标准曲线法测定芦丁含量
“分光光度法测定芦丁含量”测定方法的改进
吸道 也有 刺激 ，吸 入人 体后 ，可 引起 胸部不 适和 咳嗽 】 。
２ 改进后 的测定方法——标准曲线法
由于 原测 定 方法 存 在上 述 不足 之 处 ， 因此 很 有 必要 对 测定 芦 丁含 量 的方 法进 行 适 当的 改进 。笔者 所在 的 实验 教
１ 原测定方法 的不足
关键 词
分光光度 法 ；芦丁 ；测定方法 ；显 色对比 法；标 准曲线法 ；改进
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａｃ ｔ Ｔｈ ｉ ｓ ｐ ａ ｐ ｅ ｒ ｐ ｕ ｔ ｆ ｏ ｒ ｗａ ｒ ｄ ａ ｎ ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ， ｔ ｈ ａ ｔ ｉ ｓ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｃ ｕ ｒ ｖ ｅ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｉ ｎ ｒ ｅ ｇ ａ ｒ ｄ ｔ ｏ ｔ ｈ ｏ ｓ ｅ ｄ ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｃ ｉ ｅ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ａ ｓ ｔ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ ‘ ‘ Ｓ ｐｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｃ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｒｕ ｔ ｉ ｎ Ｃｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ’ ＇ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ｉ ｎ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｏ ｎ ． Ｗｅ ｍａ ｄ ｅ ｕ ｐ ｆ ｏ ｒ ｄ ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｃ ｉ ｅ ｓ
槐米中芦丁含量的测定解析
BREAD PPT Hale Waihona Puke ESIGN芦丁的提取率测定
取干燥芦丁粗品约1g，精密称定，加甲醇溶解后移入100mL容量 瓶，再加甲醇洗涤并入容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀。精取10mL置 100mL容量瓶，加水至刻度，摇匀。精密量取3mL置25mL容量瓶中， 按照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6mL”起依法测定吸光度， 从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度，计算即得槐米中芦丁的 提取得率。
利用超声波的空化效应、湍 流效应、微扰效应、界面效 应和聚能效应等物理作用， 加速被破碎物细胞壁的破裂， 促进细胞内含物的溶出，从 而实现天然产物低温、快速 提取的目标。具有杂质含量 低、有效成分含量高、提取 时间短的优点。
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因素设计
水平 A 料液比 因素 B 提取时间 C 温度
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芦丁对超氧阴离子O2÷清除作用
原理
用邻苯三酚自氧化法,利用O2÷清除剂能使邻苯三酚自氧化产物 在325 nm处的吸收峰受到抑制这一特点,用紫外分光光度计进行 检测,间接测得O2÷生成及O2÷的清除率。
超声提取
酸沉 用盐酸将PH调至3
离心过滤 滤液静置、干燥
芦丁粗提产品
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芦丁标准曲线的绘制
精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁标准品200mg，置 100mL容量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲 醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度， 摇匀即得（每1mL中含无水芦丁0.2mg）。精密量取上述标准溶液 0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL与6.0mL分别置 25mL容量瓶中，各加水至6mL，加5％亚硝酸钠溶液1mL使混匀，放 置6分钟，加10％硝酸铝溶液1mL摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试 液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；按照分光光度法，在 500nm的波长处比色测定吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为 横坐标，绘制标准曲线。
生物制药实验(1)
实验一芦丁的提取精制与鉴定芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutinoside），在植物界广泛存在，其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，可作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物Sophora japonica 的未开放花蕾，具有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。
除此之外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Quercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、6-而乙基氨基芦丁等。
槐花米中芦丁的含量高达12%~16%,另含少量皂苷。
芦丁水解后得到槲皮素，皂苷水解后可得到白桦酯醇（Betulin）及槐花二醇（Sophoradiol）。
芦丁为淡黄色细小针状结晶，含三个结晶水，熔点177~178℃。
；芦丁溶于热水（1:200），难容于冷水（1:8000）；溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100）；热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。
易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。
其结构如下图：一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法二、实验原理芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水。
溶解度：冷水1:10000；热水1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶于热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
三、实验器材研钵，500mL烧杯，广泛试纸，四层纱布，滤纸，漏斗，10mL试管，5mL移液管，波棒，洗耳球，温控烘箱石灰乳，浓盐酸，镁粉，10%α-萘酚乙醇溶液，浓硫酸，乙醇，2%二氯氧锆甲醇溶液，2%柠檬酸甲醇溶液四、实验流程pH8～9滤液药渣10分钟，维持pH8～9pH至4～5沉淀低温（60℃）干燥，称重。
测定方法
(2)实验试剂制备1.5%C6H6O：称取3 g的C6H6O，用去离子水定容至60mL；2.0.2µg/µL芦丁：称取6 mg芦丁，向其中加入30 mL的C2H5OH；3.5%亚硝酸钠：称取2.066 g 亚硝酸钠，加入39.254 mL的去离子水；4.5%硝酸铝：称取2.014 g 硝酸铝，加入38.266 mL 的去离子水；5.20% 三氯乙酸：20 g 三氯乙酸，用去离子水定容至100 mL；6.4%氢氧化钠：称取2.048 g 氢氧化钠，加入49.152 mL 去离子水溶解；7.0.5mg/mL BHT：称取20mgBHT,用无水甲醇定容至40 mL；8.HEPES：称HEPES 0.952 g用去离子水定容至200 mL；9.0.6mg/mL EDTA：称固态EDTA 0.012 g用去离子水定容至20 mL；10. 2 mol/L 硫酸：称量200 g 98%的H2SO4 ,加去离子水定容至1000 mL；11. 2.25mM Ferrozine：称取Ferrozine 24 mg，用去离子水定容至20 mL；12.0.2M PBS (pH6.6) (磷酸盐缓冲液): 称3.66 g 磷酸氢二钠，0.538 g 磷酸二氢钠和0.9g 氯化钠，用去离子水定容至100mL.13.1% K3[Fe(CN)6]：称取K3[Fe(CN)6] 200 mg，用超去离子水定容至20 mL；14. 6 mmol/L VC: 称取VC 0.0212 g，加入去离子水定容至20 mL;15.5mmol/L 硫酸亚铁：称取FeSO4•7H2O 0.139 g，并用去离子水定容至100 mL；16.0.1mM 过氧化氢:称取0.2mL 50mM 的过氧化氢，并用去离子水定容至100 mL；17.30%乙醇：量取95% C2H5OH 30 mL，用去离子水定容至95 mL；18. 1 mg/mL 氯化铁：称取氯化铁0.02 g，用去离子水定容至20 mL；19. 5 mM邻二氮菲:称取198 mg邻二氮菲，加入C2H5OH 20mL，混匀，取2 mL加水稀释至20 mL。
高效液相色谱法测定桑叶中芦丁含量
高效液相色谱法测定桑叶中芦丁含量
测定样品：桑叶样品
仪器设备：高效液相色谱仪、色谱柱、加样器、移液器、电子天平、pH计等。
试剂：甲醇、磷酸二氢钾、三乙胺、芦丁标准品。
操作步骤：
1、将桑叶样品粉末状，称取0、5g，加入50 ml甲醇中，超声提取15分钟，静置，离心，将上清液过滤。
2、取上清液10 ml，加入8 ml磷酸二氢钾(0、2 mol/L)中，pH 调节至4、5，加入适量三乙胺中和至pH值为7、0左右。
3、将上述溶液过滤，进样至高效液相色谱仪中。
4、据芦丁标准曲线，计算样品中芦丁的含量，并作相应的校正。
结果计算：芦丁含量（mg/g）= （样品进样量x 芦丁标准品浓度）/样品质量
注意事项：
1、样品须充分搅拌均匀，以保证提取效率和准确性。
2、溶液pH值应根据实际情况进行调节，以达到较好的色谱分离效果。
3、标准品浓度适宜，不宜过高或过低，以避免出现测定值偏差。
4、操作过程中应严格遵守实验室安全规定，避免操作失误。
综合实验一 芦丁的提取鉴定和复方芦丁胶囊的制备
综合性实验一芦丁的提取鉴定和复方芦丁胶囊的制备研究材料：槐花米提取成分：芦丁制剂：胶囊本实验提供了参考的提取方法，要求学生自行设计一种不同的提取方法。
一、实验目的⑴比较黄酮类化合物不同提取的方法的产品提取率；⑵掌握黄酮类化合物的一般鉴别原理及方法；⑶掌握硬胶囊剂制备的一般工艺过程，及用胶囊板手工填充胶囊的方法；⑷掌握硬胶囊的质量检查内容及方法。
二、实验原理⑴芦丁提取原理槐花米为一常用中药，可用作止血药，具有清肝泻火、治疗肝热目赤、头痛眩晕的功效。
其主要含有黄酮类成分，其中芦丁的含量高达12％～20％，另含有少量的皂苷。
芦丁（rutin）亦称芸香苷，C27H30O6·3H2O淡黄色针状结晶。
有减少毛细血管通透性的作用，临床上主要是治疗高血压的辅助药物。
其广泛存在于植物中，现已发现含有芦丁的植物有70多种，其中以槐花米和荞麦叶中含量较高，可作为提取芦丁的原料。
本实验参考的提取方法是利用芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，用碱水为溶剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游离的芦丁而析出，利用芦丁对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制，并通过显色反应和纸色谱法进行检识。
并比较两种提取方法的优缺点。
⑵胶囊剂的制备及质量控制基本概念胶囊剂（capsules）系指将药物盛装于硬质空胶囊或具有弹性的软质胶囊中制成的固体制剂。
一般可分为硬胶囊剂、软胶囊剂和肠溶胶囊剂。
本次实验是制备硬胶囊，将一定量的药物加辅料制成均匀的粉末或颗粒，充填于空胶囊中，或将药物粉末（颗粒）直接分装于空胶囊中制成。
空胶囊的规格由大到小分为000、00、0、1、2、3、4、5号共8种，一般常用的是0～5号。
⑶胶囊剂的质量控制①外观胶囊剂应整洁，不得有粘结、变形或破裂现象，并应无异臭。
②装量差异平均装量0.30g以下，装量差异限度为±10％；0.30g或0.30以上，装量差异限度应为±7.5％。
③崩解度与溶出度胶囊剂作为一种固体制剂，通常应作崩解度、溶出度或释放度检查。
提取芦丁实验方案
超声波提取法对苦荞茶中芦丁提取量的实验研究一、实验仪器和材料超声波发生器（型号：生产厂家：）减压蒸馏装置（型号：生产厂家：）紫外分光光度计（型号：生产厂家：）恒温干燥器 100ml烧杯5个 50ml烧杯5个100ml容量瓶6个 25ml容量瓶6个电子天平芦丁标准样苦荞样品500g（生产商：甘洛县彝家山寨农牧科技有限公司芦丁含量1.32% ）无水乙醇2000ml 亚硝酸钠100ml 硝酸铝100ml 氢氧化钠200ml（均为分析纯）蒸馏水二、待测样品的制备将苦荞在4O～45℃恒温干燥箱中干燥 4～5 h，粉碎，过250um筛。
称取1．000 g苦荞，用一定浓度乙醇浸泡3 h，超声波提取一定的时间，减压过滤，收集滤液至100 mL容量瓶并定容至100 mL，作供试液。
三、对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置100ml容量瓶中，用60%乙醇溶解定容至刻度，摇匀，即得。
四、线性关系的考察精密量取对照品溶液0,1.0，2.0,3.0,4.0，5.0，6.0ml，置25ml容量瓶中，加蒸馏水至6ml，加5％亚硝酸钠1ml，摇匀，静置6分钟，加10％硝酸铝1ml，摇匀，静置6分钟，加4％氢氧化钠10ml，加蒸馏水至刻度，静置15分钟，用紫外分光光度计测定吸收度，检测波长510nm。
以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，求回归方程、相关系数r。
五、样品含量测定准确吸取供试品液10．0mL于50 mL容量瓶中，按照芦丁标准曲线计算样品中的芦丁含量。
具体计算方式如下：1．000 g苦荞中芦丁质量(mg)：M=C(mg／mL)25 mLO．5lO0 mL1.000g苦荞中芦丁提取率(％)：W(%)=六、单因素和正交试验利用芦丁标准曲线方程进行定量评价，以原料的芦丁提取率作指标，分别考察乙醇浓度、超声时间、料液比对提取率的影响，并在单因素试验基础上采用正交试验法确定苦荞茶中芦丁的最佳提取工艺。
正交试验设计选择三因素三水平。
芦丁标曲的制作
黄酮类化合物的结构黄酮类化合物以黄酮（2-苯基色原酮）为母核而衍生的一类黄色色素。
其中包括黄酮的同分异构体及其氢化的还原产物，也即以C6-C3-C6为基本碳架的一系列化合物。
二氢黄酮类二氢黄酮醇类黄烷－3，4－二醇类（Flavanones）（Flavanonols）（Flavan-3,4-diols)黄烷三醇类（Flavan-3-ols）芦丁1.3 黄酮类物质的提取1.3.1 溶剂提取法水提法热水仅限于提取甙类,例如自槐花米中提取芦丁。
由于热水浸提时易溶于水的杂质(如蛋白质、鞣质、淀粉、多糖类化合物等)较多,后处理较复杂,提取效率也不高,故不常使用。
有机溶剂提取法黄酮类化合物的提取,主要是根据被提取物的性质及伴随的杂质来选择适合的提取溶剂,甙类和极性较大的甙元,一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水或某些极性较大的混合溶剂进行提取。
大多的甙元宜用极性较小的溶剂,如乙醚、氯仿、乙酸乙酯等来提取,多甲氧基黄酮类甙元,甚至可用苯来提取。
乙醇和甲醇是最常用的黄酮类化合物提取溶剂,高浓度的醇(如90% ～95% )宜于提取甙元,60%左右浓度的乙醇或甲醇水溶液适宜于提取甙类物质。
如采用70%乙醇提取芦笋中芦丁,浸提5h,条件为最优。
提取过程中常用冷浸法或回流法,提取次数一般为2-4次。
两种方法各有优缺点前者无需加热,有利于保持提取物的成分,但提取时间长,效率低，后者效率高,但需加热,因此成分不稳定的原料(如一些中药药材)不宜用此法。
一般来说,醇提法的对总黄酮的提取效果要好于水提法。
碱溶酸沉法由于黄酮类成分大多具有酚轻基,具有易溶于碱性水而难溶于酸性水的性质,可用碱性水(如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)或碱性稀醇(如50%乙醇)浸出,在提取液中,加酸酸化,黄酮类化合物即可沉淀析出。
用碱性溶剂提取时，所用的碱浓度不宜过高,以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物母核,当有邻二酚轻基时,应加硼酸保护。
常用饱和石灰水溶液、稀氢氧化钠溶液或5%碳酸钠水溶液提取。
芦丁测定
2. 1样品制备:自头翁汤加减复方以甘草、自头翁、秦皮、南山碴、粉葛根、车前子、黄连、蕾香、地榆、自芍=1 :3:2:4:3:2:115:3:3:2配制。
弄成碎末，加水两次煎熬后提取，浓缩，添加乙醇致含醇量为65 07o .离心去掉沉淀后蒸I-，添加甲醇溶解，离心，取上清液加甲醇定容到原药材量1:1a2. 2参照品溶液制备:取芦丁参照品12毫克，精密称取，置于SOmI瓶中，加70%乙醇溶解并稀释到刻度，得质量浓度为0. 24mg/ml的芦丁参照品溶液。
2. 3紫外一可见分光光度法扫描与标准曲线制备2. 3. 1可见分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液1. 00m1,2. OOmI,3. 00m1,4. OOmI, 5. OOmI, 6. OOmI分别置25 ml容量瓶中，均加水到6. OOmI，加5%的N aN 02溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加10%的A1(N03) 3溶液1.00 ml，摇匀，放置6分钟，加4%的N a011溶液10. 00 ml.再加水到刻度，摇匀，放置15分钟。
以相应试剂为空自，在400一800 nm 范围内进行光谱扫描，得510 nm处为可见最人吸收峰。
以空自试剂为参照，将6个标准品溶液分别在510 nm下测定吸光度，得回归方程A=0. 00988 C + 0. 00523 . r = 0. 9997 a芦丁浓度在9. 6一57. 6 mg/L范围线性关系佳。
2.3.2紫外分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液0. 10m1,0. 20m1,0.40m1,0. 60m1,0. 80m1,1. OOmI于5 ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，摇匀。
以甲醇作为空自试剂参照，在400 - 800 nm范围内进行光谱扫描，得359nm处为紫外最人吸收峰。
以空自试剂为参照，将6个标准品溶液分别在359 nm下测定吸光度，得回归方程A = 0. 02503 C + 0. 02367 . r = 0. 9995 a芦丁浓度在4. 8 -48mg/L范围线性关系佳。
中药饮片中芦丁的含量检测
中药饮片中芦丁的含量检测作者：贾洪文来源：《中国科技博览》2014年第13期[摘要]目的测定20种中药饮片中芦丁的含量。
方法采用反相高效液相色谱法，以Hypersil GOLD柱（5μm 250mm×4.60mm）为分析柱，乙腈∶水（加磷酸调pH至2.6）（8∶92～30∶70）为流动相，流速：0.8ml/min；检测波长为254nm，柱温30℃。
结果芦丁浓度在（0.0095～0.3800）μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。
结论该方法简易准确，重现性好，在本色谱条件及样品处理方法下，可以准确测出该20种中药饮片中芦丁的含量。
[关键词]中药；芦丁；高效液相色谱法中图分类号：G005 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）13-0355-01芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较多见的一种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。
有关芦丁的HPLC测试方法已有很多报道，笔者采用反相高效液相色谱法在50余种常用中药饮片中分离、检测芦丁成分，经在时间轴上（调节色谱条件以使出峰保留时间在10～35min范围内改变）反复与芦丁对照品比较，最后确认其中的20种中药饮片中含有较高的黄酮类物质芦丁。
文献曾报道该20种药材中的8种含有芦丁，但具体含量不详，笔者查阅国内有关文献，未发现在另12种药材中也含有芦丁的最新报道。
实验结果可供有关科研和临床工作者参考。
1 实验研究1.1 仪器和试药 Waters高效液相色谱仪，包括510泵，484紫外检测器，680梯度控制器。
芦丁对照品（中国药品生物制品检定所），50种药材样品分3次每次50种分别购自浙江中医学院实验药厂、浙江省中医院和浙江中医学院门诊部。
经鉴定并确认。
乙腈为色谱醇，磷酸为分析醇，水为纯净水。
1.2 色谱条件 Hypersil GOLD柱（5μm 250mm×4.6mm）；流动相：乙腈∶水（8∶92～30∶70），加磷酸调pH至2.6；流速：0.8ml/min；检测波长为254nm，柱温为30℃。
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实验三十六 标准曲线法测定芦丁含量
一、目的要求
1．掌握标准曲线制备的方法。
2．掌握标准曲线法测定药物成分的方法。
二、实验原理
显色反应需要具备良好的重现性与灵敏性，因此必须控制反应的条件，主要
是溶剂种类、试剂用量、溶液酸碱度、反应时间和显色时问等。芦丁为黄酮苷，
能与 Al3+生成黄色配合物，在NaNO2的碱性溶液中呈红色，在510nm波长处有
最大吸收。据此显色反应用光度法测定芦丁含量，应注意控制反应时间、显色时
间以及试剂用量等条件。
显色法的定量方法可采用标准曲线法。
三、仪器与试剂
1．仪器紫外-可见分光光度计；量瓶、移液管、吸量管。
2．试剂亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，乙醇(均为分析纯)，5％亚硝酸钠溶液，
10％硝酸铝溶液，1mol／L氢氧化钠溶液，30％乙醇溶液，芦丁对照品，芦丁(原
料药)。
四、实验内容与步骤
1．对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg，
置100mL量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，
摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1mL中
含无水芦丁0．1mg)。
2．标准曲线的制备精密量取对照品溶液(o．1mg／ml)o．0mL、1．0mL、2．0mL、
3．0mL、4．0mL、5．0mL，分别置于10mL量瓶中，各加30％乙醇使成5．0mL，
各精密加入5％亚硝酸钠溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各精密加入10％
硝酸铝溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各加1lmol／L氢氧化钠溶液4．0mL，
用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，放置15分钟，用分光光度计，在510nm波长
处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3．试样测定精密量取芦丁试样溶液(0．1mg／ml)3.0mL，置10mL量瓶中，按标
准曲线制备项下自“各加30％乙醇使成5．0ml。“起依法操作直至测定出样品的
吸光度。
五、注意事项
1．加入各种试剂的顺序应按操作方法进行。
2．本显色反应为配位反应，反应速度较慢，故每加入一种试剂后应充分振摇，
以利反应完全。
六、数据处理
1．根据测得的对照品的数据，绘制A—C标准曲线或计算回归方程。
2．根据测得的试样的数据，从标准曲线上读出或由回归方程计算出试样溶液中
芦丁的重量(rag)，按下式计算：
参考文献：
黄世德，梁生旺主编. 分析化学实验 北京市：中国中医药出版社，2005