小鼠肺血管平滑肌细胞使用说明
机能实验问答题
1.三类小鼠缺氧动物模型的复制方法和原理是什么？（1）组织性缺氧（氰化钾中毒性缺氧）方法：取小鼠1只，腹腔注射0.1％氰化钾0.3ml。
原理：CN-与细胞色素aa3铁原子中的配位键结合，形成氰化高铁cyt aa3，使细胞色素氧化酶不能还原，失去传递电子的功能，呼吸链中断，从而使生物氧化受阻，造成组织性缺氧。
（2）血液性缺氧一氧化碳中毒性缺氧方法：准备CO发生装置，将1只小鼠放入广口瓶中，观察其正常表现后，与CO发生装置连接。
用刻度吸管取甲酸3 ml放于试管内，沿试管壁缓慢加入浓硫酸2 ml，塞紧瓶塞。
原理：CO与血红蛋白的亲和力是氧的210倍。
吸入CO后，一方面，血红蛋白与之结合形成HbCO而失去携氧能力。
另一方面，当CO与Hb分子中的某个血红素结合后，将增加其余三个血红素对氧的亲和力，使Hb结合的氧不易释放。
同时，CO还可以抑制红细胞内糖酵解，使2,3-DPG生成减少，使氧离曲线左移，使Hb结合的氧不易释放。
亚硝酸钠中毒性缺氧方法：选体重相近的小鼠2只，观察正常指标；腹腔注射5％亚硝酸钠0.3ml，立即取其中1只小鼠腹腔内注入l％美蓝溶液0.3ml；另1只则注入生理盐水0.3 ml。
原理：亚硝酸盐可以将血红素中的二价铁氧化成三价铁，形成高铁血红蛋白。
高铁血红蛋白中的三价铁因为与羟基结合牢固，从而失去结合氧的能力。
同时当血红蛋白分子中的四个二价铁中有一部分被氧化成为三价铁以后，剩下的二价铁虽然能结合氧，但不易解离。
（3）乏氧性缺氧方法：广口瓶加入钠石灰少许，取小鼠1只放入瓶中，观察各项指标；塞紧瓶塞，每10min重复观察上述指标1次，如有其他变化，随时记录，直至动物死亡。
原理：钠石灰可以吸收空气中的氧气，当吸入气的氧分压过低时，肺泡气氧分压降低，弥散进入血液的氧气随之减少。
2.各类缺氧小鼠死亡后皮肤、黏膜和肝脏颜色是什么？为什么会有上述表现？（1）组织性缺氧（氰化钾中毒性缺氧）皮肤、黏膜、肝脏玫瑰红或红色。
大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养与鉴定
大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养与鉴定徐索文肖平喜陈健文乐康沈晓燕黄河清刘培庆【摘要】目的建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养模型，为体外研究动脉粥样硬化的发病机制提供重要的实验手段。
方法采用改良的植块贴壁法，成功建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养模型;分别用倒置显微镜和SABC试剂盒对培养细胞进行形态学观察、免疫组织化学和免疫荧光鉴定(平滑肌细胞特异性的α- SM - actin)。
结果原代培养的血管平滑肌细胞在接种后3天开始从组织块周围游出，光镜下培养细胞呈梭形，放射状生长和典型的“峰谷”状生长;免疫组化和荧光染色显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达，证实培养的细胞为血管平滑肌细胞。
结论本法简便、可靠、经济、短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞，可作为研究动脉粥样硬化和移植血管再狭窄机制的有效模型。
【关键词】大鼠;胸主动脉;植块法;血管平滑肌细胞[Abstract]ObjectiveTo establish the culture model of rat aorta vascular smooth muscle cells (VSMCs) to provide important experimental method for the pathogenesis research of atherosclerosis in vitro. MethodsEmploying the explants technique, the primary and sub-culture were completed bymodified tissue-piece inoculation and trypsin digestion respectively. The cultured cells were identified by phase contrast microscopy and immunohistochemical and immunofluorescent staining.ResultsAfter 3 days of inoculation of tissue-pieces, VSMCs migrated from the vessel pieces. The cultured cells showed the typical “hills and valleys”morphological features under the microscope. Immunohistochemical and immunofluorescent staining with monoclonal antibody against mouse α-SM- actin demonstrated these cells were positive. ConculsionIt is a simple and reliable method for obtaining highly purified and satisfactory VSMCs in short term, providing a favorable experimental platform for research into the mechanism of vascular proliferous diseases such as atherosclerosis and restenosis.[Key words]rat;thoracic aorta;explants method;vascular smooth muscle cells血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)的异常增殖、迁移、泡沫化及凋亡与冠状动脉旁路移植术(CABG)和经皮冠脉腔内血管成形术(PTCA)术后血管再狭窄、颈动脉球囊损伤术致新生内膜形成(neointima formation)及动脉粥样硬化(atherosclerosis)密切相关[1~4]。
雷公藤甲素通过抑制细胞铁死亡减轻博来霉素诱发的小鼠肺纤维化
雷公藤甲素通过抑制细胞铁死亡减轻博来霉素诱发的小鼠肺纤维化*张致琴1， 吴洁2， 秦艺璐2， 梁舒2， 左淑飞2， 张超2，高晓2， 范文强2， 张志强1△（1新乡医学院第一附属医院，河南 新乡 453100；2新乡市中心医院，河南 新乡 453000）［摘要］ 目的：探讨雷公藤甲素（TPL ）对博来霉素（BLM ）诱导肺纤维化小鼠的改善效果，揭示铁死亡参与TPL 改善肺纤维化的潜在机制。
方法：选择SPF 级小鼠，随机分为3组：对照组、模型组（BLM 处理组）和实验组（BLM+TPL 处理组），每组10只。
Day 0，模型组和实验组小鼠气管灌注BLM 水溶液（50 μL ，5 mg/kg ），对照组小鼠接受等体积的生理盐水。
Day 1起，实验组小鼠开始灌胃TPL 悬液（200 μL ，0.25 mg/kg ），每3 d 一次，共7次，对照组和模型组分别接受等体积生理盐水。
Masson 染色检测肺组织纤维化，TUNEL 染色检测肺组织细胞凋亡；体外CCK8法检测细胞活力，流式细胞术及活死染色检测细胞凋亡，免疫荧光法检测细胞脂质过氧化，Western blot 检测肺组织及细胞中目的蛋白表达。
结果：TPL 处理通过下调肺组织中I 型胶原（Col I ）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA ）的表达（P <0.05），显著降低BLM 诱导小鼠肺部纤维化程度（P <0.01）；同时，TPL 处理可显著上调肺组织中谷胱甘肽过氧化酶4（GPX4）和铁死亡抑制蛋白1（FSP1）表达（P <0.05），下调转铁蛋白受体1（TfR1）表达（P <0.05），从而抑制BLM 诱导的肺部细胞铁死亡和凋亡（P <0.01）。
体外研究结果表明，TPL 处理可显著抑制肺上皮细胞凋亡（P <0.01），进一步检测发现TPL 处理可显著降低BLM 诱导的肺泡上皮细胞内脂质过氧化（P <0.01），显著上调细胞内GPX4和FSP1蛋白表达（P <0.01），下调TfR1蛋白表达（P <0.05），通过抑制细胞铁死亡来显著降低BLM 诱导的肺上皮细胞凋亡率。
低氧对肺动脉平滑肌细胞钾离子通道影响的研究进展
流是维 持细胞 膜静 息 电位 的主要 通道 Ｉ 。钾 离子 通 ３ Ｊ 道调节肺动脉 平滑肌细胞 的兴奋 陛， 它在维 持细胞 静
（ｙｏｉ ｐｌｏａ ａｏｏｓｉｉｎ Ｈ Ｖ） ｈｐｘｃ ｕｍ ｎｒ ｖｓｃｎｔｃｏ ， Ｐ 研究 热点 ， ｙ ｒｔ Ｈ Ｖ是机体重要 的生 理性调 节机 制 ， １６ Ｐ 白 ８７年 以来 人们逐渐 发现低氧可 引起肺 血管收缩 ， 并对其 细胞学 和分子学机 制进行 了长期 的探索 ， 发现 低氧既 可使去 内皮肺动 脉环收缩 ， 又可使单个 的肺动 脉平滑 肌细胞
收缩耦 联增 强 ， 终发 生肺 动脉 收缩 和肺动 脉高 压 。 最
在肺 血管 收缩 ， 血管重 塑 中发挥 着重 要作 用 。Ｋ ｖ通
道 的功能 主要 维 持 细 胞 的静 息 膜 电位 和血 管 紧 张 度 。Ｋ 通 道调节 膜 电位 ， 在低 氧诱 导 的肺 血管 细 ｖ 并 胞 膜去极 化 中发 挥 作 用 。Ｋ ｖ通 道通 过 两 个 环 节 增
此外 ， 慢性低 氧还可使 Ｐ Ｓ Ｃ 表型发生变化和钾 ＡＭ ｓ
通道 基 因如延迟 整 流性 钾 通 道基 因 Ｒ Ｋ 等 表 达 减 Ａ 少 ， 而引 起 Ｐ Ｓ ｓ延 迟 整流 性 钾 电流 的振 幅降 从 Ａ ＭＣ
低、 开放概 率减 少 、 放 时 间缩 短 、 闭 时 问延 长 和 开 关 该通 道 的数 目下 降 ， 并促 使 Ｐ Ｓ ｓ增 殖 和 内皮 细 Ａ ＭＣ 胞 迁移 ， 而 发生 肺 血 管重 建 Ｊ 大量 研 究表 明低 从 。
众多研 究显示 ， ｖ ． 道可 能参 与组 成肺 动脉 平滑 Ｋ １５通 肌 细胞 氧敏感 Ｋ 通 道 。Ｋ ２ １ 缺氧 为可逆性 抑制 ｖ ｖ． 对
该 通道 开放 可使 膜 电位 趋 于极 化 ， 同时 引起 血 管 扩 张 ，Ｋ ａ 道影 响静 息 膜 电位 复 极 化 ， ＢＣ 通 为重 要 的负 反 馈机 制 Ｌｊ ２ 。生 理 情 况 下 胞 内 Ｃ 浓 度 很 低 ， ３ ａ 但 在 病理情 况 下 （ 低 氧 ） 会 明 显 升 高 。迄 今 大 多 如 则
血管平滑肌细胞在血管衰老发生发展过程中作用的研究现状
•664•中华老年心脑血管病杂志2021 年6 月第23 卷第 6 期Chin J Geriatr Heart Brain Vessel Dis.Jun 202 1.Vol 23.No. 6•综述•血管平滑肌细胞在血管衰老发生发展过程中作用的研究现状李晶，谢文辉，柯一郎，洪华山关键词：肌，平滑，血管；肌细胞，平滑肌；衰老；细胞外基质；脉搏波分析2019年，L a u r e n t等1首次提出超常血管衰老（s u p e rn o r m a l v a s c u l a r a g i n g’S U P E R N O V A)概念，S U P E R N O V A指不受危险因素影响，因颈-股动脉脉搏波传导速度（c a r o t i d-f e m o r a l p u l s e w a v e v e l o c i t y，c f P W V)值极低而生成一种保护表型。
U u r e n t等还依据c f P W V值将早发血管衰老（e a r l y v a s c u l a r a g i n g，E V A)和S U P E R N O V A作为血管衰老分布的2个极端来处理。
血管平滑肌细胞（v a s c u l a r s m o o t h m u scle cell.s，V S M C)作为 血管的重要组成部分，在血管衰老中扮演重要的角色。
现将血管衰老分为E V A，正常血管衰老(n o r m a l v a s c u l a r a g i n g，N V A)以及S U P E R N O V A 3 种类型，对V S M C在血管衰老及其不同类型发生发展的作用和机制的研究进展进行综述。
1细胞衰老与V S M C1.1细胞衰老细胞衰老也称为H a y f l i c k极限，指永久性细胞生长停滞。
细胞衰老可分为复制性衰老及应激性衰老，前者与端粒缩短有关，后者与D N A损伤、染色质扰动、癌基因诱导、应激等其他因素相关。
11,12-EET促进线粒体BK通道的α和β1亚基结合而引起肺血管收缩
ｇ ｒ ｏ ｗｔ ｈ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ２ － ｎ ｅ ｇ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｍｅ ｔ ａ ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｃ ｂ ｒ ｅ ａ ｓ ｔ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ．Ｊ
Ｃ ｌ ｉ ｎ Ｏ ｎ ｃ ｏ ｌ ， ２ ０ １ ０， ２ ８： ３ ２ ３ ９—３ ２ ４ ７ ．
ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｄ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ｕ ｍｏ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ．Ｊ Ｃ ｌ ｉ ｎ Ｏｎ ｃ ｏ ｌ ，
２０ ０ ８． ２ ６ ：３ ７ ０９ —３ ７１ ４．
１ ５ Ｍｉ ｌ ｅ ｓ Ｄ Ｗ ，Ｃ ｈ ａ ｎ Ａ，Ｄｉ ｒ ｉ ｘ Ｌ Ｙ，ｅ ｔ ａ １ ． Ｐ ｈ ａ ｓ ｅ Ｉ Ｉ Ｉ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｏ ｆ ｂ ｅ —
肺动脉压。
随后作者用 Ｎ Ｏ Ｓ和 Ｃ Ｏ Ｘ抑制剂处理肺动脉平滑肌细胞 ， 并使其负载膜 电位荧光染料 ｄ ｉ 一 ８ 一 Ａ Ｎ Ｅ Ｐ Ｐ Ｓ ， 以显示细胞 的膜 电位 变化 。经 １ １ ， １ ２ ． Ｅ Ｅ Ｔ处 理的细胞膜 电位 ， 细胞 去极化 。而用 Ｂ Ｋ ０ 【 开放剂 Ｎ Ｓ １ ６ １ ９处理后 ， 细胞膜超 级化 ， 表明 Ｅ Ｅ Ｔ ｓ 对普通 质 膜上 的 Ｂ Ｋ通道无作 用。 但作者又提出 ， 在肺动脉平滑肌细胞中 ， Ｂ Ｋ通道 的一个亚型存在于细胞内 的线粒体 ， 因此作者对两种小 鼠细胞进行 Ｊ Ｃ 一 １ 荧光染色 。发现用 １ １ ， １ ２ 一 Ｅ Ｅ Ｔ处理后 ， 野生型小 鼠细胞 的线粒体膜 电位下 降， 从 而导致质膜去极 化 ， 且对 ｉ ｂ ｅ ｒ ｉ ｏ ｔ ｏ ｘ ｉ ｎ敏感。而 在Ｂ Ｋ Ｂ １ 基 因敲除小 鼠中， 该效应不存在 。
血管平滑肌细胞中钙库操纵性钙通道的作用研究进展
血管平滑肌细胞中钙库操纵性钙通道的作用研究进展郭瑞威;黄岚【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2009(38)10【摘要】Ca2＋是细胞信号传导过程中最常见的第二信使，许多蛋白质直接或间接与之结合后被活化，对机体正常生理功能有十分重要的意义。
机体有一套周密的调节机制用于严格控制细胞内、外钙离子浓度的瞬间变化。
细胞浆自由钙离子浓度的调节依赖两种方式：（1）细胞内外Ca2＋的交换；（2）细胞内钙库的调节。
在细胞膜控制细胞内外Ca2＋交换有3种通道：（1）电压操纵性通道；（2）受体操纵性通道；（3）钙库操纵性通道（store-operated channels，SOC）。
SOC是近来发现新的Ca2＋通道，对SOC的研究正成为生理、药理等学科的新兴课题。
【总页数】3页(P1249-1251)【作者】郭瑞威;黄岚【作者单位】第三军医大学新桥医院全军心血管疾病研究所,重庆,400037;第三军医大学新桥医院全军心血管疾病研究所,重庆,400037【正文语种】中文【中图分类】Q26【相关文献】1.钙库操纵性钙通道在人循环纤维细胞中的表达及功能 [J], 钟金男;兰兰;何光珍;黄革;杨炯;高亚东2.血小板钙库操纵性钙通道蛋白与冠状动脉斑块易损性的相关性研究 [J], 袁楚婷;葛长江;宋现涛;张闽;苑飞;许锋3.钙库操纵性钙通道在介导低氧诱导性肺动脉高压形成中的作用及影响因素 [J], 朱雄;李娜;何庆4.散结通脉方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化主动脉钙库操纵性钙通道信号分子及血清炎症因子的影响 [J], 丁云录;李驰坤;欧喜燕;李晓兵;成光宇;刘爱东5.钙库操纵性钙通道蛋白在心血管疾病中的研究进展 [J], 费舒扬;葛长江因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠血管平滑肌细胞的原代培养及鉴定-最新年精选文档
[1] 。
大鼠血管平滑肌细胞的原代培养及鉴定血管平滑肌细胞（VSMC 的异常增殖是许多心血管疾病的共同病理基础， 在高血压、 动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等 许多血管性疾病中，都涉及到血管平滑肌细胞的异常增殖 血管由 3 个部分组成，自内向外依次是内膜层、 中膜层和外膜层，内膜层主要由血管内皮细胞和少量的平滑肌细胞组成， 外膜层由要收缩调节机体的血流和血压， 其功能障碍在心血管疾病中起着 非常重要的作用， 因此， 对血管平滑肌细胞的生物学特性进行深 入研究，才能探明上述血管疾病的发病机制。
在VSMC 勺研究中， 组织块贴壁法培养 VSM （和胶原酶消化法是目前采用的非常广泛的技术。
本实验采用组织块贴壁法进行大鼠胸主动脉平滑肌细胞 的培养，并采用平滑肌细胞的3种标记分子（SMASM22Calponin ） 进行免疫细胞化学鉴定。
1 材料与方法成纤维细胞组成， 中膜层由血管平滑肌细胞组成， 平滑肌细胞主1.1 材料。
动物来源：健康 Wistar 大鼠，由第三军大学实验动物中心提供，雌雄不限，体重180 〜200g 。
DM EMS 糖培养 基 （美国 Gibco 公司） ， Hepes 索莱宝） ， 优质胎牛血清 （原 代培养浓度 20%，传代培养浓度 10%，美国 Hyclone ），胰蛋白酶，鼠单抗肌动蛋白 SMA 、SM22、Calponin 北京博奥森生物），DAB 显色试剂盒，通用型免疫组化检测试剂盒北京中杉金桥生物技术XX公司）其余试剂均为国产分析纯。
1.2 方法1.2.1 取材：断颈法处死Wistar 大鼠，消毒胸腹部，大组织剪、组织镊剪开胸腹部皮肤，更换器械，切开胸腹部，并切除部分胸壁以利于暴露胸主动脉，用眼科弯镊和眼科剪分离胸腹主动脉并放入盛有无菌PBS的细胞培养皿中。
转入超净工作台上，眼科直镊和弯镊清除结缔组织和血块，剥除动脉外膜。
放入另一盛有PBS的细胞培养皿中，减去血管外的细小分支，并放入含10%台牛血清的DMEI中，眼科直剪纵向剖开血管腔，用眼科弯镊轻轻刮除内膜面，以去除内皮细胞，放入另一含10%台牛血清的DMEM中，用眼科弯剪反复剪切成1mm*1m大小的组织块。
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小鼠肺血管平滑肌细胞
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北京派瑞金GK1203 小鼠肺血管平滑肌细胞 5×105cells/瓶
小鼠肺血管平滑肌细胞产品说明：
为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每
次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠肺血管平滑肌细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分
离培养。研发的小鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，
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经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠肺血管平滑肌细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若
有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清
比例、所需细胞因子等。
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用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条
件;建议使用派瑞金的完全培养基。
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