实验一 银耳多糖的制备及分析-给学生
银耳多糖的提取
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乙 醇 丙 酮 乙 醚依 次 洗 涤
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℃ 烘 干 即得银 耳粗 多 糖 呈 白色 纤维状
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加
银 耳粗 多 糖 纯 化 将 银 耳 粗 多糖 溶 于 适 量 蒸 溜 水 中 加 热 促 溶 得 无 色 粘 稠 状 液 体 溶 液体 积的 氯仿 再 加 溶 液 体积 的正 丁 醇 剧 烈 摇 动 分 钟 离心 分 离 出 白 色
收 稿 日期
一
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变性 蛋 白 重 复 进行 次 白色沉 淀基 本 消失 说 明 蛋 白质 已 基 本 除 尽 溶 液 再 逆 流 水透 乙 醇沉 淀 抽 滤 洗 涤 ℃烘干 析 天 最后 一 天 换 用 蒸 溜 水 浸 泡 次 浓 缩 后 用 得 白色纤 维 状 银 耳 多糖 结 果 与 讨论
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银 耳 多 糖的 收 率 为
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经 药理 试验
表 明 银耳 多 糖 能 增 强 小 白 鼠 腹腔 巨 噬 细胞 的 吞 噬 功 能 抑 制肿 瘤 生 长 增强 机 体 的免疫 力 现 将 银 耳 多 糖 的提 取 过 程报 告如 下
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仪器 与 材 料 仪 器 提 取 用 容 器 电炉 烘 箱 材料 干 银耳 洒 精 氯 仿 正 丁醇 乙 醚等 实 验方 法 银 耳 多 糖 的提 取 称取 干 银 耳 克 用水 浸 泡 数 小 时 去 蒂 绞 碎 加 毫 升 蒸馏 约 小 时 左 右 滤 去银耳 渣 再 按同 法煮 提 一 次 合 并滤 液 浓缩 至 粘 稠 并 将 沸 腾的 水煮 浓 缩 液迅 速 倒入 倍 体 积的 乙 醇 中 搅 伴 均 匀 沉淀 静置 离 心 分 离 后抽 滤 经 无 水
银耳多糖的提取与纯化工艺的设计
燕山大学课程设计说明书银耳多糖的提取与纯化工艺的设计学院（系）：里仁学院建环系年级专业：10级生物制药学号：**************姓名：*****教师：***教师职称：副教授燕山大学课程设计（论文）任务书院（系）：里仁学院基层教学单位：建环系说明：学生、指导教师、基层教学单位各一份。
燕山大学课程设计成绩评定表设计者姓名: 韩雨薇学号: 101610051006设计题目: 银耳多糖的提取与纯化工艺的设计说明书评分：设计思路：20分字数要求：20分文档排版：20分格式细节：20分分析讨论：20分成绩：答辩小组评语：口语表达：满分20分幻灯质量：满分20分设计分析：满分40分回答问题：满分20分成绩：课程设计总成绩：（说明书成绩×0.5+答辩成绩×0.5）答辩小组成员签字：年月日2013-2014 秋季学期生物工程专业课程设计结题论文银耳多糖的提取与纯化工艺的设计学院（系）：里仁学院建环系年级专业：10级生物制药学号：101610051006学生姓名：韩雨薇指导教师：崔洪霞教师职称：副教授银耳多糖是银耳中的主要活性物质，来源于银耳子实体和银耳细胞深层发酵孢子中分离、纯化得到的杂多糖。
现代医学和药理学的很多研究将银耳多糖的药用功效概括为提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血糖和降血脂等多种生理功能。
本设计通过采用微波辅助提取法来提取银耳多糖。
在微波提取系统中，影响多糖提取率的主要因素有三个：微波功率、加热时间、加热温度。
针对这三个因素分别设计单因素实验，根据单因素实验得出最佳范围，然后再根据所得出的范围做三因素三水平的正交实验，从而得出最佳的提取条件组合。
本文系统地综述了银耳多糖的化学组成、制备和提取纯化、生物活性、实际应用等方面的研究概况，并展望了其今后研究方向及开发应用前景。
关键词：银耳多糖；提取；纯化第一部分文献综述1、银耳多糖简介 (1)1.1银耳多糖的组成 (1)1.1.1酸性杂多糖 (1)1.1.2中性杂多糖 (1)1.1.3胞壁多糖 (2)1.1.4胞外多糖 (2)1.1.5酸性低聚糖 (2)2、银耳多糖的提取及制备 (2)2.1银耳多糖的提取方法 (2)2.1.1浸提法 (2)2.1.2超声波辅助提取法 (3)2.1.3微波辅助提取法 (4)2.1.4超临界流体萃取法 (4)2.2银耳多糖的干燥方法 (4)2.3银耳多糖生理活性试验 (5)2.3.1银耳多糖清除羟自由基活性 (5)2.3.2银耳多糖清除超氧阴离子自由基活性 (5)2.3.3银耳多糖的抗氧化作用 (5)3、银耳多糖的功能特性 (5)3.1在食品生产中的加工特性 (5)3.2在化妆品生产中的加工特性 (5)3.3银耳多糖的药理学特性 (6)3.3.1免疫调节作用 (6)3.3.2抗肿瘤作用 (6)3.3.3降血糖、降血脂作用 (6)3.3.4抗溃疡作用 (6)第二部分课程设计部分1. 材料 (8)3.1银耳多糖的微波提取 (8)3.2银耳多糖的纯化 (8)3.2.1 DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析分离 (8)3.2.2 SephadexG-200凝胶过滤柱层析分离 (9)3.3紫外吸收测定 (9)3.4银耳多糖含量测定 (9)4. 设计 (9)4.1银耳多糖提取条件的单因素实验 (9)4.1.1微波功率对银耳多糖提取率的影响 (9)4.1.2加热时间对银耳多糖提取率的影响 (9)4.1.3加热温度对银耳多糖提取率的影响 (10)4.2银耳多糖提取条件的正交实验 (10)5.分析与总结 (10)参考文献 (12)第一部分文献综述1、银耳多糖简介银耳多糖( Tremella polysaccharides，TP) 是银耳的重要活性成分( 约占银耳干重的60%-70% ) ，是从银耳子实体或液体深层发酵的银耳孢子中提取出来的一种活性多糖。
银耳提取银耳多糖工艺流程-12
银耳提取银耳多糖工艺流程一、综述1、银耳银耳又名白木耳，是一种高等真菌，性味甘、平、具有滋阴润肺、养胃生津之功效，自古以来被人们看作是延年益寿的佳品，是世界公认的最珍贵的食用菌和重要药材。
银耳子实体中除银耳多糖物质外，还含有一定量的果胶质、蛋白质、粗纤维等成分，这些物质的存在，将不利于多糖物质的提取分离和纯化。
2、多糖多糖又名多聚糖，通常由多个单糖分子通过缩合、失水从而由甘糖键结合而成的一类分子结构复杂的高分子化合物。
根据其脱水缩合的成分不同，可分为均一性多糖、不均一性多糖。
多糖具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗衰老、抗氧化、抗溃疡、降血糖、调节身体免疫力等多种作用。
3、银耳多糖简介银耳多糖(Tremella polysaccharides, TP)是银耳的重要活性成分(约占银耳干重的60%-70% )，是从银耳子实体或液体深层发酵的银耳孢子中提取出来的一种活性多糖。
大量研究表明，从银耳中提取分离得到的银耳多糖具有提高机体免疫力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗溃疡、抗血栓形成、抗突变、抗肿瘤等作用，能增强机体耐缺氧能力，清除自由基。
1.1银耳多糖的组成银耳多糖的主链是由a-(1-3)-糖苷键组成的甘露聚糖，主链的2, 4, 6 位上连接有葡萄糖、木糖、岩藻糖及普通糖醛酸等残基组成的侧链，其活性中心是a -(1-3)-甘露聚糖这一共同结构部分。
银耳多糖种类包括酸性杂多糖、中性杂多糖、胞壁多糖、胞外多糖和酸性低聚糖五种，不含核酸、蛋白质类物质［3。
］1.1.1酸性杂多糖约占银耳总多糖的70%~75%，为木糖、甘露糖和葡萄糖醛酸为主的多聚体，中有少量岩藻糖。
1.1.2中性杂多糖约占银耳总多糖的20%左右，为木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖的多聚体。
1.1.3胞壁多糖根据文献报道，一种是从胞壁外层产生的酸性多糖，由D-葡萄糖醛酸、D-甘露糖和D-木糖组成；另一种为碱性多糖，由D-葡萄糖、D-葡萄糖醛酸、D-甘露糖和D-木糖组成。
微波辅助提取银耳多糖的一般工艺流程
微波辅助提取银耳多糖的一般工艺流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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果胶酶提取银耳多糖的研究
目录摘要 (1)关键词 (1)Abstract (1)Key words (1)1 前言 (2)2 仪器、设备和试剂 (2)2.1 材料、与设备 (2)2.2试剂及溶液的配制 (2)3.方法及试验步骤 (2)3.1葡萄糖含量标准曲线的制作 (2)3.2 银耳多糖的提取方法 (3)3.3 银耳多糖含量的测定 (4)4 结果与分析 (4)4.1 银耳多糖含量测定结果 (4)4.2 酶解法提取银耳多糖结果分析 (5)5小结与讨论 (6)参考文献 (7)果胶酶提取银耳多糖的研究摘要：国内常用的银耳多糖提取方法有热水提取法，酸碱提取法和酶解提取法等，其中酶解提取法具有提取时间短，条件温和等优点。
本试验选取了酶解时间和提取时间作为研究对象，探讨了不同条件下银耳多糖的收率，由试验结果表明，解法提取银耳多糖的最适条件为：银耳与水的比例为1g:50ml,加入果胶酶浓度为1%，酶解时间45min,提取时间60min。
关键词：果胶酶；银耳多糖；酶解On Pectinase extract of Tremella polysaccharidesAbstract:Tremella polysaccharide extraction of hot water extraction method, the acid-base extraction and enzymatic extraction, enzymatic extraction with extraction time is short, under mild conditions. This test selected the study of enzymatic hydrolysis time and extraction time to explore the Tremella polysaccharides yield under different conditions, the results showed that the optimal conditions of the solution extract of Tremella polysaccharides: white fungus and water ratio 1g: 50ml join the pectinase concentration of 1%, the hydrolysis time was 45min, extraction time 60min.Key words: Pectinase; the Tremella polysaccharide; enzymatic1 前言银耳俗称白木耳，是一种高等真菌，属于有隔担子菌亚纲银耳科。
银耳提取银耳多糖的工艺流程
银耳提取银耳多糖的工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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银耳多糖的检测
原理
薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附 剂吸附能力不同，使在移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中， 连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相 分离的目的。 薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸 附剂）、薄层分配层析（纤维素）、薄层离子交换层析（离子交换剂）、 薄层凝胶层析（分子筛凝胶）等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为 固定相的薄层吸附层析。 吸附是表其中的溶质在此表面上的密集现象。在 固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都 可能发生吸附现象。物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体 表面的分子（离子或原子）和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固 体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。
谢谢观赏
三组
二、湿板制作：
湿板是将支持剂加粘合剂和水或其它液体后均匀地涂布在玻 璃板上，经烘干而成的薄层板。下面介绍三种制板方法： 1、玻璃棒涂布： 将支持剂用水或适当溶剂调成胶浆，倒在玻璃板一端，然后 按干板的制作方法，用玻璃棒将支持剂由玻璃板一端推向另一端， 即形成薄层。 2、玻璃片涂布： 将支持剂用水或适当溶剂调成胶浆，倒在玻璃板一端，然后 按干板的制作方法，用玻璃片将支持剂由玻璃板一端推向另一端， 即形成薄层。 3、倾斜涂布： 将支持剂胶浆倒在玻璃片上，然后将玻璃板倾斜，使胶浆均 匀涂布在玻璃板上。 用上述任何一种方法将支持剂均匀涂布在玻璃板上后静置片 刻，待薄层表面无水渍后置烘箱中，温度升至100℃后持续1小时， 关闭电源，待温度降至接近室温时，取出薄层板放入干燥器，此 步骤称为活化。
实训仪器
名称 容量瓶 烧杯 移液管 玻璃棒 胶头滴管 层析缸 毛细管 烘箱 层析板 吹风机 规格 1000ml 250ml 5ml 1*100 2 1 2 1 2 一盒 数量
201011298银耳多糖单糖组成分析的三种色谱方法比较
银耳多糖单糖组成分析的三种色谱方法比较韩威1，姜瑞芝2，陈英红2，高阳3，高其品3*（1．延边大学，吉林延吉133002；2．吉林省中医药科学院，吉林长春130012；3．长春中医药大学，吉林长春130117）摘要：为选择一种准确快捷的方法测定银耳多糖的单糖组成，对薄层色谱法（TLC）、气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）三种色谱方法进行比较。
结果表明，前两种方法的测定结果均不理想，而HPLC法，操作简便，灵敏度高，分离效果好，信息完整。
测定结果为由葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、岩藻糖组成，其摩尔比为0.24：1.00：0.06：0.29：0.25。
HPLC法对酸性杂多糖组成糖分析是一种比较理想的选择。
关键词：银耳多糖；单糖组成；TCL；GC；HPLCComparison of three kinds of chromatographic methods for monosaccharide composition analysis of Tremella polysaccharideHan Wei1, Jiang Rui-zhi2, Chen Ying-hong2, Gao Yang3, G ao Qi-pin3*(1. Yanbian University, Yanji 133002, China; 2. Academy of Traditional Chinese Medicine and Material Medical of Jilin Province, Changchun 130012, China; 3. Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China)Abstract：To find an accurate and fast method to determine the monosaccharide composition of Tremella polysaccharide, thin layer chromatography (TLC), gas chromatography (GC) and high performance liquid chromatography (HPLC) was compared. The results of TLC and GC were not significant. However, HPLC was a simple method, showed high sensitivity, good resolution and integrity information. The result of HPLC analysis showed that the monosaccharide composition were Glc, Man, GlcA, Xyl and Fuc, with the mole percentage of 0.24:1.00:0.06:0.29:0.25. Consequently, HPLC is the most suitable method for monosaccharide composition analysis.Key words：Tremella polysaccharide; monosaccharide composition; TLC; GC; HPLC 银耳（Tremella fuciformis Berk）是真菌类银耳科银耳属植物，也叫白木耳，基金项目：十一五国家科技重大专项（No. 2009ZX09103-333）；国家自然科学基金（No. 30873370）*通讯作者Tel：（0431）86172070；E-Mail：gaoqipin@在我国有悠久的药食兼用历史，具有增强人体免疫力的作用。
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实验一银耳多糖的制备及分析
实验目的：
1. 学习真菌多糖类的分离、纯化原理。
2. 掌握多糖类物质的一般鉴定方法。
实验原理：
银耳（Tremella fuciformis）是我国一种传统的珍贵的真菌，具有滋补强壮、扶正固本之功效。
银耳中含有的多糖类物质则具有明显提高机体免疫功能、抗炎症和抗放射等作用。
多糖（polysaccharides）的纯化方法很多，但必须根据目的物质的性质及条件选择合适的纯化方法。
而且往往用一种方法不易得到理想的结果，因此必要时应考虑合用几种方法。
1、乙醇沉淀法：乙醇沉淀法是制备黏多糖的最常用手段。
乙醇的加入，改变了溶液的极性，导致糖溶解度下降。
供乙醇沉淀的多糖溶液，其含多糖的浓度以1%----2%为佳。
加完酒精，搅拌数小时，以保证多糖完全沉淀。
沉淀物可用无水乙醇、丙酮、乙醚脱水，真空干燥即可得疏松粉末状产品。
2、分级沉淀法：不同多糖在不同浓度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不同，因此可用不同浓度的有机溶剂分级沉淀分子大小不同的黏多糖。
3、季铵盐络合法：黏多糖与一些阳离子表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）和十六烷基氯化吡啶（CPC）等能形成季铵盐络合物。
这些络合物在低离子强度的水溶液中不溶解，在离子强度大时，这种络合物可以解离，溶解，释放。
本实验采用固体法培养获得的银耳子实体，经沸水抽提、氯仿—正丁醇法除蛋白质和乙醇沉淀分离可制得银耳多糖粗品，再用CTAB
（溴化十六烷基三甲铵）络合法进一步精制可得银耳多糖精品，然后进行定性分析。
实验内容与方法：
1、提取
将20g银耳实体和800ml水加入1000ml烧杯中，于沸水浴中加热搅拌8h，离心去残渣（3000r/min,25min）。
上清液用硅藻土助滤，水洗，合并滤液后于80摄氏度水浴搅拌浓缩至糖浆状。
然后加入1/4体积的氯仿—正丁醇溶液，摇匀，离心（3000r/min,10min）分层，再用分液漏斗分出下层氯仿和中层变性蛋白，然后重复去蛋白质操作2次。
上清液用2moL/L氢氧化钠调至PH7.0，加热回流，用1%活性炭脱色，抽滤，上清液于80摄氏度水浴浓缩至原体积的1/3.然后加入3倍体积的95%乙醇，离心（3000r/min,15min），沉淀用无水乙醇洗涤2次，乙醚洗涤一次，真空干燥得银耳多糖粗品
2、纯化
取粗品1g，溶于100ml水中，溶解后离心（3000r/min,10min）除去不溶物，上清液加入2%CTAB溶液至沉淀完全，摇匀，静置4h，离心（3000r/min,10min）,沉淀用热水洗涤3次，加100ml 2mol/L 的氯化钠溶液于60摄氏度解离4h, 离心（3000r/min,10min），上清液扎袋流水透析12h，透析液于80摄氏度水浴浓缩，加3倍量95%乙醇，搅拌均匀后，离心（3000r/min,10min），沉淀再分别用无水乙醇，乙醚洗涤，真空干燥，得精品银耳多糖。
3、理化性质分析
将银耳多糖精品分别加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中，观察其溶解性。
另外在浓硫酸存在的条件下观察银耳多糖与a—萘酚的作用，于界面出观察颜色变化。
4、含量测定
多糖在浓硫酸中水解后，进一步脱水生成醣醛类衍生物，与蒽酮作用形成有色化合物，进行比色测定。
请同学们（1）熟悉本次实验内容；
（2）在网上查阅测定多糖含量有几种方法；
（3）详细写出蒽酮-浓硫酸测定银耳多糖的实验步骤。