高效液相色谱-串联质谱法同时测定食用油中的16种抗氧化剂

第２３卷，第２期　２０１４年３月　化学分析计量　

ＣＨＥＭＩＣＡＬ　ＡＮＡ【　ＹＳＩＳ　ＡＮＤ　ＭＥＴＥＲＡＧＥ　Ｖｏ１．２３，Ｎｏ．２　

１１　Ｍ　２０１４　Ｚｊ　

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－－６１４５．２０１４．０２．００７　高效液相色谱一串联质谱法同时测定　食用油中的１６种抗氧化剂音　

朱臻怡。魏云计，冯民，王小晋，熊华萱，何健　（中华人民共和国淮安出入境检验检疫局，江苏淮安２２３００１）　

摘要利用高效液相色谱一串联质谱（ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）同时测定食用油中１６种抗氧化剂。食用油中的抗氧化　剂经正己烷溶解、含上．抗坏血酸棕榈酸盐的乙腈萃取后，经ｃ．　柱分离，乙腈－０．１％甲酸溶液体系为流动相进行梯度　洗脱，多反应监测模式（ＭＲＭ）检测，外标法定量。１６种抗氧化剂呈良好的线性关系（，＝Ｏ．９９１　２－０．９９８　８），方法的测　定低限为０．卜０．５　ｍｇ／ｋｇ，在测定低限浓度水平下的平均回收率为７８．６％～１０１．２％，相对标准偏差为３．５０％　１３．１９％　（ｎ＝１０　ｏ该方法准确、灵敏、重现性好，可用于食用油中１６种抗氧化剂的检测。　关键词　高效液相色谱一串联质谱法（ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）；抗氧化剂；食用油　中图分类号：０６５７．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８－６１４５（２０１４）０２－００２３－０４　

Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　１６　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｉｎ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｏｉｌ　Ｕｓｉｎｇ　Ｈｉｇｈ　Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）ｒ．Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ　Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ　Ｔａｎｄｅｍ　Ｍａｓｓ　Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　Ｚｈｕ　Ｚｈｅｎｙｉ，Ｗｅｉ　Ｙｕｎｊｉ，Ｆｅｎｇ　Ｍｉｎ，Ｗａｎｇ　Ｘｉａｏｊｉｎ，Ｘｉｏｎｇ　Ｈｕａｘｕａｎ，Ｈｅ　Ｊｉａｎ　（Ｈｕａｉａｎ　Ｅｎｔｒｙ－Ｅｘｉｔ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ　Ｂｕｒｅａｕ，Ｈｕａｉａｎ　２２３００１，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　１　６　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｉｎ　ｅｄｉｂｌｅ　Ｏｉｌ　ｕｓｉｎｇ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｔａｎｄｅｍ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｗｅｒｅ　ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ　ｗｉｔｈ　ｈｅｘａｎｅ，ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ａｓｃｏｒｂｙｌ　ｐａｌｐｉｔａｔｅ，ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｏｎ　ａ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ—ｐｈａｓｅ　Ｃ１８　ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈ　ａ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｏｆ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ｗａｔｅｒ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　０．１％ｆｏｒｍｉｃ　ａｃｉｄ　ｂｙ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｂｙ　ＭＳ／ＭＳ　ｕｎｄｅｒ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ（ＭＲＭ）ｍｏｄｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｅｘｔｅｍａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅｔｈｏｄ．　Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ＣＵｌＷｅｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｉｅｓ　ｆｏｒ　１６　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ　ｏｆ　０．９９１　２－Ｊ０．９９８　８．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔｓ　ｏｆ　１６　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　０．１　ｍｇ／ｋｇ　ａｎｄ　０．５　ｍｇ／ｋｇ．Ｓａｍｐｌｅ　ｗｅｒｅ　ｆｏｒｔｉｆｉｄ　ａｔ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆｔｈｅ　ｌｉｍｉｔ　ｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｍｉｘｅｄ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　７８．６％ａｎｄ　１０１．２％．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ　ｏｆｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　３．５０％ａｎｄ　１３．１９％（ｎ＝１０）．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｒｅｌｉａｂｌｅ。ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　１　６　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｉｎ　ｅｄｉｂｌｅ　ｏｉｌ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐ　ｔａｎｄｅｍ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ；ｅｄｉｂｌｅ　ｏｉｌ　

食品抗氧化剂是一类食品添加剂，为防止食用　油脂酸败而产生对人体有害的物质，往往需要在其　中添加抗氧化剂用于预防脂质氧化。一些合成抗氧　化剂不是食品的成分之一，相当多的动物实验证明，　抗氧化剂具有一定的毒性和致癌作用，会影响人体　的健康…，而在食品工业领域存在着不少违规添加、　过量添加的现象。随着食品中化学品残留问题的日　趋严重和食品安全问题的国际化，许多国家对抗氧　化剂的添加量进行严格的限制或明确规定其添加　量，美国、Ｅｔ本、欧盟等国家和地区已禁止使用一些　合成抗氧化剂Ｌ　２　Ｊ￣针对目前这种状况，有必要建立　一种能同时测定多种抗氧化剂的分析方法，以适应　食用油检验的需要。　不少厂家常常在食品生产过程中同时添加几　种抗氧化剂以实现更好的抗氧化效果　Ｊ。目前，抗　氧化剂的检测方法主要有比色法　Ｊ、气相色谱法　、　高效液相色谱法　等。国家标准和行业标准　。卜“Ｊ　也有利用气相色谱法和高效液相色谱法测定食用　油中的抗氧化剂的方法。近年来一些文献报道了　液相色谱一串联质谱（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法¨　在测　定调味料和饲料中多种抗氧化剂方面的应用。上　

江苏出入境检验检疫局科技项目（２０１２ＫＪ３０）　联系人：朱臻怡；Ｅ・ｍａｉｌ：ｚｈｕｚｈｅｎｙｉ１９７６＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ　收稿日期：２Ｏ１４＿ｏ１＿０６　２４　化学分析计量　２０１４年，第２３卷，第２期　述测定方法或抗氧化剂种类涉及较少，不能满足日　益增多的抗氧化剂品种测定的需要；或是方法复杂　耗时，不适用于大批量样品的处理。食用油中１６种　抗氧化剂［丁基羟基茴香醚（ＢＨＡ）、二丁基羟基甲　苯（ＢＨＴ）、特丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）、没食子酸丙酯　（ＰＧ）、没食子酸辛酯（ＯＧ）、没食子酸十二酯（ＤＧ）、　４一己基间苯二酚（ＨＲ）、乙氧基喹啉（ＥＱ）、正二氢愈　创酸（ＮＤＧＡ）、槲皮素（ＱＲ）、２，４，５．三羟基苯丁酮　（ＴＨＢＰ）、２，６一二叔丁基一４．羟甲基苯酚（ＨＭＢＰ）、　芦丁（Ｒｕｔｉｎ）、２，６一二叔丁基．４．甲氧基苯酚（Ｉｏｎｏｘ－　１００）、没食子酸异戊酯（ＩＡＧ）、２，５．二特丁基对苯二　酚（ＢＨＱ）］的同时分离测定尚未见报道。　笔者在前人工作基础上利用高效液相色谱一串　联质谱（ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）技术对食用油中ｌ６种抗　氧化剂同时测定进行研究，优化了样品前处理方法，　建立了简单、快速、准确测定食用油中１６种抗氧化　剂的方法。该方法灵敏度高，检测效率高，检测限低，　线性范围宽，为食用油中抗氧化剂的检测提供了实　用的技术手段，对监测食用油中添加剂的使用情况　具有重要意义。　１实验部分　１．１主要仪器与试剂　高效液相色谱一串联质谱仪：三重四级杆质谱　联用仪，ＴＳＱ　Ｑｕａｎｔｕｍ　Ｕｌｔｒａ　ＥＭＲ型，配有电喷雾离　子源（ＥＳＩ），美国Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ公司；　电子天平：ＰＢ－２０３Ｅ型，瑞士梅特勒一托利多　仪器（上海）有限公司；　恒温氮吹装置：Ｎ－ＥＶＡＰ１４１６５型，美国　Ｏｒｇａｎｏｍａｔｉｏｎ联合公司；　数控超声清洗器：ＫＨ一８００ＫＤＢ型，昆山禾创超　声仪器有限公司；　旋转蒸发仪：Ｂｕｃｈｉ　Ｒｏｔａｖａｐｏｒ　Ｒ－２１５型，瑞士　Ｂｕｃｈｉ公司；　正己烷、甲醇、乙腈、甲酸：色谱纯，德国Ｍｅｒｃｋ　公司；　ＢＨＡ标准品：纯度为１００％，美国ＡｃｃｕＳｔａｎｄａｒｄ　公司；　ＢＨＴ，ＥＱ，ＰＧ，Ｒｕｔｉｎ，ＴＢＨＱ标准品：纯度分　别为９９．５％，９６．５％，９９．０％，９６．６％，９９．８％，德国Ｄｒ．　Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ　ＧｍｂＨ公司；　ＢＨＱ，ＤＧ，ＩＡＧ，ＨＭＢＰ，ＨＲ标准品：纯度分别　为９９．４％，９９．５％，９９．９％，＞９７．０％，＞９８．０％，日本ＴＣＩ　公司；　ＴＨＢＰ标准品：美国ＡＰＯＬＬＯ公司；　ＮＤＧＡ，Ｉｏｎｏｘ－１００，ＯＧ标准品：纯度分别为　９７％，９９．９％，９９．６％，英国ＡｌｆａＡｅｓａｒ公司；　ＱＲ标准品：纯度为９３．４％，美国ＣｈｒｏｍＤｅｘ公　司；　

一抗坏血酸棕榈酸盐（ＡＰ）：纯度为９９．０％，美　国Ｓｉｇｍａ公司；　１．２仪器工作条件　１．２．１色谱条件　色谱柱：Ｔｈｅｏｍｏ　Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　ＧＯＬＤ柱（１００　ｍｍ×　２．１　ｍｍ，５　ｍ）；流动相：乙腈一０．１％甲酸溶液；　梯度洗脱程序：流量为０．２５　ｍＬ／ｍｉｎ，乙腈体积分　数３０％保持２　ｍｉｎ，以１．５％／Ｓ增加到９０％，保持　３．７　ｍｉｎ，再以＿２％／Ｓ降至３０％，保持３　ｍｉｎ；柱温：　３０℃；进样体积：２５　Ｌ。　１．２．２质谱条件　离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ＥＳＩ　）和　电喷雾电离负离子模式（ＥＳＩ－）；质谱扫描方式：多　反应监测（ＭＲＭ）；各氧化剂对应的监测离子及其　碰撞能量见表１。　表１　多反应监测方法测定的质谱条件参数　

注１）：后一组为定量离ｆ对。　１－３样品预处理　含ＡＰ的正己烷饱和的乙腈溶液配制：将正己　烷和乙腈混合，在分液漏斗中充分振摇，使其相互饱　和。静置分层，收集下层溶液，并于每升溶液中溶解　０．１　ｇＡＰ。　１＿３．１提取　准确称取混合均匀的样品２．ｏ０　ｇ（精确到０．０１　ｇ）于２５０　ｍＬ磨Ｅｌ锥形瓶中，加入１０　ｍＬ乙腈饱和　的正己烷稀释样品，再加入１０　ｍＬ饱和氯化钠溶液，　在旋涡混合器上涡旋振荡２　ｍｉｎ以充分溶解。用３０