药典微生物限度修订培训知识
中国药典微生物限度PPT课件
《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： – 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 – 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 – 3、非无菌药品微生物限度标准
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整体概述
概况一
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概况二
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1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温 细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检 验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有 规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
• 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动 检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定 的检查方法。
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1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进 行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用 性试验【10版：方法验证】， 以确认所 采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时， 计数方法应重新进行适用性试 验。
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1.1 Байду номын сангаас则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
中国药典微生物检验主要增修订内容PPT课件共90页
方法验证
删除了铜绿假单胞菌，增订了大肠埃希菌 ——是因在验证试验的实践中，发现作为革兰 氏阴性杆菌代表的铜绿假单胞菌在验证试验中 对大部分抗生素不敏感，而大肠埃希菌对抗革 兰氏阴性杆菌为主的抗生素敏感性较好
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方法验证
明确了验证试验所需样品量是供试品的检验量 而不是供试品的检验数量 删除了原：“ 将规定量供试品按… ” 修订为：
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稀释液、冲洗液及其制备方法部分
在 原有 1. 0.1%蛋白胨水溶液 2. pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
的基础上增加： “可根据供试品的特性，选用其他经验证的适 宜的溶液作为稀释液、冲洗液。” ----扩大了稀释液、冲洗液的选择范围：满足供 试品的充分溶解或调节供试品的pH使适宜微生 物的生长、有利消除供试品的抑菌性，提高方 法检出率。
抑菌剂效力检查法指导原则 药品微生物实验室规范指导原则 微生物限度检查法应用指导原则 药品微生物检验替代方法验证指导原则
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各论标准化
微生物限度检查各论
富马酸酮替芬滴鼻液 【微生物限度】 取本品10ml，用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成1：10的供试液。 细菌数、霉菌和酵母菌数：取供试液，采用培养基 稀释法（0.2ml/皿），依法检查（附录XI J），应符 合规定。 控制菌：取规定量供试液，依法检查（附录XI J）， 应符合规定。
复方庚酸炔诺酮注射液 【无菌】 取本品，加含1％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯
化钠－蛋白胨缓冲液稀释，经薄膜过滤法处理，用 pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液冲洗（每膜不少于 100ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检 查（附录XI H），应符合规定。
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各论标准化
甲硝唑注射液 【无菌】 取本品，经薄膜过滤法处理，用pH7.0无菌氯化钠 －蛋白胨缓冲液分次冲洗（每膜不少于500ml），以生孢梭 菌为阳性对照菌，依法检查（附录XI H），应符合规定。 注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠 【无菌】 取本品，加0.9%无菌氯化钠溶液溶解并制成每
微生物限度(无菌)检查讲义
《中国药典》2005年版微生物限度检查的方法学验证微生物限度检查的范围根据药品使用要求,把药品化为两大类:(1) 规定灭菌药品:(2) 非规定灭菌药品:在非灭菌的各种制剂中,对每克或每毫升的药品按剂型或品种不同规定(1)染菌量检查:包括细菌数,霉菌数及酵母菌数测定,以检查这几类微生物对药品的污染程度.(2) 控制菌检查:包括大肠埃希菌,大肠菌群，沙门菌,金黄色葡萄球菌及铜绿假单孢菌,生孢羧菌及白色念珠菌.药品微生物限度检验中的困难,最根本的原因在于检验对象本身的特殊性.(1) 不确定性:(2) 分布的不均匀性:(3)活体特征:药典中以活的微生物作为检验对象也是独特特性.验证的目的确认所采用的方法适合于供试品的微生物限度检查,即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以已被充分消除到可以忽略不计。
保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。
验证的类型（1）建立药品的微生物限度检查法时。
（2）修订的检验方法。
（3）供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时。
（4）定期的验证。
（5）同一产品不同批次、不同企业生产的同一产品。
当建立药品的微生物限度检查方法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数的方法学验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行，对各试验菌的回收率逐一进行验证。
微生物限度检查样品（1）首先应是合格的样品。
（2）本底微生物太多可以先灭活，但不应因此影响药效。
供试液的制备制剂形式多样，决定前处理各异1.液体供试品取供试品溶液10ml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀作为1:10的供试液.油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀.水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液.2.固体、半固体或粘稠性供试品取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀作为1:10的供试液.必要时加入适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀.增订：3.需要特殊供试液制备方法的供试品（1）非水溶性供试品（2）非水溶性膜剂供试品二部未变动，化学药膜剂取100cm2，剪碎，加100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，浸泡，振摇，作供试液。
2015版中国药典微生物限度培训-2014
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培养基
环境浮游菌、沉降菌及表面微生物监测用培养基一般采用胰酪大豆 胨琼脂培养基（TSA） 当监测结果有疑似真菌或考虑季节因素影响时，可增加沙氏葡萄糖 琼脂培养基(SDA)。
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请根据报告内容更新
培养条件GBT 16293-2010 医工业洁净室（区）浮游菌的测试方法
USP1116 无菌工艺环境的微生物控制与监测
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四、培养基体系
最突出的变化：微生物质控分类及培养基体系 2010版 分类依据 项目1 项目2 按微生物类别分 细菌数 营养琼脂 霉菌及酵母菌数 玫瑰红钠琼脂 2015版 按营养条件分 需氧菌总数 胰酪大豆胨琼脂（TSA） 霉菌及酵母菌总数 沙氏葡萄糖琼脂（SDA）
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尘埃粒子监测
监测方法：参照GB/T 16292-2010 《医药工业洁净室（区）悬浮粒 子的测试方法》 监测设备：
空气尘埃粒子计数器，多为光散射粒子计数器
工作原理： 当取样气流中的尘埃颗粒通过计数器散射腔的光敏感区时，光 遇到粒子时发生散射，这些光脉冲信号经光电二极管转换成电脉冲 信号，电脉冲次数反映粒子数，脉冲幅值反映粒子的粒径。 一台仪器可同时测定多个粒径通道的粒子。
采样点
不得少于2个
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请根据报告内容更新
采样量
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请根据报告内容更新
尘埃粒子标准
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请根据报告内容更新
容易被忽略的UCL值：
UCL的计算：平均值均值的95%置信上限，微粒每立方米 （粒/m3）
《中国药典》2020版微生物增修订内容 教学PPT课件
• 制备过程：
选择替代
增大稀释
•
取
普
通
营匀速养浆 破琼仪 碎脂高 ，培
养
基
3
3
g
加
入
溶剂，该 硫产酸品锰溶0于. 1
5
3
8
g ， 蒸 馏液最水体后10积制00，成
m L ， p H机=7械，破加碎热煮 沸 3次，分装热试水管，内但， 121℃ 灭菌1了5 m1:i6n0。的枯
草 芽 孢 杆化菌学菌结种构在营 养琼脂培养热基水活会化一培养 3代以 上，再供划试线液接进种
灭菌用生物指示剂指导原则 生物指示剂耐受性检查指导原则
DNA序列技术指导原则 标准核酸序列建立指导原则
灭菌法 药品洁净实验室微生物检测和控制指导原则
无菌检查用隔离系统验证指导原则 无菌检查法
非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 非无菌产品微生物限度标准 抑菌效力检查法
药品微生物实验室质量管理指导原则 微生物鉴定指导原则
试验。
2008年， 在《中 国药典》 2010年 版的增 修订
存在争 议
4:培养基适用性检查中的对照
经过第九届药典委员会微 生物专业委员会的反复讨论， 提出以统一的、经过充分评价 和验证过的对照培养基替代需 要由每个实验室分散评价的 “之前验证过的培养基”，微 生物实验室以对照培养基进行 培养基适用性比较试验，中国 食品药品检定研究院承担对照 培养基的研制任务。
1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
3供试品检查——检验量
中国药典 CP
ICH其他成员 国USP/JP/EP
微生物计数法区别
1微生物检验替代方法； 2菌悬液稀释剂； 3孢子悬浮液制备； 4培养基适用性检查中的对照； 5 0.1%聚山梨酯80的制备； 6平皿法计数原则
微生物限度中国药典2020年版四部通则1105、1106、1107
微生物限度中国药典2020年版四部通则1105、1106、
1107
摘要：
一、微生物限度检查的重要性
二、中国药典2020 年版四部通则1105、1106、1107 介绍
三、微生物限度检查方法
四、微生物限度检查在药品质量管理中的作用
正文：
微生物限度检查在药品生产和质量控制中扮演着至关重要的角色。
它旨在确保药品中微生物的数量和种类符合规定标准，以避免微生物污染和药品失效。
在中国，药品的微生物限度检查主要依据《中国药典》进行。
《中国药典》2020 年版四部通则1105、1106、1107 对微生物限度检查进行了详细规定。
其中，1105 通则规定了非无菌药品微生物限度检查的基本要求和方法；1106 通则针对无菌药品的微生物限度检查进行了规定；1107 通则则对微生物限度检查中使用的培养基、试剂和仪器等进行了详细说明。
微生物限度检查方法主要包括计数法和定性法。
计数法是通过计算样品中微生物的数量来判断其是否符合规定标准；定性法则是通过观察和鉴定微生物的种类，以确定其是否为有害微生物。
这两种方法在实际应用中往往相互结合，以提高检查的准确性。
微生物限度检查在药品质量管理中发挥着重要作用。
首先，它为药品生产过程中的微生物控制提供了依据，帮助企业制定合理的生产工艺和质量控制策
略。
其次，微生物限度检查可以有效防止药品在生产和储存过程中的微生物污染，保证药品的安全性和有效性。
最后，微生物限度检查还有助于药品监管部门对药品质量进行监督和评价，确保药品市场秩序和公众用药安全。
总之，微生物限度检查在药品质量管理中具有重要意义。
中国药典微生物检验增修订内容及检查要点
中国药典微生物检验增修订内容及检查要点•中国药典微生物检验有关内容及增修订情况–中国药典2010年版微生物检验有关内容–中国药典微生物检验增修订情况•与微生物检验有关的GMP检查要点–微生物检验的关键质量控制点–现行版GMP中与微生物检验有关的条款及检查关注点中国药典微生物检验有关内容及增修订情况•中国药典2010年版微生物检验有关内容–无菌检查法–微生物限度检查法–灭菌法–新增了四个指导原则•抑菌剂效力检查法指导原则•药品微生物实验室规范指导原则•微生物限度检查法应用指导原则•药品微生物检验替代方法验证指导原则无菌检查法•前言部分•培养基•灵敏度检查•稀释液、冲洗液等•方法验证•薄膜过滤法•培养及观察•结果判断•表1、表2和表3•前言部分–规定了防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出–规定了日常检验还需要对环境进行监控–对无菌检查的人员资质提出了要求•培养基–删除了硫乙醇酸盐流体培养基用于培养好氧菌、厌氧菌的规定–删除了改良马丁培养基用于培养真菌的规定•灵敏度检查–修订了黑曲霉的孢子悬液制备方法，规定应使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液稀释–规定了稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限“菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
”•稀释液、冲洗液等–规定可根据供试品的特性，选用其他经验证的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液•方法验证–标准菌种的选择上，删除了铜绿假单胞菌，增订了大肠埃希菌–明确规定了薄膜过滤法验证时，应取每种培养基规定接种的供试品总量用于过滤•薄膜过滤法–增订了抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜的规定–对每片滤膜的总冲洗量进行了规定，不得过1000ml–修订了无菌气（喷）雾剂供试品的检验方法，规定冰室的温度应至少为-20℃–对装有药物的注射器供试品的检验方法进行了详细的规定•培养及观察–对于培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长的情况，删除了可划线接种于斜面培养基上的规定，同时删除了可根据斜面是否有菌生长而判断的规定•结果判断–增订了阳性对照管和阴性对照管的实验结果对于整体实验结果判断的作用“阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。
最新中国药典版微生物限度检查解析ppt课件
表 2 非无菌含药材原粉的中药制剂微生物限度标准
表 3 非无菌的药用原料及辅料微生物限度标准 表 4 中药提取物及中药饮片的微生物限度标准
注*：限度未做统一规定。
执行及制定标准的注意事项
执行范围：
生产、贮存、销售过程中的药 品
药用原料、辅料 中药提取物、中药饮片 新药标准 进口药品标准复核 药品质量考察及仲裁
• 格式变化 • 通用要求
检测环境 供试品前处理---抑菌性去除 微生物计数法使用范围---可采用替代检查方法 微生物计数定义变化--需氧菌总数（胰酪大豆胨琼脂），霉菌和酵母菌总数 （沙氏葡萄糖琼脂） 菌种 传代 保藏 菌液制备---室温2小时，2~8°C，24小时内使用 培养基 培养条件---需氧菌总数 30~35°C 3~5天；霉菌和酵母菌数 20~25°C 5~7天。
环境
• 实验室的布局和运行 • 环境监测 • 清洁、消毒和卫生
设备
建立仪器设备管理制度 清洁保养制度 操作规程 使用、监控的记录
清单化管理 标识化管理 分类管理
样品
检验方法
➢ 方法选择：应根据检验目的选择适宜方法 ➢ 方法确认：药典方法、标准方法应进行方法适用性确认 ➢ 新方法使用前进行替代方法的验证 ➢ 注意对商业系统的试剂盒等检测方法和数据的确认。
标准执行的注意事项：
药典标准出口服制剂
含药材原粉（不再界定是否为动物药材） 含脏器提取物（不区分是否为中药制剂）
原辅料、中药提取物和中药饮片，
参考制剂的要求及生产工艺特点设置控制 军检查要求
《中国药典》2015年版-非无菌产品微生物检查法
在各控制菌项下：生化试验和“应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验” 改为较少的生化试验或“采用其他适宜方法进一步鉴定”---较大改变
《2020版中国药典微生物变更细则》解读(培训)
控制菌检查法检出意思致病菌时，可参考“微生 物鉴定指导原则（通则9204）”的提示进行后续 确证，确证的方法应选择已被认可的菌种鉴定 方法。
检验量及供试品的准备
检验量，即一次试验所用的供试品量（g）。检验时，应从2个以上最小包装单位 中随机抽取不少于3倍检验用量的供试品。
菌粉、半成品以及成品为散剂和颗粒剂的可直接称取备用；成品为片剂、胶囊剂 的需研碎后备用。
菌粉检定
1. 外观 2. 目的菌检查
取少量菌粉加入适量灭菌生理氯化钠溶液或其他适宜稀释液后，涂布 在适宜琼脂平皿上，在适宜条件下培养，其培养物的生长特性和染色镜 检的特征应符合生产用菌种特征 。
3. 杂菌检查
方法和结果判断见本总论附录3。如不符合规定应废弃。
4.Байду номын сангаас干燥失重 5. 活菌数测定
测定每克菌粉中含有的活菌数量。方法见本总论附录2。
2015版药典
2020版药典
供试品平皿上若未 供试品平皿上若有 见菌落生长或生长 疑似菌落生长，应 的菌落与阳性对照 进行分离、纯化及 的菌落形态特征不 适宜的鉴定试验， 符，判供试品未检 确证是否为大肠埃 出大肠埃希菌；若 希菌或制品中的目 生长的菌落与阳性 的菌；若平皿上未 对照的菌落形态特 见菌落生长，或虽 征相符或疑似，应 有菌落生长但鉴定 做革兰氏染色镜检 结果为非控制菌， 等适宜的鉴定试验， 判供试品未检出大 鉴别是否为制品中 肠埃希菌 的目的菌或大肠埃 希菌。
活菌数（CFU/g）=3个平皿菌落数之和/3*10*最终稀释度
附录3 微生态活菌制品杂菌检查法
微生态活菌制品杂菌检查法系检查微生态活菌制品的菌粉、 半成品及成品受外源微生物污染程度的方法。检查项目包 括控制菌检查，非致病性杂菌、真菌计数。
XX年版药典附录无菌检查和微生物限度检查法增修订内容
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XX年版药典附录无菌检查和微生物 限度检查法增修订内容
培养基的贮藏
⒈商品化培养基应根据使用说明书上的要求 进行储存。脱水培养基或单独配方组分应 在适当的条件下贮存，如低温、干燥和避 光，所有的容器应密闭，尤其是盛有脱水 培养基的容器.
¨ ⒉自配的培养基应标记名称、批号、配制 日期等信息，并在已验证的条件下贮藏。
¨ ②增加了对照培养。
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XX年版药典附录无菌检查和微生物 限度检查法增修订内容
6、供试品检查增修订内容
¨ ⑴平皿法删去采用平皿法进行菌数测定时， 连续2～3个稀释级的供试液。
¨ 修改为按计数方法的验证试验确认的程序 进行供试液制备。
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XX年版药典附录无菌检查和微生物 限度检查法增修订内容
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XX年版药典附录无菌检查和微生物 限度检查法增修订内容
①增加了菌悬液的制备及保存条件。
¨ 菌悬液制备后在室温下放置应在2小时内使 用，若保存在2～8℃可以在24小时内使用。 黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证 过的贮存期内使用，每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，按规定条件培养计 数，同时用相应的对照培养基替代被检培 养基进行上述试验。
染，但采用的措施不得影响微生物的生长。 ¨ 2、无菌检查要进行环境检测增加了日常检验还需
进行环境检测。 ¨ 3、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经
过无菌技术的培训。
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XX年版药典附录无菌检查和微生物 限度检查法增修订内容
无菌检查仪器
¨ 无菌检查仪
¨ 无菌滤杯
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XX年版药典附录无菌检查和微生物 限度检查法增修订内容