高速逆流色谱分离纯化波棱瓜子中化学成分

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高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚

高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚孙爱玲冯蕾柳仁民＊（聊城大学化学化工学院，聊城252059）摘要建立了高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚的新方法，溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-1%醋酸（5=5=7=3，V /V ），上相为固定相，下相为流动相。

从100mg 厚朴粗提物制得和厚朴酚33.3mg ，厚朴酚19.5mg ，经高效液相色谱分析，纯度均大于99.5%，其化学结构由1H NMR 和13C NMR 鉴定。

关键词高速逆流色谱，厚朴，和厚朴酚，厚朴酚 2004-07-22收稿；2005-02-23接受!"引""言高速逆流色谱（high-speed countercurrent chromatography ，HSCCC ）是一种不用固态支撑体或载体的液液分配色谱新技术，目前已广泛应用于生物工程、医药、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品及地质材料等领域［1］。

我国是最早开展HSCCC 研究的国家之一，已利用HSCCC 分离纯化了芦荟［2］、大黄［3］、丹参［4］、内蒙黄芪［5］、肉苁蓉［6］、山茱萸［7］以及羌活［8］等中药的有效成分。

中药厚朴，为木兰科木兰属乔木（Magholia officinalis Rehd.et wils ）的根皮及树皮，具有抗病毒、抗肿瘤、防龋齿、抗菌及抗溃疡等作用［9］。

和厚朴酚与厚朴酚为其主要活性成分，二者为同分异构体，结构见图1。

本实验利用HSCCC 对和厚朴酚与厚朴酚的分离制备进行了研究，建立了HSCCC 法分离制备和厚朴酚与厚朴酚的新方法，利用该法可一次性得到纯度高达99.5%以上的纯品。

图1 和厚朴酚与厚朴酚的化学结构式Fig.1 The chemicaI structure of magnoIoI and honokioI#"实验部分#.!"仪器、试剂与材料TBE-300A 高速逆流色谱仪（中国上海同田生化技术有限公司）； KTA prime 泵及检测系统（瑞士安玛西亚生物有限公司）；HX-1050恒温器（北京博医康实验仪器有限公司）；1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；色谱柱：SPHERIGEL ODS C 18（250mm X 4.6mm ，i.d.5!m ）；Mercury pIus 400核磁共振仪（美国瓦里安公司）。

高速逆流色谱分离制备无花果叶和长松萝中主要活性成分的研究的开题报告

高速逆流色谱分离制备无花果叶和长松萝中主要活性成分
的研究的开题报告
一、背景
无花果叶和长松萝都是常见的药用和食用植物，一些研究表明它们中含有很多有益物质，如多糖、黄酮类、甾醇等。

这些物质具有很多生理活性，如抗氧化、降血糖、抗炎等作用。

因此，研究无花果叶和长松萝中主要的活性成分，通过提取纯化和结构
鉴定等手段，有助于了解其药用和食用价值，同时也有助于开发其作为天然产物的新
用途。

传统的提取和分离方法有许多局限性，如操作繁琐、耗时长、成本高等问题。

逆流色谱作为一种高效、快速、可靠分离和纯化天然产物的方法能够弥补传统方法不足，并且可以提高提取物和活性成分的总量和纯度。

因此，使用高速逆流色谱分离制备无
花果叶和长松萝中主要活性成分是一种很有前景的研究方向。

二、研究目的
本项目旨在使用高速逆流色谱法对无花果叶和长松萝中主要活性成分进行分离制备，并对其进行纯化和结构鉴定，探讨无花果叶和长松萝中的有效成分及其药用和食
用价值。

三、研究内容
本研究首先采用高速逆流色谱法对无花果叶和长松萝中的活性成分进行分离制备，根据它们在高速逆流色谱中的特性，如保留时间、峰形等，进行了优化条件和参数的
研究。

然后，采用一系列色谱技术和质谱方法对主要活性成分进行了分离纯化和结构
鉴定，如薄层色谱、逆相高效液相色谱、质谱等。

四、研究意义
通过制备无花果叶和长松萝中的活性成分，可以对其药用和食用价值进行深入了解。

同时，本研究将针对使用高速逆流色谱分离制备天然产物的方法进行改进和优化，为开发天然产物的新用途提供新的方法借鉴。

TBE-300B型高速逆流色谱分离仪讲解

我国还是继美国、日本之后最早开展逆流色谱应用的国家, 也是世界上高速逆流色谱仪生产国之一。HSCCC被北京新技术应用研究所的张天佑教授和上海同田生化技术有公司的邓秋云先生进一步改进。
引用文献：姚舜, 柳仁民, 黄雪峰,等. 高速逆流色谱在天然产物分离中的方法学研究[J]. 中国天然药物, 2008, 6(1) : 13-19.
引用文献
牛丹丹, 刘彩霞, 刘绣华,等. 高速逆流色谱法分离制备花生壳中的黄酮类化合物[J]. 天然产物研究与开发, 2011, 23 : 110-113,158.
溶剂体系的选择
溶剂体系的选择原则 (1 ) 溶剂系统不会造成样品的分解或变性; (2) 足够高的样品溶解度; (3) 溶剂系统不会干扰样品的检测。 (4) 各个组分在其两相的分配系数在 0 .5 ~ 5 之间, 且有一定的差值。 (5) 溶剂系统的分相时间不超过 30 s。 (6) 尽量采用沸点低的溶剂, 以方便后续处理。 (7)尽量避免使用毒性大的溶剂
高速逆流色谱应用
目前，应用高速逆流色谱法在提取分离天然产物中的黄酮、生物碱、香豆素、萜类、木脂素、皂苷、多酚类和蒽醌类衍生物等有效成分方面已获得满意结果。
➢ 柳仁民等采用高速逆流色谱分离纯化秦皮中香豆素成分，以正丁醇-甲醇0.5%乙酸（5：1.5：5，v/v）为两相溶剂系统，经过单次分离，从150mg秦皮粗提物中分离得到14.3mg的秦皮苷(fraxin)、26.5mg的秦皮甲素(f aesculin) 、5.8mg的秦皮素(fraxetin)、32.4mg的秦皮乙素(aesculetin)，纯度分别为 97.6%、99.5%、97.2%、98.7%
高速逆流色谱原理
➢ 高速逆流色谱(high-speed counter-current chromatography, HSCCC）是一种连续高效的液 - 液分配色谱技术。由于不需要固体支撑体, 物质的分离依据其在互不相溶的两相液体中的分配系数的差异而实现, 因而避免了固体固定相不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等问题, 样品回收率高, 回收的样品更能反映其本来的特性, 特别适合于天然产物中有效成分的分离。

高速逆流色谱在天然产物分离提取中的应用38页PPT

的应用
1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响，而是让儿童练习良好道德行为，克服懒惰、轻率、不守纪律、颓废等不良行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养成儿童自觉的纪律性，这是儿童道德教育最重要的部分。—— 陈鹤琴
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃

TBE-300B型高速逆流色谱分离仪讲解

➢高速逆流色谱仪器的装置如图 1 所示, 它的公转轴水平设置, 螺旋管柱距公转轴 R 处安装, 两轴线平行。通过齿轮传动, 使螺旋管柱实现在绕仪器中心轴线公转的同时, 绕自转轴作相同方向相同角速度的自转。
引用文献：李爱峰, 刘宁宁, 柳仁民. 高速逆流色谱原理及其在天然产物化学成分分离中的应用研究进展[J]. 理化检验-化学分册, 2008, 44(5) : 481-489.
仪器的主要性能指标和使用环境
主机管路体积：280 ml 转速范围：0-1000 rpm/min；工作转速：800-1000rpm/min 流动相工作流速：2-4 ml/min（推荐）进样圈：20ml 最大工作电压：2Mpa（20公斤力/平方厘米）电压：220+20 V ；频率：50Hz 主机尺寸：330 x 600 x 550mm ；主机重量：80Kg 使用和保存环境：高度小于海拔3000m、相对湿度小于80%、工作环境温度15-30℃ 。注意事项： ➢ 处理后的样品必须没有明显的可见颗粒。 ➢ 主机运行时，请把主机侧门锁好，以防发生意外情况 ➢ 请勿让仪器在管路没有液体的情况下长时间高速空转。
➢HPLC 法
该法是利用样品组分在有机相和水相的色谱峰面积之比测定分配系数 K 值的。具体做法如下: 将样品溶于一定体积的某一相中( 例如上相U) , 然后利用 HP LC 测定上相溶液, 得到色谱峰面积 AU1; 另外加入一定体积的另一相( 例如下相L) , 振荡, 当达到分配平衡后, 取该溶液的上相进行 HPLC 测定, 得到色谱峰面积 AU2, 如图 1 所示。对于同一组分, 其分配系数 K 可以表示如下:
➢ 利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），此时在螺旋柱中任何一部分, 两相溶剂反复进行着混合和静置的分配过程，流动相不断穿过固定相, 随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的大小次序，被依次洗脱

高速逆流色谱分离纯化灯盏细辛中的黄酮类化合物

ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＳＣＣＣ）Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｓｏｌｖｅｎｔｓｙｓｔｅｍｏｆｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ — ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ — ｍｅｔｈａｎｏ１．ｗａｔｅｒ
生物工程有限责任公司，山东济南２５００１４；４．烟台张裕葡萄酿酒有限公司，山东烟台２６４００１）
摘要：采用高速逆流色谱技术快速分离纯化灯盏细辛中的黄酮类化合物，以石油醚一乙酸乙酯一甲醇一水（４：６：３．５：６．５，Ｖ／Ｖ）为溶剂系统，转速８５０ｒ／ａｒｉｎ，流速２．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长２５４ａｍ。从５００ｍｇ粗提物中分离得到４个黄酮类化合物：黄芩素（８７ｍｇ）、木犀草素（３５ｍｇ）、槲皮素（４６ｍｇ）和芹菜素（９２ｍｇ），经高效液相色谱法分析，其纯度分别为９４．６％、９２．５％、９８．２％、９７．５％。研究结果表明，应用高速逆流色谱分离灯盏细辛中的黄酮类化合物快速、高效且纯度高。
山东科学
ＳＨＡＮＤＯＮＣ１５年６月出版
Ｖｏｌ２８Ｎｏ．３Ｊｕｎ．２０１５

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３．济南三峰生物工程技术有限公司，山东济南２５１４００；４．山东中医药高等专科学校，山东烟台２６４０００）
摘要：采用高速逆流色谱对波棱瓜子乙酸乙酯提取物进行分离纯化，以石油醚一乙酸乙酯一甲醇一水（体积比２：６：３：５）为溶剂．上相为固定相，下相为流动相，流速２ｍＬ／ｍｉｎ，转速８５０ｒ／ｍｉｎ，共分离得到２个高纯度化合物，经过高效液相色谱检测，纯度均
山东科学
ＳＨＡＮＤＯＮＧＳＣＩＥＮ１４年２月出版
ＶＯＩ．２７Ｎｏ．１Ｆｅｂ．２０１４
ＤＯＩ：１０．３９７６／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２ — ４０２６．２０１４．Ｏ１，００７
中药与天然活性产物
高速逆流色谱分离纯化波棱瓜子中化学成分
杭伟一，宋腾飞，段文娟，王晓，耿岩玲，杨丙田，张钦德４
（１．山东中医药大学，山东济南２５０３５５；２．山东省分析测试中心，山东济南２５００１４；
２．ＳｈａｎｄｏｎｇＡｎａｌｙｓｉｓａｎｄＴｅｓｔＣｅｎｔｅｒ，Ｊｉｎａｎ２５００１４，Ｃｈｉｎａ；
３．ＴｈｒｅｅｐｅａｋｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．Ｌｔｄ．，Ｊｉｎａｎ２５００１４，Ｃｈｉｎａ；
ｓｔａｔｉｏｎａｒｙｐｈａｓｅａｎｄｌｏｗｅｒａｑｕｅｏｕｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ．ｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ２ｍＬ／ｍｉｎａｎｄｒｏｔａｔｉｏｎｓｐｅｅｄｏｆ８５０ｒ／ｍｉｎＴｈｅｉｒＨＰＬＣｄｅｔｅｃｔｅｄｐｕｒｉｔｉｅｓｗｅｒｅｍｏｒｅｔｈａｎ９５％Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ｓｏｌｖｅｎｔ — ｓａｖｉｎｇａｎｄｃａｎｒａｐｉｄｌｙａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ
高于９５％。该方法简便、快速、节省溶剂，可以对波棱瓜子中的化学成分进行快速有效的分离纯化。
关键词：高速逆流色谱；波棱瓜子；分离纯化中图分类号：Ｒ２８４．２；０６５７．７文献标识码：Ａ文章编号：１００２－４０２６（２０１４）０１－００４０－０５
（１。ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｎａｎ２５０３５５，Ｃｈｉｎａ；
ｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｉｔｈｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ — ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ — ｍｅｔｈａｎｏｌ — ｗａｔｅｒ（ｖｏｌｕｍｅｒａｔｉｏｏｆ２：６：３：５）ａｓｓｏｌｖｅｎｔ。ｕｐｐｅｒｏｒｇａｎｉｃ
４．ＳｈａｎｄｏｎｇＣｏｌｌｅｇｅｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｙａｎｔａｉ２６４０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｅｏｒｉｇｉｎａｌｌｙｅｍｐｌｏｙｅｄｈｉｇｈｓｐｅｅｄｃｏｕｎｔｅｒ — ｃｕｒｒｅｎｔｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＳＣＣＣ）ｔｏｓｅｐａｒａｔｅａｎｄｐｕｒｉｆｙｃｈｅｍｉｃａｌ
ＨＡＮＧＷｅｉ。
，
ＳＯＮＧＴｅｎｇ — ｆｅｉ，ＤＵＡＮＷｅｎ — ｊｕａｎ。，ＷＡＮＧＸｉａｏ，
ＧＥＮＧＹａｎ — ｌｉｎｇ，ＹＡＮＧＢｉｎｇ－ｔｉａｎ，ＺＨＡＮＧＱｉｎ－ｄｅ
ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅｄｉｓｓｏｌｖｅｄＨｅｒｐｅｔｏｓｐｅｒｍｕｍｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｕｍｓｅｅｄｓ．Ｗｅｓｅｐａｒａｔｅｄｔｗｏｈｉｇｈ — ｐｕｒｉｔｙｃｈｅｍｉｃａｌ
ＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎＨｅｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｕｍｓｅｅｄｓｂｙｈｉｇｈ－－ｓｐｅｅｄｃｏｕｎｔｅｒ－－ｃｕｒｒｅｎｔｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ