聚乳酸乙醇酸／RNAⅢ抑制肽缓释微球的血液相容性

基础医学　中国组织工程研究与临床康复第　２眷第６期２００８—０２—０５出版　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ　Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｖｅ　Ｔ￣ｓｓｕｅ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２００８　Ｖｏ１．１２．Ｎｏ．６　

聚乳酸乙醇￣／ＲＮＡＩＩＩ｝［Ｐ￥＝Ｊ肽缓释微球的血液相容性★☆　张小斌，郝立波，王继芳，姚　琦，梁茂华　Ｂｌｏｏｄ　ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｐｏｌｙａｉｔｉｃｇｌｙｃｏｌｉｃ　ａｃｉｄ／ＲＮＡ　１７１　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　Ｚｈａｎｇ　Ｘｉａｏ－ｂｉｎ，Ｈａｏ　Ｌｉ－ｂｏ，Ｗａｎｇ　Ｊｉ・ｆａｎｇ，Ｙａｏ　Ｑｉ。Ｌｉａｎｇ　Ｍａｏ－ｈｕａ　

Ｄｅｐａｒｍ￣ｎｔ　ｏｆ　Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ．　Ｂｅ＠ｒｉｇ　１００８５３．Ｃｈｉｎａ　

Ｚｈａｎｇ　Ｘｉａｏ－ｂｉｎ☆，　Ｓｍｄｙｍｇ　ｆｏｒ　ｄｏｃｔｏｒａｔｅ，Ａｔｔｅｎｄｉｎｇ　ｐｈｙｓｉｃｉａｎ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　０ｆ　ＯｔＳｈｏｐａｅｄｉｃｓ．　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　１Ｏ０８５３．Ｃｈｉｎａ　ｘｉｔｕｂｉｎ２＠１６３　ｃｏｍ　

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｅｅ　ｔｏ：　Ｈａｏ　Ｌｉ—ｂｏ，　Ｍ．Ｄ．，　Ａｓｓｏｃｉａｔｅ　ｃｈｉｅｆ　ｐｈｙｓｉｃｉａｎ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　０ｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ．Ｂｅｒｉｎｇ　１Ｏ０８５３．Ｃｌｌｉｎａ　ｌｉｂｏ　ｈａｏ＠ｈｏｔｍａｉＬｃ（￣ａ　

Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ：ｔｈｅ　Ｎａｄｏｎａｌ　Ｎａｔｌｗａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｎｏ　３０６４００８８＊　

Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：２００７—１０－２４　Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２００７－－１１－－２３　

解放军总医院骨　科，　北京市　

ｌ００８５３　

张小斌☆，男，　ｌ９７２年生，陕西　省汉中市人，汉　族，解放军总医院　骨科在读博士，主　治医师，主要从事　关节外科疾病的　研究。　Ｘｉｔｕｂｉｎ２＠１６３．ｔｏｍ　

通讯作者：郝立　波，博士，副主任　医师，解放军总医　院骨科，北京市　ｌ００８５３　ｌｉｂｏｈａｏ＠ｈｏｔｍａｉｌ＿　

国家自然科学基　金资助项目　（３Ｏ６４００８８）　

中图分类号：Ｒ３１８０８　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—８２２５　（２００８）０６－０１０２２—０５　

收稿日期：２００７．１０．２４　修回日期：２００７—１１－２３　ｆ０７－５０－ｌ０－５８ＯＩ／Ｙ　Ｙ）　

１０２２　

Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＡＩＭ：Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｒｅｖｅａｌ　ｔｈａｔ　ＲＮＡＩＩＩ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅ（ＰｄＰ１　ｉｓ　ａｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ　ｆｏｒ　ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｓ　ｆｒｏｍ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　ｄｒｕｇ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｉｔｓ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｌｏｏｄ　ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｐｏｌｙａｉｔｉｃｇｌｙｃｏｌｉｃ　ａｃｉｄ（ＰＬＧＡ１瓜ＩＰ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ．　ＭＥＴＨ０ＤＳ：Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ａｎｄ　Ａｎｉｍａｌ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ａｔ　ｔｈｅ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ　ｆｒｏｍ　Ｏｃｔｏｂｅｒ　２００５　ｔｏ　Ｏｃｔｏｂｅｒ　２００７．Ｔｈｉｒｔｙ　ｈｅａｌｔｈｙ　ａｄｕｌｔ　Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　ｗｈｉｔｅ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｗｅｒｅ　ｇｒｏｕｐｅｄ　ｒａｎｄｏｍｌｙ，ｗｉｔｌ１　６　ａｎｉｍａｌｓ　ｌｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ．Ｄｒｕｇｓ　ａｎｄ　ｒｅａｇｅｎｔｓ：ＰＬＧＡ，ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｓｕｌｐｈｏｘｉｄｅ，ＭＴＴ，ＤＭＥＭ，ｄｉｎｉｔｏｆｌｒｕｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ．（１）　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＬＧＡ／ＲＩＰ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ：Ｆｍｏｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ　ＲＩＰ　ｆｒｏｍ　Ｃ　ｅｎｄ　ｔｏ　Ｎ　ｅｎｄ，ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ　ｃｒｕｄｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｗａｓ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｐｈａｓｅ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｎｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　Ｄｅａｌ【．１１１ｅ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ＰＩＲ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｆｒｅｅｚｉｎｇ　ａｎｄ　ｄｒｙｉｎｇ．Ａｆｔｅｒｗａｒｄｓ　ｌｉｑｕｉｄ．ｐｈａｓｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ　ＰＬＧＡ，ＲＩＰ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　ｏｆ　５０—７Ｏ　ｎｌｔｎ　ｄｉａｍｅｔｅｒ．（　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｌｕｅｎｔ：ｌ　，Ｌ　ＰＬＧＡ，ＲＩＰ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｅｌｕｔｅｄ　ｓｔｅｒｉｌｙ　ｗｉｔｈ　ｓａｌｉｎｅ　ａｔ　３７℃ｆｏｒ　７２　ｈｏｕｒｓ　ｔｏ　ｈａｒｖｅｓｔ　ｓｔｏｃｋ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ．ｔｈｅｎ　ｅｑｕａｌ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｓｔｒｏｋｅ．ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓａｌｉｎｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ　０．５　ｄｉｌｕｔｉｏｎ．⑨Ｈａｅｍｏｌｙｓｉｓ　ｔｅｓｔ：Ｗｉｔｈ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｗａｔｅｒ　ａｎｄ　ｓｔｒｏｋｅ．ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓａｌｉｎｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｈａｅｍｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　１００％ａｎｄ　５０％ｅｌｕｅｎｔ　ｏｆ　ＰＬＧＡ爪ＩＰ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．（　Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｎ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ＰＬＧＡ／ＲＩＰ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｔｉｍｅ（ＰＴ１　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐａｒｔｉａｌ　ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ　ｔｉｍｅ（ＡＰＴＴ）：Ｗｉｔｈ　ｓｔｒｏｋｅ．ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓａｌｉｎｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｓ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏ１．ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｌ００％ａｎｄ　５０％ｅｌｕｅｎｔ　ｏｆ　ＰＬＧ删Ｐ　ｏｎ　ＰＴ　ａｎｄ　ＡＰｒ丌ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ．⑨Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　１００％ａｎｄ　５０％ｅｌｕｅｎｔ　ｏｆ　ＰＬＧＡ爪ＩＰ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ，ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ，ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅ　ａｎｄ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ．　ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｔｏｔａｌｌｙ　３０　ｒａｂｂｉｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ａｎａｌｙｓｉｓ．（１）Ｈａｅｍｏｌｙｓｉｓ　ｔｅｓｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ．ｔｈｅ　ｈａｅｍｏｌｙｓｉｓ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｌ００％ａｎｄ　５０％ｅｌｕｅｎｔ　ｏｆ　ＰＬＧＡ，ＲＩＰ　ｗｅｒｅ　３．２４％ａｎｄ　２．６７％．Ｔｈｅｙ　ｗｅｒｅ　ｉｎ　ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｒｉｔｅｒｉａ　ｏｆ　ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（＜５％１．　Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｎ　ｔｅｓｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　１　００％ａｎｄ　５０％ｅｌｕｅｎｔ　ｏｆ　ＰＬＧＡ／ＲＩＰ　ｈａｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｎ．　（　ＰＬＧＡ，ＲＩＰ　ｓｈｏｗｅｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ＰＴ　ａｎｄ　ＡＰＴＴ．（　ＰＬＧＡ／ＲＩＰ　ａｌｓｏ　ｓｈｏｗｅｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ．　ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ　ａｎｄ　ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅ．⑨ＰＬＧＡ／ＲＩＰ　ｓｈｏｗｅｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ．　Ｃ０ＮＣＬＵＳ１０Ｎ：ＰＬＧＡ爪ＩＰ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　ｈａｖｅ　ｇｏｏｄ　ｂｌｏｏｄ　ｃｏｍｐａｔｉｂＵｉｔｙ．　

Ｚｈａｎｇ　ＸＢ，Ｈａｏ　ＬＢ，Ｗａｎｇ　ＪＦ，Ｙａｏ　Ｑ，Ｌｉａｎｇ　ＭＨ．Ｂｌｏｏｄ　ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｐｏｌｙａｉｔｉｃｇｌｙｃｏｌｉｃ　ａｃｉｄ／ＲＮＡ　ＩＩＩ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｚｕｚｈｉ　Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ　Ｙａｎｊｉｕ　ｙｕ　Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ　Ｋａｎｇｆｕ　２００８；ｌ２（６）：１０２２—１０２６（Ｃｈｉｎａ）　［ＷＷＷ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｎｄｚｇｌｃｋｆ／ｅｊｏｕｒｕａｌ／ｕｐｆｉｌｅｓｄ０８—６，６ｋ一１０２２（ｐｓ）．ｐｄｆ］　

摘要　目的：研究表明ＲＮＡ　ＩＩＩ抑制肽（ＲＮＡ　ＩＩＩ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅ，ＲＩＰ）是葡萄球菌一种有效的全面抑制剂，作用机制与传统抗　菌素明显不同，有着良好的应用前景。通过实验评价聚乳酸乙醇酸（ｐｏｌｙａｉｔｌｃｇｌｙｃｏｌｉｃ　ａｃｉｄ，ＰＬＧＡ）／ＲＩＰ缓释微球的血液相　容性。　方法：实验于２００５—１０／２００７—１０在解放军总医院临床药理研究所及医学动物实验中心完成。选择成年健康新西兰大白兔３Ｏ只，　按随机数字表法分组，每组６只。药品及试剂：ＰＬＧＡ，二甲基亚砜、ＭＴＴ，ＤＭＥＭ，二硝基氟苯。实验方法：（￣）ＰＬＧＡ／ＲＩＰ　微球制备：采用Ｆｍｏｃ法由ｃ端至Ｎ端先合成粗品肽：采用反相液相色谱法对ＲＩＰ粗品进行纯化分析，按紫外吸收峰收集组分，　冷冻干燥，得到ＲＩＰ纯品。再采用液相复乳法制备直径５０￣７０　ｎｌｌｎ的ＰＬＧＡ／ＲＩＰ微球。②洗提液制备：ＰＬＧＡ／ＲＩＰ微球粉末按　ｌ　ｇ，Ｌ在３７℃无菌条件下用生理盐水洗提７２　ｈ，制得洗提液原液；加入同体积的无菌生理盐水制得０．５　ｇ，Ｌ的稀释液。③溶　血实验：以蒸馏水和生理盐水分别为阳性、阴性对照，观察ＰＬＧＡ／ＲＩＰ洗提液原液和０．５　ｇ，Ｌ洗提液的溶血率。④凝血实验及　ＰＬＧＡ／ＲＩＰ对凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响实验：以生理盐水为阴性对照，观察ＰＬＧＡ／ＲＩＰ洗提液原液和０．５　ｇ，Ｌ　洗提液对兔凝血时间的影响和凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响。⑤ＰＬＧＡ／ＲＩＰ对兔白细胞、红细胞和血小板及血　小板聚集的影响实验：观察ＰＬＧＡ／ＲＩＰ洗提液原液和０．５　ｇ，Ｌ洗提液对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响。　结果：纳入动物３Ｏ只。均进入结果分析。①溶血实验结果显示ＰＬＧＡ／ＲＩＰ洗提液原液和０．５　ｇ／Ｌ洗提液的溶血率　分别为３．２４％和２．６７％，两者的溶血率均＜５％，符合医用生物材料的溶血实验要求。②凝血实验结果表明　ＰＬＧＡ／ＲＩＰ洗提液原液和Ｏ．５　ｇ／Ｌ洗提液对兔凝血时间无明显影响。③ＰＬＧＡ／ＲＩＰ对各时间点兔凝血酶原时间和活　化部分凝血酶时间均无明显作用。④ＰＬＧＡ／ＲＩＰ对兔白细胞、红细胞和血小板无明显影响。⑤ＰＬＧＡ／ＲＩＰ对兔血小　板聚集无明显影响。　结论：ＰＬＧＡ／ＲＩＰ缓释微球具有良好的血液相容性。　关键词：ＰＬＧＡ／ＲＩＰ微球；血液相容性；生物材料