岛津LC-20AT型高效液相色谱仪的图文操作手册
岛津LC-20AT操作规程
岛津LC-20AT型高效液相色谱系统标准操作规程一、目的规范岛津LC-20AT型高效液相色谱系统的使用和维护。
二、范围本规程适用于岛津LC-20AT型高效液相色谱系统的使用和维护。
三、职责质检室仪器分析员负责岛津LC-20AT型高效液相色谱系统的日常使用和维护。
四、操作规程1、流动相的处理1.1 过滤溶剂溶剂在使用定要用0.45μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片本实验室有水溶性和脂溶性两过滤膜供选择（反光面朝上），缓冲盐先用水膜过滤，和有机相混合后再用有机滤膜过滤，滤前先滤少量纯化水清洗滤器。
1.2 保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
1.3保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合系统外预混合。
1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。
过滤器应先用水超声，再用甲醇超声处理。
这种情况下，流动相需要重新过滤。
1.4.3 流动相和储液器被污染由于污染，噪音越来越大，检测器基线上升。
污染物可能被泵以稳定的浓度打入系统，而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出余的峰。
用梯度洗脱时弱流动相可以使污染物聚在柱顶，流动相强度增加后污染物可能被洗脱出来一大的伪峰。
岛津LC-20AT高效液相色谱仪操作规程
1 目的：为了规范LC-20AT高效液相色谱仪的使用、维护和保养，确保测量结果的准确性，特制定此规程。
2 范围：本规程适用于LC-20AT高效液相色谱仪的使用、维护和保养。
3 责任者：化验员4 程序：4.1 开机4.1.1 接通电源，开启泵、柱温箱、检测器等辅助设备。
4.1.2 开启计算机，双击打开LC solution窗口，单击分析，进入工作站。
4.1.3 计算机与仪器连接后，把配制好的流动相放入贮液瓶中，然后将排液阀旋钮逆时针旋转180°，打开冲洗阀，再按Purge键进行排空，检查吸滤头至入口单向阀流动相管路无气泡，即再按Purge键停止排空此时检查压力显示是否为“0”，若不为“0”，执行以下零压力调整操作：在停泵状态下，按func键多次，直至进入ZERO ADJ项，按Enter键完成初始压力调零，最后顺时针旋紧排空阀。
4.1.4 最大和最小保护压力设定4.1.4.1最大压力限制是流路中的压力所不能超过的值，最大保护压力设置的目的就是保护色谱柱和其他流路部件。
如果压力超过限定值，送液就将自动停止，发出报警声并显示出错信息。
在初始屏幕上按func两次，光标会在MAX字段后闪烁，提示输入新值，然后按Enter键，屏幕上出现新值。
4.1.4.2最小压力限制是防止以下情况发生的压力下降：a) 当流路中发生了漏液；b) 当储液瓶中的流动相流完时，空气将通过流路被抽进来。
如果压力下降至最小压力限制值以下时间超过1分钟，送液也将自动停止，同时发出报警声并显示出错信息。
4.1.5泵启动和停止：按Pump键，泵就开始启动，泵运行指示灯亮。
泵运行后，须注意观察显示面板上工作压力的显示值，确保压力上升并逐渐达到一个稳定值，一般压力波动的上下幅度不应大于0.5MPa。
需要停泵就只要再按Pump键，泵一停，运行指示灯就熄灭。
4.2 方法的建立与调用4.2.1 新建方法点击文件菜单下“新建方法文件”，建立一个空白方法仪器参数视图中的高级选项中设置，数据采集：设置分析时间→LC程序时间：按需要设置时间程序→泵：设置泵的流速，流动相通道、压力上限→检测器：设置氘灯开启、池温度、检测波长→柱温箱：设置柱温。
LC-20AT高效液相色谱仪操作规程
LC-20AT高效液相色谱仪操作规程1.准备工作1.1流动相准备：使用前按待检测样品的检验方法准备所需的流动相（水使用娃哈哈纯净水，其他有机溶剂要求色谱纯，无机盐缓冲液浓度一般低于20mmol/L）用合适的0.45μm滤膜过滤（有机相和水相分别选用各自的专用滤膜，水相使用前必须过滤，有机相用肉眼观察有颗粒时必须过滤）。
1.2样品溶液配置：配置样品和标准溶液，用合适0.45μm的样品过滤器过滤后待用。
1.3检查仪器各种部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
2.开机、参数设定及平衡系统2.1开机：接通电源，依次开启B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。
2.2排气泡或更换流动相的操作方法1）将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2）逆时针转动A/B泵的排液阀180o；3）按A/B泵的【purge】键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；4）将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
5）如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
6）如按以上方法不能排尽气泡，从色谱柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中设流速为5ml/min冲洗3分钟，停泵后重新接上色谱柱并将流速重新设定为规定值。
2.3参数设定依次设定检测波长、流速、柱温、流动相比例。
点击下载。
2.4平衡系统和色谱柱打开泵开关，启动系统，冲洗色谱柱，需冲洗至基线平稳。
3.数据采集3.1进样前基线调零，点击单次采集，键入样品ID，选择数据存储路径及数据文件名，点击确定。
3.2用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。
3.3在进样阀处于“Inject”状态时，插入进样器，迅速旋转至“load”状态，注入样品，旋回“inject”位置，抽出进样针，进样结束，开始采集数据。
3.4再次分析时待色谱柱平衡后重复上述操作。
3.5在不进样时随时插入封口针。
4.分析数据的处理点击数据分析或工作站启动图标的再解析，进入数据分析，在左侧数据栏里找到要分析的数据文件，双击，点击左侧辅助栏中的一步一步进行积分设置，积分完成后保存数据文件。
岛津LC-20A液相色谱仪面板操作
参数设定组
0.000 FILE Enter to Select
func
文件操作组 控制设定组 系统设定组 监视设定组
0.000 CONTROL Enter to Select
func
0.000 SYSTEM Enter to Select
func
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
锁定键盘（[del]+[CE]开锁)
设定屏幕亮度
系统设定组
0.000 Input EXT－S 0－3 外部启动
0.000 SYS Set System Param 0.000 S－PROT 0: Clear 1: Set 0.000 FCV TYPE 0: 10AL 1: 11AL
显示ROM版本号
CE
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
MAINTENANCE
TOTAL OP TIME 208 ( h )
累计运行时间
func
L SEAL DELIVERED 2 / 180 L
左密封圈输液总体积 及更换时输液体积 右密封圈输液总体积 及更换时输液体积 部件更换记录
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
低压梯度设定
1、设定流路切换阀类型 2、设定泵的SYS参数为4 3、在泵上设定总流速 4、等度分析时,按泵上的 conc 键， 设定流动相B、C、D的浓度 梯度分析时，使用泵时间程序（BCON、 CCON、 DCON命令）设定浓 度梯度 5、按泵的 pump 键，开始输液。
LC-20A 岛津高效液相色谱仪 说明书
9
LC-20A 硬件基本操作
一、岛津 LC-20A 系列介绍
1. LC-20A 泵分为三种，分别为 LC-20AD，LC-20AB，LC-20AT。
LC-20AD 并联双柱塞泵，柱塞容量 10ul，最大排液压力 40MPa，
流量范围 0.0001-10.0000ml/min。
LC-20AB 并联双柱塞泵(2 组)，柱塞容量 10ul，最大排液压力 40MPa，
上海分公司
上海市淮海西路 570 号红坊Ｅ座 邮政编码： 200052 传 真： 021-22013600 分析中心： 021-22013645 维修电话： 021-22013601 22013608
成都办事处
成都市西御街 77 号国信大厦 6 层 F 座 邮政编码： 610015 传 真： 028-86198420 维修电话： 028-86198422，86198421
1. LC-20A 泵分为三种，分别为 LC-20AD，LC-20AB，LC-20AT。 ◆ 功能说明
泵的辅助功能及详细操作说明请参阅说明书。
流量值的设定
绿色: 电源打开时 红色: 出现错误时 橙色: 处在休眠时
压力上限
实际压力 泵运行时亮
执行程序时亮 基本功能及 辅助功能键
功能同 FUNC
删除键
压力下限
LC-20A 硬件基本操作
返回键
功能键:查看或修 改辅功功能,滚动
时间编程功能
删除键
在分析序 列表中添 加行
执行数字 上部所显 示的功能
光标键: 在 分析序列 表中移动 光标
减号键
激活时间程 序编辑
初始化屏幕, 清除键
开始进样 停止进样
清洗键(一 次)
岛津LC-20AT液相色谱仪操作规程
岛津LC-20AT液相色谱仪操作规程一、开机前准备1、流动相按照标准要求配制流动相，需使用色谱纯试剂，有机相和纯水不用过滤，可直接超声脱气后使用。
无机盐溶液流动相必须使用溶剂过滤器过滤，根据溶液不同选择不同的滤膜（有机相/水相），过滤后超声脱气使用。
脱气时需盖上瓶盖，但不拧紧。
有机相流动相脱气必须在通风橱或高温室操作。
将配制好的流动相接入液相色谱仪的流路。
一般纯有机相接入A泵，纯水接入D泵，无机盐溶液接入B 泵。
注意观察洗液瓶是否还有洗针水，洗针水为1：1甲醇水。
2、色谱柱按标准要求选择色谱柱，一般为C18柱，苯并芘有专用柱，糖类分析用氨基柱。
色谱柱安装：色谱柱上有箭头，按流路方向安装，根据所要使用的检测器在色谱柱的出口端接上不同接头。
二、开机1、打开Labsolution。
点击自动进样器上Purge键，使自动进样器进入自动清洗状态，25分钟自动停止。
双击选择适用的检测器，SPDA为二极管阵列检测器，RF为荧光检测器，ELSD为蒸发光散射检测器。
标准要求使用紫外检测器或者二极管阵列检测器的均选择二极管阵列检测器，此检测器为最常用检测器，一般项目均使用此检测器。
要求使用示差折光检测器或者蒸发光散射检测器的均选用蒸发光散射检测器，本实验室应用主要为葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、乳糖、三氯蔗糖，使用该检测器需打开气体，气体为氮气或空气，需使用99.999%纯度以上。
荧光检测器本实验室主要用于黄曲霉毒素B族和G族、苯并芘的检测。
2、新建方法文件文件→新建方法文件将等度洗脱修改为低压梯度，最高柱压由10MPa改为20MPa，设置柱流速为1ml/min，根据标准要求选择光源，检测波长小于350nm打开D2灯，350nm以上打开W灯。
设置完成后点击“下载”。
流路排气根据选择的流路进行排气，所需要使用的每个流路均需排气。
以选择A、B流路为例，逆时针旋转打开排气阀，将B、C、D泵流量设为0，点击“下载”，然后在泵上点击Purge键，显示屏上显示“Purge line”，进入A泵排气阶段。
岛津LC-20AT操作规程及其注意事项
岛津LC-20AT操作规程及其注意事项岛津LC-20AT型HPLC操作规程在线操作一、系统组成工作站，D、W检测器，二元泵（A泵、B泵），色谱柱，流动相。
二、准备1、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
2、根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向）和定量环。
3、配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm滤膜过滤。
（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）4、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
三、开机接通电源，依次开启不间断电源、泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。
四、参数设定1、波长设定：点击视图，选择[显示设臵]设臵波长。
2、流速设定：简单设臵下设臵。
五、更换流动相并排气泡1、将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2、逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；3、按泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的高流速冲洗，3min（可设定）后自动停止，一般视管路无气泡即可。
4、将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
5、如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
6、如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。
六、平衡系统1查看基线：1.1打开“在线色谱工作站”软件，1.2输入实验信息并设定各项方法参数后，1.3按下“调零”按钮。
七、进样1、进样前按软件中[零点校正]按钮校正基线零点。
2、单击[单次运行]，填好名称，选择测定方法，保存途径，点击确定，弹出开始对话框。
2、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了，开始对话框自动开始。
3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少进样2次。
八、谱图的判断及结果计算系统适用性实验：三个重要指标①分离度（加强）：一般应≥1.5。
岛津LC-20AT 型高效液相色谱仪操作规程
岛津LC-20AT 型高效液相色谱仪操作规程一．系统配置系统组成：本系统由DGU-20A3 脱气机、2 个LC-20AT溶剂输送泵（分为A，B泵）、7725i手动进样器、色谱柱（2个C18柱，3个手性柱）、SPD-20A 紫外-可见检测器、LCSolution（Version.1.2）中文工作站等组成。
二．准备工作1．流动相准备：使用前按待检测样品的检验方法准备所需的流动相（水使用蒸馏水，其他有机溶剂要求色谱纯，无机盐缓冲液浓度一般低于20mmol/L）用合适的0.45μm滤膜过滤（有机相和水相分别选用各自的专用滤膜，水相使用前必须过滤，有机相用肉眼观察有颗粒时必须过滤）。
2．色谱柱准备：根据待检测样品的需要选用合适色谱柱，柱进出口方向应与流动相流向一致（检查柱上“FLOW”流向）。
3．样品溶液配置：配置样品和标准溶液，用合适0.45μm的样品过滤器过滤后待用。
如检测中发现检测峰拖尾严重，可稀释后使用。
严禁使用未经处理的浑浊溶液进样。
4．检查仪器各种部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
三．开机、参数设定及平衡系统1．开机：接通电源，依次开启B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。
2．排气泡或更换流动相的操作方法1）将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2）逆时针转动A/B泵的排液阀180o；3）按A/B泵的【purge】键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；4）将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
5）如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
6）如按以上方法不能排尽气泡，从色谱柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中设流速为5 ml/min冲洗3分钟，停泵后重新接上色谱柱并将流速重新设定为规定值。
3．参数设定1）波长设定：一般设为254nm。
2）流动相设定：流速开始不宜太高应为正常分析流速的50％～80％冲洗一段时间，等待柱压平稳后可调节到正常流速（调节流速时应该每次增减0.1ml/min，不宜调节过快，柱在线时流速一般不超过1ml/min）。
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岛津LC-20AT型高效液相色谱仪之马矢奏春创作的图文操纵手册备了具有高灵敏度、检测范围更广的蒸发光检测器。
2、用途：本仪器可以高效地分离分析高沸点、热不稳定的有机及生化试样；二极管阵列检测器对大部分有机化合物有响应；荧光检测器可以检测发生荧光的物质，对如多环芳烃、维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；蒸发光散射检测器对碳氢化合物、概况活性剂、聚合物、脂肪酸和氨基酸、油和挥发性低于流动相的任何样品、不含发色团的化合物有响应。
三、操纵步调：1、色谱柱的装置本仪器配备了SPD-M20A二极管阵列检测器、RF-10AXL 荧光检测器和Varian380-LC蒸发光散射检测器。
样品分析前首先要确定用什么检测器，然后把色谱柱连接到所需的检测器上。
2、开机a、首先打开UPS，然后依次打开DGU-20A3真空脱气机、LC-20AT溶液传输单元（泵）、CBM-20A系统控制器、所选用的检测器、自动进样器SIL-20A，CTO-20A柱温箱电源打开。
（HPLC组件的电源开关大都在仪器的右下角）b、将两个泵上部中间的黑色旋钮逆时针旋转90~180度，按purge键进行自动脱气，一般设置为3分钟；然后按自动进样器软键盘的purge键，对自动进样器上的样品进行脱气，一般为25分钟。
c、双击Lc solution图标。
输入用户名Admin，点击OK。
单击系统配置的图标，出现系统配置的对话框。
单击自动配置，仪器自动将能找到的仪器配置，也可以用图示中的蓝色和红色箭头分别添加和去掉配置的仪器。
需要注意的是，仪器优先选择自动进样器，如果需要手动进样，需将自动进样器去掉。
单击仪器（通讯设置），选择正确的仪器类型，然后单击自动获取IP地址。
单击系统控制器，出现系统控制器的对话框，继电器的四个选项需要设置为start。
d、单击仪器开关按钮，将软件与仪器连接e、仪器参数视图里面，简单设置里面，模式选择二元高压梯度，设置总流速，泵B浓度，时间，柱温箱温度，时间程序。
然后选择下载，跑基线。
单击绘图，可以看检查基线。
3、方法编辑a、下图中看到仪器参数视图，选择高级，然后依次改变其中的参数。
如果仪器为PDA检测器时，则按以下进行设置。
数据收集：LC停止时间为0.01。
收集时间打勾，结束时间为分析样品的时间。
LC时间程序：如果等度洗脱，则设置如图中0.01 controller stop。
进行梯度洗脱时需要如图所示进行设置。
单击绘制曲线，可检查梯度曲线。
泵：模式选择二元高压梯度，设置泵B的浓度。
最大压力根据色谱柱的最大压力进行设置。
PDA：一般同时选择D2和W等，然后输入开始和结束时的波长。
柱温箱：设置柱温箱的温度。
控制器：将四个时间全部打勾。
自动进样器：不需要重新设置。
自动排气：不需要重新设置。
方法设置完后，选择文件，另存为方法文件。
当仪器稳定，基线稳定后，可以下载方法，进行样品的分析。
b、如果选择荧光检测器，首先需要色谱柱接荧光检测器，打开荧光检测器的电源，系统配置自动配置荧光检测器。
仪器参数设置部分检测器需要输入激发光和发射光的波长。
其他同PDA检测器。
c、4、如果选择蒸发光检测器，将色谱柱连接蒸发光散射检测器。
打开Varian-380电源开关，打开VarianELSD Control软件方法编辑器单击Method，出来一对话框，Use my own instrument sett，则可以改变参数，设置新的方法。
也可以不打勾，直接选择已经设置好的方法。
仪器开启时即处于STANDBY模式，加热块关闭，雾化气流速设定为较低的1.2SLM。
Standby模式下用户可设定仪器参数（雾化气流速，雾化温度，蒸发温度），然后将模式切换至RUN。
Run模式是正常工作模式，仪器处于完全设定控制状态。
在加热或降冷却程中，仪器会显示“NOT READY”，标明仪器未达设定条件。
当仪器平衡完毕，会显示“READY”。
方法使用打开机器后，选择合适的方法。
将工作模式设定为RUN，使仪器加热平衡。
打开LC solution 软件，自动配置选择AD2，即选择了蒸发光检测器。
其它设置同PDA检测器。
仪器平衡后检察基线。
在洗脱液未接入时噪音应低于0.2mv，这标明雾化气洁净干燥。
基线毛刺一般是由雾化气中的粒子或水分造成的。
引入洗脱液并待其平衡15min。
再次检查基线，应不超出1mv，如是为纯水应不超出0.25mv，纯有机溶剂也应不超出1mv。
缓冲体系和稳定剂可显著增加噪音。
然后进行样品分析。
4、运行a、单次运行单击单次运行，出现对话框，选择已经编辑的方法，输入文件名，输入样品瓶，样品架和样品的体积，单击确定可以进行样品的分析。
点击辅助栏停止或者停止的快捷键，可以将分析停止。
b、批处理运行单击批处理，打开二级菜单，单击向导，可以新建，也可以附加一个批处理文件。
选择方法文件，输入开始样品瓶，样品架，进样体积。
下一步。
输入样品组数，选择尺度品和未知。
下一步。
输入尺度品名字，ID，校准级别，数据文件名。
下一步。
输入未知品名字，ID，数据文件名。
下一步。
下一步，完成。
出现批处理文件。
另存批处理文件。
单击批处理开始，开始分析样品。
5、关机样品分析完毕，依照色谱柱的冲洗要求进行冲洗。
冲洗完后，仪器参数视图，将总流速设为0，下载。
然后单击仪器开关，关闭软件，最后将电源关掉，关闭UPS。
6、积分单击再解析，打开已经完成的数据，会看到数据、方法、陈述格式、批处理、全部文件形式。
点击分析图标，选择多色谱，提取所要波长下的峰。
在积分页面，选择通道，半峰宽，斜率，最小峰面积，一般选择面积选项。
识别页面，利用时间窗或时间带限制峰。
也可以选择积分页面的程序，进行手动积分。
如果不了解方法，可以单击帮忙。
点击确定，分析完成。
结果在视图，峰表内检查。
7、尺度曲线a、外标法定量单击向导，打开化合物表向导窗口，选择通道，半峰宽，斜率，最小峰面积，一般选择面积选项，下一步。
选择要标定的峰，下一步。
选择外标法。
计算面积。
输入校准级别，曲线拟合类型，一般选择线性。
零点，一个校准级别，选择强制通过，其它选择未强制。
加权方法无。
输入浓度，下一步。
识别，选择时间窗或者时间带。
一般来说保存时间小的用时间窗。
下一步。
定义峰的名字和标样的浓度。
完成。
保管方法。
单击校准，双击已经建立的方法。
然后将标样图谱拖动到左下角数据文件的级别中，有几个级别，则相应的拖到相应的级别中。
则自动生成尺度曲线。
另存为方法。
b、内标法定量定量方法为内标法，确定内表物的峰。
8、利用尺度曲线计算样品的浓度打开需要计算的谱图，文件选择需要加载的方法参数，检查峰表可以看结果。
9、陈述编辑单击陈述模板，拖动到陈述模板中即可，然后另存为陈述格式文件。
显示陈述，将数据拖动到陈述模板中即显示陈述。
四、注意事项：1、高压恒流泵的维护：泵的密封圈是最易磨损的部件，密封圈的损坏可引起系统的许多故障，要注意调养和定期更换。
应采纳下列措施以延长使用寿命：绝对不允许在没有流动相的或流动相还没有进入泵头的情况下启动泵而造成柱塞杆的干磨。
每天使用后应将整个系统管路中的缓冲液体冲洗干净，防止盐沉积，整个管路要浸在无缓冲的溶液或有机溶剂中。
长期不必也要定期开泵冲洗整个管路。
要用HPLC级试剂。
输液管前端要用烧结不锈钢沉子过滤流动相。
要注意防止管路阻塞造成压力过高而损坏仪器。
压力下限应设置在0.5~1MPa，以防止储液器中的流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞的干磨。
2、流动相的使用：必须使用HPLC级或相当于该级此外流动相，并µm薄膜过滤。
过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体O2等，如不脱气易发生气泡、基线噪声增加、灵敏度下降，甚至无法分析。
如果管路中使用peek树脂部件，不成使用浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚砜等试剂。
特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲溶液流动相的清洗方法：a、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗20min左右后停泵，主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗。
b、再用95/5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60min后停泵，主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了呵护色谱柱。
c、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2min左右，然后关机。
如果流动相中不含盐，则只使用上述第三步清洗即可。
3、更换流动相：在分析过程中，有时需要更换流动相进行分析。
一定要注意前一种使用的流动相和所更换的流动相是不是能够相溶。
如果前一种使用的流动相和所更换的流动相不克不及够相溶，要采取一种与这二种需更换的流动相都能相溶的流动相进行过滤、清洗。
较为经常使用的过滤流动相为异丙醇，但实际操纵中要看具体情况而定，原则就是采取与这二种需更换的流动相都能相溶的流动相。
一般清洗时间为30~40分钟，直至系统完全稳定。
更换流动相时，要用100ml的烧杯，放入需要更换的流动相，将虑头放入烧杯中，上下反复冲洗，然后将排液阀逆时针180度，purge。
然后将排液阀顺时针180度。
储液器的注意事项：µm过滤器除区去其中的微量物质。
4、色谱柱的使用：a、使用前色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价陈述所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
b、样品样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品方便处理，要使用呵护柱。
在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
c、色谱柱的保管如色谱柱要长时间保管，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
d、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
（1）、反相柱的再生：依次采取20~30倍的色谱柱体积的甲醇/水=10/90 （V/V）、乙腈、异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
（2）、正相柱的再生：依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。
要注意上述溶剂必须严格脱水。
5、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决法子色谱柱在使用中最罕见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。