新鲜冰冻血浆中凝血因子检测结果与分析
影响冷沉淀质量的关键因素分析
影响冷沉淀质量的关键因素分析冷沉淀（cryoprecipitate）是新鲜冰冻血浆（FFP）在低温（约0~4℃）解冻后沉淀的白色絮状物，是FFP的部分凝血因子浓集制品，其中主要成分有：Ⅷ因子、纤维蛋白原以及血管性血友病因子，纤维结合蛋白、ⅩⅢ因子等。
冷沉淀因其制作工艺简单、价格低廉，临床应用广泛。
适用于先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症及Ⅷ因子缺乏症患者，血管性血友病（vWD）、儿童及成年人轻型甲型血友病患者，DIC及大出血患者的替代治疗等。
因冷沉淀中的Ⅷ因子为不稳定凝血因子，受多种因素影响，所以每袋冷沉淀Ⅷ因子含量各不相同，通过查阅相关资料及跟踪验证，对影响冷沉淀质量的关键因素分析，现报告如下：1 冷沉淀的制备方法冷沉淀制品是以新鲜冰冻血浆为原料，近年来因多联采血袋的广泛应用，冷沉淀的制作工艺更加简单，安全性更强，各地中心血站均能生产。
目前国内冷沉淀的制备常用两种方法[1]：1.1 离心法取出待制备冷沉淀的新鲜冰冻血浆（FFP），置室温中约5分钟，待双联袋导管（连接管）变软后，将血浆置入2～6℃水浴箱中融化。
当血浆基本融化时，取出血浆，在2±2℃的环境下重离心，使冷沉淀凝血因子下沉于塑料袋底部。
将上清分入空袋内，血袋底部的沉淀内大约含有20～30ml血浆，即为冷沉淀凝血因子。
1.2 虹吸法取出待制备冷沉淀的新鲜冰冻血浆（FFP），置室温中约5分钟，待双联袋导管（连接管）变软后，将新鲜冰冻血浆袋置于2～6℃水浴箱中，另一空袋悬于水浴箱外且位置低于血浆袋，两袋形成一定的高度落差。
新鲜冰冻血浆融化时，上清血浆随时被虹吸入空袋中，冷沉淀遗留在新鲜冰冻血浆袋中。
在融化过程中控制水浴温度在2～6℃。
待新鲜冰冻血浆融化至约40～50ml时，即为冷沉淀凝血因子。
以上两种方法制备好的冷沉淀需迅速放入速冻机中冷冻，于-20℃以下冰箱中保存，保存期不超过一年，输注前于37℃水浴融化，并于4小时内输注。
2 冷沉淀的质量标准根据《全血及成分血质量要求》GB18469-2001规定，冷沉淀外观：肉眼观察30℃~37℃融化的冷沉淀凝血因子无纤维蛋白析出、无黄疸、无气泡、无重度乳糜。
去白细胞过滤对新鲜冰冻血浆凝血因子及血浆蛋白的影响
【 要 】 目 的 研 究 去 白 细 胞 过 滤 对 新 鲜 冰 冻 血 浆 凝 血 因 子及 血 浆 蛋 白 的影 响 。方 法 对 白 细 胞 过 滤 前 后 新 摘 鲜 冰冻 血 浆 凝 血 因 子 及血 浆 蛋 白的 活 性 进 行 测 定 。结 果 新 鲜 冰 冻 血 浆 白 细 胞 过 滤 前 后 ， 血 酶 原 时 间 、 血 相 、 凝 凝 活 化 部 分 凝 血 酶 时 间 、 血 活 酶 时 间 的 ＦⅧ 、 都 有 明 显 改 变 （ 凝 ＦⅨ Ｐ＜ Ｏ ０ ） 血 浆 纤 维 蛋 白 原 、 、 蛋 白和 ．５ ， ＦⅦ 总 清 蛋 白无 改 变 （ ＞ Ｏ ０ ） 结 论 Ｐ ．５。 新 鲜 冰 冻 血 浆 白 细胞 过 滤 可 使 部 分 凝 血 因子 活 性 丢 失 ， 其 仍 保 持 在 正 常 治 疗 但 水 平 之 上 ， 以 满 足 临 床 治 疗 的 需 要 可 【 键 词】 去 白细 胞 过 滤 ； 血 浆 凝 血 因子 ； 血 浆 蛋 白 关
同 的 检 测 项 目利 用 不 同稀 释 度 标 准 血 浆 凝 结 时 间 与 相 应 的 凝
证 实 白 细胞 过 滤 血 浆 的 应 用 价 值 ， 报 道 如 下 。 现
１ 材 料 与 制成标 准曲线 ， 绘 然
后 测 定 受 检 者 血 浆 凝 结 时 间与 相 应 因 子 活 性 率 ， 获 数 据 按 内 所 插 法 带 人 回 归 方 程 ， 算 受 检 者 血 浆 中凝 血 因子 活 性 水 平 。本 计 文 观 察 的 指 标 为 ： 血 酶 原 时 间 （ Ｔ 、 化 部 分 凝 血 活 酶 时 间 凝 Ｐ ）活 （ Ｔ 、 维 蛋 白原 （ Ｉ ） Ｆ 、 ＡＰ Ｔ） 纤 ＦＢ 、 Ⅶ ＦⅧ 、 ＦⅨ 等 。 血 浆 蛋 白测 定 在 贝克 曼 Ｌ ０全 自动 生 化 分 析 仪 上 进 行 。 Ｘ２ １ ２ ２ 血 浆 白 细 胞 滤 除 方 法 在 超 净 工作 室 按 无 菌 要 求 对 血 ．．
新鲜冰冻血浆VS冰冻血浆VS病毒灭活冰冻血浆
新鲜冰冻血浆VS冰冻血浆VS病毒灭活冰冻血浆在临床输血过程中，患者可能对血浆类型有所疑虑。
例如，有的患者看到旁边的病床输的是去病毒冰冻血浆，而自己输的是普通冰冻血浆，可能会感到不解。
特别是那些之前接受过新鲜冰冻血浆的患者，现在输的是普通冰冻血浆，可能会质疑：“难道血液不是越新鲜越好吗？”他们可能还注意到，心里因素导致患者认为输完普通冰冻血浆后的效果似乎没有之前输新鲜冰冻血浆时显著。
在当前各种病毒严重的背景下，患者还可能担心血浆中的病毒问题，因此更倾向于选择去病毒血浆。
有些时候临床医生也会区分不出这些血浆种类，为了解答这些疑虑，我们可以简要解析这几种血浆的区别。
根据血浆的来源和制备方法，我们可以将其分为新鲜冰冻血浆,病毒灭活新鲜冰冻血浆，冰冻血浆，去冷沉淀冰冻血浆，病毒灭活冰冻血浆。
怎么没有普通冰冻血浆呢？其实冰冻血浆就是普通冰冻血浆，只是习惯于叫法不一致。
制备流程新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)是指采集后储存于冷藏环境中的全血在6~8小时内(根据保养液不同，ACD为6小时，CPD或CDPA-1为8小时)但不超过18小时内将血浆分离出并速冻成固态的成分血。
FFP保留了血浆的各种有效成分，含有全部凝血因子(包括不稳定的第V因子和第Ⅷ因子)、抗凝血酶和 ADAMTS13(一种血管性血友病因子裂解酶)。
FFP含各种凝血因子约0.7~1IU/ml,纤维蛋白原1~2mg/ml血浆蛋白≥50g/L。
简单概括是指在献血者献血后的6-8小时内，将血浆分离并迅速储存于-20℃以下的冷冻环境中的血液制剂，自血液采集之日起保存期为1年。
冰冻血浆(frozen plasma，FP)的来源主要有:①FFP 保存1 年后转化为FP,缺乏V、Ⅷ因子;②全血采集18小时后至全血有效期内分离的血浆，可能缺乏 V、Ⅷ因子。
FP 在≤-18℃条件下储存,自原采集日起储存4年。
简单概括有两种来源，一种是在献血者献血后在有效期内离心分离出的血浆并迅速冰冻呈固态的成分血液，另一种是新鲜冰冻血浆一年保存期满后的血浆。
比较冷沉淀在不同保存温度和不同保存时间凝血因子Ⅷ含量及合格率变化情况
·医学检验·比较冷沉淀在不同保存温度和不同保存时间凝血因子Ⅷ含量及合格率变化情况高娟（淮安市中心血站，江苏 淮安 223001）0 引言冷沉淀是在制备全血新鲜冰冻血浆时所形成的一种白色絮状物，单位为20-30 mL，含凝血因子VIII超过40 IU/U，同时含纤维蛋白原超过75 mg/U。
从采集血标本的时间开始，冷沉淀的有效期仅为一年。
其可以应用于出血功能障碍疾病、凝血功能障碍疾病的治疗中，例如甲型血友病、纤维蛋白原缺乏症、凝血因子VIII缺乏症[1]。
本研究主要对冷沉淀在不同保存温度和不同保存时间凝血因子Ⅷ含量及合格率变化情况进行比较，报道如下。
1 仪器与方法1.1 仪器。
冷沉淀制备的仪器主要包括：低温离心机、低温融化箱、低温速冻机、血浆保存机、恒温水浴箱、凝血因子检测仪器、凝血因子促凝检测试剂。
1.2 方法。
随机采集健康人群的全血400 mL，在6小时内对血浆进行两次离心处理，离心参数，3400转/分，12分钟。
温度为4ºC，获得新鲜血浆共200 mL，表示为A、B。
使用速冻机进行速冻处理，再放入低温箱进行冷藏（-30ºC）。
3天后使用融化箱进行融化，然后使用离心机进行离心处理（贺利氏大容量冷冻离心机），制备冷沉淀的是4000转/分，10分钟，离心后去除上层血浆，取白色絮状物，即可获得20-30 mL冷沉淀。
对A、B分别使用5个无菌试管，A组：A1、A2、A3、A4、A5放在低温环境中保存（24ºC）；B组：B1、B2、B3、B4、B5放在低温环境中保存（4ºC）。
在0、3、5、7、9小时的时间点进行观察。
1.3 统计学分析。
采用SPSS 19.0统计软件进行处理，计量资料以均数±标准差表示，采用t检验；计数资料比较采用χ2检验。
P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 A组冷沉淀放置时间、温度与凝血因子VIII含量的关系。
医疗机构医院医学实验室凝血因子活性测定技术要求
医疗机构医院医学实验室凝血因子活性测定技术要求1 范围本标准规定了凝血因子（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ）活性测定的技术要求，包括了一期法、二期法和发色底物法。
由于方法学不一致，本标准不涉及纤维蛋白原检测和凝血因子XIII的检测。
本标准适用于开展凝血因子活性检测的医学实验室，用于规范相应的检测过程和质量控制。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
WS/T 359-2011 血浆凝固实验血液标本的采集及处理指南WS/T 406-2012 临床血液学检验常规项目分析质量要求WS/T 407-2012 医疗机构内定量检验结果可比性验证指南3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1凝血酶原时间prothrombin time, PT血浆与凝血活酶试剂（例如，组织因子）和氯化钙反应后发生凝固所需要的时间。
[WS/T 359-2011，定义2.1]3.2活化部分凝血活酶时间activated partial thromboplastin time, APTT血浆与适量的氯化钙（CaCl2）、部分凝血活酶试剂盒接触因子激活剂（如白陶土）反应后发生凝固所需要的时间。
[WS/T 359-2011，定义2.2]3.3定标曲线calibration curve校准曲线参考曲线定量反映凝血因子活性与纤维蛋白形成所需时间之间的相互关系的曲线。
3.4参考血浆reference plasma校准血浆定标血浆已知凝血因子活性的枸橼酸钠抗凝的正常混合血浆。
该血浆可以自备，亦可从制造商处购买，用于制备参考曲线。
3.5乏因子血浆factor-deficient plasma缺乏待测凝血因子的血浆。
3.6质控血浆control plasma源于人或动物血，或者人工制成的新鲜、冰冻或冻干的血浆，用于质量控制。
去冷沉淀血浆部分凝血因子及蛋白含量的研究
去冷沉淀血浆部分凝血因子及蛋白含量的研究林昂【摘要】 目的 探讨去冷沉淀血浆的临床应用价值,指导临床合理使用,并为国家行业标准的制订提供科学依据。
方法 对来自同一袋血液新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆、去冷沉淀血浆三种标本,进行总蛋白、白蛋白、纤维蛋白原、凝血因子V、Ⅷ、X含量检测,并进行统计分析。
结果 去冷沉淀血浆与新鲜冰冻血浆和普通冰冻血浆相比,各项指标的差异都有统计学意义(P<0.01)。
结论 去冷沉淀血浆不具备新鲜冰冻血浆和普通冰冻血浆的临床治疗价值。
但在血栓性血小板减少性紫癜(T TP)等相关疾病的治疗上具有积极意义,应作为一种成分血进行制备和使用。
【关键词】 去冷沉淀血浆 新鲜冰冻血浆 普通冰冻血浆 血浆蛋白 凝血因子【中图分类号】 R457.1+4 R446.11 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-2587(2011)02-0149-02 去冷沉淀血浆是新鲜冰冻血浆在低温条件下分离冷沉淀后所得到的血液成分。
目前,国内外输血行业对去冷沉淀血浆都没有明确规定或标准。
美国血站和输血机构标准项目部质量管理分委会和美国血库学会标准项目委员会制定的《血站和输血机构标准》仅对去冷沉淀血浆的制备有规定,但没有明确规定或标准。
为此,笔者对去冷沉淀血浆的部分凝血因子及蛋白含量进行检测,并与源自同一袋血液的新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆进行比较分析,现报告如下。
材料与方法1 材料 随机抽取经体格检查、血液检验均合格的无偿献血者血样43份,其中男性25份,女性18份。
均按正常献血过程使用ACD-B保养液血袋采集血液。
DOI:10.3969/J.is sn.1671-2587.2011.02.020 作者单位:515064 广东省汕头市中心血站 作者简介:林昂(1973-),男,汉,广东澄海人,副主任技师,本科,主要从事血液质量控制和血源管理工作。
(E-mail)316524739 @ 2 试剂与仪器 凝血因子试剂均采用美国DADE BEHRING产品:标准人血浆(lot503208B)、T hr omborel(lot545229)、缓冲液(lot527679)、氯化钙(lot539412)、APTT(lot537435)、乏V因子血浆(lot503546A)、乏Ⅷ因子血浆(lot536595A)、乏X因子血浆(lot504283A)、纤维蛋白原试剂盒(lot540272);总蛋白、球蛋白试剂(上海复星长征医学科学公司,lot2080622、2080752);T ECO COATRON M4血凝仪(德国TECO公司); BECKMAN全自动血凝仪;OLYMPUS AU400全自动生化仪(OLYMPUS OPT ICA L CO.); SDJ-20血浆速冻机(天津,天商冰冻科技公司); KJX-111冰冻血浆解冻箱(苏州医用仪器厂);J6 M1大容量低温离心机(美国BECKMAN CO.); MDF460B低温冰箱(日本SA NYO.CO)。
凝血功能报告解读
常见影响凝血功能药物介绍
抗凝药物
如华法林、肝素等，通过抑制凝 血因子的活性或干扰凝血过程，
从而延长凝血时间。
抗血小板药物
如阿司匹林、氯吡格雷等，通过 抑制血小板聚集，减少血栓形成
的风险。
溶栓药物
如尿激酶、链激酶等，通过激活 纤溶系统，溶解已形成的血栓。
药物相互作用对凝血功能影响
1 2 3
药物与药物相互作用
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血管壁
提供凝血反应的场所，同时合 成和释放多种凝血因子。
血小板
参与初期止血，通过黏附、聚 集和释放反应形成血小板血栓
。
凝血因子
一系列蛋白质，参与凝血酶的 生成和纤维蛋白的形成。
抗凝系统
防止凝血过度激活，保持血管 通畅。
凝血过程及生理意义
凝血酶原激活物形成
血管损伤时，组织因子暴露，与FVIIa 结合形成复合物，激活FX和FIX，生 成凝血酶原激活物。
结合其他检查结果
除了凝血功能报告外，还需要结合血常规、肝功能等其他检查结果进行综合评估。例如， 血常规检查中的血小板计数和肝功能检查中的转氨酶等指标都可以为凝血功能异常的判断 提供辅助信息。
04 常见凝血功能障碍疾病 诊断与治疗
血友病诊断与治疗
01
02
03
诊断方法
通过凝血功能检测、基因 检测和家族史分析等手段 进行诊断。
结合临床进行综合评估
了解患者病史和用药史
对于异常凝血功能报告结果的解读，需要结合患者的病史和用药史进行综合分析。例如， 患者是否长期服用抗凝药物或存在肝病等病史，这些因素都可能影响凝血功能报告的结果 。
观察患者症状
患者是否存在出血倾向、血栓形成等症状也是评估凝血功能异常的重要因素。例如，患者 若出现皮肤瘀斑、鼻出血等症状，可能提示凝血功能异常。
血浆的限制性输注
血浆的限制性输注新鲜冰冻血浆（fresh frozen plasma）主要用于补充凝血因子，从而达到预防出血和止血的目的。
与红细胞相比，新鲜冰冻血浆属于高危血制品，输注风险较高，不恰当使用可能出现严重的输血并发症如TRALI。
因此只有明确利大于弊时，才考虑使用，以减少不必要的输血。
（一）血浆的应用现状自20世纪80年代发现艾滋病病毒以来，新鲜冰冻血浆的用量已日趋减少。
美国成分输血调查显示，新鲜冰冻血浆的使用率仅占11.5%。
在我国，目前临床上常用的是新鲜冰冻血浆，2012年我国实施的《全血及成分血质量要求》对新鲜冰冻血浆的定义是：采集后储存于冷藏环境中的全血，最好在6小时或8小时内，但不超过18小时将血浆分离出并速冻成固态的成分血。
目前认为新鲜冰冻血浆的适应证非常有限，将其当成凝血因子制剂使用才是合理的。
然而，新鲜冰冻血浆在我国有滥用的趋势。
（二）血浆的合理应用原则上应尽量避免使用血浆制品，在必须使用时，可遵循“MANAGER”原则即监测与评估（monitoring and evaluation）、避免失血（avoid blood loss）、确定输血需求（need established）、给药（administration）、促进内源性血液成分生成（generating endogenous resources）、使用替代药物（existence ofpharmaceutical alternatives）和使用重组制剂（recombinant products）。
在治疗前进行适当的监测可获得更多关于患者的信息，有助于准确制定治疗方案。
尽量减少患者出血同样可减少血浆制品的使用，例如借助外科技术、最大程度减少有创操作等措施。
制定血浆制品输注方案时须明确患者是否可从中获益以及患者是否存在治疗的禁忌，同时须明确给药次数、给药剂量和给药途径，因为这关系到血浆制品的总剂量和患者是否可从治疗中切实获益。
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【关键词】新鲜冰冻血浆;凝血因子;活性
根据卫生部临床输血技术规范要求，新鲜冰冻血浆(freshfrozenplasma,ffp)自
血液采集后6～8h之内经分离放入-50℃速冻成块，在-30℃保存1年内几乎含有
全部凝血因子，包括不稳定因子ⅴ和ⅷ[12]。而血液凝血因子易受血浆制备、
储存、运输等条件的影响而失活，从而导致血液疗效的降低。但由于ffp仍是目
前临床预防和治疗出、凝血功能障碍的血制品之一，所以了解和掌握ffp中血液
凝血因子的含量及活性显得极为重要。我们针对市中心血站提供我院的ffp随机
抽查10份，进行部分凝血因子的检查，现将结果报告如下。
1材料与方法
1.1材料来源本次抽查10份ffp均来自蚌埠市中心血站，acda抗凝全血
分离制备而成。实验仪器：teco coatron1800全自动血凝分析仪。试剂均有
dade behring公司生产。标准血清(lot.no.102518):pt试剂(lot.no.102627)：
aptt(lot.no.103128)：fib试剂(lot.no.102511);tt试剂
(lot.no.101465);fⅷ(lot.no.103821)，fⅶ(lot.no.100708),fⅸ(lot.no.100181)。
1.2取样方法随机抽取10份ffp，37℃水浴融化，融化后立即按无菌操作抽
取血浆2ml，随即在自动血凝仪上测定凝血因子。凝血因子测定方法严格按照
co1800全自动血凝仪操作说明和试剂要求，采用凝结光学检测法原理，对不
同的检测项目利用不同的稀释度标准血浆凝结时间与相应的凝血因子活性率标
绘于对数图上，绘制成标准曲线，然后测定受检血浆凝结时间与相应因子活性
率所或获得数据带入回归方程，计算受检血浆中凝血因子活性水平。选用观察
的指标为：pt、aptt、fib、tt、fⅶ、fⅷ、fⅸ等。
2结果
ffp凝血因子测定结果，见表1。表110份ffp凝血因子测定结果注：inr是
pt用国际标准化比值的表示。
3讨论
血浆中不稳定的凝血因子(如fⅷ)因在体外半衰期较短，多为8～12h，易丧
失活性，加之血液离体后血浆凝血因子接触异物表面会有不同程度被激活而失
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去活性[1]。在ffp制备的同时，应尽量缩短ffp在室温的停留时间，在制作采血
标签时，将即刻时间打在标签上，以便在成分分离血浆时，保证在6h内把ffp
放入-50℃。速冻血浆是保存血浆内各种有效蛋白成分及生物活性因子的重要条
件。为了达到快速冷冻的目的，将制备的ffp直接放入-50℃冰柜中速冻。