质粒小提试剂盒使用说明书
质粒提取试剂盒说明书
质粒抽提：质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
实验原理：提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
详细内容请参考《分子克隆实验指南》。
另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。
碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。
将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。
只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。
在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。
当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。
在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL 以上。
煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。
加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA 变性。
但是。
闭环质粒DNA链彼此不会分离，这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。
当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。
GENMED 无内毒素小量质粒抽提试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60007.3 v.A GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂是一种旨在通过化学和生物裂解细胞、 沉淀、亲和树脂过滤、萃取来达到脱盐、去内毒素、去蛋白、去杂质小分子的纯化无内毒素质粒DNA的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种质粒/柯斯质粒DNA样品的制备，OD260/280在1.8-2.0之间。
产物可用于各种后续分子生物学操作。
产品即到即用，性能稳定，操作方便迅速，提取效率和纯化程度高。
技术背景内毒素（Endotoxin）是一种脂多糖（Lipopolysaccharides；LPS），革兰氏阴性细菌细胞膜的组成成分。
在质粒纯化过程中，细菌裂解释放出内毒素，伴随着质粒，严重干扰后续真核细胞的转染，尤其对于敏感的细胞株。
GENMED无内毒素小量质粒DNA制备技术综合了酶解、碱裂、煮沸等优势元素，融入了特异亲和树脂充分有效地使细菌中核酶、PCR反应抑制剂失活，并清除内毒素（低达<0.1 EU/微克）以及非DNA 分子，其效率和纯度都出乎其上。
产品内容GENMED混匀液（Reagent A）毫升GENMED裂解液（Reagent B）毫升GENMED平衡液（Reagent C）毫升GENMED去毒液（Reagent D）毫升GENMED去干扰剂（Reagent E）微升GENMED沉淀液（Reagent F）毫升GENMED清理液（Reagent G）毫升GENMED保存液（Reagent H）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED混匀液（Reagent A）和GENMED去干扰剂（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5和2毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于沉淀核酸涡旋震荡仪：用于混匀反应物37℃恒温水槽：用于孵育反应物1．加入毫升含质粒的细菌到毫升离心管（注意：确保细菌量OD600＝ ;如果细菌量不足，影响质粒提取）2．放进微型台式离心机离心秒，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED混匀液（Reagent A），涡旋震荡少许，使细菌颗粒混匀5．加入微升GENMED裂解液（Reagent B），轻轻混匀6．加入微升GENMED平衡液（Reagent C），强力涡旋震荡秒7．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）8．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免絮状物9．同时移取微升GENMED去毒液（Reagent D）到另一个新的毫升离心管（注意：参见注意事项3和4）10．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）11．小心抽去上清液12．加入微升实验步骤的上清液13．涡旋震荡秒14．平放在平式摇荡仪上孵育分钟，速度为RPM15．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）16．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免黑色小粒17．加入微升GENMED去干扰剂（Reagent E），混匀18．放进℃恒温水槽孵育分钟19．加入微升GENMED沉淀液（Reagent F）20．涡旋震荡秒21．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）22．小心抽去上清液23．加入微升GENMED清理液（Reagent G）24．放进微型台式离心机离心分钟，速度为0g（例如eppendorf 5415D，RPM）25．小心抽去上清液26．空气中晾干27．加入0微升GENMED保存液（Reagent H）28．放进℃冰箱里备用注意事项1．本产品为20次操作2．本产品采用特殊树脂法3．使用GENMED去毒液（Reagent D）前，充分混匀4．使用1毫升枪头，将枪头尖端部分剪去，用于移取GENMED去毒液（Reagent D）5．细菌量是个重要因素：通常1毫升细菌可获得1－5微克无内毒素质粒6．如果需要制备各种数量的细菌质粒/柯斯质粒，可订购中量和大量规格7．本公司提供GENMED RNA清除试剂盒（GMS20059）和GENMED去内毒素试剂盒（GMS20067）8．本公司提供系列质粒提取试剂产品1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定去内毒素和纯化程度高使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
树脂型质粒DNA小量提取试剂盒操作说明
树脂型™质粒DNA小量提取试剂盒操作方法1. 将3~5ml菌液13,000rpm离心30秒收集沉淀（菌体）。
如果用1.5ml或2ml离心管则需反复离心2~3次。
2. 倒掉上清，将沉淀（菌体）完全悬浮于100µl悬浮液（溶液I）中。
上清要尽可能去除干净，可用滤纸吸干。
沉淀要用混旋器完全悬浮，否则将直接导致下一步的裂解不彻底，进而影响质粒DNA的产量和纯度。
3. 加入150µl裂解液（溶液II），轻柔地颠倒混匀10次左右，溶液逐渐变得粘稠、清亮。
不可用混旋器剧烈振荡，否则会使质粒DNA断裂；裂解时间不宜超过5分钟，否则会造成染色体DNA的污染及质粒DNA的产率降低。
4.加入150µl中和液（溶液III），轻柔地颠倒混匀10次左右。
此时可见到白色絮状的染色体DNA及细菌碎片。
5. 13,000rpm离心8~10分钟，将上清液小心转入一个新的1.5ml离心管中，加入0.4ml纯化树脂（使用前充分混匀），颠倒混匀3分钟。
此步是通过离心去除染色体DNA及细菌碎片，并使处于高盐状态下的质粒DNA与纯化树脂结合。
6.将纯化树脂及上清液的混和物吸入离心纯化柱中，13,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。
7.将离心纯化柱重新套入废液收集管中，加入600µl 80%异丙醇（或80%乙醇），13,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
如果离心纯化柱底部残留有异丙醇（或乙醇），可用滤纸吸干，否则将影响以后的酶促反应。
此步是洗涤质粒DNA中混有的杂质及盐类。
8.重复第7步1~2次，尽可能将杂质去除。
9.取出离心纯化柱，将其套入一个干净的1.5ml离心管，开盖放置2~3分钟，将残留的异丙醇或乙醇挥发干净。
加入50µl TE缓冲液（若用于测序，则加50µl超纯水）于纯化树脂上，不能粘在管壁上。
室温下放置3分钟后，13,000rpm离心1分钟。
此步是将纯化树脂上的DNA洗脱下来。
质粒小提说明书
质粒小提实验步骤这个操作方案可以从过夜培养的1.0-5.0 ml 培养物能得到5-30 μg 的高拷贝数的质粒或1-10 ug低拷贝数的质粒DNA。
如果需要提高低拷贝数质粒的产量，按下面的低拷贝数的方案。
1. 将带有目的质粒的E.coli 接种于裝有5 ml LB/氨苄青霉素的10-20ml 的培养管，37℃搖床培养12~16 h，以扩增质粒。
用一个10-20ml 培养管或培养瓶，其体积至少有培养基的4 倍。
建议使用endA 敏感型的E. coli 菌株来作常规质粒的分离，例如DH5α®和JM109®等菌株。
2. 取1.5~5.0 ml 的菌液，于室温下10,000 x g 离心1min 以沉淀菌种。
3. 倒出或吸出培养基，弃去。
往沉淀中加入250 μlSolutionⅠ/RNaseA 混和液，漩涡振荡使细胞完全重新悬浮。
细胞沉淀的完全重悬对于获得高的产量是十分重要的。
4. 往重悬混和液中加入250 μl Solution Ⅱ，轻轻颠倒混匀7-10 次。
如有必要，可把裂解液置于室温静置2min，避免剧烈混和裂解液，否则会使染色体DNA 断裂而使得到的质粒纯度降低。
裂解反应不要超过5min。
（当使用完SolutionⅡ以后，须盖紧其瓶盖保存好，避免与空气中的CO2 反应。
）5. 往上述混和液中加入125 ul 冰浴Buffer N3，并温和地上下颠倒离心管数次混匀，直至形成白色絮狀沉淀。
6. 室温下，≥12000 x g 离心10min。
7. 小心将上清倒入干净的1.5ml 离心管中，加入0.1 倍体积的ETR 溶液（蓝色）至上清液中，颠倒试管7-10 次，然后于冰浴中静置10 min。
注意：在加入ETR 溶液后，裂解液可能出现浑浊，但冰浴后将逐渐转为澄清。
8. 将上述裂解液于42℃下静置5 min。
裂解液又将再次出现浑浊。
此时，立即于25℃ 12，000 x g 离心3min，ETR 溶液将在试管底部形成蓝色分层。
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒说明书
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒MagBeads Plasmid DNA Mini Extraction Kit【目录号】PDE-5005、PDE-5010、PDE-5030、PDE-5100【运输条件】2~25℃；【保存条件】组分①、③、④于2~8℃保存；组分⑦于-20℃保存；其它组分室温保存；【试剂盒组成】1. 使用前将RNase A溶液（组分⑦）全部加入菌体悬浮液（组分①）中，4℃保存备用；2. 使用前检查菌体裂解液（组分②）是否出现浑浊，如有请置于37℃水浴中温浴至澄清；3. 实验前质粒复性液（组分③）需提前置于4℃冷却充分；4. 菌体裂解液（组分②）和质粒复性液（组分③）使用后应请立即盖紧盖子；5. 磁珠悬浮液（组分④）严禁冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；6. 所有离心步骤均为室温下进行，其中加入质粒复性液（组分③）后低温离心效果更佳；7. RNase A溶液（组分⑦）长期不使用于-20℃保存，融化后4℃保存，并尽快使用；8. 质粒DNA抽提得量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关；9. 本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细阅读并按指南建议操作。
磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案【产品简介】本试剂盒可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提。
试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。
磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力，当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA，从而达到分离纯化质粒DNA的效果。
整个操作过程简便、快速。
本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质，保证提取所得质粒DNA的纯度，所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。
本试剂盒可在EP管中进行手动法操作、在96孔圆孔板中实现手动法高通量操作（单人同时操作1~6块96孔板，可同步实现96~576份样本抽提工作）、或者与各种自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。
TaKaRa 质粒DNA小量纯化试剂盒说明书
● 使用例
使用本试剂盒纯化1.5 ml 的 TB 培养基的菌液（菌体 JM109），得到约16 μg 的质粒 DNA（OD260/OD280 ≥1.8），此质粒为 pUC119，用 Hind Ⅲ酶切1 小时（电泳结果见图2）。
会影响吸光度值的测定，此时建议使用琼脂糖凝胶电泳法进行定量。 ② 质粒 DNA 纯度不好。请严格遵守实验操作要求，使用新鲜菌体培养液提取质粒。 ③ 进行 DNA 洗脱时用灭菌蒸馏水洗脱。 ④ DNA 插入片段本身立体结构复杂。有些 DNA 立体结构复杂（如 GC rich、重复序列等）时难以测
序，应改进测序方法。 Q6. 质粒 DNA 的最小洗脱体积是多少？ A6. 我们建议的洗脱体积为 30-100 μl，此种洗脱体积下收率最佳（但要注意洗脱液需直接加至膜中心），
● 制品说明
本试剂盒是用于质粒（Plasmid）DNA 小量纯化的试剂盒。试剂盒采用了传统的 SDS 碱裂解法，结合硅 胶膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需 1 小时便可完成。使用本试剂盒可从 1～4 ml LB 培养基过夜培养的菌液中纯化得到 1～20 μg 的高纯度质粒 DNA（OD260/OD280 = 1.8～2.0），制备过 程无需苯酚抽提、乙醇沉淀等步骤，所得质粒 DNA 溶解于 Tris Buffer 或水中，纯度较高，可直接用于 转化、DNA 序列分析、体外转录、限制酶切以及其他各种酶促反应。
2. 加入 Solution Ⅱ和 Solution Ⅲ后，不要剧烈混合（Vortex 等），剧烈混合会导致基因组 DNA 的污染。 3. 加入 Solution Ⅲ后，应充分混合使蛋白质、基因组 DNA 等形成白色沉淀，离心后沉降于离心管底部。
质粒提取试剂盒说明书
质粒提取试剂盒说明书提质粒是分子生物学中最基本，最easy的实验。
完全不需要借助大脑，直接照着提取试剂盒中的操作说明傻瓜操作即可。
小编一直认为应该发明一个机器人在实验室中操作这些简单却耗时的实验。
尽管操作简单，提质粒却也是一个比较重要的步骤，提出质粒的质量和数量将直接决定着后续实验室的成败。
当我们按照试剂盒中操作说明进行操作时，我们会看到P1，P2，N3, PE，EB等不同的溶液（不同试剂盒可能标识不同）。
那么大家是否知道每瓶溶液中装的什么？它们在质粒提取过程中的作用又是怎样的？提质粒很简单，但其背后的学问却并不简单哦。
质粒提取采用的是强碱裂解法（alkaline lysis），这个方法是由Birnboim和Doly在1979年发明的，在SCI上原著文章的引用量至今为止已达到12886。
那么我们现在来看一下溶液P1 ，P2，N3, PE, EB都是什么。
溶液1（P1）组分浓度25 mM Tris-HCl（pH8.0），10 mM EDTA，50 mM 葡糖糖（Glucose）溶液1的主要作用是将菌体沉淀悬浮起来。
25mM Tris-HCl是缓冲溶液，保证反应体系的pH恒定。
EDTA是金属离子螯合剂，10 mM EDTA的作用是与微生物体内的金属离子相互结合，抑制DNase的活性。
50 mM葡萄糖的作用是增加溶液的粘度，保证菌体悬浮，延缓菌体沉降的时间。
溶液1在使用前通常要加入RNA酶（RNase A），RNA酶的作用很清楚，降解掉溶液中的RNA。
由于RNA酶属于蛋白质，蛋白质稳定性很差，所以加了RNase A的溶液1需要低温4oC 保存。
溶液2（P2）组份浓度250 mM NaOH，1％（W/V）SDS（十二烷基硫酸钠）溶液2的主要作用是细胞裂解。
溶液1将细胞悬浮后，就需要添加溶液2了，溶液2的作用就是对细胞进行裂解。
溶液2只包括两种成分：氢氧化钠和SDS。
真正起到到细胞裂解作用的是氢氧化钠，这也是为什么这个方法会被叫做碱裂解法。
ZYMORESEARCH质粒提取试剂盒说明书
ZYMORESEARCH质粒提取试剂盒说明书预期用途
本试剂盒可用于提取咽拭子样本中人上皮细胞、细菌和真菌的DNA。
本试剂盒提供的裂解液能快速有效裂解细胞，裂解产物能够直接用于PCR 扩增，并且灵敏度高，特异性强，省去了繁琐的核酸提取与纯化步骤，实现快速PCR检测。
对于病原微生物检测，流行病学调查、菌群调查及其它一些以口腔微生物为样本的核酸检测都非常适用。
操作步骤
1、待检拭子样本直接置于200IFatlyeL1中，充分搅拌洗脱拭子上的样本，在管壁挤压数次后弃拭子；
2、吹打混匀，95℃孵育5min；
3、孵育后的样本12，000rpm离心2，3min，上清可直接用于PCR扩增，上清如不立即使用，需置于-20℃长期保存。
推荐使用咽拭子DNA快速提取扩增试剂盒（荧光PCR法），货号MKNJGNSWDLAQP008。
注意：
离心后的上清加入PCR反应体系的量不宜超过总体积的5%。
如偏好较小体积的反应体系，可将裂解产物稀释5倍或10倍后用作模板；
样本要求
用专用采样拭子，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将拭子放采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥。
以上标本可立即用于测试，也可放置在-20℃条件下长期保存。
注意事项
2、如样本中扩增反应抑制物较多时，可将裂解后的上清稀释5倍作为模板，进行PCR扩增。
3、实验完毕用1%的次氯酸钠或75%酒精处理工作台和移液器。
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质粒小提试剂盒I 简明步骤（PD1211）
（详细内容请参考英文说明书）
I.
实验前准备 II. 注意事项
RNase A: 使用前将提供的所有RNase A 瞬时离心后加入
Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A 置于4o C 保存。
质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer 和Elution Buffer.
转化菌:若为-70o C 甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
切勿直接取冻存的菌种进行培养。
DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL (PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100% 乙醇加入DNA Wash Buffer 。
Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C 左右水浴加热至沉
淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。
在室温下（22-25o C ）进行所有离心操作。
III. 操作步骤
1. 接种新鲜的单个菌落到1-5 mL 的LB 培养基（含适量抗生素），37o C 震荡培养14-16小时。
室温下
10,000 x g 离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani ）培养基培养12-16 小时后，OD 600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。
若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD 600不超过3.0。
2. 加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A ），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
注：细菌细胞如果没有充分悬浮均匀，将导致菌体裂解不完全，从而降低产量。
3. 加入 250 µL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
注：切勿剧烈振荡。
静置时间不超过5分钟，时间过长会导致基因组DNA 污染或质粒受到损伤。
若溶液未清亮澄清，则表明菌体裂解不充分，应加大Buffer B1的用量或减少菌体量。
4. 加入350 µL Buffer N1, 立即反转多次，至溶液充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
5. 将离心管转至高速离心机，在室温下13,000 rpm 离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心）。
6. 小心吸取离心后的上清液至带有收集管的DNA 柱中（避免吸起沉淀），室温下13000 rpm 离心1分
钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
7. 可选: 向DNA 柱中加入 500 µL Buffer KB , 室温下13000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将
离心柱重新放回到收集管中。
注：此步对富含内源核酸酶的宿主菌（endA ＋）来说是必须的，如HB101, JM101, TG1等；对endA-来说可省略，如Top 10和DH5a 等，请参照英文说明书第3页的表2.
8. 向离心柱中加入500 µL DNA Wash Buffer （确保已加入无水乙醇），室温下，13000 rpm 离心1分
钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
可选步骤：重复步骤“8”。
9. 将离心柱放回高速离心机中，13000 rpm 室温下开盖离心2分钟，以彻底去除残留的乙醇。
注：此步骤中开盖离心将会更有效的去除残留的乙醇，乙醇是否去除干净将会影响最后的洗脱效率。
10. 将离心柱转至一个新的1.5 mL 离心管中，向DNA 柱的正中间加入50~100 µL（体积>50 µL）的
ddH 2O （pH 在7.0-8.5之间）或Elution Buffer ，室温放置2分钟，13000 rpm 离心1分钟，洗脱质粒DNA 。
注：提取到的质粒DNA 可直接用于基因克隆、测序、酶切、文库筛选、体外转录翻译、转染HEK293细胞。
若用于转染内毒素敏感性细胞株，原代细胞及用于微注射，建议去除内毒素（PD1212）。
IV.DNA浓度及纯度
DNA浓度(µg/mL) = OD260 x 50 x 稀释倍数，OD260/ OD280约为1.7-1.9
V.常见问题及解答
1、没有提出质粒或者质粒收获量很低
A、菌种老化：
✓建议：对于甘油保存的菌种，需要先进行活化。
涂布或者划线菌种，重新挑选单菌落进行液体培养，并对菌种进行初摇活化，按照1：500的比例进行菌种培养。
二次培养细胞最好不要超过16小时。
B、低拷贝质粒：
✓建议：如果是由于低拷贝质粒引起的质粒收获量低，可以采用两倍的菌体量，并相应增加各种Buffer的用量，如果必要，更换具有相同功能的高拷贝质粒载体。
C、质粒丢失
✓建议：某些质粒在多次继代培养的过程中会出现丢失的现象，另外检查筛选抗生素的浓度是否正确。
D、裂解不充分
✓建议：如果采用超过推荐量的菌体进行质粒制备，会导致菌体裂解不充分。
可适当减少菌体的用量或者相应增大各种Buffer的用量。
请根据选取的试剂盒，处理相应量的细菌量。
E、Buffer中有沉淀未溶解
✓建议：Buffer B1和Buffer N1在温度较低时会出现沉淀，使用前请检查是否有沉淀生成，如有沉淀生成，请置于37o C温育片刻，待溶液澄清后使用。
F、DNA Wash Buffer中未按要求加入乙醇
✓建议：按照说明书要求加入要求量的无水乙醇，使用后旋紧瓶盖，防止乙醇挥发。
G、离心柱中乙醇残留
✓建议：漂洗后，可适当延长离心时间，已尽量去除残留的乙醇。
另外对于质粒中提，大提和超大量提取，建议离心后，将柱子或大漏斗用吹风机冷风吹片刻，以彻底去除残留的乙醇，便于洗脱和后续实验操作。
E、洗脱液加入位置不正确，
✓建议：洗脱液应加在膜中央，已取得最好的洗脱效果。
F、洗脱液pH值不正确
✓建议：将DNA从柱子上洗脱下来的最适pH值在7.0~8.5之间，如果洗脱液的pH超出此范围将会显著影响洗脱效果，请使用试剂盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10mMTris-HCl）进行洗脱，如果用ddH2O进行洗脱，请确保pH在
7.0~8.5之间。
G、洗脱体积及时间的选择
✓建议：洗脱体积将会影响最终的收获量，洗脱体积越大，收获量越高，但是浓度将会降低。
请使用试剂盒推荐的洗脱体积进行洗脱，以保证最好的收获量和浓度。
如果需要高浓度的质粒，请减少洗脱体积。
另外，如果想收获高浓度高收获量的质粒，可进行二次洗脱。
✓建议：加入洗脱Buffer后，室温放置2~5分钟，更有利于洗脱。
2、质粒纯度不高
A、蛋白质污染OD260/ OD280<1.7
✓建议：选择推荐量的菌体，离心后小心吸取上清，如果上清液中混有悬浮物，可再次离心，以彻底去除蛋白质。
B、RNA污染OD260/ OD280>1.9
✓建议：检查配送的RNase A是否完全加入到Buffer A1中，加入RNase A后，Buffer A1/RNase A应该存放在4o C，如果存放时间过长，或者没有正确存放，请重新加入RNase A。
C、基因组DNA污染
✓建议：加入Buffer B1后，轻轻颠倒混匀，避免剧烈震荡涡旋，加入Buffer B1的处理时间最好不要超过5分钟。
3、加样时DNA飘出加样孔外
✓建议：柱中残留乙醇未除净, 洗脱质粒DNA前确保无乙醇残留在膜上。
可再离心或者抽真空。
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