奶牛孕酮间接竞争ELISA检测方法的建立
体况对奶牛分娩行为、血浆激素含量及其犊牛初生重、初乳采食量的影响
动物营养学报２０２０，３２（８）：３７１７⁃３７２４ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ㊀ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０２０．０８．０３０体况对奶牛分娩行为㊁血浆激素含量及其犊牛初生重㊁初乳采食量的影响靳㊀爽㊀李聪聪㊀顾宪红∗（中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京１００１９３）摘㊀要：本试验旨在研究不同体况奶牛分娩行为和血浆激素含量的差异并探究奶牛体况对新生犊牛初生重及初乳采食量的影响㊂试验选取３６头健康的产母犊的头胎荷斯坦奶牛，依据分娩时的体况评分（ＢＣＳ）分为体况肥胖组（３．７５ɤＢＣＳɤ４．２５）２０头㊁体况正常组（３．２５ɤＢＣＳɤ３．５０）１６头㊂录像记录奶牛分娩时的行为，检测奶牛血浆激素含量，记录犊牛的初生重和初乳采食量㊂结果表明：１）体况肥胖组奶牛分娩过程中出现腹部收缩到犊牛产出的时间间隔较体况正常组奶牛显著增长（Ｐ＜０．０５），羊膜囊可见到犊牛产出时间间隔有高于体况正常组奶牛的趋势（Ｐ＝０．０９２），露蹄后至犊牛产出这段时间里的起卧次数也有高于体况正常组奶牛的趋势（Ｐ＝０．０７６）㊂２）体况肥胖组奶牛血浆中催乳素含量显著低于体况正常组奶牛（Ｐ＜０．０５），血浆中催产素含量较体况正常组奶牛有降低的趋势（Ｐ＝０．０６０），血浆中皮质醇含量显著高于体况正常组奶牛（Ｐ＜０．０５）㊂３）体况肥胖组总采食６Ｌ初乳的犊牛比例较体况正常组有减少的趋势（Ｐ＝０．０９１）㊂综上所述，相比体况正常奶牛，分娩时体况肥胖奶牛应激反应较大，产程较长，所产犊牛初乳采食量较低，影响其健康，因此应加强围产期奶牛的体况管理，避免过肥㊂关键词：体况；分娩行为；激素；新生犊牛中图分类号：Ｓ８２３．９＋１㊀㊀㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀㊀㊀文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０２０）０８⁃３７１７⁃０８收稿日期：２０２０－０３－０７基金项目：奶牛产业技术体系北京市创新团队项目（ＢＡＩＣ０６⁃２０２０）；中国农业科学院科技创新工程（ＡＳＴＩＰ⁃ＩＡＳ０７）作者简介：靳㊀爽（１９９５ ），女，河北廊坊人，硕士研究生，从事畜禽应激与健康养殖研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｓｈｕａｎｇｊｉｎｊｓ＠ｑｑ．ｃｏｍ∗通信作者：顾宪红，研究员，博士生导师，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｇｕｘｉａｎｈｏｎｇ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ㊀㊀体况评分（ｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｃｏｒｅ，ＢＣＳ）是评价奶牛能量代谢状况或脂肪沉积程度的一种方法［１］㊂体况过肥或过瘦，均会对奶牛的繁殖性能㊁生产性能㊁健康及福利水平等造成不利影响㊂对各个生理阶段的奶牛的体况进行评分，有助于发现饲养管理中存在的问题，提升牛场管理水平㊂分娩阶段是奶牛养殖过程中的重要环节，同时也是很危险的一个时期［２］，有可能出现产道损伤㊁胎衣不下㊁产后瘫痪㊁乳房炎㊁子宫炎等疾病，影响母牛的健康［３－４］㊂对于分娩阶段的奶牛来说，保持适宜的体况十分重要㊂研究表明，如果母牛过于肥胖，可能会影响全身肌肉的紧张性，使分娩的动力不足，从而导致胎儿排出困难［５］㊂相较于ＢＣＳɤ３．５的奶牛，ＢＣＳ＞３．５的奶牛产犊过程中羊膜囊破裂到犊牛产出的时间间隔高于１２０ｍｉｎ的比例增加［６］，这一阶段是分娩过程中最重要的一个环节，大部分的难产发生在此阶段［７］，易对母牛和犊牛造成伤害㊂Ｃｉｖｅｌｅｋ等［８］研究发现，ＢＣＳ（３．９６ʃ０．３１）较高的母牛较ＢＣＳ（２．７５ ３．５０）适宜的母牛出现难产的比例增高㊂但是Ｂｅｒｒｙ等［９］认为，ＢＣＳ与奶牛难产的发生率没有显著相关关系㊂以往报道对分娩时期体况是否会影响难产的发生率关注较多，鲜有对不同体况奶牛分娩行为及其所产新生犊牛状况的研究㊂因此，本试验拟探究分娩奶牛的体况对其分娩行为㊁血浆生殖激素和应激激素含量的影响，并探究是否会对新生犊牛产生影㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３２卷响，以期为生产实践中奶牛管理提供依据㊂１㊀材料与方法１．１㊀试验时间与地点㊀㊀本试验于２０１９年２ ４月在山东省曹县银香伟业集团百澳国际牧场进行㊂１．２㊀试验设计及饲养管理㊀㊀试验选取３６头健康的头胎荷斯坦奶牛（所产犊牛均为母犊），依据分娩时奶牛的ＢＣＳ分为体况肥胖组（３．７５ɤＢＣＳɤ４．２５）２０头㊁体况正常组（３．２５ɤＢＣＳɤ３．５０）１６头㊂待产奶牛在预产期前１周左右随机饲养在２个相邻的产犊圈舍（约１５ｍˑ１２ｍ）中，每个产犊圈舍中奶牛头数为１２头左右㊂每天０８：００㊁１６：３０饲喂全混合日粮（ＴＭＲ），自由采食，自由饮水㊂１．３㊀样品采集与指标检测１．３．１㊀ＢＣＳ的评定㊀㊀依据Ｗｉｌｄｍａｎ等［１０］和Ｅｄｍｏｎｓｏｎ等［１１］的奶牛ＢＣＳ标准，采用５分制ＢＣＳ系统进行体况评定，以０．２５作为１个增量单位，１表示奶牛过度消瘦，５表示过度肥胖㊂由经验丰富的牧场人员通过视觉评估和触摸（短肋㊁腰背和尻部等部位）相结合的方式，对试验牛体况进行评分㊂１．３．２㊀血浆激素含量检测㊀㊀于奶牛分娩后用肝素钠抗凝的采血管于尾静脉采血１０ｍＬ，室温静置３０ｍｉｎ，３０００ˑｇ离心１５ｍｉｎ，将血浆分装至１．５ｍＬ离心管中，置于－２０ħ冰箱中保存待测㊂㊀㊀采用放射免疫（ＲＩＡ）法测定血浆中催乳素（ｐｒｏｌａｃｔｉｎ，ＰＲＬ）㊁孕酮（ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ，Ｐ）㊁睾酮（ｔｅｓ⁃ｔｏｓｔｅｒｏｎｅ，Ｔ）㊁雌二醇（ｅｓｔｒｏｎｅ，Ｅ２）㊁前列腺素Ｅ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＥ２，ＰＧＥ２）含量，试剂盒由北京北方生物技术研究所有限公司提供㊂血浆中催产素（ｏｘｙｔｏｃｉｎ，ＯＴ）㊁肾上腺素（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ，ＥＰＩ）㊁去甲肾上腺素（ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ，ＮＥ）㊁皮质醇（ｃｏｒｔｉｓｏｌ，ＣＯＲ）含量采用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法测定，试剂盒购于上海江莱生物科技有限公司㊂１．３．３㊀行为学指标的观测与记录㊀㊀试验期间通过２４ｈ视频监控系统记录奶牛产犊时的行为，每个产犊圈舍中安装有１个球形摄像机（海康威视，杭州），调整摄像头角度使视野覆盖整个圈舍，将拍摄视频定时传输至移动硬盘存储，试验结束后回放录像进行产犊时期行为观测㊂㊀㊀观看录像过程中记录分娩母牛腹部第１次出现节律性收缩㊁阴门处首次露出羊膜囊㊁阴门处首次露出犊牛蹄㊁犊牛整个身体从产道排出或仅有一侧牛蹄未从产道排出的时间点以及母牛开始舔舐犊牛的时间点，记录阴门处首次露出犊牛蹄至犊牛产出这段时间母牛的起卧次数［１２］㊂㊀㊀在观看录像过程中，由于奶牛之间互相遮挡以及奶牛躺卧与站立的角度问题等原因，未能观察到体况肥胖组１０头㊁体况正常组６头奶牛的上述所有行为，因此在行为分析中体况肥胖组ｎ＝１０，体况正常组ｎ＝１０㊂１．３．４㊀新生犊牛体重㊁初乳采食量的测定㊀㊀犊牛出生后饲喂初乳之前进行称重㊂犊牛出生后２４ｈ内用犊牛奶瓶饲喂３次初乳，每次提供２Ｌ初乳，共为犊牛提供６Ｌ初乳，分别记录犊牛３次采食初乳的量㊂第１次采食的初乳为其所对应分娩母牛所产，第２㊁３次提供混合初乳供犊牛采食㊂犊牛３次采食初乳量之和记为总采食初乳量㊂１．４㊀数据统计与分析㊀㊀试验数据采用ＳＰＳＳ２５．０统计软件进行分析，采用ｔ检验对奶牛分娩行为㊁血浆激素含量㊁犊牛初生重数据进行分析比较，结果以 平均值ʃ标准误 表示；依据第１次采食初乳量统计体况正常组㊁体况肥胖组中第１次采食初乳量＜２Ｌ㊁第１次采食初乳量＝２Ｌ的犊牛头数，依据总采食初乳量统计体况正常组㊁体况肥胖组中总采食初乳量＜６Ｌ㊁总采食初乳量＝６Ｌ的犊牛头数，采用卡方检验（Ｃｈｉ⁃ｓｑｕａｒｅｄｔｅｓｔ）对第１次采食２Ｌ初乳以及总采食６Ｌ初乳的犊牛比例进行分析，结果以百分比（％）表示㊂以Ｐ＜０．０５表示差异显著，０．０５ɤＰ＜０．１０表示有显著差异的趋势㊂２㊀结㊀果２．１㊀奶牛分娩行为㊀㊀由表１可知，体况肥胖组奶牛分娩过程中出现腹部收缩到犊牛产出的时间间隔较体况正常组奶牛显著增长（Ｐ＜０．０５），羊膜囊可见到犊牛产出的时间间隔有高于体况正常组奶牛的趋势（Ｐ＝０．０９２），露蹄后至犊牛产出这段时间里的起卧次数也有高于体况正常组奶牛的趋势（Ｐ＝０．０７６）㊂露蹄到犊牛产出的时间间隔及产后母牛站立到舔舐犊牛的时间间隔在体况肥胖组与体况正常组奶牛之间无显著差异（Ｐ＞０．０５）㊂８１７３８期靳㊀爽等：体况对奶牛分娩行为㊁血浆激素含量及其犊牛初生重㊁初乳采食量的影响表１㊀不同体况奶牛分娩行为Ｔａｂｌｅ１㊀Ｃａｌｖｉｎｇｂｅｈａｖｉｏｒｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｃｏｗｓ项目Ｉｔｅｍｓ体况正常组ＭｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（ｎ＝１０）体况肥胖组ＨｉｇｈＢＣＳｇｒｏｕｐ（ｎ＝１０）均值标准误ＳＥＭＰ值Ｐ⁃ｖａｌｕｅ出现腹部收缩到犊牛产出的时间间隔Ｔｉｍｅｉｎｔｅｒｖａｌｆｒｏｍｔｈｅｏｎｓｅｔｏｆｒｈｙｔｈｍｉｃａｌａｂｄｏｍｉｎａｌｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎｓｔｏｔｈｅｂｉｒｔｈｏｆｔｈｅｃａｌｆ／ｍｉｎ７９．２０ʃ８．７１ｂ１０９．２０ʃ５．５１ａ７．２９００．０２０羊膜囊可见到犊牛产出的时间间隔Ｔｉｍｅｉｎｔｅｒｖａｌｆｒｏｍａｖｉｓｉｂｌｅａｍｎｉｏｔｉｃｓａｃｔｏｔｈｅｂｉｒｔｈｏｆｔｈｅｃａｌｆ／ｍｉｎ４７．３３ʃ５．４２６２．８６ʃ６．８１６．０６００．０９２露蹄到犊牛产出的时间间隔Ｔｉｍｅｉｎｔｅｒｖａｌｆｒｏｍｖｉｓｉｂｌｅｃａｌｆｆｅｅｔｔｏｔｈｅｂｉｒｔｈｏｆｔｈｅｃａｌｆ／ｍｉｎ４１．３３ʃ４．６５５４．８６ʃ７．３６５．８８３０．１２７露蹄后至犊牛产出这段时间里的起卧次数Ｔｈｅｔｉｍｅｓｏｆｐｏｓｔｕｒｅｃｈａｎｇｅｆｒｏｍｓｔａｎｄｉｎｇｔｏｌｙｉｎｇｆｒｏｍｖｉｓｉｂｌｅｃａｌｆｆｅｅｔｔｏｔｈｅｂｉｒｔｈｏｆｔｈｅｃａｌｆ／次１．６７ʃ０．４４４．５０ʃ１．３００．９２１０．０７６站立到舔舐犊牛的时间间隔Ｔｉｍｅｉｎｔｅｒｖａｌｆｒｏｍｓｔａｎｄｉｎｇｔｏｌｉｃｋｉｎｇｃａｌｆ／ｓ３６．５６ʃ１７．６６１５．２５ʃ６．３２１５．３６２０．７８９㊀㊀同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著（Ｐ＞０．０５），不同字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）㊂下表同㊂㊀㊀Ｉｎｔｈｅｓａｍｅｒｏｗ，ｖａｌｕｅｓｗｉｔｈｎｏｌｅｔｔｅｒｏｒｔｈｅｓａｍｅｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５），ｗｈｉｌｅｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｓａｍｅａｓｂｅｌｏｗ．２．２㊀奶牛血浆生殖激素含量㊀㊀由表２可知，体况肥胖组奶牛血浆中催乳素含量显著低于体况正常组（Ｐ＜０．０５）；体况肥胖组奶牛血浆中催产素含量较体况正常组奶牛有降低的趋势（Ｐ＝０．０６０）㊂血浆中孕酮㊁睾酮㊁雌二醇㊁前列腺素含量在体况肥胖组与体况正常组奶牛之间均无显著差异（Ｐ＞０．０５）㊂表２㊀不同体况奶牛血浆生殖激素含量Ｔａｂｌｅ２㊀Ｐｌａｓｍａｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｃｏｗｓ项目Ｉｔｅｍｓ体况正常组ＭｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（ｎ＝１６）体况肥胖组ＨｉｇｈＢＣＳｇｒｏｕｐ（ｎ＝２０）均值标准误ＳＥＭＰ值Ｐ⁃ｖａｌｕｅ催乳素ＰＲＬ／（μＩＵ／ｍＬ）１５３．３８ʃ７．１９ａ１２２．９４ʃ５．４９ｂ６．３１６０．００２孕酮Ｐ／（ｐｇ／ｍＬ）３８６．６７ʃ３７．０８４２５．５０ʃ４３．４９４０．２１６０．５０１睾酮Ｔ／（ｐｇ／ｍＬ）５９．３８ʃ４．４２５２．６３ʃ５．８２５．３２２０．３７７雌二醇Ｅ２／（ｐｇ／ｍＬ）５４２．３３ʃ４９．０１４８５．５９ʃ２８．７４４０．１７３０．３２８前列腺素Ｅ２ＰＧＥ２／（ｐｇ／ｍＬ）３８．８４ʃ４．２４３９．０１ʃ３．４８３．８４００．９７７催产素ＯＴ／（ｐｇ／ｍＬ）２７．６１ʃ２．８７２０．５６ʃ２．２５２．５３７０．０６０２．３㊀奶牛血浆应激激素含量㊀㊀由表３可知，体况肥胖组奶牛血浆中皮质醇含量显著高于体况正常组奶牛（Ｐ＜０．０５），血浆中肾上腺素㊁去甲肾上腺素含量在体况肥胖组与体况正常组奶牛之间均无显著差异（Ｐ＞０．０５）㊂２．４㊀新生犊牛初生重及采食初乳情况㊀㊀由图１可知，体况肥胖组总采食６Ｌ初乳的犊牛比例较体况正常组有减少的趋势（Ｐ＝０．０９１）㊂２组奶牛所产犊牛初生重及出生后第１次采食２Ｌ初乳的犊牛比例无显著差异（Ｐ＞０．０５）㊂９１７３㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３２卷表３㊀不同体况奶牛血浆应激激素含量Ｔａｂｌｅ３㊀Ｐｌａｓｍａｓｔｒｅｓｓｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｃｏｗｓ项目Ｉｔｅｍｓ体况正常组ＭｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（ｎ＝１６）体况肥胖组ＨｉｇｈＢＣＳｇｒｏｕｐ（ｎ＝２０）均值标准误ＳＥＭＰ值Ｐ⁃ｖａｌｕｅ肾上腺素ＥＰＩ／（ｐｇ／ｍＬ）６７１．４６ʃ８４．６２６４９．２１ʃ５４．４９６８．７７００．８２１去甲肾上腺素ＮＥ／（ｎｇ／ｍＬ）６．０９ʃ０．７０７．４０ʃ０．８００．７８１０．２４７皮质醇ＣＯＲ／（ｎｇ／ｍＬ）３２．２７ʃ２．５５ｂ４２．４１ʃ３．４２ａ３．１０７０．０３０㊀㊀对新生犊牛初生重进行ｔ检验，对第１次采食２Ｌ初乳的犊牛比例及总采食６Ｌ初乳的犊牛比例进行卡方检验㊂㊀㊀Ｔ⁃ｔｅｓｔｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｆｏｒｂｉｒｔｈｗｅｉｇｈｔｏｆｎｅｗｂｏｒｎｃａｌｖｅｓ，ａｎｄＣｈｉ⁃ｓｑｕａｒｅｔｅｓｔｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｆｏｒｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｃａｌｖｅｓｗｉｔｈ２Ｌｃｏｌｏｓｔｒｕｍｉｎｔａｋｅａｔｔｈｅｆｉｒｓｔｆｅｅｄｉｎｇ，ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｃａｌｖｅｓｗｉｔｈ６Ｌｔｏｔａｌｃｏｌｏｓｔｒｕｍｉｎｔａｋｅ．图１㊀新生犊牛初生重及采食初乳情况Ｆｉｇ．１㊀Ｂｉｒｔｈｗｅｉｇｈｔａｎｄｃｏｌｏｓｔｒｕｍｉｎｔａｋｅｏｆｎｅｗｂｏｒｎｃａｌｖｅｓ３㊀讨㊀论３．１㊀体况肥胖对奶牛分娩行为的影响㊀㊀奶牛的产犊过程包括３个时期：子宫开口期（第１产程）㊁胎儿排出期（第２产程）㊁胎衣排出期（第３产程）㊂本研究对奶牛分娩行为的观察集中于第２产程，在这一阶段，子宫颈充分开张，胎囊及胎儿前置部分进入阴道，母畜通过阵缩和努责将胎儿从产道排出㊂Ｃａｍｐｌｅｒ等［１２］对娟姗奶牛与荷斯坦奶牛的产犊行为进行了观察，发现从腹部收缩到犊牛产出的时间间隔为７９ １５１ｍｉｎ，平均为１１４ｍｉｎ㊂虽然其研究对象既有经产奶牛也有初产奶牛（经产牛的产犊过程比初产牛更为顺利［１３］），但研究中涉及到了顺产㊁轻度助产以及部分中度助产奶牛，因此表现出来的时间间隔稍长㊂Ｓｃｈｕｅｎｅｍａｎｎ等［１４］发现，初产奶牛在顺产的情况下出现腹部收缩到犊牛产出的时间间隔为６６ｍｉｎ，羊膜囊出现到犊牛产出的时间间隔为４５ｍｉｎ，露蹄到犊牛产出的时间间隔为３０ｍｉｎ㊂本研究中各阶段时间较Ｓｃｈｕｅｎｅｍａｎｎ等［１４］的研究得到的时间长，是由于本研究中的部分奶牛经历了轻度助产（由１人在９０ｓ内拉出）㊂本研究发现，体况肥胖０２７３８期靳㊀爽等：体况对奶牛分娩行为㊁血浆激素含量及其犊牛初生重㊁初乳采食量的影响组奶牛分娩过程中出现腹部收缩到犊牛产出的时间间隔相较于体况正常组奶牛显著增长㊂究其原因，可能是由于体况肥胖的奶牛产道脂肪沉积较多，导致产道狭窄，从而使胎儿排出受阻［１５］㊂胎儿排出主要依靠的是子宫阵缩和母体腹壁肌和膈肌收缩的力量，体况肥胖的奶牛可能会出现肌肉乏力现象，使产程加长㊂Ｌａｍｂ等［１６］研究表明，在产犊前４周奶牛以５．４７ｋｍ／ｈ的速度行走１．６ｋｍ／ｄ，每周进行５ｄ，其产犊过程较不运动奶牛更加顺利，建议牛场为干奶牛配备运动场，通过适当的运动避免奶牛体况过肥，增强分娩时肌肉的收缩力㊂３．２㊀体况肥胖对奶牛血浆生殖激素含量的影响㊀㊀分娩启动时，子宫内环境发生了很大变化，就生殖激素而言，分娩时孕激素含量降低，雌激素和前列腺素含量急剧增加，进而促进催产素㊁催乳素以及生长激素（ＧＨ）的分泌，使得子宫平滑肌收缩能力加强，子宫颈变软，宫口扩大而产生分娩动作［１７－１８］㊂催产素是由下丘脑室旁核和视上核合成的一种肽类激素，在分娩过程中起着调节子宫肌收缩㊁缩短产程等作用，是催产的主要激素［１９］㊂本研究发现体况肥胖组奶牛血浆中催产素含量有低于体况正常组奶牛的趋势，这表明体况肥胖可能会减少催产素的分泌㊂本研究对奶牛分娩行为进行了观察，发现体况肥胖组奶牛胎儿排出所需时间较长，这可能与血浆中催产素含量减少有关，催产素含量减少会影响子宫平滑肌的收缩，不利于犊牛从产道产出，因此延长了分娩时长㊂㊀㊀催乳素是一种由垂体前叶分泌的蛋白质激素，在哺乳动物的泌乳㊁繁殖㊁母性行为表达等方面都起着重要作用［２０］㊂Ｂｒｉｄｇｅｓ等［２１］研究发现，通过药物抑制内源性催乳素的释放会阻止大鼠母性行为的表达，外源性注射催乳素会促进大鼠表达母性行为㊂本研究发现体况肥胖组奶牛血浆中催乳素含量显著低于体况正常组奶牛，这表明产犊时体况肥胖可能会抑制奶牛母性行为的表达㊂３．３㊀体况肥胖对奶牛血浆应激激素含量的影响㊀㊀机体受到内外环境应激源的刺激后，会引起下丘脑－垂体－肾上腺（ＨＰＡ）轴和交感肾上腺髓质的活性增强，导致血浆中肾上腺素㊁去甲肾上腺素和促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ）㊁促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）㊁糖皮质激素含量升高㊂分娩时剧烈的疼痛以及胎儿和母体的相互作用会引起分娩母牛血浆中肾上腺素和去甲肾上腺素含量升高以及皮质醇㊁葡萄糖含量等发生变化［２２］㊂本研究发现体况肥胖组奶牛与体况正常组奶牛血浆中肾上腺素与去甲肾上腺素含量无显著差异，血浆中皮质醇含量在２组之间存在显著差异㊂皮质醇是由肾上腺皮质分泌的对糖类代谢具有最强作用的激素，是机体受到压力情况下分泌的一种维持生物体正常生理机能的激素㊂Ｐｅｔｒｏｗｓｋｉ等［２３］报道，机体皮质醇含量的高低可以有效反映动物的应激程度㊂分娩过程中奶牛会遭受剧烈疼痛，产生很大的应激，如果发生难产等情况，产程加长，应激程度又会进一步加剧［２４－２５］㊂Ｈｏｒｓｔ等［２６］研究发现，奶牛在分娩期间血液中皮质醇含量可达平时的３ ４倍㊂本研究发现，体况肥胖组奶牛血浆中皮质醇含量显著高于体况正常组奶牛，这提示我们分娩时体况肥胖的奶牛经历了更大的应激，这可能源于较长的产犊时间，体况肥胖组奶牛产犊时间较体况正常组显著增长，其经历的应激时间更长㊂体况肥胖组奶牛较多的起卧次数也反映了它们较高的应激状态㊂３．４㊀母牛体况肥胖对新生犊牛初生重及初乳采食量的影响㊀㊀初生重反映了犊牛在母体内的生长发育状况，也与其出生后的生长性能和生产性能发挥息息相关㊂犊牛的初生重受多种因素的影响，包括性别㊁胎次㊁产犊季节㊁妊娠天数㊁公牛以及母体营养状况等［２７－２８］㊂在人类研究中发现，产妇孕前超重或肥胖会增加高体质量儿与巨大儿的风险［２９］㊂关于母牛体况对胎儿初生重的影响报道不一，Ｓｐｉｔｚｅｒ等［３０］比较了产犊时ＢＣＳ分别为４㊁５㊁６（９分制体况评分系统）的肉牛所产犊牛情况，发现随着ＢＣＳ增大犊牛初生重显著升高，但Ｍｕｌｌｉｎｉｋｓ等［３１］研究发现，产犊时ＢＣＳ分别为４㊁５㊁６（９分制体况评分系统）的奶牛所产犊牛初生重没有显著差异㊂本研究中不同体况奶牛所产犊牛初生重没有显著差异，但相对于上述研究本试验涉及到的样本量较少，今后可以通过大样本量统计来对此进行研究㊂㊀㊀由于胎盘的屏障作用，犊牛在母牛体内不能获得抗体，新生犊牛不具备主动免疫能力，因此只能通过采食初乳来获得抗体建立被动免疫［３２］㊂犊牛出生后，足量优质初乳的及时摄入是影响犊牛的健康和成活率的重要因素［３３］㊂被动免疫的成功建立对后备牛的培育具有重要意义，能够提高犊１２７３㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３２卷牛日增重，减少断奶前犊牛的发病率和死亡率［３４－３５］，提升奶牛第１泌乳期和第２泌乳期的产奶量［３６］㊂Ｖａｓｓｅｕｒ等［３７］研究表明犊牛自由采食初乳量主要是受犊牛初生重和活力影响㊂本研究中２组新生犊牛初生重没有显著差异，但是体况肥胖组奶牛所产犊牛在２４ｈ内总采食初乳量有低于体况正常组奶牛的趋势，反映出了肥胖奶牛所产新生犊牛的活力较差㊂这可能是由于体况肥胖奶牛皮下脂肪沉积较多，阻碍胎盘营养传输，导致胎儿营养吸收受限，造成犊牛活力下降［３８］；此外，体况肥胖奶牛产犊时间较长，这也会对新生犊牛的活力造成不利影响［３９］㊂４㊀结㊀论㊀㊀综上所述，相比体况正常奶牛，分娩时体况肥胖奶牛应激反应较大，产程较长，所产犊牛初乳采食量较低，影响其健康，因此应加强围产期奶牛的体况管理，避免过肥㊂参考文献：［１］㊀李吉楠，孙鹏，覃春富，等．体况评分在奶牛饲养管理上应用的研究进展［Ｊ］．中国畜牧兽医，２０１３，４０（１０）：１１５－１１９．［２］㊀ＭＡＩＮＡＵＥ，ＭＡＮＴＥＣＡＸ．Ｐａｉｎａｎｄｄｉｓｃｏｍｆｏｒｔｃａｕｓｅｄｂｙｐａｒｔｕｒｉｔｉｏｎｉｎｃｏｗｓａｎｄｓｏｗｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄＡｎｉｍａｌＢｅｈａｖｉｏｕｒＳｃｉｅｎｃｅ，２０１１，１３５（３）：２４１－２５１．［３］㊀ＢＡＲＴＯＬＯＭＥＪＡ，ＫＨＡＬＬＯＵＢＰ，ＤＥＬＡＳＯＴＡＲＬ，ｅｔａｌ．ＳｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｄａｉｒｙｃｏｗｓａｔｈｉｇｈｒｉｓｋｆｏｒｐｏｓｔｐａｒｔｕｍｍｅｔｒｉｔｉｓａｎｄｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｅｎｄｏｍｅｔｒｉｔｉｓｉｎＡｒｇｅｎｔｉｎａ［Ｊ］．ＴｒｏｐｉｃａｌＡｎｉ⁃ｍａｌＨｅａｌｔｈａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，２０１４，４６（１）：７９－８５．［４］㊀ＬＥＢＬＡＮＣＳＪ．Ｐｏｓｔｐａｒｔｕｍｕｔｅｒｉｎｅｄｉｓｅａｓｅａｎｄｄａｉｒｙｈｅｒｄｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ：ａｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．ＴｈｅＶｅｔ⁃ｅｒｉｎａｒｙＪｏｕｒｎａｌ，２００８，１７６（１）：１０２－１１４．［５］㊀张健，黄雪娇．奶牛发生难产的原因分析以及预防方法介绍［Ｊ］．现代畜牧科技，２０１８（２）：５３．［６］㊀ＧＵＮＤＥＬＡＣＨＹ，ＥＳＳＭＥＹＥＲＫ，ＴＥＬＴＳＣＨＥＲＭＫ，ｅｔａｌ．Ｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓｆｏｒｐｅｒｉｎａｔａｌｍｏｒｔａｌｉｔｙｉｎｄａｉｒｙｃａｔｔｌｅ：ｃｏｗａｎｄｆｏｅｔａｌｆａｃｔｏｒｓ，ｃａｌｖｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ］．Ｔｈｅ⁃ｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，２００９，７１（６）：９０１－９０９．［７］㊀廖高锋．奶牛分娩助产强度和第二产程长度对母牛和犊牛的影响［Ｄ］．硕士学位论文．广州：华南农业大学，２０１８．［８］㊀ＣＩＶＥＬＥＫＴ，ＣＥＬＩＫＨＡ，ＡＶＣＩＧ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｄｙｓｔｏｃｉａｏｎｐｌａｓｍａｃｏｒｔｉｓｏｌａｎｄｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｌｅｖｅｌｓｉｎＨｏｌｓｔｅｉｎｈｅｉｆｅｒｓａｎｄｔｈｅｉｒｎｅｗｂｏｒｎｃａｌｖｅｓ［Ｊ］．Ｂｕｌｌｅｔｉｎ⁃ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅｉｎＰｕｌａｗｙ，２００８，５２：６４９－６５４．［９］㊀ＢＥＲＲＹＤＰ，ＬＥＥＪＭ，ＭＡＣＤＯＮＡＬＤＫＡ，ｅｔａｌ．Ｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｃｏｒｅａｎｄｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｅｆｆｅｃｔｓｏｎｄｙｓ⁃ｔｏｃｉａａｎｄｓｔｉｌｌｂｉｒｔｈｓａｎｄｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｅｆｆｅｃｔｓｏｎｐｏｓｔｃａｌｖ⁃ｉｎｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２００７，９０（９）：４２０１－４２１１．［１０］㊀ＷＩＬＤＭＡＮＥＥ，ＪＯＮＥＳＧＭ，ＷＡＧＮＥＲＰＥ，ｅｔａｌ．Ａｄａｉｒｙｃｏｗｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｃｏｒｉｎｇｓｙｓｔｅｍａｎｄｉｔｓｒｅ⁃ｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｔｏｓｅｌｅｃｔｅｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，１９８２，６５（３）：４９５－５０１．［１１］㊀ＥＤＭＯＮＳＯＮＡＪ，ＬＥＡＮＩＪ，ＷＥＡＶＥＲＬＤ，ｅｔａｌ．ＡｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｃｏｒｉｎｇｃｈａｒｔｆｏｒＨｏｌｓｔｅｉｎｄａｉｒｙｃｏｗｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，１９８９，７２（１）：６８－７８．［１２］㊀ＣＡＭＰＬＥＲＭ，ＭＵＮＫＳＧＡＡＲＤＬ，ＪＥＮＳＥＮＭＢ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈｏｕｓｉｎｇｏｎｃａｌｖｉｎｇｂｅｈａｖｉｏｒａｎｄｃａｌｆｖｉ⁃ｔａｌｉｔｙｉｎＨｏｌｓｔｅｉｎａｎｄＪｅｒｓｅｙｄａｉｒｙｃｏｗｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２０１５，９８（３）：１７９７－１８０４．［１３］㊀ＢＬÖＴＴＮＥＲＳ，ＨＥＩＮＳＢＪ，ＷＥＮＳＣＨ⁃ＤＯＲＥＮＤＯＲＦＭ，ｅｔａｌ．ＢｒｏｗｎＳｗｉｓｓˑＨｏｌｓｔｅｉｎｃｒｏｓｓｂｒｅｄｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｐｕｒｅＨｏｌｓｔｅｉｎｓｆｏｒｃａｌｖｉｎｇｔｒａｉｔｓ，ｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔ，ｂａｃｋｆａｔｔｈｉｃｋｎｅｓｓ，ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ，ａｎｄｂｏｄｙｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２０１１，９４（２）：１０５８－１０６８．［１４］㊀ＳＣＨＵＥＮＥＭＡＮＮＧＭ，ＮＩＥＴＯＩ，ＢＡＳＳ，ｅｔａｌ．Ａｓ⁃ｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｃａｌｖｉｎｇｐｒｏｇｒｅｓｓａｎｄｒｅｆｅｒｅｎｃｅｔｉｍｅｓｆｏｒｏｂｓｔｅｔｒｉｃｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｄｙｓｔｏｃｉａｉｎＨｏｌｓｔｅｉｎｄａｉｒｙｃｏｗｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２０１１，９４（１１）：５４９４－５５０１．［１５］㊀ＰＨＩＬＩＰＳＳＯＮＪ．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｃａｌｖｉｎｇｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ，ｓｔｉｌｌｂｉｒｔｈａｎｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄｆａｃｔｏｒｓｉｎｓｗｅｄｉｓｈｃａｔｔｌｅｂｒｅｅｄｓ：Ⅱ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｎｏｎ⁃ｇｅｎｅｔｉｃｆａｃｔｏｒｓ［Ｊ］．ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＳｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ，１９７６，２６（２）：１６５－１７４．［１６］㊀ＬＡＭＢＲＣ，ＢＡＲＫＥＲＢＯ，ＡＮＤＥＲＳＯＮＭＪ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｏｒｃｅｄｅｘｅｒｃｉｓｅｏｎｔｗｏ⁃ｙｅａｒ⁃ｏｌｄＨｏｌｓｔｅｉｎｈｅｉｆｅｒｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，１９７９，６２（１１）：１７９１－１７９７．［１７］㊀孙丽萍，杨利国．奶牛分娩期管理［Ｃ］／／第四届全国牛病防制及产业发展大会论文集．武汉：国家肉牛／牦牛产业技术体系疾病控制研究室，２０１３．［１８］㊀ＪＥＮＫＩＮＧ，ＹＯＵＮＧＩＲ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｐａｒｔｕｒｉｔｉｏｎ；ｔｈｅｕｓｅｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｏｄｅｌｓ［Ｊ］．ＡｎｉｍａｌＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＳｃｉｅｎｃｅ，２００４，８２／８３：５６７－５８１．［１９］㊀ＦＲＥＥＭＡＮＭＥ，ＫＡＮＹＩＣＳＫＡＢ，ＬＥＲＡＮＴＡ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｌａｃｔｉｎ：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｅｃｒｅ⁃ｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ，２０００，８０（４）：１５２３－１６３１．２２７３８期靳㊀爽等：体况对奶牛分娩行为㊁血浆激素含量及其犊牛初生重㊁初乳采食量的影响［２０］㊀ＶＡＬＲＯＳＡ，ＲＵＮＤＧＲＥＮＭ，ŠＰＩＮＫＡＭ，ｅｔａｌ．Ｏｘｙ⁃ｔｏｃｉｎ，ｐｒｏｌａｃｔｉｎａｎｄｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎｉｎｌａｃｔａｔｉｎｇｓｏｗｓ：ａｓ⁃ｓｏｃｉａｔｉｏｎｓｗｉｔｈｍｏｂｉｌｉｓａｔｉｏｎｏｆｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｍａ⁃ｔｅｒｎａｌｂｅｈａｖｉｏｕｒ［Ｊ］．ＬｉｖｅｓｔｏｃｋＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＳｃｉｅｎｃｅ，２００４，８５（１）：３－１３．［２１］㊀ＢＲＩＤＧＥＳＲＳ，ＲＯＮＳＨＥＩＭＰＭ．Ｐｒｏｌａｃｔｉｎ（ＰＲＬ）ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍａｔｅｒｎａｌｂｅｈａｖｉｏｒｉｎｒａｔｓ：ｂｒｏｍｏｃｒｉｐｔｉｎｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｄｅｌａｙｓａｎｄＰＲＬｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｒａｐｉｄｏｎｓｅｔｏｆｂｅｈａｖｉｏｒ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９０，１２６（２）：８３７－８４８．［２２］㊀贝丽琴，吴心华，陈旭海，等．奶牛分娩应激综合征［Ｊ］．中国动物保健，２０１５，１７（１２）：３３－３６．［２３］㊀ＰＥＴＲＯＷＳＫＩＫ，ＷＩＮＴＥＲＭＡＮＮＧＢ，ＳＣＨＡＡＲ⁃ＳＣＨＭＩＤＴＭ，ｅｔａｌ．Ｂｌｕｎｔｅｄｓａｌｉｖａｒｙａｎｄｐｌａｓｍａｃｏｒｔｉ⁃ｓｏｌｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｐａｎｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒｕｎｄｅｒｐｓｙ⁃ｃｈｏｓｏｃｉａｌｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｓｙｃｈｏ⁃ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１３，８８（１）：３５－３９．［２４］㊀ＧＬＡＤＤＥＮＮ，ＭＣＫＥＥＧＡＮＤ，ＶＩＯＲＡＬ，ｅｔａｌ．Ｐｏｓｔ⁃ｐａｒｔｕｍｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｄｏｅｓｎｏｔａｌｔｅｒｓｔｒｅｓｓｂｉｏ⁃ｍａｒｋｅｒｓｉｎｃｏｗｓａｎｄｃａｌｖｅｓｅｘｐｅｒｉｅｎｃｉｎｇａｓｓｉｓｔｅｄａｎｄｕｎａｓｓｉｓｔｅｄｐａｒｔｕｒｉｔｉｏｎ：ａｒａｎｄｏｍｉｓｅｄｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｔｒｉａｌ［Ｊ］．ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＲｅｃｏｒｄ，２０１８，１８３（１３）：４１４．［２５］㊀ＯＳＡＷＡＴ，ＮＡＫＡＯＴ，ＭＯＲＩＹＯＳＨＩＭ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｙｓｔｏｃｉａ，ｒｅｔａｉｎｅｄｐｌａｃｅｎｔａａｎｄｂｏｄｙｃｏｎｄｉ⁃ｔｉｏｎｏｎｐｌａｓｍａβ⁃ｅｎｄｏｒｐｈｉｎｐｒｏｆｉｌｅｉｎｐｅｒｉｐａｒｔｕｒｉｅｎｔｄａｉｒｙｃｏｗｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄＤｅｖｅｌｏｐ⁃ｍｅｎｔ，２０００，４６（１）：２３－３０．［２６］㊀ＨＯＲＳＴＲＬ，ＪＯＲＧＥＮＳＥＮＮＡ．Ｅｌｅｖａｔｅｄｐｌａｓｍａｃｏｒ⁃ｔｉｓｏｌｄｕｒｉｎｇｉｎｄｕｃｅｄａｎｄｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｈｙｐｏｃａｌｃｅｍｉａｉｎｒｕｍｉｎａｎｔｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，１９８２，６５（１２）：２３３２－２３３７．［２７］㊀王梦琦，朱小瑞，邢世宇，等．影响荷斯坦牛犊牛初生重的因素分析［Ｊ］．家畜生态学报，２０１６，３７（１０）：２２－２５．［２８］㊀ＢＯＨＮＥＲＴＤＷ，ＳＴＡＬＫＥＲＬＡ，ＭＩＬＬＳＲＲ，ｅｔａｌ．Ｌａｔｅｇｅｓｔａｔｉｏｎｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｂｅｅｆｃｏｗｓｄｉｆｆｅｒｉｎｇｉｎｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｃｏｒｅ：ｅｆｆｅｃｔｓｏｎｃｏｗａｎｄｃａｌｆｐｅｒ⁃ｆｏｒｍａｎｃｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２０１３，９１（１１）：５４８５－５４９１．［２９］㊀ＹＵＺＢ，ＨＡＮＳＰ，ＺＨＵＪＧ，ｅｔａｌ．Ｐｒｅ⁃ｐｒｅｇｎａｎｃｙｂｏｄｙｍａｓｓｉｎｄｅｘｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｉｎｆａｎｔｂｉｒｔｈｗｅｉｇｈｔａｎｄｏｆｆｓｐｒｉｎｇｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ／ｏｂｅｓｉｔｙ：ａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗａｎｄｍｅｔａ⁃ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１３，８（４）：ｅ６１６２７．［３０］㊀ＳＰＩＴＺＥＲＪＣ，ＭＯＲＲＩＳＯＮＤＧ，ＷＥＴＴＥＭＡＮＮＲＰ，ｅｔａｌ．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｎｄｃａｌｆｂｉｒｔｈａｎｄｗｅａ⁃ｎｉｎｇｗｅｉｇｈｔｓａｓａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｔｐａｒｔｕｒｉ⁃ｔｉｏｎａｎｄｐｏｓｔｐａｒｔｕｍｗｅｉｇｈｔｇａｉｎｉｎｐｒｉｍｉｐａｒｏｕｓｂｅｅｆｃｏｗｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，１９９５，７３（５）：１２５１－１２５７．［３１］㊀ＭＵＬＬＩＮＩＫＳＪＴ，ＣＯＸＳＨ，ＫＥＭＰＭＥ，ｅｔａｌ．Ｒｅｌａ⁃ｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｃｏｒｅａｔｃａｌｖｉｎｇａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｉｎｙｏｕｎｇｐｏｓｔｐａｒｔｕｍｃｏｗｓｇｒａｚｉｎｇｎａｔｉｖｅｒａｎｇｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２０１２，９０（８）：２８１１－２８１７．［３２］㊀ＦＩＳＣＨＥＲＡＪ，ＳＯＮＧＹ，ＨＥＺ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｅｌａ⁃ｙｉｎｇｃｏｌｏｓｔｒｕｍｆｅｅｄｉｎｇｏｎｐａｓｓｉｖｅｔｒａｎｓｆｅｒａｎｄｉｎｔｅｓｔｉ⁃ｎａｌｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎｉｎｎｅｏｎａｔａｌｍａｌｅＨｏｌｓｔｅｉｎｃａｌｖｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２０１８，１０１（４）：３０９９－３１０９．［３３］㊀ＭＣＧＵＩＲＫＳＭ，ＣＯＬＬＩＮＳＭ．Ｍａｎａｇｉｎｇｔｈｅｐｒｏｄｕｃ⁃ｔｉｏｎ，ｓｔｏｒａｇｅ，ａｎｄｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆｃｏｌｏｓｔｒｕｍ［Ｊ］．ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＣｌｉｎｉｃｓｏｆＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａ：ＦｏｏｄＡｎｉｍａｌＰｒａｃｔｉｃｅ，２００４，２０（３）：５９３－６０３．［３４］㊀ＵＲＩＥＮＪ，ＬＯＭＢＡＲＤＪＥ，ＳＨＩＶＬＥＹＣＢ，ｅｔａｌ．ＰｒｅｗｅａｎｅｄｈｅｉｆｅｒｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｎＵＳｄａｉｒｙｏｐｅｒａ⁃ｔｉｏｎｓ：ｐａｒｔⅤ．Ｆａｃｔｏｒｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙｉｎｐｒｅｗｅａｎｅｄｄａｉｒｙｈｅｉｆｅｒｃａｌｖｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２０１８，１０１（１０）：９２２９－９２４４．［３５］㊀ＦＡＢＥＲＳＮ，ＦＡＢＥＲＮＥ，ＭＣＣＡＵＬＥＹＴＣ，ｅｔａｌ．Ｃａｓｅｓｔｕｄｙ：ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｌｏｓｔｒｕｍｉｎｇｅｓｔｉｏｎｏｎｌａｃｔａｔｉｏｎ⁃ａｌｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ［Ｊ］．ＴｈｅＰｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｔｉｓｔ，２００５，２１（５）：４２０－４２５．［３６］㊀ＧＯＤＤＥＮＳＭ，ＬＯＭＢＡＲＤＪＥ，ＷＯＯＬＵＭＳＡＲ．Ｃｏｌｏｓｔｒｕｍｍａｎａｇｅｍｅｎｔｆｏｒｄａｉｒｙｃａｌｖｅｓ［Ｊ］．ＴｈｅＶｅｔ⁃ｅｒｉｎａｒｙＣｌｉｎｉｃｓｏｆＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａ：ＦｏｏｄＡｎｉｍａｌＰｒａｃ⁃ｔｉｃｅ，２０１９，５（３）：５３５－５５６．［３７］㊀ＶＡＳＳＥＵＲＥ，ＲＵＳＨＥＮＪ，ＤＥＰＡＳＳＩＬＬÉＡＭ．Ｄｏｅｓａｃａｌｆ ｓｍｏｔｉｖａｔｉｏｎｔｏｉｎｇｅｓｔｃｏｌｏｓｔｒｕｍｄｅｐｅｎｄｏｎｔｉｍｅｓｉｎｃｅｂｉｒｔｈ，ｃａｌｆｖｉｇｏｒ，ｏｒｐｒｏｖｉｓｉｏｎｏｆｈｅａｔ？［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２００９，９２（８）：３９１５－３９２１．［３８］㊀ＲＥＹＮＯＬＤＳＬＰ，ＢＯＲＯＷＩＣＺＰＰ，ＣＡＴＯＮＪＳ，ｅｔａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇｏｆｆｅｔａｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＣｌｉｎｉｃｓｏｆＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉ⁃ｃａ：ＦｏｏｄＡｎｉｍａｌＰｒａｃｔｉｃｅ，２０１９，３５（２）：２２９－２４７．［３９］㊀ＭＵＲＲＡＹＣＦ，ＶＥＩＲＡＤＭ，ＮＡＤＡＬＩＮＡＬ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｙｓｔｏｃｉａｏｎｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｅｈａｖｉｏｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｖｉｔａｌｉｔｙａｎｄｐａｓｓｉｖｅｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓｉｎｎｅｗｂｏｒｎＨｏｌｓｔｅｉｎｃａｌｖｅｓ［Ｊ］．Ｃａ⁃ｎａｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ，２０１５，７９（２）：１０９－１１９．３２７３㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３２卷∗Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｇｕｘｉａｎｈｏｎｇ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ（责任编辑㊀菅景颖）ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＢｏｄｙＣｏｎｄｉｔｉｏｎｏｎＣｏｗｓ ＣａｌｖｉｎｇＢｅｈａｖｉｏｒ，ＰｌａｓｍａＨｏｒｍｏｎｅＣｏｎｔｅｎｔｓａｎｄＴｈｅｉｒＣａｌｖｅｓ ＢｉｒｔｈＷｅｉｇｈｔ，ＣｏｌｏｓｔｒｕｍＩｎｔａｋｅＪＩＮＳｈｕａｎｇ㊀ＬＩＣｏｎｇｃｏｎｇ㊀ＧＵＸｉａｎｈｏｎｇ∗（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９３，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｃａｌｖｉｎｇｂｅｈａｖｉｏｒａｎｄｐｌａｓｍａｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｃｏｗｓ，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｎｔｈｅｂｉｒｔｈｗｅｉｇｈｔａｎｄｃｏｌｏｓｔｒｕｍｉｎｔａｋｅｏｆｎｅｗｂｏｒｎｃａｌｖｅｓ．Ｔｈｉｒｔｙ⁃ｓｉｘｈｅａｌｔｈｙＨｏｌｓｔｅｉｎｃｏｗｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｈｉｇｈｂｏｄｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｃｏｒｅ（ＢＣＳ）ｇｒｏｕｐ（３．７５ɤＢＣＳɤ４．２５）２０ｃｏｗｓａｎｄｍｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（３．２５ɤＢＣＳɤ３．５０）１６ｃｏｗｓ．Ｔｈｅｃａｌｖｉｎｇｂｅｈａｖｉｏｒｗａｓｒｅｃｏｒｄｅｄｂｙｖｉｄｅｏｒｅｃｏｒｄｉｎｇ．Ｔｈｅｐｌａｓｍａｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｃｏｗｓａｆｔｅｒｄｅｌｉｖｅｒｙｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅｂｉｒｔｈｗｅｉｇｈｔａｎｄｔｈｅｃｏｌｏｓｔｒｕｍｉｎｔａｋｅｏｆｃａｌｖｅｓｗｅｒｅｒｅｃｏｒｄｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄａｓｆｏｌｌｏｗｓ：１）ｔｈｅｔｉｍｅｆｒｏｍｔｈｅｏｎｓｅｔｏｆｒｈｙｔｈｍｉｃａｌａｂｄｏｍｉｎａｌｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎｓｔｏｔｈｅｂｉｒｔｈｏｆｔｈｅｃａｌｆｉｎｔｈｅｈｉｇｈＢＣＳｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｎｇｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｍｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅｔｉｍｅｆｒｏｍａｖｉｓｉｂｌｅａｍｎｉｏｔｉｃｓａｃｔｏｔｈｅｂｉｒｔｈｏｆｔｈｅｃａｌｆｔｅｎｄｅｄｔｏｂｅｌｏｎｇｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｍｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（Ｐ＝０．０９２），ａｎｄｔｈｅｔｉｍｅｓｏｆｐｏｓｔｕｒｅｃｈａｎｇｅｆｒｏｍｓｔａｎｄｉｎｇｔｏｌｙｉｎｇｔｅｎｄｅｄｔｏｂｅｍｏｒｅｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｍｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（Ｐ＝０．０７６）．２）ＴｈｅｐｌａｓｍａｐｒｏｌａｃｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔｉｎｈｉｇｈＢＣＳｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｍｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅｐｌａｓｍａｏｘｙｔｏｃｉｎｃｏｎｔｅｎｔｔｅｎｄｅｄｔｏｂｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｍｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（Ｐ＝０．０６０），ａｎｄｔｈｅｐｌａｓｍａｃｏｒｔｉｓｏｌｃｏｎｔｅｎｔｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｍｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．３）Ｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｃａｌｖｅｓｗｉｔｈ６ＬｔｏｔａｌｃｏｌｏｓｔｒｕｍｉｎｔａｋｅｉｎｔｈｅｈｉｇｈＢＣＳｇｒｏｕｐｔｅｎｄｅｄｔｏｂｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｍｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｇｒｏｕｐ（Ｐ＝０．０９１）．ＩｔｉｓｃｏｎｃｌｕｄｅｄｔｈａｔｈｉｇｈＢＣＳｃｏｗｓｈａｖｅｇｒｅａｔｅｒｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅａｎｄｌｏｎｇｅｒｃａｌｖｉｎｇｌａｂｏｒｐｒｏｃｅｓｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｍｏｄｅｒａｔｅＢＣＳｃｏｗｓ，ａｎｄｔｈｅｉｒｃａｌｖｅｓ 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化学发光免疫分析方法
化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。
其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析。
化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。
化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。
免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。
化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。
待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。
一、化学发光免疫分析方法的类别化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为 3 大类，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。
（一）化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。
目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。
1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析。
鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。
在碱性溶液中，鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光，其中H2O2最为常用。
因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。
酶类主要是辣根过氧化物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、Cu2+、Co2+和它们的配合物。
鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子。
鲁米诺的发光光子产率约为0.01，最大发射波长为425 nm。
2. 吖啶酯类标记的化学发光免疫分析吖啶酯用于化学发光免疫分析方法（ChemiluminescentImmunoassay，CLIA）由于热稳定性不是很好，Klee 等研究合成了更稳定的吖啶酯衍生物。
奶牛酮血症的诊治
奶牛酮血症的诊治奶牛酮血症是奶牛产后常见的代谢疾病，其主要表现为血中酮体含量增高和血糖水平下降。
临床上表现为食欲不振、发情不正常、体重下降、体温降低等。
如果不及时处理，会导致奶牛能量不足，引发其他问题，如病毒感染、产后发热、泌乳衰竭等。
因此，对于奶牛酮血症的防治非常重要。
诊断对于有疑似奶牛酮血症的病牛，应及时进行干扰酮模式的检测。
干扰酮模式是指抽取奶牛晨起的尿液，使用干扰酮试纸进行检测。
正常情况下，奶牛的酮体含量低于100mg/L，如果检测结果超过了这个数值，就需要进一步检查。
治疗治疗奶牛酮血症有多种方法，包括饲料控制、药物治疗以及其他注意事项。
1. 饲料控制奶牛酮血症的主要原因是饲料摄入不足，因此要加强饲料管理。
可以通过增加高能饲料比例、提高日喂草量、增加饲喂次数、增加饲喂浓度等方式来增加奶牛的能量摄入。
此外，需要及时补充微量元素，如铜、锌等。
2. 药物治疗奶牛酮血症也可以通过药物治疗来缓解症状。
目前常用的药物有促进胰岛素分泌的药物、酮体清除剂等。
其中最常用的是康力泰（Propylene glycol），服用方法是口服或灌胃。
康力泰可以改善奶牛能量不足症状，增加血糖水平，减轻奶牛的压力。
3. 其他注意事项还有一些其他的注意事项可以帮助缓解奶牛酮血症的症状。
首先是保持牛棚的清洁卫生，避免减少细菌感染。
同时要增加奶牛的活动量，促进新陈代谢的正常运转，提高奶牛的食欲。
还要定期检测奶牛的健康状况，特别是在分娩后和孕期。
总之，奶牛酮血症虽然常见，但不是不可避免的，只要加强管理，定期检测，及时治疗，就可以有效地控制这种疾病。
如果您的奶牛出现了不正常的症状，建议及时请示兽医师来鉴定。
湘西黄牛发情周期与妊娠早期孕酮变化规律研究
湘西黄牛发情周期与妊娠早期孕酮变化规律研究李雄;雷虹;龙云;李昊帮;李剑波;罗希;李晟;燕海峰;易康乐【摘要】采集湘西黄牛母牛的血液样品,通过酶联免疫吸附技术检测和比较其在发情周期和早期妊娠期的孕酮(P4)水平.结果表明,湘西黄牛的发情周期中,P4浓度变化非常明显,大致呈先上升再下降的趋势.发情前期、中期、后期和间情期P4浓度分别为8.85、0.72、1.40和9.13 μg/mL,发情中期与后期P4浓度显著低于发情前期和间情期(P＜0.05);妊娠早期的母牛,从发情配种后,血液中P4浓度缓慢升高,其中妊娠后0～10 d、11～20 d、21～30 d和31～36 d P4浓度分别为3.36、8.91、12.69和16.12 μg/mL,各阶段P4浓度差异显著(P＜0.05);发情后第21d、24 d、27 d和30 d,妊娠母牛血液中的P4浓度显著高于未妊娠的母牛(P＜0.05).试验表明,发情配种后20 d,妊娠母牛与未妊娠母牛的血液中孕酮含量差异明显,可作为判断是否受孕的标记因子.【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2015(036)005【总页数】4页(P55-58)【关键词】湘西黄牛;妊娠早期;发情周期;孕酮【作者】李雄;雷虹;龙云;李昊帮;李剑波;罗希;李晟;燕海峰;易康乐【作者单位】湖南省畜牧兽医研究所草业与草食动物研究室,湖南长沙410131;湖南省畜牧兽医研究所草业与草食动物研究室,湖南长沙410131;湖南德农牧业科技有限公司,湖南花垣416400;湖南省畜牧兽医研究所草业与草食动物研究室,湖南长沙410131;湖南省畜牧兽医研究所草业与草食动物研究室,湖南长沙410131;长沙千山畜牧服务有限公司,湖南长沙410144;湖南省畜牧兽医研究所草业与草食动物研究室,湖南长沙410131;湖南省畜牧兽医研究所草业与草食动物研究室,湖南长沙410131;湖南省畜牧兽医研究所草业与草食动物研究室,湖南长沙410131【正文语种】中文【中图分类】S811.6雌性动物的发情周期与妊娠主要受到神经和激素的双重调节。
奶牛隐性乳腺炎的检测与治疗
奶牛隐性乳腺炎的检测与治疗乳房炎是奶牛最常见疾病之一，由于机械的、物理的、化学的和生物学的作用而引起的乳腺的炎症，其特征是乳腺叶间结缔组织或乳腺体发炎，或两者同时发炎。
隐性乳房炎在临床上很难被发现，故常常不被重视，该病发病率高，危害更为严重。
1 检测方法CMT法是加州乳房炎测试法的缩写，是根据乳汁中体细胞数含量的多少来判断是否患有隐性乳房炎，是一种比较可靠的方法，目前在临床上应用的比例较高，常用的有乳汁体细胞直接计数法和间接计数法2种。
间接计数法比较著名的是加州乳房炎测试法（CMT），其原理是将乳汁中的细胞破坏后，根据释放出的DNA沉淀或凝块的数量间接判断细胞数目多少的方法。
直接计数法就是通过直接计算每毫升牛乳中细胞数量的方法来评价奶牛的乳房炎发病情况。
如直接显微镜计数法（DMSCC），该方法检测成本低，但因操作人员经验水平和所处环境条件的不同，导致数据结果误差较大，且耗时长，不易掌握，不适合大批量快速检测。
目前，较先进的是采用荧光流式细胞技术对牛奶中的体细胞进行荧光染色处理的自动计数法。
优点是快速、准确、误差小、重复性好，电脑自动计数并打印结果，现已有商业的仪器出售，该方法的缺点是需要专门的仪器设备，对于一些规模较小的养殖场（户）会增加成本。
此外，虽然各个国家对体细胞计数法比较重视，但是有关的规定和标准不同，一般在20万～50万/mL为安全。
BMT法用于亚临床乳房炎检测，操作简单、诊断快速。
基本原理是检测乳汁中的体细胞数量，并且根据体细胞数量的多少来判定检测结果。
在采样时，先用酒精棉球擦拭清洗每一个乳头端，并要弃掉前3把奶，每个乳区采2mL乳样于诊断盘上，在每一个托盘中加入2mL BMT 检测试剂，摇匀，30s后观察结果。
根据反应现象和依照BMT判定标准进行判断。
对连续检测2次为“++”或“++”以上的乳区进行了乳头注射给药，并结合手工挤奶的方法，短时间内使临床型乳房炎的发病率降低了。
通过BMT法检测以及及时给发病的乳区注射药物。
LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎症损伤模型的建立
LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎症损伤模型的建立作者：陈佳佳来源：《安徽农业科学》2020年第15期摘要采用LPS诱导子宫内膜上皮细胞炎症模型，通过研究细胞因子IL-1β、TNF-α mRNA 的表达验证模型，为进一步对子宫内膜炎发病机理的研究和治疗药物疗效的评价奠定基础。
经组织块原代培养和胰酶纯化分离得到奶牛子宫内膜上皮细胞，并通过免疫组化鉴定细胞纯度。
采用0、10、30、50、100 μg/mL 的LPS分别在3、6、9、12、18 h刺激纯化后的子宫内膜上皮细胞，采用MTT法筛选出最佳刺激浓度时间为30 μg/mL，12 h，然后以最佳刺激浓度刺激子宫内膜上皮细胞，在12 h后收集细胞，最后通过荧光定量RT-PCR检测IL-1β、TNF-αmRNA的表达差异性。
关键词奶牛子宫内膜炎;子宫内膜上皮细胞;细胞因子中图分类号S858.23文献标识码A文章编号0517-6611（2020）15-0105-04doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.15.029开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Establishment of Inflammatory Injury Model of Endometrial Epithelial Cells Induced by LPS in CowsCHEN Jiajia（Beijing Vocational College of Agriculture，Beijing 102442）Abstract The model of endometrial epithelial cell inflammation induced by LPS was used to study the expression of IL1β，TNFα mRNA，and lay the foundation for further pathogenesis of meningitis in utero treatment of research and evaluation of drug efficacy.Bovine endometrial epithelial cells （BEEC） were obtained and purified from cow uterus with primary cultured tissue explant and trypsin，and identified by immunohist chemistry.We used 0，10，30，50，100 μg/mL concentrations of LPS，respectively，after 3，6，9，12 h to stimulate purified endometrial epithelial cells，the results showed that the best situmulation concentration and time screened out by MTT method were 30 μg/mL（LPS）and 12 h respectively.BEEC were stimulated with 30 μg/mL LPS 12 h，and the cells were collected and ;fluorescence quantitative RT-PCR was made in order to detect the mRNA expression differences of IL1β，TNFα.Key wordsCow endometritis;Endometrial epithelial cells（BEEC）;Cytokines作者簡介陈佳佳（1989—），女，河南洛阳人，实验师，硕士，从事畜牧兽医和实验技术研究。
奶牛乳腺上皮细胞系的建立
左右时，少量成纤维细胞开始从组织块周围出现，10d 左右时乳腺上皮细胞开始从组织块周 围生长，单层细胞融合至培养底壁的 90%左右，吸出原有培养液，根据上皮细胞与成纤维 细胞对胰蛋白酶消化敏感性不同，在混合生长的原代或传代细胞培养物中，经过 0.25%胰蛋 白酶的 D-Hanks 液，37℃消化，在倒置显微镜下观察，待成纤维细胞细胞质回缩，细胞间 隙增大，脱离瓶壁时，加培养液终止消化，将酶液倾出，离心后得到的大部分是成纤维细胞。 3~5 次选择传代，弃掉组织块，可得到纯化的乳腺上皮细胞。
奶牛乳腺上皮细胞系的建立
陈建晖，佟慧丽，高学军﹡，李庆章
东北农业大学动物医学院，哈尔滨（150030）
E-mail：chenjianhui_2005@
摘 要：奶牛乳腺上皮细胞系的建立可为转基因动物生产、提高泌乳量提供良好的动物体外 模型。本研究采用组织块接种法，成功地培养了奶牛乳腺上皮细胞。通过对细胞接种存活率、 群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状的检测，建立并鉴定了正常培养的奶牛乳腺 上皮细胞系，细胞传至 20 代以上时仍保持旺盛的增殖活力。此外，本研究探讨了胰岛素、 催乳素及孕酮对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白和乳糖分泌能力的影响。 关键词：奶牛；乳腺上皮细胞；细胞系 中图分类号：Q2
检测样品的处理和酪蛋白的一样，HPLC 的检测条件：紫外检测波长，195nm；流动相， 5%的乙腈，流速，恒流 0.6ml/min；进样体积，10µl，其他操作同酪蛋白一样。分别以浓度 为 1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml 的乳糖标准品进行 HPLC，以乳糖浓度 为横坐标，峰面积为纵坐标作乳糖标准曲线。细胞样品与乳糖标准品采用完全相同的 HPLC 检测条件。
酶联免疫吸附实验课件
四、注意事项
1、所有样品按传染源处理； 2、加试剂前应混匀，力求滴加准确； 3、加样应加在板孔的底部，避免产生气泡并迅速完成； 4、洗涤时各孔均需加满，洗涤必须彻底，防止产生假阳性； 5.温育的时间要严格控制。
自习
五、 ELISA的影响因素
(一)固相载体 (二)抗原 (三)试验样品 (四)结合物 (五)洗涤剂与稀释剂 (六)底物 (七)作用时间 (八)结果判断 (九)试验的重复性(精确度) (十)对使用仪器要求
(四)结合物
在ELISA中，用酶标记的抗体或抗原统称为结合 物，此为进行ELISA检测的关键试剂。常规使用 ELISA法的主要问题是能够简便地制备酶结合物， 而此种制备好的酶结合物要求稳定，具有很高的 酶活性，抗原或抗体的特异性，产量高及成本低。
(六)底物
(1)底物在未被酶催化以前应该是无色的， 而经 酶催化后有明显的颜色变化，这样可 使结果分辨清楚； (2)所显色泽易干洗脱； (3)显色后的产物要求稳定，在作定量测定 时所产生的有色物质应该是可溶性的； (4)价廉，易得而且无毒。
(七)作用时间
(1) 任意确定一个时间，如20分钟或30分钟终止反应，测 定被检标本和阳性参考标本的O.D值。这样所得的数据要进 行校正，校正可按下列公式：
校正后O.D绝对值=被检标本的O.D值* (1.0/阳性标本的 O.D值) (2) 制备好一批酶结合物后预试时间，在反应温度固定时， 当阳性参考血清O.D值达到1.0时终止反应，记录这个时间， 如30分钟，以后用本批酶结合物测定待检样品时都采用同 一时间终止反应，这个办法不需要校正，比较方便。
(一):检查抗原和半抗原方面
1.内分泌方面已经用于检测雌性激素、绒毛膜 促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促 甲状腺素和孕酮等，其敏感性与RIA相当
回乳期奶牛血清GH、INS、HC、TGF-β1和IGF-1含量变化
回乳期奶牛血清GH、INS、HC、TGF-β1和IGF-1含量变化沈留红;张有瑞;巫晓峰;肖劲邦;姜思汛;邓俊良;左之才;傅宏庆;曹随忠;余树民【摘要】为探究回乳期奶牛血清中生长激素(GH)、胰岛素(INS)、氢化可的松(HC)、转化生长因子β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)含量的变化及其相关性.试验选择规模化奶牛场日产奶量为(15.43 ± 2.10) kg,即将干乳的妊娠后期健康中国荷斯坦奶牛20头.干乳开始当天记为第0天,分别采集第0、1、3、5、7、9和11天奶牛尾静脉血,ELISA法检测血清中GH、INS、HC、TGF-β1和IGF-1含量并对结果进行统计学处理,分析其在奶牛回乳过程中的变化规律及其相关性.结果显示,回乳期奶牛血清GH、INS、HC和TGF-β1含量在第0至1天变化不显著(P>0.05);血清GH和HC含量第3至11天依次降低且差异均极显著(P<0.01),其中血清HC 含量第3天极显著高于其余各天(P<0.01);血清INS含量第3至11天依次升高且差异均极显著(P<0.01);血清TGF-β1含量第3至11天差异性均不显著(P>0.05);血清IGF-1含量依次呈阶梯式下降趋势,第0天和第1天、第3天和第5天、第7天和第9天、第9天和第11天之间均差异不显著(P>0.05),但第0至1天、第3至5天、第7至11天3阶段之间差异极显著(P<0.01).回乳期奶牛血清GH、INS、TGF-β1和IGF-1含量变化两两间呈极显著相关(P<0.01);HC含量变化与GH、INS和IGF-1含量变化均呈极显著相关(P<0.01),与TGF-β1含量变化呈显著负相关(P<0.05).%In order to explore the changes and correlation among the levels of growth hormone (GH),insulin (INS),hydrocortisone (HC),TGF-β1 and IGF-1 in cows' serum during the period of milk withdrawal.Twenty healthy Chinese Holstein cows in late pregnancy that gave (15.43±2.10) kg milk per day were used,which were ready to dry milk.The day when cowsbegan to dry milk was recorded as the 0 d.The cows' venous blood from the tail on the day 0,1,3,5,7,9 and 11 were collected.ELISA was used to evaluate the levels of GH,INS,HC,TGF-β1 and IGF-1 in serum to analyze the changes and correlation among them.The results showed that,during the period of milk withdrawal,the changes of GH,INS,HC and TGF-β1 levels in serum were not obvious from the day 0 to the day 1 (P>0.05).The levels of GH and HC in serum were both on the decline and had significant difference from the day 3 to the day 11 (P<0.01),and the levels of GH in serum on the day 3 was significantly higher than those on the other days (P<0.01).The levels of INS in serum was on the rise and had significant (P<0.01) difference from the day 3 to the day 11,while the levels of TGF-β1 in serum had no significant (P>0.05) difference from the day 3 to the day 11.The levels of IGF-1 in serum showed downward trend in ladder type,and the difference among levels of IGF-1 in serum on the day 0 and day 1,day 3 and day 5,day 7 and day 9,day 9 and day 11 were not obvious(P>0.05),while IGF-1 levels among 0-1 d,3-5 d and 7-11 d had significant (P<0.01) difference.There was significant (P<0.01) correlation among the levels of GH,INS,TGF-β1 and IGF-1 in cows' serum separately during the period of milk withdrawal.The HC levels showed significant (P<0.01) correlation with GH,INS and IGF-1 levels,while it showed significant(P<0.05) negative correlation with TGF-β1 levels.【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2017(029)004【总页数】7页(P548-554)【关键词】回乳期奶牛;生长激素;胰岛素;氢化可的松;转化生长因子β1;胰岛素样生长因子1【作者】沈留红;张有瑞;巫晓峰;肖劲邦;姜思汛;邓俊良;左之才;傅宏庆;曹随忠;余树民【作者单位】四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室,奶牛疾病研究中心, 四川成都 611130;河北省廊坊市农业局水产站,河北廊坊065000;四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室,奶牛疾病研究中心, 四川成都 611130;四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室,奶牛疾病研究中心, 四川成都 611130;四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室,奶牛疾病研究中心, 四川成都 611130;四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室,奶牛疾病研究中心, 四川成都 611130;四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室,奶牛疾病研究中心, 四川成都 611130;江苏农牧科技职业学院,江苏泰州225300;四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室,奶牛疾病研究中心, 四川成都 611130;四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室,奶牛疾病研究中心, 四川成都 611130【正文语种】中文【中图分类】S857.2;S811.2激素在哺乳动物生长发育过程中具有不可替代的调控作用，其中直接调控乳腺发育和泌乳的激素主要有生长激素(growth hormone，GH)、胰岛素(insulin，INS)、氢化可的松(hydrocortisone，HC)、催乳素(prolactin， PRL)、雌激素(estrogen，E)和孕酮(progesterone，P4)等[1-2]，它们通过与转化生长因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1，IGF-1)、信号转导和转录激活因子5(signal transduction and transcriptional activation factor of 5，STAT5)等[3]细胞因子相互作用而形成乳腺发育和泌乳的调控网络。
孕酮定量检测试剂盒 说明书
5. 所有试剂应视为有潜在的生物危害。实验结束后，所用的物品应采用高压、过氧乙酸或 84 液等侵泡处理。 参考文献 1. Filicori M, Butler JP, Crowley WF Jr.黄体神经内分泌调节，《临床调查》73:1638 1984. 2. Katt JA, Duncan JA, Herbon L 等，促性腺分泌激素的频率决定垂体促性腺分泌激素受体的数量， 《内分泌学》1985; 116:2113. 3. Csapo AI, Pulkkinen MO, Wiest WG：早孕患者切除黄体和孕酮补偿疗法的影响，《妇产科》， 115:759, 1973. 4. 托马斯分娩和诊断 生产企业 企业名称：德国 DRG 诊断设备有限公司 地址：德国 玛堡市斐恩贝塔思路 18 号 邮政编码：35069 电话：49（6421）17000 传真：49（6421）170050 网址：www.drg-diagnostics.de 售后服务单位名称：北京协和洛克生物技术研究开发中心 地址：北京市海淀区恩济庄 18 号院 4－2－302 邮政编码：100036 电话：010-51295656 传真：010-88140690 网址： 医疗器械生产许可证编号 京药管械生产许 20040085 号 医疗器械注册证书编号
复冻融。
3. 含叠氮纳化物不能用于酶反应。
检验方法
1. 实验前所有的试剂、样本和微孔板条达到室温（18～25°C）。
2. 洗液与双蒸水按照 1/40 的比例稀释，稀释后的洗液在室温可保存 2 周。
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安徽 农 业 科 学 ，ｏｒａ ｏ 儿 ｕ Ａ ．Ｓｉ２０ ，６ １ 】７５ Ｊｕ ｌ ｆ ｈｉ ｇｉ ｃ． ８３ （８ ：６３—７５ ，７６ ｎ Ａ ０ ６４７ ７
责 任 编 辑 张杨 林
责任校对
傅 真 治
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邵 谱， 杨正涛 张 ， 乃生， 虚 吉 大 畜 兽 学 临 免 检 实 室吉 长 ｌ ６ 周 （林 学 牧 医 院 床 疫 测 验 ，林 春３ ２ ｏ） ｏ
摘要 ［ 目的］ 为孕酮检测 试剂盒 的研 制奠 定基础 。［ 方法 ］ 用二环 己基碳 化二 亚胺法制 备检测 抗原 ， 立 了检 测奶 牛孕 酮含 量 的间接 采 建 竞争 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ方法 。［ 结果 ］ 检测奶 牛孕酮 的间接 竞争 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ的最佳 反应 条件 确 定为 ： 佳 包被 浓度 为 １ ｇ ｍ ， 酸 盐缓 冲液 的 包被 效 最 （ ｎ／ ｌ碳 ３ ０ 果较好 ， ４℃过夜 ＋３ 以 ７℃ ２ｈ佳 ， 最佳 封 闭液 为 ２ 山羊 血 清 ， ％ 酶标 抗 体 的 工 作 浓 度 为 ０ １ ＊ ￣ ．３ｔ／ｍ 。建 立 的 标 准 曲 线 方程 为 ｙ＝ １８４４ ．４ ｘ一０ １０ ｌＲ ０９ １７ ， ．４ （ ．８ ） 检测 范 围为 ０～２ ｇｍｌ最低 检测 限为 ０．８ｎ ／ ｌ ０ｎ／ ， ５ ｇ ｍ 。该标 准曲线 的批 内变异 系数 和批 间 变异 系数 分 别为 ２ ２ ％和 ２ ３ ％。 ｌ ．２ ． ７ 结论 Ｉ 该研 究建 立 了定量 检测奶 牛孕酮 的间接 竞争 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ方 法。 关键 词 奶 牛孕酮 ； 间接 竞争 Ｅ ＩＡ； ＬＳ 定量检 测 中图分 类号 Ｓ ２ ． １ ８ ３９ 文献标识 码 Ａ 文章 编号 ０ １ ６ ｌ２Ｏ ）８—０６ ３ ２ ５７—６ １（０８ ｌ ７５ —０
ｅ ｔ ｈ ｐｉ ｂ ｓ ，ｔｅ ｏ ｔ ｍ ｅ ｌ ｌ ｕｄ ｗ ％ ｇ ａ ｅｕ ａ ｄｔｅｗｏｋｎ ｏ ｃ ｍｕ ｓａｉ ｉ ｉ ａ ２ ｇ ｎ ｑ ｓ ｏ ｔｓｒｍ ｎ ｈ ｒｉｇｃｎ ｎ．ｏ ｎｙ —ａｅｌｄ ａ ｔ ｏ ｙｗ ０．３ ｆｅ ｚｍｅ ｌｂ ｌ ｎ ｉ ｄ ａ ｅ ｂ ｓ １ ．１１ ｓａ ｌ ｈ ｄｓａ ｄ ｒ ｕ￣ １ｅｅｔｂｉ ｅ ｔｎ ａｄｃｌｅ ｓ