溶血程度对己糖激酶法测定血糖的影响分析
两种葡萄糖酶学测定方法的比较
选 择 ２个标本 （ 一个正 常值 ， 一个高值 ） 每天测定 ２次 ，
公司提供。
１ ３ Ｇ Ｕ标 准 液 ． Ｌ
先配制 １０ｍ ｏ ＬＧ Ｕ标准贮存液 ， ０ ｍ ｌ Ｌ ／ 放置 ２ｈ以上 ， 临 用前配制成 ４ 、０和 ５ｍ ｏ／ ０２ ｍ ｌＬ三种浓度 ｊ 。
１４ 胆 红 素标 准 液 ．
由卫生部上海生物 制品研究所 提供 ８８０ｕ ｏ Ｌ的浓 ４ ｍ ｌ ／
学 方法有 葡 萄糖 氧 化 酶 （ Ｏ 法 和 己 糖 激 酶 （ Ｇ Ｄ） ＨＫ） 法。
Ｇ Ｄ法的测定技术有极谱 分析法 和 比色法 两类 ， Ｏ 比色 分析
法是用 Ｇ Ｄ和辣根过氧化物酶 （ Ｏ 的偶联反应系统 。己 Ｏ Ｐ Ｄ） 糖激酶方法的特异性 比葡萄糖氧化酶法高 ， 被认为是测定血 清葡萄糖的参 考方法 ， 用于 自动分 析仪 ］ 适 。为 了详 细 了 解这两种测定 方法之 间存在的各项技术性能的联系 和差异 ， 我们使用两种方法分别进行了 ５ 方法评价试验 ， 项 并统计 分 析和 比较了精密度 、 线性 范围、 准确度 （ 回收率 和方 法 比较 ） 和干扰因素 ， 现报道如下 。
临床生 化检 验方法的选择和评价 ， 是临床生化检验质 量 控制的重要 基础 工作 ｊ 。临床检 验所 选用 的实验 方法 ， 应
具备两个重要 的特性 ， 即实用性 （ 费用低廉 、 速度快 等） 可 和
度， 临用前 ｌ Ｏ倍稀释成 ８４ｕ ｏ Ｌ ８ ｍ ｌ 。 ／
１５ 室 内质控 品 ．
由英 国朗道公司 （ Ａ Ｏ 提供 。 Ｒ ＮＤ Ｘ）
１６ 血 红蛋 白 液和 维 生素 Ｃ溶 液 ．
副波长的选择对HK法测定血糖的影响
（ 四川省 人 民医院检验 科 ， 四川 成都
６ ０７ ） １ ０ ２
要 ： 讨 副 波 长 的 选择 对 日立 ７ ６ 探 ０ ０奎 自动 生 化 分 析 仪 己糖 激 酶 （ Ｋ） 测 血 糖 的 影 响 ， 其 是 探 讨 Ｈ 法 尤
对溶 血、 脂血 、 黄疸 标本 的影响 ，选择 不 同的 副波 长对 三种 类型的 标本和 正 常标 本血 清进 行 测定 ， 结果 经 统 计发现 ， 波长 宽度 的选择 对正 常标本 血清的影 响无 显著性 差异 （ 副 Ｐ＞ｏ０ ）而对溶 血 、 血、 ５， 脂 黄痘 血 清 影 响有 显著性 差异 ＜ Ｏ ０ ） 对溶 血标本 的影 响最 大 ＜ ０ ０ ） 一５， ． １ 。因此对 ＨＫ 法测 定 血糖 选择 好 副波 长
Ｇ一 一 ６ Ｐ＋ ＮＡＤ÷ ６ ＧＰ＋ ＮＡＤＰ ＋ Ｈ 一 Ｈ
根 据 上述 两 步 反 应 ， 后 生 成 的 ＮＡＤ Ｈ 的 生 成 速 率 最 Ｐ
与 葡萄 糖 浓 度 呈正 比 ， 而 可 得 血 清 中 葡 萄糖 的 浓 度叫 。 从
实 验 主 要 参数 ：
方 法 １ ｏｎ ｐ ｉｔ 反 应 时 间 （ ｉ） ３ ａ ｒｎ
耗 ＮＡ ＤＰ 从 而 干 扰 本 法 测 定 ， ３ 讨 论 从上 面 结 果 表 明溶 血 、 血标 本 严 重 干 扰 测 定 结 脂
维普资讯
现 代 检 验 医 学杂 志
２０ ０ ２年 ５月 第 １ ７嚣第 ２期
ＪＭｏ ａ ｄＬ ｂＭ ｅ ． ｙ２０ ， １１ ， ２ ｄ Ｍａ ０２ Ｖ０ ７ Ｎ。
３ ３
副波长的选择对 ＨＫ 法测定血糖的影响
李顺君 ， 文 芳 ， 黄 饶绍琴
有报 重 要 的 意 义 。 因 此 ， 同的 仪 器 、 不 试剂 、 法 ． 确 地 选 方 正 择好 双 波 长 和 参 数 尤 为 重要 。
葡萄糖氧化酶的活力测定实验报告
葡萄糖氧化酶的活力测定实验报告葡萄糖氧化酶酶活测定葡萄糖氧化酶酶活测定1 酶活单位与定义pH6.0、30℃的条件下，每分钟能把 1.0μmol 的β-D-葡萄糖氧化成D-葡萄糖酸和H2O2 的酶量为一个单位。
2 测定原理葡萄糖和氧反应，在葡萄糖氧化酶的作用下，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。
3 试剂和溶液3.1 磷酸盐缓冲液（pH6.0）称取16.61g 磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O ）和35.82g 磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），溶于无CO2 的水中，稀释到1000ml。
3.2 邻联茴香胺甲醇缓冲液1g 邻联茴香胺加在100ml 甲醇中搅拌溶解备用。
临用时现配，取0.1ml 加入到上述缓冲液12ml 中混匀。
3.3 180g/l 葡萄糖水溶液18g 葡萄糖加适量水溶解，并定容至100ml。
3.4 0.03%辣根过氧化物酶液称取辣根过氧化物酶（HRP,美国Ameresco 公司）10mg，溶于30ml 蒸馏水。
4 仪器设备721-分光光度计、恒温水浴、秒表5 分析步骤5.1 待测酶样品的处理将待测酶样做适当稀释后进行试验，使得测定△A 值在0.25～0.4。
5.2 测定6 结果表示与计算X=[△A÷（11.3×t×0.1）] ×nt—测定时间，min0.1—样品体积，ml11.3—消光系数n—稀释倍数所得结果表示至整数。
篇二：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶(glucose oxidase ，GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase ，POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。
激素对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定
激素对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定作者刘亦斌摘要目的：掌握血糖的测定原理及方法，掌握血糖的正常范围及意义，熟记胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响及并解释其作用机制。
方法：采用邻甲苯胺法测血糖浓度结果：结论：胰岛素会使血糖浓度降低，肾上腺素会使血糖浓度升高。
关键字：胰岛素、肾上腺素、血糖浓度正文前言：正常情况下，血糖浓度在各种因素调解下，维持相对恒定，但是现如今糖尿病可谓是医学界的一大顽症，目前并无良药可医，对于此种病当以预防为主。
因此身为医学生，掌握激素对血糖浓度的影响及如何测量血糖浓度显得有为重要。
原理：所谓“血糖”就是指血液中的葡萄糖。
空腹（即吸收后的状态）的血糖处于动态平衡：正常人在3.89~6.11mmol/L之间。
空腹血糖水平的相对恒定，是在神经激素调解下血糖的来源和去路达到动态平衡的结果。
调节血糖的激素有：胰岛素、肾上腺素、胰高血糖素、肾上腺皮质激素、生长素和甲状腺素等。
胰岛素是体内唯一能使血糖降低的激素，其他激素均使血糖升高。
肾上腺素升高血糖的机制主要作用于肝细胞膜受体，通过cAMP-蛋白激酶系统激活肝磷酸化酶，同时抑制糖原合成酶，导致肝糖原分解加速。
胰岛素降低血糖的机制是：降低肝细胞cAMP水平，从而抑制肝磷酸化酶，激活糖原合成酶，促进肝糖原的合成；胰岛素诱导糖酵解关键酶类的合成，阻遏糖异生关键酶的合成；胰岛素促进葡萄糖进入红细胞、肌肉等组织的异化扩散，促进糖的利用。
血液中的葡萄糖，在热的冰醋酸溶液中可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛（或称羟甲基糠醛）。
后者在与邻甲苯胺缩合，生成蓝绿色的西夫式碱（Schiffbase）。
其色泽的深浅与葡萄糖浓度成正比。
与同样处理的标准葡萄糖溶液比色，即可求得待测血液中葡萄糖的含量。
本实验在于测量家兔注射肾上腺素或胰岛素前后的血糖水平变化。
材料：试剂1肾上腺素（1mg/1ml）2胰岛素（5单位/ml）3碘酒,消毒酒精4饱和硼酸溶液：取硼酸6g,溶于100ml蒸馏水中，摇匀，放置过夜后过滤，即可应用。
葡萄糖测定葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。
2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定3 个月。
3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。
4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。
5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。
2h 以后方可使用。
7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
葡萄糖氧化酶法的实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除葡萄糖氧化酶法的实验报告篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，goD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase，poD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(ph7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调ph至7.0，用蒸馏水定容至1L。
2．酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。
3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。
4．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。
5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。
6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。
2h以后方可使用。
7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
2．手工操作法取试管3支，按下表操作。
读取标准管及测定管吸光度。
【计算】【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。
葡萄糖试剂盒(己糖激酶法)标准操作程序
葡萄糖试剂盒（己糖激酶法）标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中葡萄糖的含量。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清或血浆中葡萄糖的含量。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定葡萄糖浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的葡萄糖试剂盒采用的是己糖激酶法(HK)。
5. 原理葡萄糖在三磷酸腺苷（ATP ）和镁离子存在下被已糖激酶（HK ）磷酸化，产生葡萄糖-6-磷酸（G-6-P ）和二磷酸腺苷（ADP ）。
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH ）使G-6-P 氧化为6-磷酸葡萄糖，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）还原为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（NADH ）。
在340/380nm 的吸光度变化与标本中存在的葡萄糖数量成正比。
+++−−−→−+--+--−→−+HNADH ADP P G ADPP G ATP PDH G HK磷酸葡萄糖葡萄糖-66666. 仪器日立7600自动生化分析仪 7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2 试剂瓶内主要成分：R1：Good ’s 缓冲液、G-6-PDH 、ATP ； R2：Good ’s 缓冲液、HK 、NAD +； 校准品：葡萄糖7.3 试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年。
开瓶后存放在生化分析仪试剂仓中可稳定7天。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：某某公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
临床生化检验 第三章 葡萄糖的测定
糖代谢紊乱－－高血糖和糖尿 脂类代谢紊乱－－高血脂、酮症酸中毒 体重减轻和生长迟缓 微血管、神经病变和白内障的发生
糖尿病的诊断
临床症状
糖尿病的诊断
生化诊断
血糖的测定 尿糖的测定 葡萄糖耐量试验
一、血糖的测定
1．出现糖病症状加上随机血糖浓度≥11.1mmol/L。 2．空腹血糖≥7.0mmol/L。空腹指至少8h内无含热量食 物的摄入。 3．口服葡萄糖耐量试验（OGTT） ，2h血糖浓度 ≥11.1mmol/L。
空白管（B） 标准管（S） 测定管（U）
－
－
0.1
－
0.1
－
0.1
－
－
3.0
3.0
3.0
混匀，置沸水中煮沸10min，取出置冷水中冷却5min， 在630nm处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。
计算
血清葡萄糖 (mmol/L)
测定管吸光度 标准管吸光度
5
参考值
临床意义
评价
回收率98.6%～99.6%，线性范围可达30.8mmol/L， 日 内CV2%左右，日间CV不大于4%。特异性强，但不及氧化 酶法。
第一节 体液葡萄糖测定 一、己糖激酶法（ＨＫ法）（理解） 原理：
葡萄糖＋ATP ＨＫ 葡萄糖-６-磷酸＋ADP 葡萄糖-6-磷酸＋NADP＋ G-6-PD ６-磷酸葡萄糖内酯 +NADPH
NADPH在340nm有吸收峰
评价：
本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化 分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵。
生理性：饥饿和剧烈运动
低血糖
病理性:药源性、肝源性、胰岛素瘤等
三、邻邻甲苯胺法（理解）
原理：
糖代谢紊乱
第六章糖代谢紊乱Disorder of Carbohydrates Metabolism第一节概述一、糖的重要生理功能1.氧化供能2.人体的主要组成成分之一糖蛋白、糖脂、蛋白多糖、核糖；转化成脂肪和某些非必需氨基酸等二、血糖（blood sugar, blood glucose）的来源与去路正常人空腹血糖浓度~L来源与去路：}来源去路食物糖类__________能量,CO2,H2O肝糖原 __________糖原非糖物质__________非糖物质*____其它糖及衍生物尿糖三、血糖浓度的调节1.神经系统的调节主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路中关键酶的活性来实现。
2.激素的调节分为两大类：降血糖激素和升血糖激素1)胰岛素#胰岛素的来源与性质胰岛素的主要作用：a.促进肌肉、脂肪细胞摄取血糖。
b.促进肝糖原合成。
c.促进糖氧化分解。
d.促进糖转化成脂肪。
E.抑制糖异生。
胰岛素发挥作用必须通过胰岛素受体（insulin receptor）才能实现。
2)胰高血糖素胰高血糖素的来源与性质胰高血糖素的主要作用：a.促进肝糖原分解，补充血糖。
b.促进糖异生。
3)其它升血糖激素包括肾上腺髓质激素、糖皮质激素、生长激素等。
在调节血糖的激素作用中，最重要的是胰岛素和胰高血糖素。
3.肝脏的调节肝脏内糖代谢途径多，其中有的为其特有。
它是调节血糖的主要器宫。
第二节高血糖症与糖尿病[高血糖症(hyperglycemia)：空腹血糖>L；若血糖>肾糖阈值L,则出现尿糖。
糖尿病（Diabetes Mellitus,DM）：一种以糖代谢紊乱为主要表现的慢性、复杂的代谢性疾病，系胰岛素相对或绝对不足或利用缺陷引起，具遗传易感性。
一、糖尿病的分型1.胰岛素依赖性糖尿病（insulin dependent diabetes mellitus，IDDM, I 型）特点：青春期好发，对胰岛素敏感，与遗传相关，患者对胰岛素补给具有依赖性。
葡萄糖氧化酶法的实验报告
葡萄糖氧化酶法的实验报告篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖原理葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
试剂1 ．/L 磷酸盐缓冲液称取无水磷酸氢二钠及无水磷酸二氢钾溶于蒸馏水800ml 中，用1mol/L 氢氧化钠调pH 至，用蒸馏水定容至1L 。
2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1200U ，葡萄糖氧化酶1 200U ，4- 氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至，用磷酸盐缓冲液定容至100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。
3 ．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml 中，用棕色瓶贮存。
4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4 ℃可以存放 1 个月。
5 ．12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸于蒸馏水约800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L 。
6 ．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml 中，以12mmol/L 苯甲酸溶液定容至100ml 。
2h 以后方可使用。
7 ．5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液放于100ml 容量瓶中，用12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
操作步骤1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
2 ．手工操作法取试管3 支，按下表操作。
读取标准管及测定管吸光度。
计算参考范围空腹血清葡萄糖为～/L 。
临床意义1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。
2 ．病理性高血糖糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。