结核分枝杆菌
结核分枝杆菌
结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)，
简称结核杆菌，首次由德国科学家Robert Koch于 1882年由肺结核病人的痰液中分离得到，并被证实为结 核病的病原菌核杆菌在分类上隶属于放线菌目、分支杆 菌科、分支杆菌属，是种不能运动、不产芽孢、专性需 氧的短小杆菌。菌体-般细长、略弯曲，端极钝圆，多呈 单个或分枝状排列，大小约1-4×0.4μm。
革兰氏染色呈阳性；Ziehl -neelsen抗酸染色呈红色 ，非抗酸性细菌则呈蓝色。结核杆菌的抗酸性主要取决 于其胞壁内所含的分枝菌酸残基，亦和其胞壁固有层的 完整性有关。
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02 治疗性结核病疫苗的种类 2.1 活载体疫苗 2.2 亚单位疫苗 2.3 DNA疫苗 2.4 全菌灭活疫苗 2.5 其他疫苗 03 结核病治疗性疫苗的研究现状 04 结核病治疗性疫苗的展望
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04 展望
结核疫苗快速发展，并能对致病性结核杆菌产 生保护性免疫应答，为TB的防治带来了希望。然而， 迄今还没有一个重组疫苗能达到BCG的免疫水平。 其原因在于，重组疫苗虽可激活免疫系统，但不能 引起长期特异性的细胞免疫记忆，所以开发一种与B CG协同的、可产生长效免疫应答的疫苗十分重要。 初免-加强免疫策略的出现，有效联合了BCG与新型 结核疫苗，为预防结核、诱导机体产生长期免疫保 护作用提供了可能。
等
MTB肝素结合血凝
素
DNA疫苗
HG85 A/B
临床前 中国人民解放军军事 嵌合 DNA疫苗 A 医学科学院（吴雪琼） g85A/Ag85B 等
结核分枝杆菌形态结构
结核分枝杆菌形态结构以结核分枝杆菌形态结构为标题，写一篇文章。
结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是引起结核病的病原体。
它是一种革兰氏阳性杆菌，属于分枝杆菌科。
结核分枝杆菌具有特殊的形态结构，这些结构对其在人体内的生存和传播起着重要作用。
结核分枝杆菌的外形呈细长的杆状。
其杆菌长度约为1-4微米，直径为0.2-0.5微米。
这种细长的形态结构使得结核分枝杆菌能够在宿主细胞内存活，并对抗宿主的免疫系统。
此外，结核分枝杆菌的外表面覆盖有一层特殊的脂质物质，称为结核分枝杆菌脂质。
这种脂质物质能够保护菌体免受宿主细胞的吞噬作用，同时也使得结核分枝杆菌对抗抗生素的能力增强。
结核分枝杆菌的细胞壁也是其重要的形态结构之一。
细胞壁由多层结构组成，主要包含脂质和糖质成分。
其中，糖质成分包括糖胺聚糖和酸性酚胺聚糖。
这些糖质成分赋予了结核分枝杆菌耐酸性的特性，使其能够在酸性环境中存活。
此外，结核分枝杆菌的细胞壁还含有特殊的酶和脂质酰胺，这些物质能够与宿主细胞相互作用，进一步增强其对抗宿主免疫的能力。
除了细胞壁，结核分枝杆菌的细胞质内还含有一些重要的结构。
例如，结核分枝杆菌的染色体位于细胞质中心的一侧。
染色体呈线状，由DNA组成，包含了结核分枝杆菌的遗传信息。
此外，细胞质内还存在一些重要的细胞器，如核糖体和内质网等。
这些细胞器参与了结核分枝杆菌的蛋白质合成和代谢过程，维持了菌体的正常功能。
总结起来，结核分枝杆菌具有细长的杆状形态，外表面覆盖有结核分枝杆菌脂质，细胞壁由多层结构组成，含有特殊的糖质和脂质酰胺，细胞质内含有染色体和重要的细胞器。
这些形态结构使得结核分枝杆菌能够在人体内存活，并对抗宿主的免疫系统。
深入了解结核分枝杆菌的形态结构有助于我们更好地理解其致病机制，并为结核病的防治提供科学依据。
结核分枝杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解结核分枝杆菌的生物学特性及致病机理；2. 掌握结核分枝杆菌的培养、分离、鉴定及检测方法；3. 增强实验室操作技能，提高对结核病的防控能力。
二、实验原理结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种革兰氏阳性细菌，是引起结核病的病原体。
本实验通过培养、分离、鉴定及检测结核分枝杆菌，了解其生物学特性及致病机理。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）结核分枝杆菌菌种；（2）牛肉浸液；（3）鸡蛋；（4）石炭酸复红染液；（5）无菌生理盐水；（6）无菌试管；（7）酒精灯；（8）高压蒸汽灭菌器；（9）显微镜；（10）生物安全柜。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）电热恒温水浴锅；（3）无菌操作台；（4）超净工作台；（5）显微镜。
四、实验方法与步骤1. 菌种复苏（1）将冷冻保存的结核分枝杆菌菌种复苏于牛肉浸液中，37℃恒温培养24小时；（2）观察菌落生长情况，记录结果。
2. 分离纯化（1）将复苏后的菌液涂布于牛肉浸液琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（2）挑取单菌落进行纯化，重复涂布、培养，直至获得纯化菌落。
3. 鉴定（1）挑取纯化菌落，用无菌生理盐水洗涤，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于石炭酸复红染液中，37℃恒温染色30分钟；（3）用无菌生理盐水冲洗，观察菌体形态及染色特性；（4）挑取染色阳性菌落，进行生化试验，如氧化酶试验、触酶试验等，以鉴定结核分枝杆菌。
4. 检测（1）挑取纯化菌落，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于含有药物的琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（3）观察药物对菌落的抑制作用，判断药物对结核分枝杆菌的敏感性。
五、实验结果与分析1. 菌种复苏：复苏后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
2. 分离纯化：纯化后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
3. 鉴定：挑取染色阳性菌落，进行生化试验，结果显示氧化酶试验、触酶试验均为阳性，符合结核分枝杆菌的生物学特性。
结核分枝杆菌【17页】
4.结果与分析
红肿硬结直径
（1）阳性反应（＞5mm）-- 机体已感染过结核分枝杆 菌或卡介苗接种成功
（2）强阳性反应（≥15mm）-- 可能有活动性结核,应进 一步做其他检查。
（3）阴性反应（＜5mm）
1）未感染过结核分枝杆菌
2）感染初期
3）严重结核病患者
4）患有其他疾病细胞，如麻疹等导致的细胞免疫功 能低下者；艾滋病；
• 专性需氧 • 生长缓慢(18-24h/代) • 营养要求高
罗氏培养基：乳白色或米黄色，干燥、 表面粗糙呈颗粒样或菜花状菌落。
3.抵抗力
巴氏消毒法能杀灭 结核分枝杆菌吗？
四怕： • 怕湿热 • 怕紫外线 • 怕乙醇 • 怕抗痨药物
四不怕： 不怕干燥 不怕酸碱 不怕碱性染料 不怕青霉素
四、防治原则
1.预防： 卡介苗，结核菌素皮 内试验 2.治疗： 原则:早期 适量 联合 全程 规律 常用药物: 有异烟肼、利福平、链 霉素、乙胺丁醇等。
小结
• 生物学特性：细长略弯 分枝状排列 需氧 生长缓慢 四怕四不怕
• 致病性：脂质 蛋白质 荚膜 • 免疫性：结核菌素试验 • 防治原则：卡介苗 抗痨药物
林黛玉
态生两靥之愁， 娇袭一身之病。
泪光点点， 娇喘微微。 闲静时如姣花照水，
行动时如弱柳扶风。
• 林黛玉到底得的是什么 病？
肺结核
• 结核病是由哪个 致病菌 引起的呢？
结核分枝杆菌
一、生物学性状
1. 形态与染色 • 细长,稍有弯曲 • 抗酸染色红色 • 分枝状排列或聚集成团 • 无鞭毛，无芽胞，有荚膜
4.变异性
• 毒力变异：
– 卡介苗（BCG）：1908年，Calmette和 Guerin将有毒的牛分枝杆菌培养在含甘油、胆 汁、马铃薯的培养基中，经13年230次传代而 获得的减毒活疫苗株，用于预防结核病。
结核分枝杆菌菌落特征
结核分枝杆菌菌落特征浅析
结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是引起肺结核的
主要病原体，由于其生长缓慢、抗药性强而且易滋生成株，对于它的
研究需要对其菌落特征有所了解。
观察结核分枝杆菌的菌落可以看出，其形态呈不规则的凹凸形状，边缘不规则而且很粗糙，色泽呈暗黄色或灰白色，质地较硬，且会随
着时间的推移逐渐变硬而脆，同时会释放出一种木香味道。
此外，结
核分枝杆菌的菌落侵袭能力较强，容易扩散并感染周围组织。
对于结核分枝杆菌的研究，菌落特征是了解其生长情况的重要工具。
针对菌落特征，我们可以从以下几个方面进行研究：菌落形态、
边缘形态、色泽及质地、味道等。
掌握这些细节，可以更好地了解结
核分枝杆菌的生长情况，为各类研究提供更多的参考。
此外，还应当
清洗好实验器材和保障实验室质量，保证研究结果的准确性和科学性。
医学微生物学：结核分枝杆菌
结核病
tuberculosisTB
肺部感染
原发感染 原发后感染
肺外感染 ➢传播途径 • 呼吸道 • 消化道 • 皮肤损伤部位等
进入肺泡
肺泡巨噬细胞
炎症-原发灶
淋巴管（炎）肺门淋巴 结肿大
原发综合征
外源性或内源性 原发后感染
90%以上 钙化自愈
肺结核典型临床症状 发热、乏力、咳痰、 咳血、胸水、腹水
第二节 麻风分枝杆菌
（Mycobacteriu leprae）
生物学性状
形态染色：与结核分枝杆菌相似 培养特性：典型胞内菌，不能人工培养 动物模型：犰狳（qiuyu） 抵抗力：较强，耐干燥、耐低温 传播途径：呼吸道和密切接触 潜伏期：数年~数十年
致病性与免疫性
麻风分 枝杆菌 侵入
隐性感 感染 染多见 排出 发病（神经和皮肤）
磷脂 分枝菌酸 蜡质D 硫酸脑苷脂 硫酸多酰基化海藻糖
多糖
局部病灶细胞浸润
所致疾病
结核病（tuberculosis，TB） ➢ 传播途径：呼吸道、消化道、皮肤损伤部位等 ➢ 基本病变：结核结节
• 结核（tubercle）源自 拉丁文tuberculum，意 为“小的肿胀”
• 干酪样坏死
所致疾病
荚膜
粘附,入侵 抗吞噬
蛋白质
迟发型超敏反应 结核结节的形成
脂质：60%
磷脂 分枝菌酸 蜡质D 硫酸脑苷脂 硫酸多酰基化海藻糖
多糖
局部病灶细胞浸润
脂质
➢分枝菌酸 与抗酸性有关 索状因子=分枝菌酸+海藻 糖 • 破坏线粒体膜及酶类 • 抑制白细胞游走 • 引起慢性肉芽肿 ➢蜡 质 D= 分 枝 菌 酸 + 肽 糖 脂 • 佐剂作用 • 引起迟发型超敏反应
结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌
➢多发生于成人 ➢病灶局限，不易扩散 ➢易形成结核结节，易发生干酪样坏死和空洞
2、肺外感染
结核分枝杆菌可进入血液循环引起肺内、外播散， 如脑、肾结核、脊柱结核等。 结核分枝杆菌进入消化道可引起肠结核、结核性 腹膜炎等。
（三）免疫性
结核的免疫属于感染免疫，又称有菌免疫。即 此种免疫力随结核分枝杆菌或其成分在体内存 在而存在。一旦体内病菌或其组分全部消失， 免疫力也随之消失。 属胞内感染菌，其免疫主要是以T细胞为主的细 胞免疫。
旧结核菌素（old tuberculin，OT) 每0.1ml含5单位
纯蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD) 人结核分枝杆菌制成的PPD-C 卡介苗制成的BCG-PPD 每0.1ml含5单位 目前都用PPD
方法
PPD 5个单位两前臂皮内注射 48～72h后红肿硬结超过5mm者为阳性≥15mm
磷脂：促使单核细胞增生，与结核结节的形成及干酪
样坏死有关。
蜡质D：是肽糖脂和分枝菌酸的复合物，可激发机体产
生迟发型超敏反应。
硫酸脑苷脂：抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体的结合，
使细菌能在吞噬细胞中长期存活。
2、蛋白质
是结核菌素的主要成分，本身无毒，和蜡质D 结合后能使机体发生超敏反应。
在形成结核结节中发挥一定作用。
培养特性
专性需氧，生长缓慢 营养要求高，在罗氏固 体 培 养 基 （ P112 ） 中 生 长良好，2-4周后呈乳白 或米黄色、干燥菜花状 菌落。
花菜样菌落
抵抗力 （四怕） （四不怕）
对乙醇敏感 对湿热敏感 对紫外线敏感 对抗结核药物敏感
抗干燥 抵酸碱 抗碱性染料 对青霉素等抗生素耐药
变异性
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
1.痰液涂片染色：这是最常用的方法之一、将痰液制备成涂片，进行
酸性染色，如抗酸杆菌染色和耐酸染色。
结核分枝杆菌是抗酸杆菌，其细
胞壁富含脂质，可以抵抗酸性染料的脱色作用。
这种方法可以快速检测出
结核分枝杆菌的存在。
2.结核分枝杆菌的培养：这是鉴定结核分枝杆菌的“金标准”。
痰样
品通常会涂在含有富含营养物质的培养基上，并在适当的温度和湿度条件
下孵育。
结核分枝杆菌需要一个相对较长的孵育时间（通常需要数周）才
能生长和生成可见的菌落。
分枝杆菌的培养是确诊结核病的关键步骤，同
时还可以进行对特定抗结核药物的药敏试验。
3.伊红染色：这种方法旨在鉴定酸酒杆菌属分枝杆菌和其他酸杆菌的
超微结构。
伊红染色可使细胞壁和细胞内储存的色素显现为红色或粉红色。
该方法可以帮助确定分枝杆菌的类属。
4.PCR检测：聚合酶链反应（PCR）能够通过扩增目标基因片段来检
测和诊断结核分枝杆菌。
这种方法具有高度特异性和灵敏度，并可以通过
荧光标记的探针来定量检测。
5.蛋白质组学：蛋白质组学技术通过检测和分析结核分枝杆菌内部蛋
白质的组成和变化，可以为诊断和治疗提供信息。
质谱法是一种常用的蛋
白质组学技术，可以通过检测菌落样品中的特定蛋白质来鉴定结核分枝杆菌。
总的来说，微生物学诊断方法在结核分枝杆菌检测和鉴定中起着至关
重要的作用。
这些方法可以帮助医生确定结核病的诊断和治疗方案，并对
结核分枝杆菌的流行病学研究和控制提供重要的科学依据。
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03 治疗性结核病疫苗的研究现状
目前结核疫苗开发中依然面对的关键问题，那就 是对结核免疫机制缺乏足够的了解。当前控制结核 病疫苗的研究重点倾向于放在加强初免疫苗效应方 面，即对卡介苗初免后的人群，进行加强免疫来预 防结核病的发生，降低结核病的发病数，减少结核 病的传染源，也是从源头对结核病实施控制。如何 有效杀死胞内残存的结核杆菌，预防结核病的复发， 以及对耐药结核杆菌的有效治疗，是结核病研究面 临的重大挑战。
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亚单位疫苗 DNA疫苗
临床前 中国人民解放军军事 嵌合 DNA疫苗 A 医学科学院（吴雪琼） g85A/Ag85B 等
全菌体灭活疫 苗
M.Vacca
临床Ⅲ期
武汉生物制品所
母牛分枝杆菌 鸟分枝杆菌
Mw[M.indicusp 临床Ⅱ期 ranii(MIP)19]
其他疫苗 RUTI 临床Ⅱ期
结核杆菌特异性片 段 M. smegmatis 临床Ⅰ期 中国药品生物制品检 无细胞耻垢分支杆 定所（徐苗） 菌疫苗
结核分枝杆菌及其 治疗性疫苗的研究进展
结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)，
简称结核杆菌，首次由德国科学家Robert Koch于 1882年由肺结核病人的痰液中分离得到，并被证实为结 核病的病原菌核杆菌在分类上隶属于放线菌目、分支杆 菌科、分支杆菌属，是种不能运动、不产芽孢、专性需 氧的短小杆菌。菌体-般细长、略弯曲，端极钝圆，多呈 单个或分枝状排列，大小约1-4×0.4μ m。 革兰氏染色呈阳性；Ziehl -neelsen抗酸染色呈红色 ，非抗酸性细菌则呈蓝色。结核杆菌的抗酸性主要取决 于其胞壁内所含的分枝菌酸残基，亦和其胞壁固有层的 完整性有关。
治疗性疫苗
是指在已感染病原微生物或已患有某些疾 病的机体中，通过诱导和提高特异性的免疫应 答反应，打破机体的免疫耐受，达到治疗或防 止疾病恶化的天然、人工合成或用基因重组技 术表达的产品或制品，是治疗研究领域的一项 新突破。
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治疗性结核病疫苗
能将低效的抑菌反应转换成高效的杀菌反应, 让外源基因在真核细胞内表达,表达出的抗原 能在细胞质中与主要组织相容性复合物( majo r histocompati -bility complex ，MHC)Ⅰ 类分子结合,然后被呈递到细胞表面。CD8+T 细胞在识别含有抗原肽的MHC Ⅰ类分子后,产 生可裂解细胞的效应分子。这些效应分子具有 穿膜活性,如 perforin（穿孔素）和granulysi n（颗粒溶解素）,由此降解靶细胞。
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目录
治疗性结核病疫苗的种类 活载体疫苗
2.2
2.3 2.4 2.5 03
亚单位疫苗
DNA疫苗 全菌灭活疫苗 其他疫苗 结核病治疗性疫苗的研究现状
04
结核病治疗性疫苗的展望
01 治疗性结核病疫苗概念及其意义
6 / 12
02 治疗性结核病疫苗的种类
疫苗种类 活载体疫苗
疫苗名称
试验阶段
研发公司
产品说明
OxfordMVA85 临床Ⅱb Oxford 和Aeras 痘病毒Ankara(M A/AERAS-485 期 （（牛津大学、全球 VA)Ankara(MVA) 结核疫苗基金会） HBHA HG85 A/B 临床前 等 MTB肝素结合血凝 素
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04 展望
结核疫苗快速发展，并能对致病性结核杆菌产 生保护性免疫应答，为TB的防治带来了希望。然而， 迄今还没有一个重组疫苗能达到BCG的免疫水平。 其原因在于，重组疫苗虽可激活免疫系统，但不能 引起长期特异性的细胞免疫记忆，所以开发一种与B CG协同的、可产生长效免疫应答的疫苗十分重要。 初免-加强免疫策略的出现，有效联合了BCG与新型 结核疫苗，为预防结核、诱导机体产生长期免疫保 护作用提供了可能。