扬州市近3年新甲型H1N1流感病毒HA基因分析
H1N1猪流感病毒广西分离株HA基因序列分析
Ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ， Ｎ ａ ｎ ｎ ａ ）
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： 【 Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ 】 Ｔ ｈ ｉ ｓ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｗ ａ ｓ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｍ ｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｉ ｎ ｆ ｃ ｌ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｈ Ａ ｇ ｅ ｎ ｅ ｏ ｆ Ｈ１ Ｎ１ ｓ ｗ ｉ ｎ ｅ ｉ ｎ ｌ ｆ ｕ ｅ ｎ ｚ ａ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｘ ｉ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｔ ｏ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｄ ｅ ｒ ｅ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｏｒ ｆ ｍｏ ｎ ｉ ｔ ｏ ｉ ｒ ｎ ｇ ｓ ｗ ｉ ｎ ｅ ｌ ｆ ｕ ｉ ｎ Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｘ ｉ ． 【 Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ 】 Ｔ ｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ＨＡ ｇ ｅ ｎ ｅ
Ｙ ＡＮ Ｊ ｉ ａ ｎ － ｈ ｕ ａ ， Ｌ Ｉ Ａ Ｎ Ｇ Ｄ ａ ｎ － ｊ ｉ ｅ ， Ｌ Ｉ Ｃ ｈ ｕ ｎ — ｙ ｉ ｎ ｇ ， Ｘ Ｕ Ｘ ｉ ａ ｎ － ｋ ｕ ｎ ， ＨＵ Ｑ ｉ ａ ｏ — ｙ ｕ ｎ ， Ｓ Ｕ Ｎ Ｘｉ ａ ｎ ｇ － ｘ ｉ ａ ｎ ｇ ． ＨＥ Ｑ ｉ — ｓ ｏ ｎ ｇ ， Ｘ Ｉ Ｏ Ｎ Ｇ Ｙｉ
（ 广西大学动物科技 学院，南宁 ５ ３ ０ ０ ０ ５ ； 广西动物疫病预防控制中心，南宁 ５ ３ ０ ０ ０ １ ）
摘要 ： 【 目的】 了解Ｈ１ Ｎ１ 猪流感病毒广西分离株 的分 子特 征 ， 为广西猪 流感疫情 监控 提供 参考依据。【 方法 】 采用
甲型流感病毒检测方法及技术方案H1N1
甲型（H1N1）流感病毒实验室检测技术方案(试行)广州健仑生物科技有限公司整理本方案旨在为全国流感监测网络实验室提供甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案，不用作商业活动或赢利目的。
一、标本的采集种类和要求1、推荐采集的呼吸道标本种类疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。
气管插管的病人也应收集气管吸取物。
标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置于4 ℃（冰箱），并马上送至实验室。
（临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。
）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。
（附表1）2、拭子的选择标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做柄。
不推荐棉拭子和木柄。
标本采集管应包含3毫升病毒采样液（含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）3、临床标本储存要求保存在4℃（不能超过4天）或者-70℃或-70℃以下。
有条件的实验室均应保存在-70℃或-70℃以下。
不应保存在-20℃。
4、标本的分装处理标本送至实验室后，立即进行处理，避免反复冻融。
将原始标本分为三份，一份用于核酸检测，一份用于病毒分离，一份保存待复核。
5、标本的运输疑似人感染甲型H1N1感染病例列为 A类，用UN2814包装运输。
填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单（附表2）。
二、核酸检测基于PCR原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。
1、基于real-time RT-PCR的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物和探针序列为美国CDC设计）：4月29日WHO网站上公布了美国CDC设计的针对此次甲型H1N1流感病毒的real-time RT-PCR引物和探针，此实验用于检测疑似甲型H1N1流感病例的呼吸道样本, 因此，用此real-time RT-PCR的方法，建议首先筛选甲型流感病毒并排除季节性流感病毒和H5N1禽流感病毒。
医务人员接种甲型H1N1流感疫苗抗体水平的长期随访分析
医务人员接种甲型H1N1流感疫苗抗体水平的长期随访分析目的调查随访大兴安岭地区医务工作者注射甲型H1N1流感疫苗后不同时间抗体水平的动态变化规律。
方法采用单纯随机抽样方法抽取内蒙古林业总医院45名甲型H1N1流感抗体阴性医务工作者为研究对象，接种国产甲型H1N1流感疫苗，接种时间为2009年10月28日～12月22日，随访统计接种后第1、2、3、27个月时的抗体滴度及阳转率。
应用SPSS 16.0进行统计学处理，两组比较采用χ2检验及t检验。
结果甲型H1N1流感疫苗在不同年龄组、性别间的免疫效果差异无统计学意义（P > 0.05）。
与第1个月抗体阳转率（95.56%）相比，随着免疫时间的推移，阳转率逐渐下降。
与第1个月抗体滴度（265±92）相比，除第2个月（231±67）与其差异无统计学意义外（P = 0.07），第3个月（183±88）及第27个月（46±38）抗体滴度均低于第1个月（P = 0.03、P 40为保护水平阳性界值[10]。
1.4 统计学方法应用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P 0.05），即接种疫苗1个月后抗体滴度在不同年龄间差异不明显。
见表1。
2.2 不同采样时间抗体滴度及阳转率比较本研究为较长时间随访，随访时间长至接种后第27个月。
与接种后第1个月抗体阳转率相比，随着免疫时间的推移，阳转率逐渐下降，第27个月阳转率已降至44.12%。
与接种后第1个月抗体滴度相比，除第2个月抗体滴度与其差异无统计学意义外（P = 0.07），第3个月及27个月均低于第1个月（P = 0.03、P 0.05）。
见表3。
3 讨论甲型H1N1流感因其高度变化的基因组，每年均导致局部流行，偶尔也会导致全球的大爆发。
每1～3年，季节性流感疫苗都会被重新修改，以跟上病毒HA 和NA蛋白的突变速度[11]。
H5N1
许多国家对本国出现H5N1都有所研究
Li等
通过近几年东亚禽流感病毒变异监发现： H5N1病毒随时间所发生重排
1999年Gs/Gd型
2002年Z型
引起2003年~~2004年 东南亚禽流感爆发
材料方法
怎样 选？
GenBank数据库
194条H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白基因的完整序列 MEGA Ver.3.0(Kumar，Tamura,Nei 2004)进行比对
分布相吻合，其中subgroupl对应1997年，subgroup2 对应2001年，subgroup3对应2002年。尽管我们也 注意到，相比于以上这些明显的分组，中国大陆组 (China group)没有表现出显著的地区分化特点。
时间分布： 图3中该基因具有明显的时间分化特点。1996年之前的序列独立分成一支，这一支
2：AY861372-ea-gle.Belgium.04
与其他2004年分布于东南亚的病毒序列相近，而与欧美来源的序列差异较大， 推测：这株病毒与导致2004年越南、泰国禽流感爆发的H5N1病毒同源。（文献）
因此可以推断： 病毒基因进化树上的地域隔离是可以被打破的。这种病毒的传播可 能是通过全球化贸易，也可能是通过候鸟迁徙。
找出序列变异位点(包括碱基替代、缺失、插入位点)
统计数量，分析不同来源的变异特点 做出全部Biblioteka 列的系统进化树验证树的可靠性
分析进化关系
进化分析的流程
收集数据 寻找同源基因 多重联配 模型选择
系统发育分析
假设检验
在全长1780bp的H5N1病毒HA基因核酸序列中
发现757个可变位点
Parsimony-informative sites (包含两种以上碱基， 而其中至少有两种 碱基经常出现的位点) 有537个
甲型流感疫情、应对措施
甲型(H1N1)流感诊断标准
本病的诊断主要结合流行病学史、临床表现和病原学检 查，早发现、早诊断是防控与治疗的关键。 （一）疑似病例。
符合下列情况之一即可诊断为疑似病例：
1.发病前7天内与甲型H1N1流感疑似或确诊病例有密切接触 （在无有效防护的条件下照顾患者，与患者共同居住、暴露于同一 环境，或直接接触患者的气道分泌物或体液），出现流感样临床表 现。 2.发病前7天内曾到过甲型H1N1流感流行（出现病毒的持续人 间传播和基于社区水平的流行和暴发）的国家或地区，出现流感样 临床表现。 3.出现流感样临床表现，甲型流感病毒检测阳性，但进一步检 测排除既往已存在的亚型。
H1N1
1985 1995 2005
1895
1900 1918 1889 俄罗斯流感 旧香港流感 西班牙流感 H3N8 H1N1 H2N2
1957 亚洲流感 H1N1
1968 香港流感 H3N2
Masato Tashiro
提供幻灯片
Pandemic influenza
流感大流行再次暴发是科学的事实
甲型(H1N1)流感全球疫情特点
流感病毒在传播过程中致病性会有发生改变，目前对于甲 型（H1N1）流感病毒在传播过程中发生地变化、对疫情 趋势带来的影响尚不明朗，有两种可能性，一是病毒毒力 下降，传播强度减弱；二是致病力增加，病死率高，产生 更严重的后果。
因此，要高度重视，从最坏的可能性考虑 ，做最充分的准备。
甲型（H1N1）流感防控措施介绍
二ＯＯ九年五月十五日
一、流感大流行背景资料介绍
大流行的危害
Credit: US National Museum of Health and Medicine
1918年: “西班牙流感” （H1N1） 2,000-4,000万人死亡， 当年欧洲人口为1亿， 死亡率为20－40%。
甲型 H1N1流感住院患者病毒核酸与淋巴细胞百分比的相关性分析
甲型 H1N1流感住院患者病毒核酸与淋巴细胞百分比的相关性分析刘秀红;赵一鸣;李莉;张欣;孙莉波;闫惠平;李宁【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2015(000)010【摘要】目的：通过对2009年6月1日-2009年12月8日北京佑安医院收治的191例（死亡8例）甲型 H1N1流感病毒感染确诊住院病例的分析，了解发病期间 H1N1病毒感染患者 H1N1病毒核酸及淋巴细胞百分比的变化趋势以及二者之间关系，以期为临床提供简单易掌握的诊断数据。
方法用实时 RT-PCR 检测H1N1病毒核酸及血常规，并对191例患者的临床资料进行回顾性分析。
结果H1N1病毒感染患者的病毒核酸阳性率与淋巴细胞百分比呈强负相关性（r＝－0．950，P ＜0．001）；H1N1病毒感染且并发肺炎的患者 H1N1病毒核酸为阴性时其淋巴细胞百分数大于病毒核酸阳性时的淋巴细胞百分数（42．96±2．50＞31．63±3．03，P ＜0．01）；在发病前7天，随着发病天数的增加，肺纹理清晰的患者淋巴细胞百分数有平滑上升趋势，而肺纹理增粗和肺炎的患者的淋巴细胞百分数上升趋势呈巨齿样波动；8例死亡病例死亡前的淋巴细胞百分比均低于20％，并在5％-15％范围内无规律波动。
结论甲型 H1N1病毒能引起淋巴细胞数量上的降低，患者淋巴细胞百分比的高低变化趋势在一定程度上预示病情的轻重，当淋巴细胞百分比持续小于20％，预示病情危重。
【总页数】6页(P1717-1722)【作者】刘秀红;赵一鸣;李莉;张欣;孙莉波;闫惠平;李宁【作者单位】首都医科大学附属北京佑安医院，北京100069; 北京市肝病研究所，北京 100069;北京协和医院基本外科，北京 100005;首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069;首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069;首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069;首都医科大学附属北京佑安医院，北京100069;首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069; 北京市肝病研究所，北京 100069【正文语种】中文【中图分类】R511.7【相关文献】1.定量实时 PCR 技术快速检测甲型 H1N1流感病毒 [J], 纪衍瑾;孙雯雯;朱喆2.重庆市2009～2014年甲型 H1N1流感病毒分离株 HA基因变异分析 [J], 叶盛;喻臻;陈爽;凌华;熊宇;李勤3.交叉引物恒温扩增法检测甲型 H1N1流感病毒及临床应用 [J], 白志军;胡林;李魁彪;钟华燕;陈艺韵;鲁恩洁;狄飚4.猪流感病毒和新型甲型流感H1N1病毒 [J], 张拥军;严延生5.综合科住院患者甲型 H1N1流感认知及行为状况调查 [J], 詹华玉;廖巧聪;官燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
甲型H1N1流感的流行病学特征及预防控制
甲型Ｈ1Ｎ1流感的流行病学特征及预防控制目的:系统分析甲型H1N1流感的流行病学特征和预防控制措施。
方法:采用回顾性与前瞻性相结合的方法,对文献资料和疫情形势进行总结分析。
结果:甲型流感并非新发传染病,历史上曾有多次暴发或流行;此次A/H1N1流感为一种变异的“杂交”病毒引起,疫情来势凶猛,传播速度快,病毒攻击性强,尚无特效治疗药物和免疫疫苗,但综合防控措施对预防控制疫情十分有效。
结论:甲型H1N1流感可防、可控、可治。
标签：甲型流行性感冒;A/H1N1流感;流行病学;预防控制[文献标识码] A[文章编号]1674-4721(2009)08(a)-037-03首发于墨西哥的人感染A(H1N1)流感导致患者死亡的疫情,已迅速蔓延至全球,截至2009年5月10日,WHO已经确认全球29个国家和地区发现4 379例甲型H1N1流感确诊病例,其中死亡50多例。
我国内地5月11日中午也确诊1例患者,成为发现甲型H1N1流感确诊病例的第30个国家和地区。
这次被世界卫生组织(WHO)确定为“具有国际影响的突发公共卫生事件”的甲型H1N1流感疫情,特别是病例逐日大幅增加的发展态势,可能促使WHO将再次提高流感大流行警告级别。
我国已将其纳入法定乙类传染病和国境检疫传染病[1]。
究竟甲型H1N1流感是什么样的疾病?怎样进行诊断和治疗?如何才能预防控制?本文拟结合有关研究成果和进展,对其流行病学特征进行简要介绍,以期为预防控制提供参考。
1 疫情历史“流感”是流行性感冒的简称,是一种古老、常见和多发的呼吸道疾病,也是人类至今尚不能控制的流行于全世界的病毒性传染病。
100多年来,曾发生过1889、1918、1957和1968年4次世界性大流行。
流感在我国流行的历史更悠久,虽然古代医书中没有“流行性感冒”的名称,但有瘟病、时行病、时气、风寒、风热、感冒甚至时行感冒的病名,根据其发病季节、传播方式、传播速度和临床症状的记载和描述,很可能就是目前的流行性感冒。
呼吸道病毒-甲型流感病毒
奥司他韦（Oseltamivir）/ 特敏福（Tamiflu）/达菲 扎那米韦（ zanamivir ）/瑞乐沙（ Relenza ）/ 乐感清
血凝素（Hemaglutinin, HA）
• H1~H16
• Glycoprotein enables virus attaching to host cell
Antigenic drift (抗原漂移)：
亚型内发生的抗原小变异，量变，小流行，一般 ２～３年发生一次。
Rebecca J. Garten et al, / 22 May 2009 / Page 1/ 10.1126/science.1176225
2. 高致病性禽流感病毒（Highly pathogenetic avian influenza virus, HPAI）如H5, H7 Subtype 的HA0水解部位有多个连续的碱性氨基酸
HA0
protease*
HA1 + HA2
Host proteases
1.细胞外酪蛋白酶：存在呼吸道上皮细胞和禽类肠道。 2. 细胞内Furin, PC5/PC6：禽类各组织细胞内存在，能 水解连续的碱性氨基酸多肽。 3. 血浆纤维蛋白酶
Question:
1. 为什么甲型流感病毒具有种属特异性？
与病毒的HA, NA和宿主的病毒受体特异性有关
2. 2009年新型H1N1流感病毒的基因组特点是什么？
3. 甲型流感病毒理论上至少有多少亚型？而实际上流行/致病 的亚型较少，为什么？ 4. 人类中流行过的人流感病毒有那些？可引起人类流感 的禽流感病毒有几种，致病情况如何？
Bacterial Proteases
共同或继发感染（Co-infection with bacteria）
甲型H1N1流感病毒(2009)及其核酸诊断试剂的研发与临床应用
秋 冬季 节 是流 感 极 易流 行 的 时期 ，有 可 能 引起 甲型
Ｈ１ Ｎ１流感病毒 的严 重爆 发 。因此 ，建立 甲型 Ｈ１ Ｎ１流感 病毒 的快速检测 方法 ，生产能广泛用于临床的、准确有效的
Ｃ ｉＭｅ ｉｔ ｈｏ， ｅｅ ｅ ２ １， ｏ． ， ． ｈｎ ｄＢｏｅ ｎ ｌＤ ｃｍｂｒ ０ １Ｖ １６Ｎｏ６ ｃ
４９ ２
ＤＯ Ｉ１ ． ９ ９ ｃ ｂ ｄｉｓ ． ６ ３ ７１ Ｘ． ０ １０ ．０ ：０ ３ ６ ／ｍ ａ ． ｎ １ ７ － ３ ２ １ ． ６０ ８ ｓ
・
生 物 诊 断 技 术 ・
根据美国疾病预防控制中心和wto公布的流感病毒的基冈组成信息研究人员将甲型hlnl流感病毒的基因与已经掌握的部分猪流感病毒的基冈进行了对比利用流感病毒信息库和快速分析平台对已报道的22株病毒序列进行分析各分离株的核苷酸序列的同源性达到99以上属于同一株病毒12
中 国医药 生物技 术
２１ 年 １ ０ １ ２月第 ６卷 第 ６期
（ ～Ｎ ） Ｎ１ ９ 。甲型 流 感病 毒是 一种 分 节 段 Ｒ ＮＡ 病 毒 ， 含 共
载并有病原学依据 的世 界流 感大流行一共有 ４ 次。其中发
生于 １１ ９ ８—１ １ ［３ 西班 牙 大 流 感 ， 由 Ｈ１ 亚 型 流 ９ ９年 １１ －的 Ｎ１
有 ７条 结构 蛋白基 因和 １条非结构蛋 白基 因 （ Ｓ ，结构 Ｎ ） 蛋 白分别为核蛋 白 （ ） ＮＰ 、基质蛋 白 （ 、Ｈ Ｍ） Ａ、Ｎ Ａ、Ｐ Ａ、 Ｐ Ｂ１和 Ｐ ２ Ｂ ，其中前 ４种蛋 白为病毒粒体的组成成分 ，后 ３种 蛋白均 为功能性 多聚酶 ，参与病毒基因的转 录和 复制 ， 在病毒粒体 中属 于分 子量最大但含量极少的蛋 白。Ｎ 蛋 白 Ｓ 存 在于受病 毒感 染的细胞 中， 病毒粒体 中检测不到，具体功 能尚不清楚 。 “ 根据 美国疾病预防控制 中心 和 ＷＴ 公布 的流感病毒 Ｏ 的基 因组成信 息，研 究人员将 甲型 Ｈ１ Ｎ１流感病毒 的基 因 与已经 掌握 的部分猪流感病毒 的基因进行了对 比， 利用流感 病 毒信 息库和快速分析平 台， 已报道 的 ２ 对 ２株病毒序 列进 行分析 ，各分离株的核苷酸序列的同源 性达到 ９ ％ 以上， ９ 属于 同一株病毒｝ 】 。对 Ｈ 基因和 Ｎ 基 因进行分析，确 Ａ Ａ 认引起本次疫情 的病原体属于 Ａ Ｈ１ ／ Ｎ１亚型流感病毒【 】 。 同时对病毒全部 ８条基因进行进 一步分析 ，发现此次流行 的病毒株包含～种较 为独特 的基因片段组合 ， 是来 自北美和 欧亚两种猪 流感病毒的混合体 。 本次流行 的流感毒株 的 ＨＡ 基因核苷酸序列与早期从 美 国分离到 的 Ｈ１ 的猪 流感病 毒株 的同源性达 到 ９ ％ Ｎ２ ３ 以上，其 中与 印第安纳州的 Ｈ１亚型猪流感病 毒 ［ ／ｗ ｎ／ Ａ Ｓ ｉｅ
甲型H1N1流感的研究进展
・８・甲型Ｈ１Ｎ１流感的研究进展农光民（广西医科大学第一附属医院，广西南宁５３００２１）［中图分类号］Ｒ５１１［文献标识码］Ａ［文章编号］１６７２－１０８Ｘ（２０１０）０１－０００８－０４ＴｈｅＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＲｅｓｅａｒｃｈ０１１ｈｌｆｌｕｅｌｌｚａＡ（Ｈ１Ｎ１）ＮＯＮＧＧｕａｎｇ—ｍｉｎ（ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧｕａｎｇｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｗｅｒｓｉｔｙ，ＧｕａｎｇｘｉＮａｎｎｉｎｇ５３００２１，Ｃｈｉｎａ）目前甲型ＨｌＮｌ流感进入全球大流行阶段。
ＷＨＯ和各国卫生医疗、防御及科研机构正投入大量的人力及物力对这一新发传染病进行积极的基础和临床研究，涉及疾病的防控、流行趋势预测、病毒变异及耐药的监测、危重症病人的诊治等多方面。
现将一些进展简述如下。
１新型Ｈ１Ｎ１甲型流感势态背景甲型流感病毒是一种非常活跃的病毒，容易发生变异和基因重配，一般每隔１０一１３年发生一次大变异，引起大流行。
ＷＨＯ早在１９９７年即开始提醒新一轮全球流感大流行，１２年后一种新型Ｈ１Ｎｌ甲型流感出现在北美洲，人类对此新型病毒没有免疫力，普遍易感，病毒不断扩散。
２００９年６月１１日，ＷＨＯ在两个月内将全球大流行预警级别提升到６级。
但该行为仅反映新型Ｈ１Ｎｌ病毒传播的范围，而不是该病毒引发疾病的严重程度。
除了墨西哥的病例，一般都病情轻微，尽管存在不确定性因素，但ＷＨＯ快速大流行病评估协作组估计…这次流感流行将弱于１９１８年流感大流行，与１９５７年流感相仿。
但南半球的经验显示，此病毒可能会对卫生机构造成相当大的压力，并可能导致重症和死亡，防止病毒扩散已经不太可能，目前疾病的防控转向以监测诊治蕈症患者为主。
２新型Ｈ１Ｎ１甲型流感病毒及其变异此次源于北美的新型甲型ＨｌＮｌ流感病毒是一种含有人一猪一禽３种流感病毒的重配病毒，新病毒株为８个流感基因片段的重组，其中６个片段（ＰＢ２、ＰＢＩ、ＰＡ、ＨＡ、ＮＰ、ＮＳ）来自禽、猪和人流感病毒三重重组的猪流感病毒，另两个片段（ＮＡ、Ｍ）起源于欧亚地区的猪流感病毒。
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Ｖｏ１ ．３ ４ Ｎｏ．１
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＭａ ｒ ．２ Ｏ１ ３
扬 州市近 ３年新 甲型 Ｈ１ Ｎ １流感病 毒 ＨＡ基 因分析
肖越 胜 。 ，宿 春虎 。 ，黄 瑶 ， 张 军 ，彭大 新。
（ １ ．扬 州 市 医 学 检验 中心 ，江 苏 扬 州 ２ ２ ５ ０ ０ １ ； ２ ．扬 州 市 疾 病 预 防 控 制 中 心 ， 江苏 扬州 ２ ２ ５ ０ ０ １ ；
ｎ ｅ ｗ ｉ ｎ ｆ ｌ ｕ ｅ ｎ ｚ ａ Ａ （ Ｈ１ Ｎ１ ）ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｅ ｓ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ Ｙａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ａ ｒ ｅ ａ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ２ ０ ０ ９ ａ ｎ ｄ ２ ０ １ １ ｗａ ｓ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｅ ｄ ．Ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ９ ｎ ｅ ｗ ｉ ｎ ｆ ｌ ｕ ｅ ｎ ｚ ａ Ａ （ Ｈ１ Ｎ１ ）ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ．Ｔｈ ｅ ｉ ｒ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｏ ｔ ｉ ｄ ｅ ａ ｎ ｄ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｈ ｏ ｍｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ＨＡ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ａ ｍｏ ｎ ｇ ９ ｉ Ｓ Ｏ —
中 图分 类 号 ：Ｑ ９ ４ ３ ． ２ 文 献标 志码 ：Ａ 文章 编 号 ：１ ６ ７ １ —４ ６ ５ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ １ — ０ ０ ３ ６ —０ ５
Ｇｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ＨＡ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｏ ｆ ｎ ｅ ｗ ｉ ｎ ｆ ｌ ｕ ｅ ｎ ｚ ａ Ａ （ ＨＩ Ｎ１ ）
３ ．扬 州 大 学 兽 医学 院 ，江苏 扬 州 ２ ２ ５ ０ ０ ９ ）
摘 要 ： 采 用 Ｒｅ ａ ｌ ｔ ｉ ｍｅ Ｐ Ｃ Ｒ（ Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ） 对 患 者鼻 咽拭 子 样 品进 行 检 测 ， 筛 选 新 甲 型 ＨＩ ＮＩ流 感 病 毒 。将 阳性 样 品接 种
ＡＢＳ ＴＲＡＣＴ ：Ｒ ｅ ｓ ｐｉ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｓ ｗａ ｂ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｃ ｏｌ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎｅ ｄ ｂ ｙ ａ Ｒｅ ａ ｌ — ｔ ｉ ｍｅ ＰＣＲ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｕｓ ｉ ｎ ｇ ａ ｎｅ ｗ ｉ ｎｆ ｌ ｕ ｅ ｎ ｚ ａ Ａ （Ｈ １Ｎ １ ） ｖｉ ｒ ｕ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏｎ ｋｉ ｔ ． Ｔｈｅ ｐ ｏｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｓ ａ ｍ ｐｌ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｎ ｏｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎｔ ｏ Ｍ ＤＣＫ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｆ ｏ ｒ ｖｉ ｒ ｕｓ ｉ ｓ ｏｌ ａｔ ｉ ｏ ｎ． Ｔｈｅ Ｈ Ａ ｇ ｅ ｎｅ ｓ ｏｆ
ｉ ｎ ｆ ｌ ｕ ｅ ｎ ｚ ａ Ａ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｂ ｖ Ｒｒ ｒ ＿ ＰＣＲ ａ ｎ ｄ ｗｅ ｒ ｅ Ｓ Ｕ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｔ Ｏ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ．Ｔｈ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｏ ｆ ＨＡ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｏ ｆ
ＭＤ Ｃ Ｋ 细胞 进行 病 毒 分 离 ， 通过 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ扩 增 病 毒 ＨＡ 基 因 并 进 行 测 序 分 析 ， 分析扬州市 ２ ０ ０ ９ ２ ０ １ １年 新 甲 型 ＨＩ Ｎ１
流感病毒血凝素（ ＨＡ） 基 因的 遗 传 进 化 特 征 。结 果 表 明 ： 分 离 出 ９株 新 甲型 Ｈ１ Ｎ１流感 病 毒 ， 其 ＨＡ 基 因核 苷 酸 及 氨 基
（ １ ．Ｙ ａ ｎ ｇｚ ｈ ｏ ｕ Ｃｅ ｎ ｆ ｏ ｒ Ｃｌ ｉ ｎ Ｌａ ｂ，Ｙａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ２ ２ ５ ０ ０ １ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ．Ｙ ａ ｎ ｇｚ ｈ ｏ ｕ Ｃｅ ｎ ｆ ｏ ｒ Ｄｉ ｓ Ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ Ｐｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ，Ｙａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ２ ２ ５ ０ ０ １ ，Ｃｈ ｉ ｎ ａ； ３ ．Ｃｏ ｌ ｌ ｏ ｆ Ｖｅ ｔ Ｍｅ ｄ，Ｙ ａ ｎ ｇｚ ｈ ｏ ｕ Ｕｎ ｉ ｖ，Ｙａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ２ ２ ５ ０ ０ ９，Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
第 ３ ４卷 第 １ 期 ２ ０ １ ３年 ３月
扬 州 大 学学 报 （ 农业与生命科学版）
Ｊ ｏ ｕｒ ｎａ ｌ ｏ ｆ Ｙａ ｎ ｇｚ ｈ ｏ ｕ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ（ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｅｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ）
ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｅ ｓ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ Ｙａ ｎ ｇ ｚ ｈｏ ｕ ａ ｒ ｅ ａ ｄｕ ｒ ｉ ｎｇ ｎ ｅ ａ ｒ ｌ ｙ ３ ｙ ｅ ａ ｒ ｓ
Ｘ Ｉ ＡＯ Ｙｕ ｅ ｓ ｈ ｅ ｎ ｇ ，Ｓ Ｕ Ｃｈ ｕ ｎ ｈ ｕ 。 ，ＨＵＡＮＧ Ｙａ ｏ ，ＺＨＡＮＧ Ｊ ｕ ｎ ，Ｐ Ｅ ＮＧ Ｄａ ｘ ｉ ｎ 。
酸同源性分别为 ９ ８ ． １ ～９ ９ ． ８ 和９ ６ ． ６ ～９ ９ ． ８ ；与 疫 苗 株 Ａ／ ｃ ａ ｌ ｉ ｆ ｏ ｒ ｎ ｉ ａ ／ Ｏ ７ ／ ２ Ｏ Ｏ ９相 比 ， 核 苷 酸 及 氨 基 酸 的 同 源 性 分别为 ９ ８ ． ４ ～９ ９ ． ５ 和９ ７ ． ０ ～９ ９ ． ３ ，其 中 ２ ０ １ １年 ３株 病 毒 在 抗 原 位 点 上 发 生 了 点 突 变 。遗 传 进 化 分 析 显 示 ９株 病 毒 形 成 ３个 明 显 的 分支 。证 明新 甲型 ＨＩ Ｎ１流 感 病 毒 已 发 生 了 一 定抗 原 漂 移 。 关键词 ： 新 甲 型流 感 病 毒 ；Ｈ１ Ｎ１ ；血凝 素 ；遗 传 进 化 分 析