Westernblot发光检测中常见的问题及解决方法
Western blot发光检测中常见的问题及解决方法
免疫印迹试验（Western blot）是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，被广泛应用于蛋白表达水平的研究、抗体活性检测和早期疾病诊断等多个方面。其中较为简单也为大家所普遍接受的Western blot显色方法为底物化学发光法ECL，文章根据发光检测中常见的几种问题现象与各位生物人一起探讨。
众所周知，Western blot的原理是蛋白质在电力场的作用下，由大到小的进行排列，利用电泳进行分离和富集。拥有抗原表位的蛋白质分子被抗体（一抗）特异性识别并与之结合。在此基础上，酶或荧光标记的二抗识别并结合一抗，通过与底物反应显色来观察目的蛋白。Western blot显色的方法主要有以下几种：一、放射自显影，二、底物化学发光ECL，三、底物荧光ECF，四、底物DAB呈色。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。大部分Western blot显色底物是化学发光底物，发表文章通常也是用底物化学发光ECL。
ECL法检测辣根过氧化物酶的原理是辣根过氧化物酶在H2O2存在下，氧化化学发光物质鲁米诺（lumino，氨基苯二酰一肼）并发光，在化学增强剂存在下光强度可以增大1000倍，通过将印记放在照相底片上感光就可以检测辣根过氧化物酶的存在。ECL法操作简便，应用现成的试剂盒，按照说明，将两种显色底物等体积混合后将其覆盖在膜表面使其均匀，用玻璃胶片把膜包起来，马上在暗室中将X光片覆盖在膜的上面，显影、定影（或用荧光检测仪检测）。ECL法具有灵敏度高，线性范围广等特点。
图1 ECL检测原理图
Western blot发光检测受多种因素影响，主要包括：抗原含量，抗体敏感度，底物敏感度，显影和定影效率，等。现根据检测中几种常见的现象问题进行分析：
目的蛋白信号弱或无。在Western blot发光检测中常见的问题之一就是目的蛋白信号弱或无。首先考虑是否转膜不充分/过转，如果是，则要优化转膜条件；其次，在转膜合适的前提下考虑是否抗体-抗原敏感性过低，也可能是底物HRP或底物活性降低，可以通过加大上样量/提高抗体浓度/使用敏感底物/延长压片时间解决。曝光时间短也会使蛋白信号降低，因此，要延长胶片的曝光时间。
背景较高。背景深是在Western blot发光检测中最常见的问题，造成背景深的原因很多。第一，封闭的问题，封闭条件一般为5%牛奶或BAS室温封闭2-4h，但最好4度过夜；实际上牛奶对于多数抗体来说效果不错，但二抗与牛奶可能有交叉反应，因此洗涤很重要。另外BSA蛋白单一，可降低因牛奶其他成分引起的背景。第二，TBST洗脱不彻底也会导致背景深，适当增加洗脱时间、次数、用量可以减轻背景颜色。第三，条带背景深也与曝光时间有关，曝光时间超过半小时出现背景是很正常的，所以可以的话建议曝光1-10min。英格恩公司生产的Westernblot 发光试剂EnlightTM含独特的发光增强剂和精准的发光底物，比普通发光试剂灵敏度更高、更稳定，而且发光时间长，背景更低。第四，抗原-抗体浓度/HRP过高时，直接或间接结合在膜上，洗脱不掉等原因，考虑降低抗体浓度或蛋白上样量。
图2 Western blot发光检测中常见的问题及比较
非特异性条带。非特异性条带与抗体交叉反应有关。单抗比多抗特异性好，纯度高，另外适当稀释一抗/二抗浓度，也是有必要的。如果样本在处理过程中发生降解，则样本处理时加入蛋白抑制剂在冰上操作。
显影后膜上条带处变为黄色或为白色。可能是HRP过高导致的敏感性或背景太高，应降低抗体浓度。
条带内无显影的白点与转膜和显影的操作有关。转膜前尽量将膜平衡，并注意胶和膜之间避免气泡，显影时膜与X光片间也应避免气泡。
散在小圆斑是牛奶封闭液中的杂质颗粒导致的，解决此类问题可提前配置好封闭液于4度保存，使用时勿混匀，仅用上层。
Western blot发光检测中常见问题及解决办法
现象
原因
解决办法
信号弱或无
HRP过高引起底物迅速耗竭
稀释一抗/二抗
抗体-抗原系统敏感性过低
提高抗体浓度/蛋白上样量
转膜不充分/过转
优化转膜条件
HRP或底物活性降低
测试活性或选用敏感底物
高背景
HRP过高(背景较高)
稀释一抗/二抗
封闭时间不足
延长封闭时间4度过夜最好
抗体与封闭液有交叉
更换封闭液(如3%BSA的TBST)
TBST洗脱不足
增加洗脱时间、次数、用量
曝光时间过长
降低曝光时间
抗原-抗体浓度过高
降低抗体浓度或蛋白上样量
条带内无显影的白点
转膜不良（如有气泡在胶-膜之间)
精细操作
膜平衡不均/油脂污染
按说明书平衡膜/戴手套用平头镊子持膜
膜与X光片间有气泡
显影前去除气泡
非特异性条带
抗体交叉反应
稀释一抗/二抗
散在小圆斑
封闭液有杂质颗粒
静置牛奶使大颗粒沉淀，仅用上层
反影(白色条带,黑色背景)
HRP过高(背景较高)
稀释一抗/二抗
显影后膜上条带处变为黄色
HRP过高(敏感性太高)
稀释一抗/二抗
底物化学发光ECL是Western blot最常用的显色方法之一，因此，熟悉并掌握其中最常出现的问题及解决办法是做好Western blot发光检测的基础。
市政道路工程试验检测常见问题及措施
市政道路工程试验检测常见问题及措施
市政道路工程试验检测常见问题及措施 摘要：在我国经济发展的过程中，城市化进程也在逐渐加快中，这代表着我国的市政道路工程建设项目也在随之增多，市政道路本身的施工质量受到的关注程度也会相对增加，这是我国经济发展过程中市政道路的必经之路，从重视数量建设向着重视质量建设发展。而对于市政道路工程的施工质量，其通过试验检测方法能够对其施工质量进行有效的监督管理，保证城市发展过程中的市政建设满足人们生产生活需要。本文对当前市政道路工程施工试验检测中常见的问题进行了分析。 关键词：市政道路工程；试验检测；问题 自改革开放以来，我国的市政道路工程建设项目数量逐渐增加，施工力度和规模也在逐渐扩大化，人们的出行频率以及出行交通工具也在发生着较大的变化，在这种情况下，保证市政道路工程施工质量对我国城市发展具有非常重要的意义。试验检测作为一种重要的市政道路质量保障机制，其对整个市政道路工程施工质量影响是非常大的，能够在最大程度上降低市政道路工程施工问题的出现。 一、市政道路工程试验检测作用分析 市政道路工程开展试验检测是为了更好的保证我国的
市政道路施工质量，通过该措施的执行，使得施工单位加强了对自身施工质量的重视，同时还能够在最大程度上对市政道路施工中存在的质量问题进行发现和解决，是我国市政道路发展的重要举措。对于市政道路工程施工中的材料选择，其是保证市政道路工程施工质量的重要内容，而试验检测在这一施工内容中起着重要的监督管理作用，通过试验检测能够对市政道路施工中所使用到的各种材料质量进行检测分析，确定其成分是否满足市政道路后续使用标准，通过试验检测方法能够对这些新材料和新工艺的效果进行准确的分析，且新材料和新工艺的应用还能在最大程度上降低工程施工成本，这对我国的市政道路工程施工发展具有非常重要的意义。最后则是对整个工程的状况更加了解，市政道路工程试验检测方法的应用，其通过全过程的检测机制能够对整个市政道路工程中的所有施工环节质量进行确定，在出现问题之后能够及时寻找问题点并对其进行处理。 二、市政道路工程试验检测中常见问题分析 1.样本选取缺乏代表性，对于市政道路工程中的试验检测，取样工作质量对整个检测结果的准确性以及其能否代表整个工程施工质量具有决定性的影响，而一些施工单位为了保证自身的施工符合相关标准，样品的选择往往带有一定的目的性和投机性，通过选择一些特定的、品质优异的样品进行检测，这种检测结果无法代表市政道路工程的施工质量。
常用电子元器件检测方法与技巧
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民常用电子元器件检测方法与技巧元器件的检测是家电维修的一项基本功，如何准确有效地检测元器件的相关参数，判断元器件的是否正常，不是一件千篇一律的事，必须根据不同的元器件采用不同的方法，从而判断元器件的正常与否。特别对初学者来说，熟练掌握常用元器件的检测方法和经验很有必要，以下对常用电子元器件的检测经验和方法进行介绍供对考。 一、电阻器的检测方法与经验： 1固定 1固定电容器的检测 A检测10pF以下的小电容 因10pF以下的固定电容器容量太小，用万用表进行测量，只能定性的检查其是否有漏电，内部短路或击穿现象。测量时，可选用万用表R×10k挡，用两表笔分别任意接电容的两个引脚，阻值应为无穷大。若测出阻值(指针向右摆动)为零，则说明电容漏电损坏或内部击穿。B检测10PF～001μF固定电容器是否有充电现象，进而判断其好坏。万用表选用R×1k挡。两只三极管的β值均为100以上，且穿透电流要小。可选用3DG6等型号硅三极管组成复合管。万用表的红和黑表笔分别与复合管的发射极e和集电极c相接。由于复合三极管的放大作用，把被测电容的充放电过程予以放大，使万用表指针摆幅度加大，从而便于观察。应注意的是：在测试操作时，特别是在测较小容量的电容时，要反复调换被测电容引脚接触A、B两点，才能明显地看到万用表指针的摆动。C对于001μF以上的固定电容，可用万用表的R×10k挡直接测试电容器有无充电过程以及有无内部短路或漏电，并可根据指针向右摆动的幅度大小估计出电容器的容量。 2电解电容器的检测 A因为电解电容的容量较一般固定电容大得多，所以，测量时，应针对不同容量选用合适的量程。根据经验，一般情况下，1～47μF间的电容，可用R×1k挡测量，大于47μF的电容可用R×100挡测量。 B将万用表红表笔接负极，黑表笔接正极，在刚接触的瞬间，万用表指针即向右偏转较大偏度(对于同一电阻挡，容量越大，摆幅越大)，接着逐渐向左回转，直到停在某一位置。此时的阻值便是电解电容的正向漏电阻，此值略大于反向漏电阻。实际使用经验表明，电解电容的漏电阻一般应在几百kΩ以上，否则，将不能正常工作。在测试中，若正向、反向均无充电的现象，即表针不动，则说明容量消失或内部断路；如果所测阻值很小或为零，说明电容漏电大或已击穿损坏，不能再使用。C对于正、负极标志不明的电解电容器，可利用上述测量漏电阻的方法加以判别。即先任意测一下漏电阻，记住其大小，然后交换表笔再测出一个阻值。两次测量中阻值大的那一次便是正向接法，即黑表笔接的是正极，红表笔接的是
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结构施工图审查常见问题汇总 一、计算书： 1、基本风压和基本雪压数值书写有误。 风荷载60米以上高层乘以1.1系数； 雪荷载敏感结构取100年数值。 （雪荷载敏感主要是指大跨、轻质屋盖结构。混凝土框架结构大跨度可套用抗震规范的18米；轻钢屋盖雪荷载基本上都会超过屋盖自重，均划分为雪荷载敏感结构。） 2、荷载取值不满足规范要求。 存在荷载漏输或取值偏小。（尤其应注意卫生间、楼梯间、阳台等。） 机房层平面太阳能集热板区面层恒载输入不足。 附房层作为地下室顶板，应考虑上部结构施工荷载，活载取值偏小。（不小于4KN/m2，建议取4KN/m2。） 对剪力墙结构，考虑墙体粉刷荷载，建议砼容重适当加大。 覆土厚1.7米，荷载输入偏小。（厚度取值不足，土容重按20KN/m2，取18KN/m2偏小） 3、应校验地下室抗浮设计水位取值同岩土工程勘察报告提供数据是否一致。 存在整体抗浮满足，局部抗浮不满足。（下沉庭院、坡道等） 4、地下室防水砼外墙抗裂计算 朱炳寅《建筑结构设计问答及分析》P356，对地下结构进行裂缝跨度验算时，可考虑基础及地下室外墙建筑外防水的作用，按一类环境确定基础及地下室外墙外表面的混凝土裂缝控制，裂缝宽度可控制在0.3～0.4mm。 考虑实际施工中填土极不规范，防水材料翻修困难，裂缝宽度按0.25控制。 5、场地类别有误。 场地类别应根据地勘报告取值，抗震区与构件的抗震等级密切相关。 6、地面粗糙度 应根据荷载规范取值，风压高度变化系数不同，对非震区高层计算结构有较大影响。 7、地下室顶板作为上部结构嵌固部位时应符合JGJ3-2010,12.2.1要求。嵌固层选用 应与地下室统一。 单体计算模型应将地下室及相关范围一起建模计算。单体模型外延两跨，满足刚度比2的要求。存在较多下沉庭院等造成顶板不完整时嵌固端下移或置于基础顶。 8、商业建筑活载在设计柱、基础时，不能考虑按楼层的折减，应取楼面梁相同的折减 系数。 9、柱混凝土强度等级高于承台应进行局部受压验算，请复核并提供计算书。 单桩竖向承载力特征值偏大（侧阻和端阻综合系数取值不对），请复核桩基。
LED发光二极管检测方法
1．发光二极管的特点 ? 发光二极管LED（Light-Emitting Diode）是能将电信号转换成光信号的结型电致发光半导体器件。其主要特点是： （1）在低电压（～）、小电流(5～30mA)的条件下工作，即可获得足够高的亮度。 （2）发光响应速度快（10-7～10-9 s），高频特性好，能显示脉冲信息。 （3）单色性好，常见颜色有红、绿、黄、橙等。 （4）体积小。发光面形状分圆形、长方形、异形（三角形等）。其中圆形管子的外径有φ1、φ2、φ3、φ4、φ5、φ8、φ10、φ12、φ15、φ20（mm）等规格，直径1 mm的属于超微型LED。 （5）防震动及抗冲击穿性能好，功耗低，寿命长。由于LED的PN结工作在正向导通状态，本射功耗低，只要加必要的限流措施，即可长期使用，寿命在10万小时以上，甚至可达100万小时。 （6）使用灵活，根据需要可制成数码管、字符管、电平显示器、点阵显示器、固体发光板、LED平极型电视屏等。 （7）容易与数字集成电路匹配。 2．发光二极管的原理 发光二极管内部是具有发光特性的PN结。当PN结导通时，依靠少数载流子的注入以及随后的复合而辐射发光。普通发光二极管的外形、符号及伏安特性如图1所示。LED正向伏安特性曲线比较陡，在正向导通之前几乎有电流。当电压超过开启电压时，电流就急剧上升。因此，LED属于电流控制型半导体器件，其发光亮度L（单位cd/m2，读作坎[德拉]每平方米）与正向电流IF近似成正双，有公式 L =K IFm 式中，K为比例系数，在小电流范围内（IF=1～10mA），m=～。当IF＞10mA时，m=1，式（）简化成 ?????? L =K IF 即亮度与正向电流成正比。以磷砷化镓黄色LED为例，相对发光强度与正向电流的关系如图2所示。LED的正向电压则与正向电流以及管芯的半导体材料有关。使用时应根据所要求的显示亮度来选取合适的IF值（一般选10mA左右，对于高亮度LED可选1～2mA），既保证亮度适中，也不会损坏LED。若电流过大，就会烧毁LED的PN结。此外，LED的使用寿命将缩短。 由于发光二极管的功耗低、体积小，色彩鲜艳、响应速度快、寿命长，所以常用作收录机、收音机和电子仪器的电平指示器、调谐指示器、电源指示器等。发光二极管在正向导通时有一定稳压作用，还可作直流稳压器中的稳压二极管，提供基准电压，兼作电源指示灯。目前市场上还有一种带反射腔及固定装置的发光二要管（例如BT104-B2、BT102-F），很容易固定在仪器面板上。
路桥工程试验检测中常见问题及应对措施 王渭锋
路桥工程试验检测中常见问题及应对措施王渭锋 发表时间：2019-08-09T14:10:00.190Z 来源：《防护工程》2019年9期作者：王渭锋 [导读] 影响路桥质量的因素有很多，通过科学的试验检测工作可以尽早发现这些问题。 身份证号码：36242719870624xxxx 摘要：一般而言，由于缺乏工程测试和检查的时间比较短，一些检测机制尚未完成，特殊筛选技术等问题滞后。为了在测试和管理路桥过程中有效提高经济效益和社会效益，项目管理人员必须考虑建筑物的特点和路桥设计的需要，建立科学合理的检测机制，完善检测过程中的每一个环节，确保工程建设的整体质量，高效率地实施路桥工程检测和检查工作，确保路桥工程在施工期间顺利完成。 关键词：路桥工程；试验检测中；常见问题；应对措施 引言 影响路桥质量的因素有很多，通过科学的试验检测工作可以尽早发现这些问题，并在最初的阶段解决这些问题，以保证路桥工程整体的质量。路桥试验检测人员要努力提高自己的专业水平，端正自己的工作态度，以积极饱满的状态投入工作。另外还要引进一些新的技术、设备，并定期进行保养、维修，以保证这些设备始终处于稳定的运行状态，减少因为机器设备而产生的误差，提高试验检测的准确性和可靠度，为路桥工程质量提供有效的保障。 1路桥工程试验检测的重要性分析 1.1路桥工程质量控制的主要条件 由于路桥工程的建设规模一般较大，且其建设的选址较为偏僻，因此在建设过程中，会无形中增加建设及施工的成本，施工周期较长。因此，为保证施工所需材料的质量，应在工地附近建设对应的材料试验室，针对所需使用的建筑材料进行实地检测，实现对材料质量的可控性，同时应保证工地实验室资金的充足，满足实验仪器、设备等的引进。 1.2路桥工程试验检测的重要性 试验检测是完善路桥工程质量监督管理工作的先决条件，同时也是发挥检测工作质量标准工作科学规划的重要内容，因此在路桥工程施工中具有重要意义。首先，任何一项工程建设，都需要进行科学试验，进而以科学数据作为路桥工程检测的标准，从而能够保证路桥工程的顺利进行。其次，准确性和规范化的试验检测流程，是创建精品路桥工程的重要内容，也体现了路桥工程建设部门对于质量管理检测工作的重视。最后，要严格的以路桥工程试验检测工作的标准进行约束，宏观的分析试验检测工作的标准化流程，进而强调事物发展的规律，从根源处总结出路桥工程试验检测工作的重要性。 2影响路桥检测工作质量的常规因素 2.1路桥工程试验检测技术较为落后检测道路施工需要各种测试方法和测试设备来处理各种环境中的阿金侧工作，从而确保测试数据的完整性和准确性。但是，鉴于路桥工程检测单位实际开发建设水平的差异，所采用的检测方法相对落后，这样不仅增加了路桥建设的风险，而且还降低了路桥工程控制本身的整体竞争力。 2.2试验检测及其管理制度不完善 在工程施工的前期阶段，试验检测是采购人员进行材料选购的依据，因此应保证试验检测过程中的管理制度完善，检测流程标准化，这样才能够保证采购作业的正常开展。而目前来看，大多数的路桥工程在试验检测作业过程中，没有建立标准化的管理制度，难以实现检测工作各个环节的斜接，同时在管理制度的认识与落实上，并没有针对试验检测的结果进行具体落实，管理制度过于形式化。 2.3设备应用不当造成质量检测失误 除了上述所述的人为因素之外，设备也是检测工作中非常重要的另一个主体，只有确保测试设备的准确适用性才能促进整个项目的顺利开展，这也是确保测试结果的关键因素。设备及时更新与工作精准度的提升对整体的工程质量至关重要。 3路桥工程试验提高检测质量的措施分析 3.1完善试验检测制度体系 由于路桥工程试验检测制度的不完善使得试验检测工作无法有效开展，作用无法发挥，因此必须要加强对工程检测制度的完善。首先，加强对人员管理制度的完善，对各项制度任务进行明确的分工，同时将责任直接落实到各个岗位和人员，提升员工的责任意识，在工作中兢兢业业，防止出现弄虚作假的行为。同时在管理层中设置各个工程试验检测负责人，对工程试验检测中的任务进行严抓，防止在出现问题后互相推诿。此外，加强对奖惩机制的完善，对于在试验检测工作中勤勤恳恳，试验检测过程认真负责的人员需要给予积极的鼓励和奖惩；对于在试验检测工作中弄虚作假，工作态度不认真的人员，则需要通过规范的体制和制度进行改善。 3.2做好材料质量控制工作 材料是工程建设施工重要基础，对路桥施工用料予以严格的质量监控及试验检测，能预防质量问题，比如对工程建设所需各类原材料、半成品、成品及预制品等进行规范的试验检测，能确定哪些材料合格，哪些不合格，预防承包方使用质量不合格的材料施工。与此同时，在取样过程中，还应安排监督人员在现场进行签字认可，无论是取样过程还是取样数量都应根据相关技术规范确定。而且对不同的原材料需要进行非常规试验检测，用于确定此类材料是否完全符合技术规范与要求。针对施工中可能用到的新工艺、技术与材料，均要施以细致的试验检测，根据试验检测结果确定其是否合格，确认合格后方可用于施工，端正试验检测工作态度，引起足够重视。除此之外，工程开工前，还要向工程的监理方提供所有材料的出厂试验报告及合格证书。 3.3加强路桥工程试验检测设备的完善 从当前路桥工程试验检测情况来看，在仪器设备方面还存在很多的问题，仪器设备数量不足，状况不完善，使得试验检测技术在实施过程中存在很多的问题，因此可以通过对试验检测设备的补充和整合进行完善。具体的方式为通过对单一工程试验检测设备资源的整合，提升整合效率。但是为了有效预防整合方面的资源浪费，必须要在工程检测的过程中将所有的设备都交由检测单位进行管理，但是可以在整个企业的各部门和项目部间共享。如果检测设备缺失或者存在问题，通过协商的方式对设备进行协调应用。通过对检测设备的整合，不
实验二极管和三极管的识别与检测实验报告
实验 二极管和三极管的识别与检测 一、实验目的 1.熟悉晶体二极管、三极管的外形及引脚识别方法。 2.熟悉半导体二极管和三极管的类别、型号及主要性能参数。 3.掌握用万用表判别二极管和三极管的极性及其性能的好坏。 二、实验仪器 1.万用表 2.不同规格、类型的半导体二极管和三极管若干。 三、实验步骤及内容 1.利用万用表测试晶体二极管 （1）鉴别正负极性 机械万用表及其欧姆档的内部等效电路如图所示。 图中E 为表内电源，r 为等效内阻，I 为被测回路中的实际电流。由图可见，黑表笔接表内电源的正端，红表笔接表内电源的负端。将万用表欧姆档的量程拨到100?R 或K R 1?档，并将两表笔分别接到二极管的两端如图所示，即红表笔接二极管的负极，而黑表笔接二极管的正极，则二极管处于正向偏置状态，因而呈现出低电阻，此时万用表指示的电阻通常小于几千欧。反之，若将红表笔接二极管的正极，而黑表笔接二极管的负极，则二极管被反向偏置，此时万用表指示的电阻值将达几百千欧。 电阻小电阻大 （2）测试性能 将万用表的黑表笔接二极管正极，红表笔接二极管负极，可测得二极管的正向电阻，此电阻值一般在几千欧以下为好。通常要求二极管的正向电阻愈小愈好。将红表笔接二极管正极，黑表笔接二极管负极，可测出反向电阻。一般要求二极管的反向电阻应大于二百千欧以上。 若反向电阻太小，则二极管失去单向导电作用。如果正、反向电阻都为无穷大，表明管子已断路；反之，二者都为零，表明管子短路。 2.利用万用表测试小功率晶体三极管 （1）判定基极和管子类型 由于基极与发射极、基极与集电极之间，分别是两个PN 结，而PN 结的反向电阻值很大，正向电阻值很小，因此，可用万用表的100?R 或K R 1?档进行测试。先将黑表笔接晶体管的某一极，然后将红表笔先后接其余两个极，若两次测得的电阻都很小，则黑表笔接的为NPN 型管子基极，如图所示，若测得电阻都很大，则黑表笔所接的是PNP 型管子的基极。若两次测得的阻值为一大一小，则黑表笔所接的电极不是三极管的基极，应另接一个电极重新测量，以便确定管子的基极。
cnas实验室认可中常见问题(20200919214248)
实验室认可中常见问题 2013-07-09 、关于认可规则 1. 某实验室工作人员以CNAS-RLO第10.1.1条“变更通知”中“ c）认可范围内的检测/校准依据…… 作范围……发生重大改变；”为依据，认为校准能力的扩大属于变更，而不是扩项。为种说法是否正确？应何解释？ 答：这种说法不正确。CNAS-RLO第10.1.1条所述变更，是指认可范围内的变化，校准能力扩大，大部分不在认可范围内，所以不能按变更处理，应按扩大认可范围（简称扩项）处理。 、关于CL10 1. CL10中规定的技术管理者不具备，是否此领域不予认可？ 答：是，化学领域不予认可。 2. CNAS-CL1C中的“注”与正文是否有等同作用？ 答：CL10中的“注”是对正文的解释，或举例。 3. CL10在定期使用中间点的校准标样检查校准曲线会造成误导实验室以为制作一条校准曲线只满足上述要求可长期使用，不正确使用方法！不符合分析化学基本要求！如何处理？ 答：CNASX可的实验室，有境内实验室，也有境外实验室，CL10规定的是最低要求，也是采用国际上 通用规则。如果相应国家标准中有明确规定的，实验室应执行国家标准。 4. 申请的化学领域的授权签字人如都达不到CL10要求怎么办？是否可以推荐了其化学技术能力， 没有推荐化学领域的授权签字人？ 答：如果实验室某个领域没有符合要求的授权签字人，则该领域的能力不予认可。 5. CNAS-CL10:2012 5.2.1 条款要求实验室从事化学检测的人员具有化学或相关专业专科以上的历，或者具有10 年以上化学检测工作经历, 该条款在某些实验室的化学检测人员的工作年限会达不到，能否个比例，使没有相关专业专科以上学历而从事化学检测的人员，通过学习、培训取得上岗证，在工作中学习累工作经验和工作年限。如评审中出现该不符合项，实验室除招有资质的人员难于整改。如招不到符合条件人员，该不符合项关闭不了，评审组难于限制化学检测能力。 答：此条款是强制性要求，比例是100%。对于人员不能满足要求，或相关不符合项不能在规定时间完成整改的，则相应项目不予认可。此类不符合项的整改验收，应安排现场跟踪验证，包括安排现场试验。 6. CNAS-CL1：02012 于2012年6月11日发布，2013年1月1日实施。在2013年1月1日前，审时发现实验室未按照CNAS g求进行自查，和实验室的做法不符合新的应用说明要求，应如何处理。 答：①现场发现实验室没有进行自查的，评审组应提醒实验室进行自查。②如果评审依据是旧版文件，使实验室没有按照新版文件操作，评审组也不能开不符合项，只能是提醒实验室。 7. 化学实验室的标准物质按CL10要求是要按计划进行核查。但在CL01中只要技术和经济条件允许，进行… , 按哪个要求进行评定。 答：应执行CL10文件，因为应用说明文件是对通用认可准则（CL01）要求的明确和细化，允许其要求于通用认可准则。 8. CL10对技术负责人的要求，在司法鉴定机构中，如公安司法鉴定机构中其角色是要求理化室技术责人，还是机构的技术负责人之一？
(完整版)二极管共阴共阳极检测方法
LED数码有共阳和共阴两种，把这些LED发光二极管的正极接到一块（一般是拼成一个8字加一个小数点）而作为一个引脚，就叫共阳的，相反的，就叫共阴的，那么应用时这个脚就分别的接VCC和GND。再把多个这样的8字装在一起就成了多位的数码管了。 图1 多位数码管 LED数码有共阳和共阴两种，把些LED发光二极管的正极接到一块（一般拼成一个8字加一个小数点）而作为一个引脚，就叫共阳的，相反的，就叫共阴的，那么应用时这个脚就分别的接VCC和GND。再把多个这样的8字装在一起就成了多位的数码管了。 找公共共阴和公共共阳首先，我们找个电源（3到5伏）和1个1K（几百的也欧的也行）的电阻，VCC串接个电阻后和GND接在任意2个脚上，组合有很多，但总有一个LED会发光的找到一个就够了，，然后用GND不动，VCC（串电阻）逐个碰剩下的脚，如果有多个LED （一般是8个），那它就是共阴的了。
相反用VCC不动，GND逐个碰剩下的脚，如果有多个LED（一般是8个），那它就是共阳的了。 一、LED数码管的检测方法 1. 用二极管档检测 将数字万用表置于二极管档时，其开路电压为＋2.8V。用此档测量LED数码管各引脚之间是否导通，可以识别该数码管是共阴极型还是共阳极型，并可判别各引脚所对应的笔段有无损坏。 （1）检测已知引脚排列的LED数码管 检测接线如图5-42所示。将数字万用表置于二极管档，黑表笔与数码管的h点（LED的共阴极）相接，然后用红表笔依次去触碰数码管的其他引脚，触到哪个引脚，哪个笔段就应发光。若触到某个引脚时，所对应的笔段不发光，则说明该笔段已经损坏。 （2）检测引脚排列不明的LED数码管 有些市售LED数码管不注明型号，也不提供引脚排列图。遇到这种情况，可使用数字万用表方便地检测出数码管的结构类型、引脚排列以及全笔段发光性能。 下面举一实例，说明测试方法。被测器件市一只彩色电视机用来显示频道的LED数码管，体积为20mm×10mm×5mm，字形尺寸为8mm×4.5mm，发光颜色为红色，采用双列直插式，共10个引脚。
建筑施工图审查和会审时常见问题2017
建筑专业施工图审查和图纸会审常见问题汇编（2017） 一、地下室部分 1、地下室中发电机房储油间设150高门槛且采用甲级防火门，并注明储油量不超1m 3。发电机房、配电房、消防中心等上方和贴邻不能直接布置有水的房间(如厨厕、水池等）。 2、消防水泵房不能设有地下三层及以下或与室外地坪高差超10m，应设150高门槛、 排水沟和集水井等。消防中心一般设于首层，若设于地下一层应取得消防局的审核许可。 3、地下车库两个防火分区共用前室及其楼梯时，前室一个门为乙级防火门，另一个 门应为甲级防火门。在地下车库布置停车位时注意预留疏散通道通至疏散楼梯间的防火门。 4、地下室集水井位置尺寸应与水施图一致，注明集水井定位详见结施图，建施图中 应注明其长宽深尺寸，注意消防电梯的集水井应比电梯机坑低至少1000且其有效容积至少2m3。 5、地下室放大平面图应附上其位置示意图，地下室放大平面比例为1：100或150。 6、地下室设有功能用房（如餐厅、商场等）其防水等级为Ⅰ级，地下室配电房也要 求Ⅰ级，可在功能用房和配电房内增加一道内防水层(如2厚聚合物水泥防水涂料等)。 7、地下室平面应附上防火分区示意图，表示汽车坡道和疏散楼梯位置、车库最远点疏散距离 不超60m，注明每层停车数量并在地下一层注明地下总停车数量。地下三层及以下或与室 外高差超10m时应采用防烟楼梯间，其他地下室可采用封闭楼梯间(在首层处应设外窗)。 8、汽车坡道首层出口与规划道路相连通时，应与道路边线距离≥7.5m。汽车坡道转弯90°时 内半径≥4m，转弯90°-180°时内半径≥5m，转弯180°时内半径≥6m。 9、汽车库内层间的特级防火卷帘一般设于汽车坡道上坡端，不需两端都设置特级防火卷帘, 地下一层至首层的汽车坡道则不需设置防火卷帘。
LED发光二极管工作原理及检测方法
LED发光二极管工作原理及检测方法 发光二极管LED（Light-EmittingDiode）是能将电信号转换成光信号的结型电致发光半导体器件。 1、发光二极管LED主要特点 （1）在低电压（1.5～2.5V）、小电流(5～30mA)的条件下工作，即可获得足够高的亮度。 （2）发光响应速度快（10-7～10-9 s），高频特性好，能显示脉冲信息。 （3）单色性好，常见颜色有红、绿、黄、橙等。 （4）体积小。发光面形状分圆形、长方形、异形（三角形等）。其中圆形管子的外径有φ1、φ2、φ3、φ4、φ5、φ8、φ10、φ12、φ15、φ20（mm）等规格，直径1mm的属于超微型LED。 （5）防震动及抗冲击穿性能好，功耗低，寿命长。由于LED的PN结工作在正向导通状态，本射功耗低，只要加必要的限流措施，即可长期使用，寿命在10万小时以上，甚至可达100万小时。 （6）使用灵活，根据需要可制成数码管、字符管、电平显示器、点阵显示器、固体发光板、LED 平极型电视屏等。 （7）容易与数字集成电路匹配。 2．发光二极管的原理 发光二极管内部是具有发光特性的PN结。当PN结导通时，依靠少数载流子的注入以及随后的复合而辐射发光。普通发光二极管的外形、符号及伏安特性如图1 所示。LED正向伏安特性曲线比较陡，在正向导通之前几乎有电流。当电压超过开启电压时，电流就急剧上升。因此，LED属于电流控制型半导体器件，其发光亮度L（单位cd/m2，读作坎德拉每平方米）与正向电流IF近似成正双，有公式L =K IFm 式中，K为比例系数，在小电流范围内（IF=1～10mA），m=1.3～1.5。当IF>10mA时，m=1，式（L =K IF 即亮度与正向电流成正比。以磷砷化镓黄色LED为例，相对发光强度与正向电流的关系如图2所示。LED的正向电压则与正向电流以及管芯的半导体材料有关。使用时应根据所要求的显示亮度来选取合适的IF值（一般选10mA左右，对于高亮度LED可选1～2mA），既保证亮度适中，也不会损坏LED。若电流过大，会烧毁LED的PN结。此外，LED的使用寿命将缩短。 由于发光二极管的功耗低、体积小，色彩鲜艳、响应速度快、寿命长，所以常用作收录机、收音
蛋白Western blot电泳——试验中常见问题及解答
蛋白质电泳与western blot1 Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。该文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术。 （1）原理 （2）分类 ①放射自显影②底物化学发光ECL ③底物荧光ECF ④底物DAB呈色 （3）主要试剂 （4）主要程序 （5）实验常见的问题指南 1. 参考书推荐 2. 针对样品的常见问题 3. 抗体 4. 滤纸、胶和膜的问题 5. Marker 的相关疑问 6. 染色的选择7. 参照的疑问8. 缓冲液配方的常见问题 9. 条件的摸索10. 方法的介绍 11. 结果分析（1）原理：与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 （2）分类 ①放射自显影②底物化学发光ECL ③底物荧光ECF ④底物DAB呈色 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。 （3）主要试剂 1、(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和 1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。 2、，1mlH2O去离子水配制，室温保存。 3、分离胶缓冲液:1.5mmol/L Tris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C 保存。 4、浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05g Tris溶于40mlH2O中，用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用Tris.CL。 5，N，N’N’四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时，聚合反应受到抑制。10%(w/v)过硫酸胺溶液。提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。去离子水配制数ml，临用前配制. 6.1g过硫酸铵，加超纯水溶解并定容至10ml，分装到1.5ml微量离心管中，冻存。 7缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS 12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O 32ml混匀备用。按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。
万用表检测发光二极管的方法
万用表检测发光二极管的方法 1．用万用表检测普通发光二极管 A．用指针式万用表R×10k档，测量发光二极管的正、反向电阻值。正常时，正向电阻值（黑表笔接正极时）约为几十至200kΩ，反向电阻值为∞（无穷大）。在测量正向电阻值时，较高灵敏度的发光二极管，管内会发微光。若用万用表R×1k档测量发光二极管的正、反向电阻值，则会发现其正、反向电阻值均接近∞（无穷大），这是因为发光二极管的正向压降约在2V左右（部分发光二极管压降在3V左右，如白色发光二极管等），而万用表R×1k档内电池的电压值为1.5V，故不能使发光二极管正向导通。 B、用指针式万用表的R×10k档对一只220μF/25V电解电容器充电（黑表笔接电容器正极，红表笔接电容器负极），再将充电后的电容器正极接发光二极管正极、电容器负极接发光二极管负极，若发光二极管有很亮的闪光，则说明该发光二极管完好。 C、用3V直流电源，在电源的正极串接1只47Ω电阻后接发光二极管的正极，将电源的负极接发光二极管的负极，正常的发光二极管应发光。或将1节1.5V 电池串接在万用表的黑表笔（将万用表置于R×10或R×100档，黑表笔接电池负极，等于与表内的1.5V电池串联），将电池的正极接发光二极管的正极，红表笔接发光二极管的负极，正常的发光二极管应发光。 D、如果有两块指针万用表（最好同型号）。用一根导线将其中一块万用表的“+”接线柱与另一块表的“-”接线柱连接。余下的“-”笔接被测发光管的正极（P区），余下的“+”笔接被测发光管的负极（N区）。两块万用表均置×1 0Ω挡。正常情况下，接通后发光二极管就能正常发光。若亮度很低，甚至不发光，可将两块万用表均拨至×1Ω若，若仍很暗，甚至不发光，则说明该发光二极管性能不良或损坏。应注意，不能一开始测量就将两块万用表置于×1Ω，以免电流过大，损坏发光二极管。 2、万用表检测红外发光二极管 红外发光二极管的正向压降一般为1.3～2.5V，可用指针式万用表R×10k档测量红外发光管的正、反向电阻。正常时，正向电阻值约为15~40kΩ（此值越小越好）；反向电阻大于500kΩ。若测得正、反向电阻值均接近零，则说明该红外发光二极管内部已击穿损坏。若测得正、反向电阻值均为无穷大，则说明该
WB免疫印迹实验常见问题全汇总
【干货收藏贴】WB常见问题精品全集锦 做了很久的WB（western blot），走了很多弯路，但是WB想要做好并不难，总结WB实验中可能会遇到的问题，分析可能的原因及对应的解决方案，这就是实验成功的基石。 以下，我们先解决很多技术菌的疑惑，然后再着手汇总实验中常见问题和可能原 因分析以及给出建议解决方案。 WB常见问题分析 1.为什么我的细胞提取液中没有检测到目的蛋白？ 原因有很多： a) 细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞； b) 细胞中的蛋白质被降解掉了，可加入蛋白酶抑制剂，抑制蛋白酶活性； c) 抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，是否有问题； d) 酶降解可能是没有保持低温操作，样品保存不当，样品放置时间过长。 2.我做的蛋白质分子量很小（10KDa），请问怎么做WB？ a)可以选择PSQ 膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起，再转移。其他按 步骤即可； b)也可选择孔径0.22um的PVDF膜或者NC膜，转膜时间缩短，另外可采用 Tricine-SDS-PAGE体系。 3.我的目的带很弱，如何加强？ a)可以加大抗原上样量，这是最主要的； b)也可以将一抗稀释比例降低； c)还可以延长曝光时间。 4.DAB好还是ECL好？ DAB 有毒，但是比较灵敏，是HRP 最敏感的底物； ECL结果容易控制，但被催化时灵敏度差一点，但如果达到阀值，就特别灵敏，可以检测pg 级抗原。 5.胶片是一片空白，是怎么回事？ 如果能够排除下面的几个问题那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。 a) 二抗的HRP 活性太强，将底物消耗光； b) ECM底物中H2O2，不稳定，失活； c) ECL底物没覆盖到相应位置； d) 一抗选择不当二抗失活； e) 二抗失活。
浅谈试验操作中的常见问题
浅谈试验操作中的常见问题 中交一局海外公司亚的斯公司（张君） 摘要：试验检测技术已经作为一门新的学科出现在现代工程建设中。不仅作为工程施工质量过程控制的技术手段，还作为对工程运营过程的使用性能的监测依据。通过分析试验监测技术中的常见问题，提高试验检测的技术水平。 关键词：试验检测；仪器设备；常见问题；影响 一、引言： 试验检测任务在工程建设项目中，始终贯穿于整个项目过程。包括项目前期的原材料的料源确定，品种规格的取舍，混合材料的配合比设计；项目实施过程中的质量检验控制，原材料的定期检验调校；项目后期的产品质量验收与评定。在整个试验过程中，对试验真值的取舍一直是困扰试验检测人员的关键问题。样品的不均匀性、不同试验设备的差异性、不同试验操作人员的主观操作性等，以及结果计算过程中，数位、数字的取舍与进位等。都是影响施工质量与进度的关键问题。 在以往的关于试验检测的教材中，大多对样品的不均匀性和结果计算过程中数字修约的问题着重的介绍与讲解。这里我就不再过多的探讨。在试验操作讲解中主要介绍一些相关的使用设备和大致的试验步骤。相对于刚刚接触试验检测工作的新人来讲，这样的介绍，只是在他们的头脑中形成了一个系统的、抽象的、模糊的概念。在实际的操作过程中，由于试验设备与教材中的差异，试验环境的改变，试验样品的多样化等不同的因素。常常会使年轻的试验检测员们遇到很多细小甚微的细节问题。困扰着新人对试验操作的标准化、规范化、合理化的认识。从而影响了试验结果的真实性和有效性。根据在以往的试验过程中遇到的细小问题，通过具体的实例反应出在今后的试验过程中试验检测人员应该注意的细节。 二、常见问题实例 2.1熟悉和掌握设备的性能及操作 作为一名合格的试验检测人员，进入试验室后首先要对今后工作的试验仪器有所了解。包括其性能，工作额定电压，试验量程等基本参数。在进行试验检测操作之前，要对试验设备进行简单的检查和开机试运行。当确认试验设备运转正常之后再进行正式的试验操作。 2.2天平的正确使用习惯 常规试验中最长应用的设备应属天平。在现代试验室中大多数天平都采用了电子天平。其使用简单，读数便捷快速，大大地提升了试验检测的效率。电子天平的方便快捷给试验检测的技术进步提供了长足的发展，但是往往在其使用过程中，出现纰漏，误操作或是野蛮操作的问题。降低了一起设备的使用寿命，也对试验数据的真实有效性产生了影响。早期的电子天平大多为三角螺旋调节天平的水平，外置圆水准泡。新近出产的电子天平多为四角螺旋，更有利于天平的调节。在天平的使用过程中，往往使用者经常忽略水准螺旋的调节，也不愿意检查水准气泡是否居中。拿来样品就直接放在天平上称量，对于精度要求不高的试验项目，这样的称量方法对结果的影响不会产生很大的影响，但相对于称量精度高的试验
LED发光二极管检测方法
1．发光二极管的特点 发光二极管LED（Light-Emitting Diode）是能将电信号转换成光信号的结型电致发光半导体器件。其主要特点是： （1）在低电压（～）、小电流(5～30mA)的条件下工作，即可获得足够高的亮度。 （2）发光响应速度快（10-7～10-9 s），高频特性好，能显示脉冲信息。 （3）单色性好，常见颜色有红、绿、黄、橙等。 （4）体积小。发光面形状分圆形、长方形、异形（三角形等）。其中圆形管子的外径有φ1、φ2、φ3、φ4、φ5、φ8、φ10、φ12、φ15、φ20（mm）等规格，直径1 mm的属于超微型LED。 （5）防震动及抗冲击穿性能好，功耗低，寿命长。由于LED的PN结工作在正向导通状态，本射功耗低，只要加必要的限流措施，即可长期使用，寿命在10万小时以上，甚至可达100万小时。 （6）使用灵活，根据需要可制成数码管、字符管、电平显示器、点阵显示器、固体发光板、LED平极型电视屏等。 （7）容易与数字集成电路匹配。 2．发光二极管的原理 发光二极管内部是具有发光特性的PN结。当PN结导通时，依靠少数载流子的注入以及随后的复合而辐射发光。普通发光二极管的外形、符号及伏安特性如图1所示。LED正向伏安特性曲线比较陡，在正向导通之前几乎有电流。当电压超过开启电压时，电流就急剧上升。因此，LED属于电流控制型半导体器件，其发光亮度L（单位cd/m2，读作坎[德拉]每平方米）与正向电流IF近似成正双，有公式L =K IFm
式中，K为比例系数，在小电流范围内（IF=1～10mA），m=～。当IF＞10mA时，m=1，式（）简化成 L =K IF 即亮度与正向电流成正比。以磷砷化镓黄色LED为例，相对发光强度与正向电流的关系如图2所示。LED的正向电压则与正向电流以及管芯的半导体材料有关。使用时应根据所要求的显示亮度来选取合适的IF值（一般选10mA左右，对于高亮度LED可选1～2mA），既保证亮度适中，也不会损坏 LED。若电流过大，就会烧毁LED的PN结。此外，LED的使用寿命将缩短。 由于发光二极管的功耗低、体积小，色彩鲜艳、响应速度快、寿命长，所以常用作收录机、收音机和电子仪器的电平指示器、调谐指示器、电源指示器等。发光二极管在正向导通时有一定稳压作用，还可作直流稳压器中的稳压二极管，提供基准电压，兼作电源指示灯。目前市场上还有一种带反射腔及固定装置的发光二要管（例如BT104-B2、BT102-F），很容易固定在仪器面板上。 LED的输出光谱决定其发光颜色及光辐射纯度，也反映出半导体材料的特性。常见管芯材料有磷化镓（GaP）、砷化镓（GaAsP）、磷砷化镓（GaAlAs）、砷铝化镓（GaN）氮化镓可发蓝光。 3．使用注意事项 （1）管子极性不得接反，一般讲引线较长的为正极，引线较短的是负极。 （2）使用中各项参数不得超过规定极限值。正向电流IF不允许超过极限工作电流IFM值，并且随着环境温度的升高，必须作降额使用。长期使用温度不宜超过75℃。 （3）焊接时间应尽量短，焊点不能在管脚根部。焊接时应使用镊子夹住管脚根部散热，宜用中性助焊剂（松香）或选用松香焊锡丝。 （4）严禁用有机溶液浸泡或清洗。 （5）LED的驱动电路必须加限流电阻，一般可取一百欧至几百欧，视电源电压而定。
Western Blot常见问题及处理总结
免疫细胞研究western blot Western Blot常见问题及处理总结 阿木 1、western blot 的优点 答：灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。 2、为什么我的细胞提取液中没有目标蛋 白？ 答：原因有很多: a) 你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c) 你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。 3、我的细胞提取液有的有沉淀，有的很 清亮，为什么呢？
答：a) 有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS 浓度，同时将样品煮沸时间延长，b) 也不排除你的抗原浓度过高，这时再加入适量上样缓冲 液即可。 4、我做的蛋白质分子量很小（10KD）， 请问怎么做WB？ 答：可以选择0.2μml的膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起，再转移。 其他按步骤即可。 5、我的目的带很弱，怎么加强？ 答：可以加大抗原上样量。这是最主要的。 同时也可以将一抗稀释比例降低。 6、胶片背景很脏，有什么解决方法？答：减少抗原上样量，降低一抗浓度，改
变一抗孵育时间，提高牛奶浓度。 7、目标带是空白，周围有背景，是为什 么？ 答：你的一抗浓度较高，二抗上HRP 催化活力太强，同时你的显色底物处于一个临界点，反应时间不长，将周围底物催化完，形成了空白即“反亮现象”。将一抗和二抗浓度降低，或更换新底物。 8、我的胶片是一片空白，是怎么回事？ 答：如果能够排除下面的几个问题那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。 a) 二抗的HRP 活性太强，将底物消耗光；b) ECM底物中H2O2，不稳定，失活；c) ECL底物没覆盖到相应位置；d) 二 抗失活。
公路工程试验检测中的常见问题及应对措施
公路工程试验检测中的常见问题及应对措施 发表时间：2020-04-13T16:50:28.380Z 来源：《城镇建设》2020年4期作者：刘亮 [导读] 现阶段，随着社会的发展，我国的公路工程的建设也越来越迅速 摘要：现阶段，随着社会的发展，我国的公路工程的建设也越来越迅速。公路工程质量决定其经济效益和社会效益的上限，公路工程试验检测工作则是工程质量问题的试金石。作为质量管理和技术管理的重要内容，试验检测工作是确保施工设计方案有效性和可行性的前提条件，也是工程项目质量控制的常规方法。公路工程试验工作能够对工程竣工后的验收工作提供完整、详细的参考数据，从而完善工程监理监管制度流程，所以需要相关工作人员做好试验检测工作的相关工作，全面规划，统筹管理工程项目中的各个施工生产环节。 关键词：公路工程；试验检测；常见问题；应对措施 引言 经济发展与公路运输具有十分密切的关系，在运输行业中公路运输是比较重要的一个组成部分，在建设中需投入较大精力，只有妥善解决公路运输问题，才能有利促进经济的快速发展。公路工程项目不断扩大的建设规模，使社会发展在一定程度上满足了基本需求，所以，公路最重要的就是工程建设质量。为使公路产生各种质量问题，对公路开展检测工作是最常用的方法，进而使因公路质量导致的问题得到有效避免，在公路后期也避免产生一定的安全隐患。在公路开展的相关检测中，采取有效的试验检测方法，通过科学的试验检测较深入地分析公路建设中采用的设备、材料及人力等有关内容，进而确保公路建设质量。深入分析检测相关结果，进而实现评定公路建设的主要流程，最关键的在于使有关安全问题得到明显改善。因公路运输较大的运输量、较低的成本及便捷灵活等优势突出，使我国公路程近年来不断扩大建设规模，但随之也产生了很多问题，所以，对公路工程一定要加强试验检测。 1公路工程试验检测工作的重要性 我国经济快速发展的同时各地的基建水平也在迅速提高，公路工程建设的规模也日益扩大，对工程质量的追求也精益求精。为了提高工程完成质量和延长公路的使用寿命，试验检测工作有着非常重要的职责。试验检测工作可以加强对公路工程质量的把控、确保工程各项相关数据达标，与公路工程的质量息息相关，因此在工程开工前到竣工后都应当进行试验检测。公路工程试验检测的内容涵盖多种，如施工材料、施工技术、施工成果和施工基础等，从基础到整体都需要进行检测。工程参建方可以通过检测工作了解公路路线设计是否科学、路基承载力是否足够，路线和路基的设计是否符合工程力学，避免施工中出现误差或安全隐患；工程验收方可以通过检测工作了解公路工程施工质量、施工材料是否达标，防止工程建造不符合要求。公路检测技术的发展有利于我国公路建造中发现问题、提高建造水平，对我国公路工程的发展有着长远意义。 2公路工程试验检测工作对施工质量的影响 2.1材料选择方面 在进行公路工程施工时，通过公路工程的试验检测，能有效实现对材料性能的控制。通过加大对试验检测工作的开展，保障了工程材料采购的科学性，同时也推进了材料性能的提升，降低了材料的投入成本，保障了工程经济效益的提升。在公路工程施工中需要应用到大量的填料和砂石，在进行这些材料的选取时，通过试验检测工作能保障材料选取更加合理。而且通过相关的检测可以保障新型工艺、新型技术和新型材料的应用，为工程材料的大力发展提供了依据，有效推进了新型技术应用的可行性判定，保障了工艺和技术应用的合理性，也就是说无论是对材料进行选取还是材料的应用，通过试验检测工作都能有效实现对质量的控制，推进工程经济效益的增长。 2.2施工工艺方面 在公路工程施工中，通过试验检测能实现施工技术的优化，让工程投入更少的成本，实现工程质量的优化。通过试验检测的合理应用，加大了技术应用的合理性，同时也推进了材料用量比例的优化，让工程造价得到降低，通过对检测结果的分析，准确评估技术应用的可行性，判断技术应用是否存在问题。另外加大对检测结果的分析，还可以实现对技术应用的调整，保障工程施工的顺利性。 3公路工程试验检测中常见问题的应对措施 3.1培养专业试验检测人员 试验检测人员是检测工作的完成者，如果存在专业水平、操作水平低的情况就会对检测工作有着不利影响，对工程建造的完成也有负面影响。因此需要工程试验检测部门注重对专业人才的培养，在提升设备精确性的同时加大对专业试验检测人员的培养，从专业知识、仪器实操和综合素质方面得到提升。还可以引进专业技术人才，带动内部人员水平的提升和技能学习。除了专业能力之外，还要定期或不定期地对在职人员进行检测工作习惯的检查，确保他们依据作业指导和管理手册进行检测工作，对检测结果能做到完全负责，更好地开展检测工作，使公路工程试验检测工作能够保持权威性、公正性。 3.2健全公路工程试验检测相关管理制度 公路工程试验检测需要从公路工程建设的实际情况出发，合理地对管理制度做出修改和补充，推动公路工程试验检测工作的正常开展。针对工程重点和特点编制具有可操作性的公路工程试验检测方案，明确检测人员岗位职责。建立完善有效的施工报检制度，保证现场检测符合规范标准要求。 3.3优化原材料选择与配合 在公路工程施工中，工作人员需要加大对施工材料的合理控制，而且还需要严格控制原材料的配比，尤其是在进行混凝土以及沥青材料的配置时必须要求配比符合施工标准，而且与工程的施工需要相吻合。通过对原材料的试验检测，能有效保障施工中混凝土沥青等材料应用的科学性，保障材料配合比符合施工要求，同时也能加大对配比的优化，保障公路工程施工质量。通过对公路工程的试验检测，能让工作人员加大对施工原材料的合理控制，实现对原材料各项参数的分析，实现对工程中资源的合理化应用。比如说，在进行公路工程的原材料试验检测时进行材料选择，需要通过抽样检查的方式确保材料质量符合施工标准，并且将合格的材料应用到工程中，在进行混凝土的配置时要求工作人员对混凝土的配比进行分析，确保混凝土配比标准符合施工要求，通过对原材料的试验检测保障配比符合标准，并且尽量选择灰剂量比较小的配置方案。同时在沥青材料的试验检测时，工作人员也需要对材料进行科学检测，确保沥青质量与施工标准相符，沥青材料的配比需要选取油量较少的配比方案。 3.4提高检验人员的综合素养 检验人员的综合素养是整个检验过程中的关键，也是影响检验结果的主要因素。因此必须提高检验人员的专业技能，注重日常的培训