腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤HPLC液相谱图
配方奶粉中核苷酸含量高效液相色谱测定_高运华
表 2 乙酸浓度对检测的影响
项目
加入的 2 mL 乙酸体积分数
5% 3% 2%
1%
0.5%
杂质的沉淀效果 较差 好
较好
较好
一般
溶液的澄清度 混浊 澄清 澄清
澄清
较澄清
HPLC 杂质峰的 较多 少
较少
较多
多
数量
杂质峰影响待 分析物的数量
2（CMP， AMP）
0
2（UMP， 3（UMP， 4（CMP，UMP， AMP） GMP，AMP） GMP，AMP）
摘 要：研究建立了定量测定配方奶粉中 5 种核苷一磷酸（钠盐）的高效液相色谱方法。通过添加适量乙酸、离心浓
缩、调节 pH 等技术方法，快捷有效地去除奶粉中影响核苷酸含量定量测量的蛋白质、脂肪及其他杂质成分，使用核苷
酸国家级标准物质，采用外标法对样品中的核苷酸含量进行了定量测量。结果表明：该方法检出限低，准确度在
色谱柱为 Ailent ZORBAX SB-Aq 4.6×250 mm； 流速为 1.0 mL/min；柱温为 30 ℃；检测器为 DAD 检测器；样品浓度为 1 mg/mL；进样体积为 10 μL。 检 测 波 长 AMP 为 257 nm，CMP 为 280 nm，UMP 为 262 nm，IMP.2Na 为 249 nm，GMP.2Na 为 254 nm。 2.1.2 流动相及梯度条件
采用耐水性的色谱柱，磷酸盐做为流动相，DAD 检测器，用保留时间进行定性，峰面积进行定量，对 配方奶粉中的核苷酸进行了定量分析。
2 结果与讨论
2.1 5 种核苷酸液相色谱分离分析条件的优化 用核苷酸标准物质作为样品，通过优化色谱分
离分析条件，完成了 5 种核苷酸高效液相色谱的有 效分离分析。 2.1.1 色谱条件
高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿奶粉中核苷酸
第42卷第1期2021年1月Vol42No1Jan'2021质谱学报JournalofChinese MassSpectrometrySociety高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿奶粉中核苷酸陈晶燕，陈万勤，王峰，陈碧莲，周霞，刘柱，梁晶晶（浙江省食品药品检验研究院，浙江杭州310052）摘要：建立了高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定婴幼儿奶粉中胞嘧啶核苷酸（CMP）、腺嘌吟核苷酸（AMP）、鸟嘌吟核苷酸（GMP）、尿嘧啶核苷核（UMP）、次黄嘌吟核苷酸（IMP）等5种核苷酸含量。
使用碱性磷酸酶去磷酸化作用，把样品中的核苷酸水解成相应核苷，经选择性硼酸固相萃取净化，ACQUITY UPLC HSS T3（2.1mmX100mmXi.8"m）色谱柱分离，以5mmol/L甲酸铵溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱。
采用电喷雾正离子源，内标法定量，以多反应监测（MRM）模式进行质谱分析°结果表明，奶粉中5种核苷在各自线性范围内的线性关系良好，相关系数均大于0.998,回收率为74.2%〜110.7%，相对标准偏差在0.8%〜5.3%之间（n=6）,CMP、AMP、GMP、UMP、IMP的定量限分别为0.7、0.1、0.7、3.3、0.6mg/100g°该方法灵敏度高、重现性好、定量准确，可用于测定婴幼儿奶粉中核苷酸含量°关键词：高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）；奶粉;核苷酸；核苷；多反应监测（MRM）中图分类号:O657.63文献标志码:A文章编号：10042997（2021）01009308doi：10.7538/zpxb.2019.0156开放科学（资源服务）标识码（OSID）:Determination of Nucleotides in Infant Milk Powder by HighPerformance Liquid Chromatography-Tandem Mass SpectrometryCHENJing-yan,CHEN Wan-qin,WANG Feng,CHEN Bi-lian,ZHOU Xia,LIU Zhu,LIANGJing-jing(.Zhejiang Institute for Food and Drug Control,Hangzhou310052,China)Abstract:Nucleotides are biologically important small molecules composed of a nitroge-nousbase,afive-carbon sugar(ribose or deoxyribose)and at least one phosphate group.Theyplayimportantroleinimprovinggastrointestinaltractrepairafterdamage, maintainingtheimmunesystem andregulatinglipoprotein metabolism.Nowadaysthe roleofdietarynucleotideshasbeenpaidincreaseda t entionininfantnutrition.Dietary nucleotidesarecrucialtomaintainingnormalgrowthanddevelopmentininfants.There-forethecontentsofnucleotidesininfantmilkpowderbecomeimportant.A methodfor收稿日期：2019-11-15;修回日期：2020-03-10基金项目：浙江省市场监管局项目（018007）浙江省食品药品监督管理局科技计划项目（019002）资助作者简介：陈晶燕（1993—）,女（汉族），浙江杭州人，助理研究员，从事分析化学研究。
HPLC法测定10种动物药中尿嘧啶_黄嘌呤_次黄嘌呤_脲苷的含量
1. 4 线性关系 精密称取以上 4 种标准品各 1 ,2 ,2 ,1mg 置 100ml 容量瓶中 ,加水溶解并稀 释至刻度 ,取该液 0. 1 ,0. 2 ,0. 3 ,0. 4 ,0. 5ml 分 别放至 5ml 容量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀后 进样 20μ1 ,按上述色谱条件 ,得到 4 条过原点 的直线 ,其线性范围及相关系数为 :尿嘧啶 (uracil ) : 0. 0 ～ 23. 8ng , r = 0. 9998 ; 黄 嘌 呤 (xant hine) :0. 0～40. 2ng , r = 0. 9995 ; 次黄嘌 呤 ( hypoxant hine) : 0. 0～43. 2ng , r = 0. 9996 ; 脲苷 (uridine) :0. 0～14. 6ng , r = 0. 9993 。 1. 5 回收率及精密度 取等量的样品 5 份 ,分 别加入一定量的混合标准品 ,依法提取分离及 测定 ,计算回收率 ,结果见表 1 。
2. 6
0. 1267
2. 3
—
—
0. 1634
0. 7
注 : n = 5
量以虻虫最高 ,斑蝥次之 ,次黄嘌呤含量也以虻 虫最高 ; 而脲苷的含量则以青娘子中最高 ,全 蝎 、红娘子 、僵蚕中也有存在 。另外 ,各动物药 的 HPL C 图谱差别较大 ,我们认为具有一定的 鉴别意义 。 3 参考文献
0. 9735
0. 9
0. 7605
1. 2
—
—
九香虫
0. 0312
2. 5
婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定(食品安全国家标准)
食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定1 范围本标准规定了液相色谱法测定游离核苷酸总量的方法。
本标准适用于婴幼儿食品和乳品中游离核苷酸总量的测定。
（包括：胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、次黄嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、腺嘌呤核苷酸]2 原理试样经过水提取，用沉淀剂沉淀蛋白质后，通过高效液相色谱分离，用紫外检测器外标法测定试样中核苷酸的含量。
3 试剂与材料注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水，液相色谱流动相用水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。
3.1.2 冰醋酸。
3.1.3 四丁基硫酸氢铵。
3.1.4 甲醇。
3.1.5 磷酸氢二钾（K2HPO4）。
3.1.6 磷酸二氢钾（KH2PO4）。
3.1.7 磷酸。
3.2 试剂配制3.2.1 醋酸溶液（100 mL/L）：吸取10 mL冰醋酸，加水定容到100 mL。
3.2.2 磷酸氢二钾溶液（0.1 mol/L）：称取2.28 g磷酸氢二钾，用超纯水溶解并定容到100 mL。
3.2.3 磷酸盐缓冲液（1.40 mmol/L 四丁基硫酸氢铵，0.01 mol/L磷酸二氢钾）：称取1.360 g磷酸二氢钾，加0.4753 g 四丁基硫酸氢铵，加900mL水溶解，用磷酸氢二钾溶液调pH至3.2，用水定容到1000 mL。
（一周内使用。
）3.3 核苷酸标准品胞嘧啶核苷酸（简称CMP）（C9H14N3O8P）：纯度≥99%。
腺嘌呤核苷酸（简称AMP）（C10H14N5O7P）：纯度≥99%。
尿嘧啶核苷酸（简称UMP）（C9H13N2O9P）：纯度≥99%。
鸟嘌呤核苷酸（简称GMP）（C10H14N5O8P）：纯度≥99%。
次黄嘌呤核苷酸（简称IMP）（C10H13N4O8P）：纯度≥99%。
3.4 标准溶液配制1GB ××××—20042 核苷酸标准混合液（必须当天配置）：分别称取核苷酸标准品CMP、AMP、UMP、GMP和IMP各10mg（准确至0.1mg），于同一个100mL容量瓶中，用超纯水溶解定容至100mL。
HPLC法测定豆浆中的嘌呤含量
HPLC法测定豆浆中的嘌呤含量毛玉涛;张洪;王明力【摘要】利用HPLC法对豆浆中的嘌呤物质进行检测分析,建立腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤4种嘌呤物质的多组分检测条件并进行方法评价.研究表明:利用Zorbax C18反相色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0 μm),流动相以KH2 PO4缓冲液(0.02 mol/L,pH 3.0),在流速1.0 mL/min,柱温25℃,进样量10 pL,检测波长(λ1)为254 nm的条件下,豆浆中的4种嘌呤达到最好分离,其精密度和回收率小于2％.%A feasible method using HPLC which was evaluated for analyzing Adenine,Guanine,Xanthine,Hypoxanthine from soybean milk was established in this paper.The chromatographic conditions were optimized as follows:Zorbax C18 column (4.6 mm ×250 mm,i.d.5.0 μm),254 nm by UV detector with 0.02 mol/L of KH2PO4 buffer solution (pH =3.0) as mobile phase,the flow rate was 1.0 mL/min,the column temperature was 25 ℃,and the sample size was 10 μL.The result showed that several purines can be separated effectively in these conditions with the precision and recovery under 2％.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2015(041)002【总页数】5页(P207-211)【关键词】豆浆;嘌呤;HPLC【作者】毛玉涛;张洪;王明力【作者单位】贵阳市粮油质量检测中心,贵州贵阳,550002;贵州省分析测试研究院,贵州贵阳,550002;贵州大学酿酒与食品工程学院,贵州贵阳,550025【正文语种】中文由RNA、DNA在生命科学研究中的重要地位，可预见到核苷、核碱、核酸及嘌呤物质的分析研究，是生命科学的一个重要领域，解决嘌呤物质的分析问题，在物质检测发展中一直处于核心地位［1］。
预制菜 人参炖老鸡-2023标准
预制菜人参炖老鸡1 范围本文件规定了预制菜人参炖老鸡的术语和定义、原辅料、技术要求、生产加工过程、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存、食用方法、销售与追溯召回。
本文件适用于以鸡肉、人参、红枣等为主要原料，经加水炖煮等加工后装袋制成的人参炖老鸡。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 191 包装储运图示标志GB 2707 食品安全国家标准鲜（冻）畜、禽产品GB 2760 食品安全国家标准食品添加剂使用标准GB 2761 食品安全国家标准食品中真菌毒素限量GB 2762 食品安全国家标准食品中污染物限量GB 4789.26 食品安全国家标准食品微生物学检验商业无菌检验GB 5009.5 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定GB 5009.6 食品安全国家标准食品中脂肪的测定GB 5009.91 食品安全国家标准食品中钾、钠的测定GB 5009.124 食品安全国家标准食品中氨基酸的测定GB 5749 生活饮用水卫生标准GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法GB 7718 食品安全国家标准预包装食品标签通则GB 10133 食品安全国家标准水产调味品GB/T 10786—2022 罐头食品的检验方法GB 14881 食品安全国家标准食品生产通用卫生规范GB/T 19506 地理标志产品吉林长白山人参GB 28050 食品安全国家标准预包装食品营养标签通则GB31621 食品安全国家标准食品经营过程卫生规范GB 31644 食品安全国家标准复合调味料JJF 1070 定量包装商品净含量计量检验规则定量包装商品计量监督管理办法国家市场监督管理总局令（第70号）食品标识管理规定国家质量监督检验检疫总局令（2009）第123号3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
高效液相色谱在中药检测的应用研究
高效液相色谱在中药检测的应用研究摘要：高效液相色谱法（HPLC）是色谱法的一个分支，在医药、化学、工业、农业、商检等领域应用广泛。
文章从HPLC的检测原理和技术特点出发，介绍了HPLC在中药检测中的应用现状，并结合实例进行分析。
关键词：中药；HPLC；技术特点；成分检测；质量分析中药是我国的传统医药，以往检测中药的真假和质量，主要采用观察、触摸、闻尝、水试、火试等方法[1]。
近年来随着中医研究深入，中药在临床上的应用更加广泛，传统的检测方法不满足准确性要求，必须采用先进的检测技术。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）在成分测定、质量分析等方面，均具有较高的应用价值，是一种可行的检测技术方案。
1．HPLC的检测原理和技术特点1.1 检测原理HPLC的检测原理，是以液体为流动相，采用高压输液系统，将不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂/缓冲液等流动相，泵入装有固定相的色谱柱，各种成分在柱内被分离后，进入检测器进行检测，就能得到各种成分的含量，以便开展深入分析。
HPLC最早出现于1903年，经过百年的发展和演变，分析精度和自动化水平不断提升。
1.2 技术特点HPLC的技术特点，可以总结为“四高、一广、环保”。
①“四高”指的是高压（对载液加高压，减小流经色谱柱时受到的阻力）、高速（载液流速和分析速度快，一个样本的分析时间通常在15-30min）、高效（固定相和流动相能达到最佳分离效果）、高灵敏度（检测精度可达到0.01mg）。
②“一广”指的是应用范围广，70%以上的有机化合物，均可采用HPLC分析，尤其是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物，分析时更有优势[2]。
③“环保”指的是色谱柱可以反复使用，一根柱子能分离不同化合物；而且检测过程中样品量少、容易回收。
2．HPLC在中药检测中的应用现状2.1 中药材成分测定《中国药典》中收录的中药材和饮片有500多种，300多种采用现代技术测定含量，约70%采用的是HPLC法，典型代表如人参、白芍、大黄、天麻、丹参、甘草、五味子、牛蒡子等，检测既快速又准确。
嘌呤代谢
AMP
HN HC
IMP
NAD+ 2O H NADH+H O
+
谷氨酰胺 Mg2+,ATP
谷氨酸
HN H2N C
C HN C N CH C C N N O H R- '-P
5
O C
GMP合成酶 合成酶
CN CH C N N R-5'-P
XMP
GMP
AMP
ATP
激酶
ADP
ATP
激酶
ATP
ADP 激酶
ADP 激酶
★★
A.嘌呤类似物: A.嘌呤类似物: 嘌呤类似物
8-氮杂鸟嘌呤
★★
6-巯基嘌呤(6MP)、6-巯基鸟嘌呤、 巯基嘌呤(6MP)、 巯基鸟嘌呤、 (6MP) 其中, 6MP临床应用较多 临床应用较多. 其中, 6MP临床应用较多.其化学结构与次黄嘌 呤相似,并可在体内转变成6MP核苷酸.因而可抑 呤相似,并可在体内转变成6MP核苷酸. 6MP核苷酸 制IMP转变为AMP及GMP;可通过竞争性抑制影 IMP转变为AMP及GMP;可通过竞争性抑制影 转变为AMP 响次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)而 响次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)而 (HGPRT) 阻止了补救合成途径;还可反馈抑制PRPP酰基转 阻止了补救合成途径;还可反馈抑制PRPP酰基转 PRPP 移酶而阻断从头合成途径. 移酶而阻断从头合成途径.
★★★
嘌呤碱合成的原料来源
（2）AMP和GMP的合成 AMP和GMP的合成
HOOCCH2CHCOOH
★★
O C C N CH C N N R-5'-P
NH C HN C N CH HC C N N R-5'-P