植物叶绿素类胡萝卜素测定办法
木薯组培苗中叶绿素和类胡萝卜素含量分析
木薯组培苗中叶绿素和类胡萝卜素含量分析木薯是世界上主要的粮食作物之一，被广泛种植和消费。
木薯组培苗是一种种植木薯的重要前期材料，在木薯生长的过程中，叶绿素和类胡萝卜素是主要的叶片色素，对木薯的生长和发育有重要的影响。
对木薯组培苗中叶绿素和类胡萝卜素含量进行分析，有助于了解木薯的生长和发育情况，为木薯的高产高效种植提供科学依据。
一、叶绿素和类胡萝卜素的功能和含量分析方法（一）叶绿素的功能：叶绿素是一种植物叶片中最为常见的绿色色素，是进行光合作用的必需色素，具有吸收光能和光能转化为化学能的功能。
叶绿素的含量足够多，则能够促进植物进行光合作用，从而加速植物的生长和发育。
（二）类胡萝卜素的功能：类胡萝卜素是一种植物中重要的营养成分，是植物的主要抗氧化剂。
类胡萝卜素还能够帮助植物克服干旱胁迫、低温、光照强度大等逆境，对植物的生长有积极促进作用。
类胡萝卜素的含量也是衡量植物生长状况的重要指标。
（三）叶绿素和类胡萝卜素的含量分析方法：叶绿素和类胡萝卜素的含量通常采用乙醇提取-乙醇溶解法与分光光度法进行测定。
乙醇提取-乙醇溶解法是通过将植物组织用乙醇提取，然后利用乙醇溶解叶绿素和类胡萝卜素，最后通过测定溶液的吸光值来得到叶绿素和类胡萝卜素的含量。
而分光光度法则是利用不同波长下植物组织中叶绿素和类胡萝卜素的吸光特性进行测定。
通过这两种方法可以准确快速地测定叶绿素和类胡萝卜素的含量。
二、木薯组培苗中叶绿素和类胡萝卜素含量的分析（一）叶绿素含量分析：对木薯组培苗中叶绿素含量进行测定，首先需将木薯组培苗中的叶片样品取出，使用乙醇提取-乙醇溶解法进行提取，然后通过分光光度法测定其吸光值。
根据吸光值的测定结果，结合标准曲线，可以得到木薯组培苗中叶绿素的含量。
实验结果显示，木薯组培苗中叶绿素的含量随着生长期的延长而逐渐增加，表明木薯组培苗的光合作用能力随着生长期的延长而逐渐增强。
（二）类胡萝卜素含量分析：通过乙醇提取-乙醇溶解法与分光光度法测定木薯组培苗中类胡萝卜素的含量，结果表明木薯组培苗中类胡萝卜素的含量也随着生长期的延长而逐渐增加。
植物叶绿素类胡萝卜素测定方法
叶绿素、类胡萝卜素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量;根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C 和液层厚度L成正比,即A＝αCL式中：α比例常数;当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm 时,α为该物质的吸光系数;各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得;如果溶液中有数种吸光物质,则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和;这就是吸光度的加和性;今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量,只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A,并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度;在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰,所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰;二、材料、仪器设备及试剂一材料：新鲜或烘干的植物叶片;二仪器设备：1分光光度计；2电子顶载天平感量；3研钵；4棕色容量瓶； 5小漏斗；6定量滤纸；7吸水纸； 8擦境纸；9滴管;三试剂：195%乙醇或80%丙酮v丙酮：v乙醇=2：1的95%水溶液；2石英砂；3碳酸钙粉; 暗中2h,,25ml三、实验步骤1取新鲜植物叶片或其它绿色组织或干材料,擦净组织表面污物,剪碎去掉中脉,混匀;2将取好的样品放入25ml容量瓶中,加混合浸提液无水乙醇:丙酮=5:520ml,放在黑暗条件下,浸泡至叶片发白,用浸提试剂定容至25ml,摇匀备用;3把叶绿体色素提取液倒入1cm光径的比色皿内,以浸提试剂为空白测定吸光度;选择波长663 646 和470nm;四、实验结果计算叶绿素a 的浓度 = OD 633 – OD 646叶绿素b 的浓度 = OD 646– OD 663类胡萝卜素浓度=÷229 单位 mg/L Cmg/L 提取液总量ml叶绿体色素含量mg/g= ____________________________ 烟叶重量g1000注意事项：操作避光研磨时间短些。
一种检测农作物叶片中叶绿素a和类胡萝卜素含量的方法[发明专利]
![一种检测农作物叶片中叶绿素a和类胡萝卜素含量的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/9bd7fbf36bd97f192379e9c2.png)
专利名称：一种检测农作物叶片中叶绿素a和类胡萝卜素含量的方法
专利类型：发明专利
发明人：崔海瑞,王伟博,舒庆尧
申请号：CN201110426195.2
申请日：20111219
公开号：CN102519886A
公开日：
20120627
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测农作物叶片中叶绿素a和类胡萝卜素含量的方法，包括：选取一组叶色深浅明显不同的叶片，通过扫描和图像分析处理获得该组叶片样品的图像亮度值，再结合分光光度法准确测定的该组叶片的叶绿素a和类胡萝卜素含量，分别建立叶绿素a与叶片的图像亮度值的函数关系，以及类胡萝卜素与叶片的图像亮度值的函数关系；再通过扫描和图像分析处理获得待测叶片的图像亮度值，并根据所述的函数关系分别计算出待测叶片中叶绿素a和类胡萝卜素含量。
本发明所用设备简单，操作简便、成本低、速度快，无需化学试剂和提取，检测不受时间和外部环境的影响，测定结果稳定，可实现随时随地快速检测农作物叶片中叶绿素a和类胡萝卜素含量。
申请人：浙江大学
地址：310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号
国籍：CN
代理机构：杭州天勤知识产权代理有限公司
代理人：胡红娟
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实验二蔬菜中胡罗卜素的测定(纸层析法)营养与食品卫生
营养与食品卫生学
（三）样品的采集和处理
（1）粮食：样品用水洗三次，置60℃烤箱 中烤干，磨粉，储于塑料瓶内，放一小包 樟脑精，盖紧瓶塞保存，备用。
（2）蔬菜与其他植物性食物：取可食部用 水冲洗三次后，用纱布吸去水滴，切碎， 用匀浆器制成匀浆，贮于塑料瓶内，冰箱 内保存备用。
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点样：准确吸取待检液40μl在滤纸下端基线上A、B两 点之间或C、D两点之间迅速来回进行带状点样一次点 完（见图1）。每个样品点2带作为平行样。
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营养与食品卫生学
展开：
待纸上所点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，用定 书机固定两边，置于预先用石油醚饱和的层析缸中（见图 2），进行上行展开。（注意纸纹方向与展开方向一致； 缸内石油醚深度约1cm即可，样斑不能直接接触石油醚。
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营养与食品卫生学
四、操作步骤
（5）将石油醚提取液通过盛有10g无水硫酸钠固 体的小漏斗，滤入瓷蒸发皿。用少量石油醚分数 次洗净分液漏斗和无水硫酸钠层内的色素，洗涤 液合并瓷蒸发皿中。 （6）将瓷蒸发皿置于低温电热板上蒸发至约1ml 时，取下，待其自然挥干。冷却后置于冰裕上， 立即用石油醚2ml沿蒸发皿壁将色素洗下，混匀立 即点样。 （7）层析
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营养与食品卫生学
五、计算
式中：X2——样品中胡萝卜素的含量，以β －胡萝卜素计，mg/100g； c——在标准曲线上所查得的胡萝卜素 的含量，μg； V1——点样体积，ml； V2——加入瓷蒸发皿内的样品石油醚 提取液浓缩后的定容体积，ml； m——样品质量，g。
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营养与食品卫生学
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植物生理学实验-叶绿体色素的定量测定
植物生理学实验
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2、测定光密度
以96%乙醇为空白，比色测定3份样品的光密度；
波长665nm、649nm和470nm
B126室：分光光度计 型号：22PC
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分光光度计的使用：？
功能键
显示屏
样品室
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波长调节旋钮
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测定溶液加到 比色杯的2/3初
空白对准光路
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植物生理学实验
叶绿体色素在不同溶剂中的吸收光 谱有差异。在使用不同溶剂提取色素时， 计算公式有所不同。
本实验以 96％乙醇为例。
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96％乙醇提取
已知叶绿素a、b的96%乙醇提取液在红光 区的最大吸收峰：a＝665nm；b＝649nm
根据有色物质的加和性，建立方程组： D665=Kaλ665 Ca+ Kbλ665 Cb D649=Kaλ649 Ca+ Kbλ649 Cb
Ka645＝ 16.75 Kb645＝ 45.60
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植物生理学实验
根据加和性原则列出以下关系式： D663 = 82.04Ca+9.27Cb D645 = 16.75Ca+45.60Cb
解方程组得：
Ca (mg/L)= 12.72D663 – 2.59D645 Cb (mg/L)= 22.88D645 – 4.67D663 Ca与Cb相加即得叶绿素总量（CT）： CT (mg/L)= Ca + C整b理课=件20.29D645 + 8.05D663
Enter 输入键，接受当前的状 态或进行测定；
Mode 功能键，按该键显示不 同的功能菜单；
2、测定
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定摘自王尊本主编,综合化学实验(第二版),第226-244页,北京:科学出版社,2007年9月。
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定[1-27]一、叶绿体色素的提取(一) 实验目的1)掌握有机溶剂提取叶绿体色素等天然化合物的原理和实验方法。
2)了解皂化-萃取提取胡萝卜素的原理。
3)了解1,4-二氧六环沉淀法提取叶绿素的原理。
(二) 实验原理植物光合作用是自然界最重要的现象,它是人类所利用能量的主要来源。
在把光能转化为化学能的光合作用过程中,叶绿体色素起着重要的作用。
高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素四种。
它们所呈现的颜色和在叶绿体中含量大约比例见表34.1。
表34.1 高等植物体内叶绿体色素的种类、颜色及含量项目叶绿素类胡萝卜素叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素叶黄素颜色蓝绿色黄绿色橙黄色黄色在叶绿体内各色素含量比例 3 1 2 13 1 叶绿素chlorophylls是叶绿酸的酯,它在植物进行光合作用中吸收可见光,并将光能转变为化学能。
叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂。
在绿色植物中叶绿素主要以叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)两种结构相似的形式存在,其差别仅是叶绿素a中一个甲基被叶绿素b中的甲酰基所取代。
叶绿素的基本结构见图34.1。
在叶绿素分子结构中含有四个吡咯环,它们由四个甲烯基联结成卟啉环,在卟啉环中央有一个镁原子,它以两个共价键和两个配位键与4个吡咯环的氮原子结合成内配盐,形成镁卟啉。
在叶绿素分子中还有两个羧基,其中一个与甲醇酯化成COOCH3,另一个与叶绿醇酯化成COOC20H39长链。
类胡萝卜素carotenoids是一类不饱和的四萜类碳氢化合物(例如胡萝卜素,carotenes,或它们的氧化衍生物(例如叶黄素类,xanthophylls。
植物体叶绿素含量的测定实验报告
实验报告植物体叶绿素含量的测定摘要：本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取菠菜叶片中和番茄叶片中叶绿体色素，叶绿素a ，叶绿素b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm 、649nm 和470nm 。
根据分光光度计测定的吸光度值，从而计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。
实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a ，叶绿素b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm 、649nm 和470nm 。
根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。
实验目的：掌握分光光度计法对叶绿素a 、叶绿素b 、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。
实验材料：生物材料：菠菜叶片0.25g ，自己培养的全素番茄苗叶片0.2g ，缺磷番茄苗叶片0.2g ；试剂：95%乙醇、石英砂、碳酸钙；仪器：分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、玻璃棒、小烧杯、10ml量筒、50ml 容量瓶、剪刀、滤纸、滴管。
实验步骤：1.叶绿体色素的提取取新鲜菠菜叶片0.25g ，擦干，去中脉，剪碎放入研钵，加入少许石英砂和CaCO 3，再加入95%乙醇3ml,研磨成匀浆，再加95%乙醇10ml ，静置10min ，用漏斗滤去残渣，用乙醇反复冲洗研钵、残渣至无色；用容量瓶定容至50ml 。
2.吸光度的测定取光径1cm 比色杯，注入上述叶绿素提取液，以95%乙醇注入另一同样的比色杯内作为空白对照，在波长665、649、和470nm 下测定吸光度。
3.结果计算依据下列计算公式，分别计算出叶绿素a 、B 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
C a （叶绿素a ）=13.95A 665 – 6.8A 649C b （叶绿素b ）=24.96A 649 – 7.32A 665C T （叶绿素）=C a +C b =18.16A 649 + 6.63A 665C x.c （类胡萝卜素）=(1000A 470 – 2.05C a -114.8C b )/248叶绿体色素含量 = ）样品鲜重（稀释倍数）提取液体积（）色素浓度（g /mg ⨯⨯L L实验结果：菠菜叶片提取液吸光值：1、测定叶绿素ab为什么选用红光波长？叶绿素吸收红光和蓝紫光，故有两个吸收峰，光合色素还有类胡萝卜素，只吸收蓝紫光，所以不能选蓝紫光区测定，否则被类胡萝卜素干扰，只能用红光。
高效液相色谱法同时测定叶绿素和类胡萝卜素
高效液相色谱法同时测定叶绿素和类胡萝卜素一、实验目的1、了解高效液相色谱在叶绿体色素全分析的应用。
2、掌握生物样品的高效液相色谱实验技术。
3、初步掌握梯度洗脱实验技术。
二、测定意义植物光合色素的分析方法有许多种,经典的方法有纸层析和薄层层析,薄层层析又根据吸附剂不同而分成几种类型。
吸附剂的类型有:硅胶、硅藻土、糖类、纤维素和聚酰胺等。
层析后的各个色素斑点剪下并用相应的溶剂溶解后测定其吸收光谱,对照文献资料再确定色素的种类。
上述方法较简便,但准确性不高。
近几年随着高效液相色谱技术的发展,有人已将它应用于植物色素的分析中。
从植物提取液分离出来的叶绿素和胡萝卜素已发现有多种异构体，而且常常是同时存在的。
因此对叶绿素和胡萝卜素的深入研究较为困难。
高效液相色谱既能对单一组分进行定量，又能对混合物中的多组分在分离的基础上进行定量。
既能用于主要成分的含量测定，又能用于微量和痕量组分的测定。
高效液相色谱是一种准确度好和精密度高的分析技术。
因此，尽管难以得到所有的植物色素标准品，但高效液相色谱技术仍被认为是研究叶绿素和胡萝卜素的一种最有效手段。
三、基本原理叶绿体色素提取液可以采用正相或反相高效液相色谱法分析，实验表明，反相高效液相色谱法更加方便。
但由于色素提取液各组分的极性差别较大，等度洗脱可能使某些组分的分离不够完全。
因此，对植物色素提取液的全分析应采用梯度洗脱方式以改善分离和缩短分析时间。
本实验采用高效液相色谱法可对绿色植物叶片提取液中的色素进行较全面的分离，并直接测定叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素的含量。
四、仪器与试剂1. 岛津LC-20 高效液相色谱仪，色谱工作站，微量进样器（100 μl），Hypersil BDS C18( 4.0mm×200 mm，5μm)。
2. 叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素纯品为Sigma公司产品，甲醇、二氯甲烷和乙腈为液相色谱淋洗剂，实验用水为二次去离子水（娃哈哈纯净水），经玻璃系统重蒸馏。
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叶绿素、类胡萝卜素含量的测定 ??? 一、原理
??? 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚L 成正比，即A ＝αCL 式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 和类胡萝卜素的含量，只需定该提取液在三个特定波长下的吸光度A ，并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求其浓度。
在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大
收峰。
???? 二、材料、仪器设备及试剂
??? （一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。
??? （二）仪器设备：1）分光光度计；2）电子顶载天平（感量0.01g ）；3）研钵；4）棕色容量瓶；? 5）漏斗；6）定量滤纸；7）吸水纸； 8）擦境纸；9）滴管。
??? （三）试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）（v 丙酮：v 乙醇=2：1的95%水溶液）；2）石英砂；3）碳酸粉。
暗中2h ，0.5g ，25ml
??? 三、实验步骤
??1）取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。
??2)将取好的样品放入25ml 容量瓶中，加混合浸提液（无水乙醇:丙酮=5:5）20ml ，放在黑暗条件下，浸泡叶片发白，用浸提试剂定容至25ml ，摇匀备用。
3）把叶绿体色素提取液倒入1cm 光径的比色皿内，以浸提试剂为空白测定吸光度。
选择波长663 646 和470nm 。
??? 四、实验结果计算
叶绿素a 的浓度 = 12.21 ? OD 633 – 2.81 ? OD 646
叶绿素b 的浓度 = 20.13 ? OD 646– 5.03? OD 663
类胡萝卜素浓度=（1000A 470-3.27C a -104C b ）÷229 单位 mg/L
C(mg/L)*提取液总量（ml）
叶绿体色素含量（mg/g）= ____________________________
烟叶重量（g）*1000
注意事项：操作避光研磨时间短些。