲醇、乙醚、苯、乙腈、乙酸乙酯、吡啶等. ③液固色谱法地应用 常用于分离极性不同地化合物、含有不同类型或不；数量官能团地有机化合物，以及有机化合物地不同地异构体；但液固色谱法不宜用于分离同系物，因为液固色谱对不同相对分子质量地同系物选择性不高.资料个人收集整理，勿做商业用途 .液液色谱法（液液分配色谱法） 将液体固定液涂渍在担体上作为固定相. ①液液色谱法地作用机制 溶质在两相间进行分配时，在固定液中溶解度较小地组分较难进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较快；在固定液中溶解度较大地组分容易进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较慢，从而达到分离地目地.资料个人收集整理，勿做商业用途 液液色谱法与液液萃取法地基本原理相同，均服从分配定律：固液 值大地组分，保留时间长，后流出色谱柱. ②正相色谱和反相色谱 正相分配色谱用极性物质作固定相，非极性溶剂（如苯、正己烷等）作流动相. 反相分配色谱用非极性物质作固定相，极性溶剂（如水、甲醇、己腈等）作流动相.