紫外分光光度法测蛋白质含量
分光光度法测定蛋白含量的依据
分光光度法测定蛋白含量的依据分光光度法测定蛋白含量，这听起来好像是个复杂的科学实验，实际上它就像我们做饭时量食材那么简单。
你想象一下，厨房里热气腾腾，你在准备一顿丰盛的晚餐。
你会用量杯量出米、菜，结果一看，哎呀，米和菜的比例不对，这道菜估计要变成灾难了。
这和分光光度法的原理差不多，都是为了找到正确的比例，让最终的结果美味可口。
分光光度法到底是什么呢？它就是通过测量光的吸收来确定样品中蛋白质的含量。
听起来是不是很高大上？但简单得很。
我们拿一束光，照在我们的样品上，然后看它吸收了多少光。
光越被吸收，样品里的蛋白质就越多，简简单单的一道光谱，蛋白质的秘密就全都暴露无遗。
就像你用放大镜看蚂蚁，越看越清楚。
想象一下，如果你在阳光下，穿着一件黑色的T恤，阳光照在你身上，那绝对是个“吸光小能手”。
而如果你穿的是白色的，那就像是阳光的反射器。
这个原理在分光光度法中也是适用的，蛋白质和其他物质就像不同颜色的衣服，各自吸收光的能力也不一样。
我们可以通过调节光的波长，找出蛋白质吸收的“黄金波长”，就像找到你最喜欢的歌曲那样，心里一阵欢喜。
而这个方法的好处可多着呢！它快速。
想想，如果每次都要通过繁琐的化学反应来测量，那得耗费多少时间啊。
分光光度法只需要几分钟，蛋白质的含量就一目了然。
准确性也不错。
这方法像是找到了蛋白质的“身份证”，谁都逃不过它的法眼。
样品处理简单，不需要太多复杂的步骤，就像煮方便面，简单又方便。
使用分光光度法时也有一些小注意点。
样品必须要纯净，杂质多了，那结果可就像是你做饭时不小心放了盐，整锅菜都咸得要命。
光的路径要保持清洁，任何污渍都可能影响测量结果。
就像你想拍张好照片，镜头上有灰尘，效果肯定大打折扣。
别忘了校准仪器，这就像做菜前确认一下食材的新鲜程度，确保一切都是上等货。
分光光度法的应用也很广泛，科研、食品、医药，几乎无处不在。
就拿医药来说，医生通过这个方法可以判断血液中蛋白质的含量，及时发现病症。
药典-蛋白质含量测定(紫外吸收法、Lowrry法、双缩脲法)
3.1.1 蛋白质含量第一法紫外吸收法（见EPO）用4g/L的碳酸氢铵溶液将供试品稀释至0.5~2mg/ml，作为供试品溶液。
以4g/L的碳酸氢铵溶液作为可被，测定供试品溶液在320nm、325nm、330nm、335nm、340nm、345nm 和350nm的吸光度。
用读出的吸光度的对数与其对应波长的对数作直线回归，求得回归方程。
紫外-可见分光光度法，在波长276~280nm处，测定供试品的溶液最大吸光度A max，将A max对应波长代入回归方程，求得供试品溶液由于光散射产生的吸光度A光散色。
计算供试品蛋白质含量，应不低于0.5mg/ml。
蛋白质含量(mg/ml)=(A max -A光散色)/ 7.43 x 供试品稀释倍数x 10。
1.仪器的校正和鉴定1)波长允许误差：紫外光区±1nm，500nm附近±2nm2)吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
3)杂散光碘化钠、亚硝酸钠2.测定法，1)对照品比较法(c x)= (A x/A R) c R，其中c x为供试品浓度；A x 为供试品溶液的吸光度c R为对照品浓度；A R为对照品溶液的吸光度。
2)吸收系数法通常吸收系数大于1003)计算分光光度法4)比色法第二法Lowry法本法用于微量蛋白质的含量測定。
蛋白质在碱性溶液中可形成铜-蛋白质复合物，此复合物加入酚试剂后，产生蓝色化合物，该蓝色化合物在波长650nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，根据供试品的吸光度，计算供试品的蛋白质含量。
试剂1〉酚试剂称取钨酸钠（Na2WO4·2H2O）100g、钼酸钠（Na2MnO4·2H2O）25g，置1500ml蒸馏瓶中，加入700ml水、85%磷酸50ml、盐酸100ml，上连回流管（使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞）微沸回流10小时。
取下回流管，加入硫酸锂150g 、水50ml、溴液几滴，煮沸约15分钟，驱除过量的溴，冷却，加水至1000ml，过滤，为酚试剂贮备液。
生化实验报告
生化实验报告
实验原理，实验结果，实验分析。
分光光度技术及蛋白含量的测定
实验一双缩脲法测定蛋白质含量
实验原理：蛋白质分子在碱性溶液中能与铜离子结合成紫色的化合物，即为双缩脲反应。
在一定浓度内，颜色与浓度成正比。
实验结果:由于第五组数据误差较大，图像绘制时予以舍去。
实验分析：根据标准曲线及其公式，并血清吸光度为0.089，得出每100ml血清样品中蛋白质的克数为0.548g。
实验二考马结合法测定蛋白质含量
实验原理：考马与蛋白质结合后最大吸收峰从465nm变成595nm，即其595nm处光吸收增加量可知蛋白质的量。
实验结果:标准溶液的吸光度为0.407，标本溶液的吸光度为0.088。
实验分析：根据公式，可得样品中蛋白质的含量为10.811g/ml。
实验三紫外分光光度法测定蛋白质含量
实验原理:蛋白质具有吸收紫外线的性质，其高峰在280nm波长处。
在此波长范围内，吸收峰的光密度值与其浓度成正比。
实验结果：
实验分析：。
生化分析实验课紫外分光光度法测定蛋白质吸收光谱曲线
友情复叙
（1）、需要强调的是：紫外、可见分光光度法测定样品时都需要用一个“空白管”， 它主要是用于仪器校“零点”用。空白管一般又习惯称“零管”和“对照
管”。
（2）、能作为“零管”溶液的条件？一般要求是：被测定的溶质的溶剂作为零管溶 液，但是如果实验本身要求不高或所用溶剂与蒸馏水在某一特定的波长吸 光度差异很小（比较过），也可以直接用蒸馏水甚至自来水代替。
紫外分光光度法
测定蛋白质吸收光谱曲线
一 实验原理
蛋白质所含有的一些芳香族氨基酸（主要是苯丙氨酸，酪氨 酸）具有共轭双键结构能够产生π→π﹡及n→π﹡类型的电子跃迁， 因此能够在近紫外光区产生光吸收，并且在280 nm波长处有一特征吸收 峰。利用这一特性，通过对蛋白质紫外吸收光谱曲线的测定，可以进行 定性分析。
0 240 250 260 270 280 290 300 310
波长（nm）
吸光度(A)
吸光度(A)
图1、牛血清白蛋白在250—300 nm波长吸收光谱曲线图
牛血清白蛋白紫外吸收光谱曲线
0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
0 240 250 260 270 280 290 300 310 波长（nm）
5-2、蛋白质的紫外吸收光谱曲线的制作
紫外分光光度法测定蛋白质的含量
１ ． ３ 方 法
１ ． ３ ． １ 吸收 曲线 的绘 制
１ ． ３ ． ３ 待 测 样 品 的 测 定
取２ ｍＬ的待测蛋 白质溶液 ，用 ０ ． ９ ％的 Ｎａ Ｃ １ 溶液稀 释至
１ ０ ｍＬ ， 按上述 方法测定 ２ ７ ９ ｎ ｌ ｎ处的吸光度值 。 平行测定三次 。 结果 见表 ３ 。
＝
０ ． ６ ０ ０ ｍｇ ／ ｍＬ；样 品标准偏差 ｓ ＝ ［ ∑ （ ｘ 一 ｘ ） ／ （ ｎ 一 １ ） ＝ ０ ． ０ ７ ８ ；相对
标准偏差 Ｓ ｒ ＝ Ｓ ／ ｘ ＝ Ｏ ． ０ ２ ６ 。
２ ． ２ 结 果分 析
２ ＿ ２ ． １ 影 响 本 测 定 方 法 的 因 素
ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ． Ｔｈ ｉ ｓ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ｔ ｅ ｓ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ｂ ｙ ＵＶ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ． Ａｃ ｃ ｏ ｒ ｄ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｉ ｓ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ． Ｗｅ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ａ ｎ ｄ ｓ ｕ ｍｍａ ｒ ｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｔ ｒ ａ ｉ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ． Ｉ ｔ ｗａ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗａ ｓ ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ， ｒ ａ ｐ ｉ ｄ ｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｆ ｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｉ ｎ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ． Ｅｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ａ ｌ ｌ ｙ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｏｒ ｆ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｍ ｉ ｒ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｌ ｏ ｗ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ． Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ： ＵＶ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｃ ；ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ；ｄ ｅ ｔ ｅ ｍ ｉ ｒ ｎ ｉ ｎ ｇ
紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理
紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理一、前言蛋白质是生物体内重要的有机分子，其浓度的准确测定对于生物学、医学等领域研究具有重要意义。
紫外分光光度法是一种常用的测定蛋白质浓度的方法，本文将详细介绍紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理。
二、概述紫外分光光度法是利用物质吸收紫外线的特性来测定其浓度的方法。
在波长范围为190~400 nm内，蛋白质中含有若干种氨基酸，其中色氨酸和酪氨酸对紫外线具有较强吸收。
因此，可以通过在这个波长范围内测量蛋白质溶液吸收光强度来计算出其浓度。
三、实验步骤1. 制备标准曲线首先需要制备一系列不同浓度的蛋白质标准溶液，并在190~400 nm 范围内分别记录它们的吸收值。
然后将这些数据绘制成标准曲线。
2. 测定待测样品的吸光度将待测样品溶液放入紫外分光光度计中，记录在190~400 nm范围内的吸收值。
3. 计算浓度根据标准曲线和待测样品的吸收值，可以计算出待测样品的蛋白质浓度。
四、原理解析1. 色氨酸和酪氨酸的吸收特性在紫外分光光度法中，色氨酸和酪氨酸是蛋白质中两种主要的吸收物质。
它们在190~280 nm范围内具有较强的吸收能力，其中色氨酸最大吸收波长为280 nm，而酪氨酸则在270 nm左右有一个较强的吸收峰。
这些特性使得紫外分光光度法能够对蛋白质进行准确的浓度测定。
2. 比尔-朗伯定律比尔-朗伯定律是紫外分光光度法能够准确测定物质浓度的基础。
该定律指出，在单色光照射下，物质对于该波长的吸收与其浓度成正比。
具体公式为：A = εcl其中，A表示吸光度，ε表示摩尔吸光系数，c表示物质浓度，l表示光程长度。
3. 摩尔吸光系数的计算摩尔吸光系数是紫外分光光度法中的一个重要参数，它反映了单位浓度的物质对于特定波长的光线的吸收能力。
对于蛋白质来说，摩尔吸光系数可以通过氨基酸组成和序列确定。
一般情况下，可以使用文献中已知的摩尔吸光系数进行计算。
4. 标准曲线和浓度计算通过制备一系列不同浓度的蛋白质标准溶液，并在190~400 nm范围内分别记录它们的吸收值，可以绘制出标准曲线。
紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理
紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理介绍紫外分光光度法是常用的一种测定蛋白质浓度的方法。
本文将详细介绍紫外分光光度法的原理以及其在蛋白质浓度测定中的应用。
紫外分光光度法原理紫外分光光度法利用蛋白质溶液对紫外光的吸收特性进行测量，从而确定蛋白质的浓度。
蛋白质分子中的色氨酸（Trp）、苯丙氨酸（Phe）和酪氨酸（Tyr）等芳香族氨基酸在紫外光区域具有吸收峰，通过测量吸光度可以间接测定蛋白质的浓度。
实验步骤以下是使用紫外分光光度法测定蛋白质浓度的一般实验步骤：1. 制备蛋白质样品制备含有待测蛋白质的溶液样品。
确保溶液浓度适中，避免过高或过低浓度对测定结果产生影响。
2. 预热紫外分光光度计打开紫外分光光度计并进行预热，使其达到稳定的工作温度。
3. 校准光程使用标准样品校准紫外分光光度计的光程，确保准确测量待测样品的吸光度。
4. 测定吸光度将待测样品倒入光度池，使用紫外分光光度计测量样品溶液在特定波长下的吸光度。
常用波长为280nm，其对色氨酸具有最大吸收峰。
5. 绘制标准曲线制备一系列已知浓度的蛋白质标准溶液，分别测定它们的吸光度。
利用这些测定值绘制标准曲线，用于计算待测样品的蛋白质浓度。
6. 计算蛋白质浓度根据标准曲线，计算出待测样品的蛋白质浓度。
根据不同的光吸收系数和波长，可以得出不同氨基酸的摩尔吸光系数，再根据摩尔吸光系数进行计算。
紫外分光光度法的优势紫外分光光度法具有以下优势：1.灵敏度高：对浓度较低的蛋白质样品也能够进行准确测量。
2.快速便捷：测量过程简单，不需要复杂操作。
3.非破坏性：样品在测量过程中不受损伤，可以进行进一步的分析。
紫外分光光度法的局限性紫外分光光度法也存在一定的局限性：1.干扰物质：一些样品中可能含有其他吸收波长与蛋白质相近的物质，会对测定结果产生干扰。
2.重复性：在批量测定时，光度池的装填和清洗对结果的重复性有一定影响。
3.波长选择：根据不同蛋白质的吸收特性，选择适当的波长进行测量，否则会导致测定结果不准确。
蛋白浓度的测定
蛋白质浓度测定：紫外分光光度法OD280/OD260＜1.5时，用Lowry-Kalokar公式：样本蛋白质含量(mg/m1)＝1.45*OD280一0.74*OD260OD280/OD260﹥1.5时，用Lamber-Beer定律计算：样本蛋白质含量(mg/m1)= OD280/K×L＝（OD280/6.3×1）×10g/L 本实验样品：牛血清白蛋白E1%cm＝6.3（100ml/cm.g）K：克分子消光系数；E1%cm：百分比吸光度的吸光系数；注：不同蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量有差异，故标准管与测定管的蛋白质氨基酸组成应相似，以减小误差。
OD是optical density（光密度）的缩写， OD＝1og（1/trans），其中trans 为检测物的透光值。
吸光度：吸光度，absorbance，是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数，影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等吸光系数与入射光的波长以及被光通过的物质有关。
只要光的波长被固定下来，同一种物质，吸光系数就不变。
当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，光的强度减弱。
吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。
吸光度用A表示， A＝abc，其中a为吸光系数，单位L/（g·cm），b为液层厚度（通常为比色皿的厚度），单位cm ，c为溶液浓度，单位g/L。
影响吸光度的因数是b和c。
a是与溶质有关的一个常量，温度通过影响c，而影响A。
一般来说OD260代表核酸的吸光度，OD280代表蛋白质的吸光度，OD230代表其他杂质（多糖等）的吸光度。
A260/A280与OD260/OD280的意思是一样的。
A代表吸光值，而OD是光密度值，一个意思。
A260/280比值一度成为判断核酸纯度的唯一通用标准，纯的DNA一般在1.8~2.0之间；后来发现在抽提过程中使用的许多试剂影响 A260和A280读数；同时，对同一样品10倍数量级稀释后测定吸光值发现，分光光度计的吸光值仅在一定的区域是线性的。
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紫外分光光度法测蛋白质含量
一、实验目的
1.学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。2.掌握紫外分光光度法测定蛋白质含
量的实验技术。
3.掌握tu-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。
二、 实验原理
1.紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能
的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。
紫外线：10-400nm
可见光：400-780nm（可被人们的眼睛所感觉）特点：带光谱、分子光谱应用：定性
分析-最大吸收波长；
定量分析-朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）A.定性分析原理：
吸收曲线：吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状.b.定量分析原理：
根据Lambert-Beer定律：a=εBC，当入射光波长λ时，当光程B恒定时，有色物质
的吸光度a与一定浓度范围内物质的浓度C成正比。
定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度a为纵坐标，浓度c为横坐标
的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
c、 仪器组件：
各种类型的紫外-可见分光光度计，如下图所示，从总体上来说是由五个部分组成，
即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。
本实验的原理是紫外分光光度法
（1）蛋白质可作定量分析的原因：蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双
键，所以蛋白质溶液在275--280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。在一
在固定的浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，符合
朗伯-比尔定律，因此可以用于定量分析。该方法测定的蛋白质浓度范围为0.1-1.0mg/ml。
（2）此种方法测量的准确度差一点的原因：由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含
量不同，所处的微环境也不同，所以不同蛋白质溶液在280nm的光吸收职也不同。据初步
统计，浓度为1.0mg/ml的1800种蛋白质及蛋白质亚基在280nm的吸光度在0.3―3.0之
间，平均值为1.25+/-0.51。所以此种方法测量的准确度差一点。
（3） 嘌呤、嘧啶等核酸干扰时的经验公式：如果样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外
线的核酸，在280nm处测量蛋白质含量时会有很大的干扰。核酸在260nm处的光吸收比
280nm处强，而蛋白质的光吸收则相反。因此，280nm和260nm之间的吸收差可用于计算
蛋白质含量。通常使用以下经验公式：
蛋白质浓度（mg/ml）=1.45a280-0.74a260
（A280和a260分别是在280nm和260nm处测量的吸光度值）溶液中的蛋白质含量也
可以通过以下经验公式直接计算：蛋白质浓度（mg/ml）=f*A280*D*1/D
其中a280为蛋白质溶液在280nm处测得的吸光度值；d为石英比色皿的厚度（cm）;d
为溶液的稀释倍数；f为校正因子
（4） 测定稀溶液中蛋白质浓度的经验公式：蛋白质的肽键在200-250nm处具有较强
的紫外吸收。在一定范围内，光吸收强度与浓度成正比。波长越短，光吸收越强。如果选
择215nm，则可以减少干扰和光散射。与单波长测定相比，利用215nm和225nm的光吸收
差可以减小非蛋白质组分引起的误差。因此，可以选择215nm和225nm光吸收差分法测定
稀溶液中的蛋白质浓度。通常使用以下经验公式：
蛋白质浓度（mg/ml）=0.144（a215-a225）
（a215和A225分别是在215nm和225nm处测量的蛋白质溶液的吸光度值。III.仪器
和试剂
仪器：tu-1901紫外-可见分光光度计，比色管（10ml的5个），吸量管。试剂：标
准蛋白质溶液：5.00mg/ml溶液、0.9%nacl溶液，待测蛋白质溶液（牛血清白蛋白）。
四、 实验步骤1基本操作
（1）启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器,预热半小时。
（2） 用移液管吸取0.6、0.8、1.0、1.2和1.4ml 5，将00mg/ml标准蛋白溶液放入
5个10ml比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。使用1cm石英反应杯和
0.9%NaCl溶液作为参考溶液（参考溶液无法取出）
（3）在工作界面上选择测量项目为光谱扫描，设置扫描参数（起点：400nm，终点：
250nm，速度：中，间隔：1.0nm，单次扫描）
（4） 将两个装满0.9%NaCl溶液的1cm石英反应杯放入测量池进行基线扫描，然后
选择测量量，进行零点校准，然后返回光谱扫描。
2.吸收曲线的制作:（找出最大吸收波长）
用0.3mg/ml蛋白质溶液替换前反应杯中的溶液，点击开始扫描，得到以下吸收曲线。
从曲线可以看出，该标准蛋白质溶液的最大吸收波长为278nm，该波长下的吸光度为
0.1984。
3.标准曲线的制作：
在工作界面上选择测量项目，设置光度测量的测量条件（测量波长：278.00nm）。
用1cm石英比色皿，以0.9%nacl溶液为参比，在278nm处分别测定以上所配标准溶
液的吸光度a278，记录如下：浓度（mg/ml）
a2780.340.50.60.70.0.0.0.0.0.19712532322237584382以蛋白质浓度为横坐标，吸光度
为纵坐标绘制标准曲线：4.样品测定：
制备三份待测蛋白质溶液（将2.0ml待测蛋白质溶液放入三个10ml比色管中，用
0.9%NaCl溶液稀释至刻度），按上述方法在278nm处测量吸光度。吸光度分别为0.3906、
0.3765和0.3848。平均值为a278=0.3840。根据样品溶液的吸光度，待测蛋白质的浓度为
标准曲线的0.6101mg/ml。转化后待测蛋白质溶液的浓度为C=0.6101mg/ml？
10ml/2.0ml=3.0505mg/ml
五、注意事项准备工作：
（1） 测量前，机器应预热半小时。
（2）溶液一定要配制准确,以防影响实验效果,保证点在一条直线上。（3）由于蛋白
质的紫外吸收峰常因ph值的改变而改变，故进行样品测定时的ph最好与标准曲线制作时
的ph值一致。
测量工作：
（1）吸收曲线绘制前必须进行光谱的扫描。
（2）. 在制作定量标准曲线之前，必须选择最大吸收波长，以确保高灵敏度。（3）
在实际操作中，反应杯在使用过程中应保持清洁，不得触摸反应杯的光滑表面，以免摩擦
影响透光。
六、思考题
1.紫外分光光度法测定蛋白质的方法有哪些缺点和优点？受哪些因素影响和限制？
答：优点：方法操作简便、迅速、不需要复杂和昂贵的设备，不消耗样品，测定后仍
能回收使用，低浓度的盐和大多数缓冲溶液不干扰测定。
缺点：准确性和灵敏度差。干扰物质很多：酪氨酸和色氨酸含量与标准蛋白质差异较
大的蛋白质测定存在一定误差。如果样品中含有嘌呤、嘧啶等紫外线吸收物质，会产生很
大的干扰
2.若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？
答：因为核酸在260nm处的光吸收比蛋白质在280nm处的光吸收强，但事实恰恰相反。
因此，280nm和260nm之间的吸收差可用于计算蛋白质含量。通常使用以下经验公式：
蛋白质浓度（mg/ml）=1.45a280-0.74a260
（A280和a260分别是在280nm和260nm处测量的吸光度值）溶液中的蛋白质含量也
可以通过以下经验公式直接计算：蛋白质浓度（mg/ml）=f*A280*D*1/D 7。实验总结
本次实验进行得很顺利，绘制标准曲线时各个点都落在直线上，实验达到了预期的目
的。