巴氏毕赤酵母表达系统的研究进展
毕赤酵母N_糖基化改造的研究进展
毕赤酵母N 糖基化改造的研究进展张 倩,宋海峰(军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室,北京100850)[摘要] 毕赤酵母表达系统具有诸多优点,广泛用于生产重组蛋白。
由于其糖基化途径与人不同,表达的糖蛋白为高甘露糖型,改变了糖蛋白的结构,影响其特性和功能,且具有免疫原性,限制了以毕赤酵母为表达系统大量生产重组蛋白的应用。
在过去的20多年里,很多研究集中在毕赤酵母N 糖基化人源化改造研究上,希望产生类人的糖链结构,但进展缓慢。
近期,毕赤酵母N 糖基化改造研究已经取得了重大进展,产生了类人的末端为唾液酸的糖链结构,为应用毕赤酵母表达系统大量生产重组蛋白铺平了道路。
现对毕赤酵母N 糖基化的研究进展进行简述。
[关键词] 毕赤酵母;N 糖基化;糖蛋白[中图分类号]Q513.2;R915.2 [文献标识码]A [文章编号]1003-3734(2008)14-1206-03 Advances i n the asparagi nes li nked glycosyl ati on i n Pichi a pastorisZ HANG Q ian,SONG H a i feng(Depart m ent of Phar m aco logy and Toxico logy,Institute of Rad i a tion M ed icine,A cade my of M ilitar y M e d ical Sciences,B eijing100850,Ch i n a)[Abstract] W ith m any advantages,P ichia pastoris is w i d ely used to pr oduce reco m binan t pro teins.Due to t h e differences i n N g l y cosylati o n pathw ay bet w een P ichia pastoris and hum an,the struct u re o f h i g h m annose g lycan of P ichia pastoris w as changed,the characterization and functi o n o f t h e glycopro teins,or even i m munogen ic w ere af fected.The applicati o n of P ichia pastoris to produce g l y coprote i n s w as li m ited.I n the past t w o decades,m any re searches focused on the m od ificati o n of N glycosylati o n to obtai n hum an li k e glycopro teins,yet got li m ited success. Rencently,great advance m ents have been m ade to produce hum anized sia l y lated gycopro teins,w hich paved t h e w ay to use P ichia pastoris as host to produce reco m b i n ant pro teins.Th is rev i e w summ arizes the re levant researches.[Key w ords] P ichia pastoris;N g l y cosy lati o n;glycopr o te i n毕赤酵母(P ichia pastoris)表达系统是20世纪80年代初期发展起来的一种新型的外源蛋白表达系统,它既具有原核表达系统操作简易、易于培养、生长速度快、表达量高、成本低等优点,还具有真核生物表达系统的对外源蛋白的翻译后修饰等特点,如糖基化、蛋白磷酸化等。
巴斯德毕赤酵母表达系统研究系统进展
➢翻译后修饰
毕赤酵母糖蛋白因与哺乳动物糖蛋白糖链结构的差 异而具有潜在的抗原性，使其在医药工业上的应用受到 一定的制约。它们在哺乳动物体内可被免疫系统清除而 失去效能，而且有引起超敏反应的危险性。
解决糖基化策略：
①尝试胞内表达，避免目的蛋白的糖基化；
②对非活性中心的糖基化位点进行突变改造，清除糖基 化；
稀有密码子制约翻译速率
此时需要进行全基因的合成，使编码序列 符合毕赤酵母密码子的偏爱性和具有更高的
➢基因剂量
相对剂量效应
一般情况下，随着整合拷贝数的增加，表达量也会增加， 例如，1-8整合拷贝数范围内，HBsAg表达量成比例升高。 但也有例外，如小牛溶菌酶的表达随着拷贝数从1-3的上 升反而减少，这可能与mRNA翻译、蛋白折叠效率有关。
重组子在酵母细胞中的命运
导入毕赤酵母的重组质粒能通过同源重组整合到 染色体上，不同的整合方式可产生不同表型的转化子：
（1）同源双交换：表达载体线性化后，两端分别为5’AOX1和 3’AOX1序列，与基因组的同源序列发生双交换后，导致毕赤 酵母基因组内AOX1编码区被表达单元所替换，胞内醇氧化酶 只能来自AOX2基因，酶活性大大降低。因此转化子表现为甲 醇利用缓慢，表型为Muts。
若整合发生在his4位点处，可能出现表达单 元丢失现象，这可能是由于基因组中突变的his4与表 达单元中的his4基因之间发生了基因转换（gene conversion）所致，所以一般选择AOX1位点整合。
his4
用于转化子筛选的基因标记
用于毕赤酵母转化子筛选的基因标记主要有营养 缺陷型互补基因和显性基因：
二、巴斯德毕赤酵母简介
Pichia pastoris
巴斯德毕赤酵母是一种甲基营养菌，能 够在低 廉的甲醇培养基中生长，甲醇能高效 诱导甲醇代谢途径中各酶编码基因的表达， 因此生长迅速、乙醇氧化酶基因AOX1所属 强启动子、表达的可诱导性是巴斯德毕赤酵 母表达系统的三大优势。由于巴斯德毕赤酵 母没有合适的自主复制型载体，所以外源基 因的表达序列一般整合入受体的染色体DNA 上，因此能够稳定遗传。目前已有500多种 外源蛋白在巴斯德毕赤酵母系统中获得成功 表达。
巴斯德毕赤酵母表达系统
业 放 大 生 产 ；４ 表 达 量 高 。酿 酒 酵母 中表 皮 生 长 因子 （）
— —
破 伤 风 毒 素 Ｃ片 段 表 达 量 达 １ｇ Ｌ ， ｅａｂａｉｅｓ ２／ Ｊ Ｈ ｒ ｒｓｉ ｉ ｌｎ ｓ 羟 腈 裂 合 酶 的 表 达 水 平 高 达 ２ ｇ Ｌ ；５ 在 巴斯 德 毕 ２／ ［ （ ）
赤酵母 中表 达的蛋 白既 可存 在 于胞 内 ， 又可 分泌到胞
系统 复 杂 ； 斯 德 毕 赤 酵 母 中 表 达 产 物 可 分 泌 至 胞 外 ， 而 获 得 较 高 表 达 量 和 利 于 表 达 产 物 的分 离 纯 化 。 巴 从 关键 词 ： 巴斯 德 毕赤 酵母 ； 外 源蛋 白 ； 表 达 中图分 类号 ： Ｑ １ 文献 标识 码 ： Ａ ８６
如 ， 原 核 表 达 系 统 表 达 人 组 织 型 基 质 金 属 蛋 白 酶 抑 用 制 剂 （ Ｉ ） 虽 然 获 得 了 大 量 重 组 蛋 白 ， 是 由 于 重 Ｔ ＭＰ ， 但 组 蛋 白形 成 包 含 体 ， 以使 ＴＭＰ分 子 内 的 ６对 二 硫 键 难 Ｉ 正 确 折 叠 配 对 ， 终 未 能 得 到 有 活 性 的 全 长 分 子 。 李 始 克 勤 等 用 巴斯 德 毕 赤酵 母 表 达 系 统 获 得 了 分泌 型 前 正 确 折 叠 的 ＴＭＰ １重 组 蛋 白 的表 达 量 达 ４ ｍ ／ ￣ ； ３ Ｉ ．， ０ ｇ Ｌ２ （ ）
高 等 真 核 细 胞 相 比 ， 斯 德 毕 赤 酵 母 易 于进 行 操 作 和 巴 培养 。 巴斯 德 毕 赤 酵 母 对 需 氧 生 长 有 强 的偏 好 ， 一 这 生 理 学 特 性 使 得 它 既 能 高 密 度 发 酵 生 长 ， 有 利 于 工 亦
一种强化乳铁蛋白表达的毕赤酵母及其构建方法与应用
一、概述乳铁蛋白是一种存在于哺乳动物乳汁中的重要蛋白质，具有丰富的营养价值和生物活性。
其在免疫调节、抗氧化、抗菌、抗病毒等方面具有重要作用，因此受到了广泛的关注。
而毕赤酵母是一种常见的真菌微生物，可以被用于多种重要蛋白的表达和生产。
构建一种强化乳铁蛋白表达的毕赤酵母具有重要的研究意义和应用价值。
二、毕赤酵母的特点1. 毕赤酵母的生物学特性毕赤酵母（Pichia pastoris）是一种酵母，通过改良的形态和工程学技术，可以高效表达和分泌异源蛋白，其优点包括a. 生长速度快b. 表达异源蛋白能力强c. 分泌蛋白质的能力优秀2. 毕赤酵母在蛋白表达中的应用毕赤酵母在蛋白表达中应用广泛，主要包括医药、工业、生物学等领域。
通过毕赤酵母表达系统，可以实现对多种重要蛋白的高效表达和大规模生产。
三、强化乳铁蛋白表达的毕赤酵母构建方法1. 选择适合的毕赤酵母表达载体通过对不同毕赤酵母表达载体的筛选和比较，选取适合乳铁蛋白表达的载体。
2. 乳铁蛋白基因的克隆和插入通过PCR扩增、酶切、连接等分子生物学技术，得到乳铁蛋白基因的重组表达载体。
3. 转化和筛选将表达载体转化至毕赤酵母菌株中，进行筛选得到高效表达乳铁蛋白的毕赤酵母菌株。
4. 条件优化与表达通过调节培养基、温度、pH值等条件，优化乳铁蛋白的表达条件，提高其表达量和纯度。
四、强化乳铁蛋白表达的毕赤酵母的研究进展1. 表达量和纯度的提高通过使用不同的表达载体、优化表达条件等手段，可以显著提高乳铁蛋白的表达量和纯度，满足不同应用的需求。
2. 抗性因子的引入引入抗性因子可以提高毕赤酵母对特定抗生素的抗性，从而提高其在生产中的稳定性和可操作性。
3. 结构与功能分析通过结构生物学等技术手段对乳铁蛋白在毕赤酵母中的结构和功能进行深入研究，为其应用提供理论基础。
五、强化乳铁蛋白表达的毕赤酵母在食品、医药等领域的应用1. 食品领域强化乳铁蛋白表达的毕赤酵母可以用于生产高营养价值的乳制品，如乳粉、奶酪等，提高其抗菌、抗氧化等功能。
巴斯德毕赤酵母新型分泌表达载体构建
α文章编号:10083464(2003)01003704巴斯德毕赤酵母新型分泌表达载体构建韦宇拓,甘凤琼,苏华波,赵颖怡,汪嵘,黄日波(广西大学生物技术实验中心,广西南宁530005)摘要:巴斯德毕赤酵母分泌表达载体pP I C I NU 是利用来源于克鲁维酵母(K luy vero m y ces m arx ianus )的菊粉酶基因信号肽DNA 序列(ISP )构建的。
表达实验结果表明,带有分泌表达载体pP I C I NU 的Β-1,3-1,4葡聚糖酶基因重组菌,具有与带有表达载体pP I C 9K (带有Α因子信号肽)的Β-1,3-1,4葡聚糖酶基因重组菌相同的分泌效率。
关键词:巴斯德毕赤酵母;克鲁维酵母菊粉酶基因信号肽;分泌表达;Α因子信号肽中图分类号:Q 782 文献标识码:ACon struction of a novel secreti ng expression vectors for P ich ia p astorisW E I Yu tuo ,GAN Feng qi ong ,SU H ua bo ,ZHAO Y ing yi ,W AN G Rong ,HUAN G R i bo(B i o techno logy R esearch Cen ter ,Guangx i U n iversity ,N ann ing 530005,Ch ina )Abstract :T he secreting exp ressi on vecto r ,pP I C I NU con tain ing inu linase signal pep tide (ISP )from K luy vero m y ces s m a rx ianu ,of P ich ia p astoris w as con structed .T he exp ressi on resu lts show ed that the secreti on efficiency of the beta1,31,4glucanase of recom b inan t P .p astoris con tain ing p P I C I NU w as as h igh as that of recom b inan t P .p astoris harbo ring pP I C I 9K carrying Αfacto r p rep ro p ep tide .Key wards :P ich ia p astori ;signal pep tides of K luy vero m y ces s m a rx ianu inu linase ;secreting ex 2p ressi on ;Α-facto r p rep ro pep tide Bong 等研究中发现在克鲁维酵母(K luy vero m y ces m a rx ianus )中,大部分菊粉酶能被分泌到胞外,将其先导肽用在酿酒酵母中能促进多种外源蛋白分泌到胞外,分泌效率高于常用的Α因子信号肽[1]。
毕赤酵母表达系统使用心得
毕⾚酵母表达系统使⽤⼼得Pichia酵母表达系统使⽤⼼得甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为⼈熟知，并⼴泛应⽤于外源蛋⽩的表达。
虽然说酵母表达操作简单表达量⾼，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到⾼表达的。
不少⼈在操作中会遇到这样那样的问题，收集了部分⽤户在使⽤EasySelect Pichia Expression System这个被誉为最简单的毕⾚酵母表达的经典试剂盒过程中的⼼得体会。
其中Xiang Yang是来⾃美国乔治城⼤学（Georgetown University）Lombardi癌症中⼼（Lombardi Cancer Center），部分⽤户来⾃国内。
+ 表⽰优胜于；- 表⽰不如；= 表⽰差不多EasySelect Pichia Expression System产品性能：优点——使⽤简单，表达量⾼，His-tag便于纯化缺点——酵母表达蛋⽩有时会出现蛋⽩切割问题全⾯产品报告及⼼得体会：巴斯德毕⾚酵母（Pichia pastoris ）是⼀种能⾼效表达重组蛋⽩的酵母品种，⼀⽅⾯由于其是属于真核⽣物，因此表达出来的蛋⽩可以进⾏糖基化修饰，另⼀⽅⾯毕⾚酵母⽣长速度快，可以将表达的蛋⽩分泌到培养基中，⽅便蛋⽩纯化。
毕⾚酵母表达载体pPICZ 在多克隆位点（MCR ）3'端带有his-tag 和c-myc epitopes ，这些tag 有利于常规检测和纯化，⽽且在MCR5'端引⼊了alpha factor （α-factor ）⽤以增加表达，并且在表达后α-factor 可以⾃动被切除。
在进⾏克隆的时候，如果你选择的是EcoRI ，那么只需在⽬标蛋⽩中增加两个氨基酸序列即可完成。
另外pPICZ 系列选⽤的是Zeocin 抗⽣素作为筛选标记，⽽诱导表达的载体需要甲醇——甲醇⽐⼀般⽤于⼤肠杆菌表达诱导使⽤的IPTG 便宜。
毕赤酵母蛋白表达系统研究进展
P． pastoris 是甲醇营养型酵母中的一种，可以在 含有甲醇的培养基上快速生长。与其他蛋白表达系
收稿日期： 2010-11-02 基金项目： 福建省科技厅资助项目（ 2009N0032） ，福建省教育厅资助项目（ JA08041） 作者简介： 杨梅，女，博士，教授，研究方向： 生物化学与分子生物学； E-mail： myang@ fjnu． edu． cn
3 外源蛋白的表达及其影响因素
目前，毕赤酵母蛋白表达系统在国内外应用都 很广泛，已成功表达许多外源蛋白。但由于毕赤酵 母本身仅分泌少量蛋白，因此外源蛋白占培养基中 总蛋白的绝大多数。有些外源蛋白的表达量可达到 g / L 以上水平，如 Hao 等［27］成功表达的重组人复合 α-干扰 素 （ cIFN） 的 表 达 量 达 到 1． 24 g / L； Huang 等［28］表达的截短的 1，3-1，4-β-D-葡聚糖酶的表达 量为 3 g /L。虽然许多外源蛋白都可以在毕赤酵母 中高效表达，但仍然有些蛋白表达量相对较低或不 表达，在同一表达系统中表达不同的外源蛋白，其表 达量千差 万 别，外 源 蛋 白 的 表 达 受 多 方 面 因 素 的 影响。 3． 1 外源基因自身的内在特性
母属（ Candida） 和汉逊酵母属（ Hansenula） 等。毕赤 酵母（ P． pastoris） 作为甲醇酵母的一种，是单细胞低 等真核生物，已发展成为广泛应用的表达宿主。与 其他表达系统相比，毕赤酵母具有不可比拟的优势， 其既有原核生物繁殖快、易于培养、培养基廉价和试 验过程简单可行等特点，又具有强有力的启动子，还 可以对外源蛋白进行加工折叠和翻译后修饰，具备 了典型的真核生物表达体系的特点。毕赤酵母表达 系统已发展成为一个较为理想的蛋白表达系统，被 国内外广泛应用于生产外源蛋白。目前，已有 500 多种外源蛋白在该表达系统中获得表达［4］。
蛇毒素蛋白毕赤酵母表达进展
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中国生物工程杂志 China B io techno logy
Vo.l 30 N o. 10 2010
1 丝氨酸蛋白酶的酵母表达
蛇毒丝氨酸 蛋白酶 ( sn ake venom serine p roteases, SV SP) 在蝰科蛇毒中含量较高, 此类蛋白酶的活性中心 有 H is( A rg) A sp S er三联体 结构, 其 活性可 被丝 氨酸 修饰剂苯 甲基磺酰氟 ( PM SF ) 或二异丙基磷 酸 ( DFP )
类凝血酶
B atroxobin
H arob in A nc rod C a lobin G loshedobin
独特活性 SVSP
型
蛇毒金属蛋白酶
( SVM P)
型
L 氨基酸氧化酶
P roteinC activa tor
A lbo fibrase A lfim eprase F ibrinogenase IV E chistatin Rhodostom in
H a lydin J erdon itin A lbola tin Saxat ilin heterodim e r)
神经毒素 ( NT ) 血管收缩素
p resyn ap tic NT
PLA 2 B ung arotox in
p os ts ynap tic NT
迄今为止, 超过 30 种的蛇毒 类凝血 酶已被发 现, 由于在血栓治疗方面的重要用途, 因而这类 SV SP 是蛇 毒蛋白酵母表达研究最多的。 Yang等 [ 6 7] 用 pP IC9K 载 体在毕赤 酵母 GS115 中分 别表 达了 长白 山白 眉蝮 蛇 ( G loyd ius ussuriensis)类凝血酶 gu ssurobin 基因和蛇岛蝮 ( G loyd ius shedaoensis)的 g loshedobin 基因, 重组 类凝 血 酶蛋白 Gu ssu rob in含有 260个氨基酸和 12个半胱氨酸 残基, 产量 为 3. 5 m g /L, 分 子量 为 28kD a( 理 论 值 为
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源的培养基 中生长 ， 因为其细胞 中含有 甲醇代谢途 径的必需 酶， 如醇氧化酶（ Ｏ ） 二羟丙酮合成酶 和过氧化氢酶 等 ， ＡＸ、 其
中 Ａ Ｘ是甲醇酵母代谢途径 中的第 １ Ｏ 个酶 ， 它催化 甲醇被氧
化 为 甲醛 和过 氧 化 氢 ， 氧 化 氢 进 一 步 由过 氧 化 氢 酶 分 解 成 过
萄糖作碳 源时 ， 菌体中只有 １ 个或几个很小 的过氧化物酶体 ；
而在以 甲醇作碳源 时， 过氧化物酶体几 乎 占到整 个细胞体积 的 ８％ ， ０ 因此 ， 当在 Ａ Ｘ基 因前利用 同源重组方式插入外源 Ｏ 蛋 白基因 时， 获得 大量表 达 。在 构建 表达 菌 株时 ， Ｏ 可 ＡＸ 的 １个或 ２个基 因的缺失就会导致菌株对 甲醇利用能力 的改 变， 根据菌株 的基因型可将 毕赤 酵母 分成 ３种表型 ： １ 甲醇 （） 快利用型菌株（ ｔ ， Ｍｕ ） 它含 有 Ａ Ｘ Ｊ基因 ， Ｏ 能够快速利用 甲
的 表达 。
１ 巴氏 毕 赤酵 母 的特 性
巴氏毕赤酵母是一种 甲基 营养型酵母。 甲基营养型酵母 是指一类可 以在 以甲醇为唯一碳源和能源的培养基上生长 的 酵母 菌 ， 主要 包 括 ： 逊 酵 母 属 （ ａ ｓ ｕ ） 念 珠 酵 母 属 汉 Ｈ ｎｅ ｌ 、 ｎａ （ １、 ） 球拟 酵母 属 （ ｏｕｏｓ ） 克 勒克 酵母 属 （ ｌ ｃ— Ｔｒｌ ｉ 、 ｐｓ Ｋｏ ｋ ｅ
１ 一醇氧酶 ；２ —过氧化氢酶 ；３ 甲醛脱氢酶 ； 一 甲 一 ４ 酸脱氢酶 ；５ 一二羟丙酮合成酶 ；６ 一二羟丙 酮激酶 ； ７ １一 — ， 二磷酸果糖醛缩酶 ；８ 果糖 ． ６二磷酸化 酶 ； ６ 一 １． ， ９ 甲醛还原酶 一
图１ 巴氏毕赤酵母中甲醇的代谢途径
ｅａ 以及毕赤酵 母属 （ ｉ ｉ） ｒ） Ｐｃ ａ 等。现研究 证 实， 作为 表达 ｈ 可
环 ， Ｇ Ｐ有 １３进入主代谢途径 ， 而 Ａ ／ 用于合成其他物质。 从图 １中可 以看出 ， 甲醇代谢途 径中 ， 及到多 种酶 ， 在 涉
这些酶都 是由染色体上 的有关基 因编码表达的 。巴氏毕赤酵 母染色体内含有 甲醇代谢必需 的关键 调控酶——醇 氧酶 （１ ａ 一 ｃｈｌ ｘ ａｅ Ａ Ｘ） 因 ， 可 以产 生 ２种 酶——Ａ ｘ １和 ｏｏ ｏｉ ｓ ，Ｏ 基 ｄ 它 Ｏ Ａ Ｘ２ Ｏ 。当葡萄糖 、 甘油或 乙醇等作为碳源时 ， Ｏ Ａ Ｘ几乎不表 达， 进一步研究表明 Ａ Ｘ 的表达受转 录水 平调控 ， Ｏ 强诱导 型 启动子 Ｐｏ ａｘ能有效控制 Ａ Ｘ表 达 。最近有 研究报 道 ， Ｏ Ｊ 将 顺式元件与原始启动子连接 成新型 的人 工启动子 ， 以提 高 可 外源蛋白的产量和活性 。此外 ， 甲醇代谢所需 的醇氧化酶 被分选到过氧化物酶 （ ｅｏｉ ｍ ） 中 ， ｐｒｘ ｏ ｅ 体 ｓ 形成 区域化 ： 以葡 在
中图分类号 ： ７６ Ｑ ８ 文献标志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０２—１０ 【０ ２ ０ ０ ３ ０ １０ ３ ２ ２ １ ）３— ０ ５— ４
随着分子生物学理论 研究 的不 断深入 ， 子生物学 技术 分 得 到了快速 发展 ， 与此 同时 ， 构建 的不 同表达 系统 也层 出不 穷 。巴氏毕赤酵母（ ｉ ｉ ｐｓ ｒ ） １６ 由 Ｏ ａａ Ｐｃ ａ ａｔ ｉ 是 ９ ９年 ｈ ｏｓ ｇｔ 等首次 发现 的， 于 ２ 并 ０世纪 ８ Ｏ年代迅速 发展为一个新 兴 的表 达系 统 …。巴氏毕赤酵母 表 达系统 具有优 势 的生物学 和遗传 学 特性 ， 和大肠埃 希菌 （ ｈｒ ｈ ｏｉ 、 Ｅ ｓ ｅｃｉ ｃｌ 酿酒 酵母 （ ａｃａｏ ｃ ｉ ａ ） Ｓ ｃｈｒ— ｍ ｃｓ ｅ ｖ ｉ ） ｙｅ ｃｒ ｉａ 等传统表达 系统 一样 ， ｅｓ ｅ 被广 泛用 于外源 基 因
江苏农业科学
பைடு நூலகம்
２１ ０ ２年第 ４ ｏ卷第 ３ 期
一 ３ ５一
姚 晶， 吴正钧 ， 任 婧．巴氏毕赤酵母表达 系统 的研究进展［ ］ Ｊ ．江苏农业科学，０ ２，ｏ ３ ３ ２ １ ４ （ ）：５—３ ８
巴氏毕赤酵母表达系统 的研究进展
姚 晶 一 ． ，吴正钧 任 ， 婧
（． １乳业生物技术 国家重点实验室／ 明乳业股份有限公司技术中心 ， 光 上海 ２ ０ ３ ； ． ０ ４ ６ ２ 上海海洋 大学食 品学院 ， 上海 ２ １０ ） ０ ３ ６
外源蛋 白的宿主菌的主要 是 巴氏毕 赤酵母 （ ａｔ ｉ） Ｐ ｐｚｏｓ 和多 ｒ 形汉逊酵母 （ ｐ ｌ ｏ ｈ ） 。甲基 营养 型酵母 的 甲醇代 且 ｏ ｍ ｒ ａ ｙ ｐ 谢 途径 与甲醇氧化机制非常相似 ， １为 甲醇在 巴氏毕赤酵 图 母 中的代谢过程 Ｊ 甲醇 酵母 可 以在 以甲醇为 唯一 碳源和能 ，
摘要 ： 巴氏毕赤 酵母 表达系统具有 优 良的特性 ， 目前广泛应用 的微生物表达系统之一 ， 是 它在理论研究 和实践应
用上尤其是在大规模发酵中具有重要的意义。本研究综述了巴氏毕赤酵母的生物学和遗传学特性， 详细阐述了巴氏
毕赤 酵母 表达 系统 的组成 以及影 响外源基 因表达 的因素 ， 并提出了一些提高表达量的方法。 关键 词 巴氏毕赤酵母 ； 表达 系统 ； 表达 ； 响因素 影
水和氧。甲醛在胞浆 内被 甲醛脱氢 酶 （ ＭＤ） 甲酸脱 氢酶 Ｆ 和 （ ＭＤ 氧化成 Ｃ ：或者在 ５一 酸木酮糖 （ ｕ Ｐ 、 Ｆ Ｈ） Ｏ， 磷 Ｘ ５ ） 二羟丙
酮合成酶 （ Ｈ Ｓ 催化下形成 ３一磷酸甘油醛 （ Ａ ） ＤＡ ） Ｇ Ｐ 和二羟
丙酮（ Ｈ Ｐ ； Ｈ Ｐ与 Ｇ Ｐ在 １６一二磷 酸果糖 醛缩 酶作 Ｄ Ａ ）Ｄ Ａ Ａ ， 用下形 成 果糖 一１ ６一二 磷 酸 （ Ｂ ） Ｆ Ｐ又 经 １ ５一二 ， Ｆ Ｐ ；Ｂ ， 磷酸果糖酶 去磷酸 化生成 Ｘ ５ 和Ｇ Ｐ； ｕ Ｐ 一次参 加循 ｕＰ Ａ Ｘ ５又