北京1 200 例汉族人群中长链脂肪酸氧化酶G1528C 基因突变筛查

［ !］
>;!?@>1?( AB<$"*&C$ ：=/ ;B:6/4; .1; 0544-;4 45.; /7 $!%"&’ ,8.5.-/2 -2 ! 9C8V82-. @;2; /7 <=> -2
率为 ! ‘ "*# ， 是芬兰人群中常见的脂肪酸 " 氧化缺 ［ )］ 陷病。 SV351 等 报道美国人群的 $!%"&’ 基因突 变携带率 为 ! ‘ !%# ^ ! ‘ "## ， 与中链脂肪酸氧化酶 （ ,;3-8, 015-2 50A69’/? 3;1A34/@;25C; ， <’?F） 缺陷 一样， 已成为最常见的脂肪酸氧化缺陷病。 <=>! 亚单位的 $!%"&’ 基因突变被认为是西方人种中最 常见的致病性基因突变， 携带 $!%"&’ 基因突变的
北
京
大
学
学
报 （
医
学
版
）
・ J"・
LUNGP?D UH >RfSP$ NPSgRGbS=O （ ER?D=E b’SRP’Rb） ( g/6+ )J( P/+ !( H;V+ "##%
・论著・
北京 ! "## 例汉族人群中长链脂肪酸氧化酶 $!%"&’ 基因突变筛查
朱锦明! ，杨( 孜!! ，余( 梅" ，王( 荣! ，叶蓉华! ，杨惠霞) ，翟桂荣* ，王( 琪*
［ "］
国人群的脂肪酸氧化代谢障碍至今尚未见报道。因 此， 我们应用聚合酶链反应9限制性片段长度多态性
报道的芬兰人群 $!%"&’ 突变发生
基金项目： 国家自然科学基金 （ )#"*##)& ） ； 首都医学科研发展基金 （ "##"9)#)! ） 资助 b8::/4.;3 VA P5.-/256 P5.84; b0-;20; H/8235.-/2 /7 ’1-9 25 （ )#"*##)& ）523 <;3-0-2; G;C;5401 F;X;6/:-2@ H/8235.-/2 /7 ’5:-.56 （ "##"9)#)! ） C ;9,5-6，c-dA52@e ;,5-6+ 0/, !’/44;C:/23-2@ 58.1/4’
!"#$$%&%’ ()# *+$ ,-./01 23*4*&)% &% 5)%’ "+4&% (4**6 4"&7 )8&74*&)% $%962$ &% :4% %4*&)%45&*6 &% ;$&<&%’ =)=354*&)%
L-29,-2@ MEN! ，M- O?P$!! ， <;- ON" ，G/2@ Q?P$! ，G/2@9185 OR! ，E8-9B-5 O?P$) ，$8-94/2@ ME?S* ，T- Q?P$* （ !+ F;:54.,;2. /7 UVC.;.4-0C 523 $A2;0/6/@A，>;W-2@ N2-X;4C-.A =1-43 E/C:-.56，Y;-Z-2@ !###&) ，’1-25； "+ E5-3-52 <59 .;42-.A 523 ’1-63 E;56.1 E/C:-.56， Y;-Z-2@； )+ F;:54.,;2. /7 UVC.;.4-0C 523 $A2;0/6/@A， >;W-2@ N2-X;4C-.A H-4C. E/C:-.56； *+ Y;-Z-2@ $A2;0/6/@A UVC.;.4-0C E/C:-.56 ）
&9GQ ’ ，DQJDNGE J9?FIQJ 7QTHOQ CLD 7V !"##； &9GQ ( ，DQJDNGE J9?FIQ 9TDQO CLD 7V !"##；&9GQ 0 ，GHO?9I J9?FIQ 7QTHOQ CLD 7V !"# #； &9GQ 2 ，GHO$ ?9I J9?FIQ 9TDQO CLD 7V !"##； &9GQ - ，:QDQOHUVEHDQ J9?FIQ 7QTHOQ CLD 7V !"##；&9GQ 1 ，:QDQOHUVEHDQ J9?FIQ 9TDQO CLD 7V !"# #；&9GQ 5 ， 7I9GP CHGDOHI； &9GQ . ，;<= ?9OPQO/ 图 #" !"# 扩增产物 #%&! 结果 %&’()* #" #QFOQJQGD9DNSQ EQI QIQCDOHF:HOQJNJ OQJLIDJ HT !"# TO9E?QGD 8NEQJDQ8 7V !"# #
&9GQ ’$( ，DQJD J9?FIQJ；&9GQ 0 ，GHO?9I CHGDOHI；&9GQ 2 ，FHJNDNSQ CHGDOHI HT :QDQOHUVEHDQ；&9GQ - ，7I9GP CHGDOHI；&9GQ 1 ，;<= ?9OPQO/ 图 !" 脐血标本 ;<= 经 !"# 扩增后凝胶电泳结果 %&’()* !" #QFOQJQGD9DNSQ EQI QIQCDOHF:HOQJNJ OQJLIDJ HT !"# 9?FINTNC9DNHG
抗凝， 酚 A 氯仿抽提， 异丙醇析出沉淀 ;<=。 !"# 扩增目的基因片段 > !"# 扩增 *+!! 亚单位的第 ’- 外显子基因片段， !"# 引物参考文献 DC9 EED DCC DC$0B， !( ：-B$9ED CDD 9DD 9E9 9EC DDD DC9 999 9CD CDE C$0B； 目的片段长度为 (5) 7F， 引物由上海生 工生物工程技术有限公司合成。 !"# 反应体系为 0) "&， 含 ’)) GE 基 因 组 ;<=， )/ ( ??HI A & 的 8<+!J、 ’ K !"# 缓冲液、 ’/ - ??HI A & *E"I( 、 上下游 引物各 ’ "?HI A & （ 上海生工公司合成） 和 +9E 酶 ’ L （ 上海生 工 公 司 合 成） 。反 应 条 件 为： 32 M 2- J， -- M 3) J， 5( M 1) J， 00 个循环后补加 5( M - ?NG 结束； 同时设立空白对照。通过 () E A & 琼脂糖凝胶 电泳判断扩增结果。 ! / # / $" #%&! 分析 > 将 !"# 扩增产物应用内切酶 !"##进行酶切反应。酶切体系组成： !"# 扩增产物 ’) "&， !"# # )/ - "& （ )/ - L A "& ） ， 终反应体积 () 05 M 消化 ’( :， 再经 () E A & 琼脂糖凝胶电泳判 "&， 断酶切结果； 以西方人种的 ,’-(." 杂合子标本为 阳性对照， 同时设立中国健康成年女性阴性以及空 白对照作为实验技术质控标准。杂合子标本经内切 酶 !"# # 消 化 后， 被 切 割 成 2 个 片 段：(0. 7F、 ’’5 7F、 ’(’ 7F 和 0( 7F。如为纯合子， 则被切割成 0 个 片段：’’5 7F、 ’(’ 7F 和 0( 7F。如为野生型， 则被 切割成 ( 个片段： (0. 7F 和 0( 7F。 ;<= ?9OPQO 由 北京鼎国生物技术有限责任公司提供。 ! / $" 统计学方法 % 数据以均数 4 标准差 （$ 4 "） 表示， 计量资料用 $"
［ * a _］ 孕妇约有 J%] 会发生妊娠期肝损害 。有关中
。长链三羟酰基辅酶 ? 脱氢酶 （ 6/2@ 015-2 )9
1A34/BA50A69’/? 3;1A34/@;25C; ， D’E?F ） 位 于 <=> 的 ! 亚单位。 ! 亚单位的 $!%"&’ 突变是 D’E?F 基因的最常见基因突变， 占突变等位基因的 I%] ^ _%] 。=A2- 等
朱锦明， 等> 北京 ’ ()) 例汉族人群中长链脂肪酸氧化酶 ,’-(."ห้องสมุดไป่ตู้基因突变筛查
・ 50・
（ !"#$#%&!） 方法对北京地区 ’ ()) 例汉族人群中 *+! ! 亚单位基因的 ,’-(." 突变发生率进行了初 步筛查， 现将结果报道如下。 !" ! / !" 资料与方法 资料来源 本课题为多中心前瞻性研究， 收集 ())0 年 1 月 至 ())2 年 2 月在北京大学第三医院妇产科、 北京市 海淀区妇幼保健院、 北京大学第一医院妇产科、 北京 市妇产医院出生的汉族新生儿脐血 ’ ()) 份； 标本 采集获知情同意， 并获北京大学第三医院伦理委员 会批准； 孕妇平均孕周为 （ 03 4 - ） 周， 平均年龄为 （ (5/ 3 4 (/ . ） 岁。孕 妇 均 无 高 血 压、 心 脏 病、 糖尿 病、 肝脏病、 肾脏病及甲状腺功能亢进等病史。杂合 子阳性对照标本来源于美国 6789: 实验室。 ! / #" ! / # / !" ! / # / #" 方法 基因组 ;<= 提取> 取脐带血 0 ?&， @;+=
R!RR ’)/ ) 软件分析。 #" 结果
> > ’ ()) 例脐血标本 ;<= 经 !"# 扩增， 凝胶电泳 均可见到 (5) 7F 的条带 （ 图 ’） 。 !"# 扩增产物经 !"##酶切， 结果显示 (0. 7F 条带； 酶切结果除阳性 对照外没有发现与杂合子标本相同的 ’’5 7F 和 ’(’ 7F 条带 （ 图 (） 。