内皮细胞亚类marker基因
免疫组化(新)
五 免疫组化技术全过程
1、抗原提取（纯化）（粉碎、沉淀、层析、 离心、电泳） 2、抗体制备：
用Ag免疫动物产生Ab， 由 于 Ag有 多 个 决 定簇 ， 刺激多个B细胞克隆，产 用杂交瘤技术，在细胞培养条 生 针 对 多个 Ag决 定 簇 的 件下，经过多次克隆化，使一 混合物（多价Ab）。 个杂交细胞及其后代产生一种 McAb： 均质的Ab。（分离出单个细 胞，使其通过分裂增殖而获得 一个遗传特性） PcAb：
6、滴加Ⅰ抗，置湿盒内，4℃冰箱过夜。 7、PBS液洗3x5’。 8、滴加Ⅱ抗，湿盒内室温30’，PBS 洗3x5’。 9、滴加PAP或ABC试剂，室温30’，PBS洗 3x5’。 10、显色：DAB液5’ －15’，镜下控制，PBS 冲洗。 11、复染：苏木素1－2分钟，盐酸酒精分化30 秒，兰化10’。 12、80%、95%、100%酒精脱水，二甲苯透 明，中性树胶封片。
肌肉组织标记物
1.结蛋白（Desmin,DMS） 2.肌动蛋白（Actin） 3.肌球蛋白（Myosin） 4.肌红蛋白（Myoglobin,MG） 5. 肌酐激酶BB和MM（Creatinine kinase BB&MM） 6.Z-蛋白（Z-protein）
淋巴造血组织标记物
1.白细胞共同抗原（Leucocyte common antigen,LCA,CD45）； 2.免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）轻链（κ、λ）重 链（μ、γ、δ、α）；
中 心 母 细 胞
中 心 细 胞
B1：套细胞 B2：记忆细胞
T细胞的分化演变过程
骨髓 胸腺 外周淋巴组织及血液
干细胞标志物
干细胞标志物胚胎干细胞的标志物Oct-4: Oct-4（也叫Oct-3或Oct3/4）属POU转录因子一员，最初鉴定为DNA结合蛋白，可通过顺式元件活化基因转录。
它在全能胚胎干细胞(ES)和生殖细胞表达。
该表达对于维持干细胞的自我更新和多能性是必要的。
4 ES的分化导致Oct-4的下调。
5 Oct-4不仅是细胞系多能分化的主要调节因子，而且也是首要的作为鉴定全能ES细胞的标志物。
SSEAs: SSEAs 最初是用来鉴定识别糖脂表位的三个单抗。
SSEA-1表达在前移植期的鼠胚表面（如八细胞期）并且也发现存在于畸胎瘤干细胞表面，但不存在分化的衍生细胞中。
输卵管上皮、子宫内膜、附睾, 成年鼠脑和肾小管区域也发现和SSEA-1抗体反应。
SSEA-3和4在卵子发生时合成，在卵母细胞、受精卵和早期卵裂球细胞膜上存在。
这些与糖链相关的分子的生物学功能被认为是调控发育期的细胞膜间的相互作用。
未分化的灵长类ES细胞，人的EC和ES细胞表达SSEA-3和SSEA-4,但不表达SSEA-1。
未分化的小鼠ES细胞表达SSEA-1,但不表达SSEA-3或SSEA-4.造血干细胞的标志物CD34（细胞表面的唾液粘蛋白）：CD34自从被发现存在于少量人骨髓细胞以来就是兴趣的焦点。
从骨髓和外周血来源的CD34阳性富集的细胞群体显出大部分的造血活性。
CD34被认为是造血干细胞(HSCs). 的标志物。
CD34在原始细胞分化为成熟细胞后表达下降.这点也发现在克隆的祖细胞和一些细胞系的干细胞。
尽管CD34功能未知，但现在认为它参与早期造血CD34是HSCs的标志物的理论近年受到挑战。
Osawa等人首先证明小鼠HSCs可以是CD34阴性。
并且，人的CD34阴性细胞也有低水平的嫁接和造血能力。
移植研究表明胎绵羊CD34阴性细胞有重新繁殖的能力。
并且也表明人和鼠的CD34阳性细胞可能来源于CD34阴性细胞。
总的说来，这些报告提示，HSCs可能是CD34+或CD34-。
医学免疫学-名解和问答
内源性抗原、外源性抗原：在APC内新合成的Ag，如病毒感染细胞合成的病毒蛋白、肿瘤细胞合成的肿瘤抗原叫内源性Ag，该抗原在细胞内加工、处理为抗原短肽，与MHC I类分子结合而可被 T细胞识别。并非由APC合成，而是来源于APC外的Ag叫外源性Ag，该Ag经吞噬、胞饮和受体介导摄取而加工为抗原短肽，与MHC II类分子结合而被 T细胞识别。
第01章免疫学概论、第02章免疫器官和组织
免疫防御：防止外界病原体的入侵和及时清除已入侵的病原体及其有害物质。过低或缺失则发生免疫缺陷病，过高则损伤自身组织，即超敏反应。
免疫监视：随时发现和清除体内出现的“非己”成分(肿瘤细胞、衰老和死亡的细胞)，该功能低下则导致肿瘤发生和持续性病毒感染。
免疫自稳：通过自身免疫耐受和免疫调节2种机制维持免疫系统的稳定。该功能紊乱则发生过敏反应和自身免疫病。
CD：应用以单克隆抗体鉴定为主的方法，将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原称CD。CD分子具有参与细胞的识别、粘附和活化等功能。
细胞粘附分子：介导细胞间、细胞与细胞外基质间接触和结合（或粘附）的膜表面糖蛋白。分布于细胞表面或细胞外基质中，以配体-受体相对应的形式发挥作用。
鱼类原始生殖细胞标记基因研究进展
Vol.33,No.6Dec. 2020第33卷第6期2020年12月水产学杂志CHINESE JOURNAL OF FISHERIES文章编号:1005-3832( 2020 )06-0080-09鱼类原始生殖细胞标记基因研究进展程琳乞黄天晴2,刘晨斌巴谷伟2,徐革锋2,史秀兰2,姚作春2,王丽薇2,王炳谦2(1.哈尔滨师范大学生命科学与技术学院,黑龙江哈尔滨150025;2.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070)摘要:鱼类原始生殖细胞(primonlial germ cells, PGCs)为配子的前体，在发育生物学和水产养殖领域具有极其重 要意义。
在基础科学研究中,PGCs 提供了研究细胞迁移机制的理想模型;在保护濒危物种的应用科学中,PGCs是低温保存的最佳细胞类型，可保存亲代基因组信息。
随着对青错Oryzias latipes 和斑马鱼Danio rerio 等模式 生物的研究，使用PGCs 标记基因研究生殖细胞的迁移和发育备受关注。
这些标记基因可以鉴定PGCs 及其分布、增殖和迁移,为研究鱼类的性腺分化机制奠定了基础,为确定人工性别控制诱导敏感期和单性群体育种提供科学依据。
本文介绍了 Dead end.Vasa 和Nanos 系列鱼类PGCs 标记基因的特点及研究现状，可为鱼类种质 资源保存及性控育种等提供参考。
关键词:鱼类;原始生殖细胞;标记基因中图分类号:S917 文献标识码:AResearch Perspectives : Marker Genes of Primordial Germ Cells in FishesCHENG Lin 气 HUANG Tianqing 2, LIU Chenbin 1,2, GU Wei 2, XU Gefeng 2, SHI Xiulan 2, YAO Zuochun 2,WANG Liwei 2, WANG Bingqian 2(1. College of Life Sciences and Technology, Harbin Normal University, Harbin 150025, China;2. Heilongjiang River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Harbin 150070, China)Abstract: Fish primordial germ cells (PGCs), as the precursor of gametes, play an important role in developmental biology and aqua culture. In basic scientific research, PGCs provide an ideal model for understanding of the mechanism of cell migration; in the appliedscience of protecting endangered species, PGCs is the best cell types for cryopreservation, which can preserve the information on parental genome. With the development of model organisms such as medaka Oryzias latipes and zebrafish Danio rerio 9 the use of P GCsmarker genes to study the migration and development of germ cells has attracted much attention. These marker genes can identify PGCs and their distribution, proliferation and migration, lay a foundation for the study of gonadal differentiation mechanism of fish, and provide scientific basis for determining induction sensitive period of artificial sex control and breeding of monogamous population.This paper introduces the characteristics and research status of a series of P GCs marker genes including Dead end, Vasa and Nanos, in fish, which have provide reference for conservation of fish germplasm resources and sex control breeding.Key words: fish; primordial germ cell; marker gene鱼类早期胚胎发育阶段生殖细胞系与体细胞 系发生分离，随后形成原始生殖细胞(primordialgerm cells, PGCs)o PGCs 起源于胚胎外，通过胚胎组 织迁移到生殖曙，分化为精原细胞或卵原细胞，进 一步发育成卵母细胞和精母细胞，最终形成成熟卵子和精子⑴,是配子在胚胎中的前体。
内胚层分化标记物
内胚层分化标记物内胚层（endoderm）是胚胎发育早期的胚层之一，它是胚胎组织分化的重要阶段。
内胚层分化标记物指的是能够标记或识别内胚层细胞的特定蛋白或基因。
这些标记物在研究胚胎发育、干细胞分化以及疾病模型构建等方面起到了重要的指导作用。
下面将为大家介绍一些常见的内胚层分化标记物。
1. AFP（甲胎蛋白）：AFP是一种胚胎期特异的蛋白质，常用作标记内胚层分化的细胞。
AFP在内胚层中的表达与肝脏和胰腺等消化系统器官的发育密切相关。
2. SOX17（SRY-related HMG box 17）：SOX17是一种转录因子，它在内胚层的形成和分化中起到关键作用。
SOX17 的表达特异性出现在内胚层中，用于标记和研究内胚层相干发育。
3. CXCR4（C-X-C趋化因子受体4）：CXCR4是一种受体蛋白，广泛参与细胞迁移和分化。
在内胚层向胚胎内胚叶转化的过程中，CXCR4的表达量显著上调，因此，CXCR4也是内胚层分化的常用标记物之一。
4. GATA6：GATA6是一种转录因子，它在多种消化系统器官的发育过程中扮演重要角色。
GATA6在内胚层细胞中表达丰富，可作为内胚层分化的标志。
5. FOXA2：FOXA2被认为是内胚层分化的关键标志之一。
它在消化系统和肺部的发育中发挥着重要的调控作用，对内胚层的分化和细胞命运决定起到重要作用。
通过使用上述内胚层分化标记物，研究人员可以追踪和鉴定内胚层细胞的分化和命运决定，从而深入理解胚胎发育过程中内胚层的形成和功能。
此外，内胚层分化标记物的应用还有助于构建胚胎干细胞和诱导多能干细胞等模型，用于治疗和研究多种疾病，如消化系统疾病、肝病和肺疾病等。
总结起来，内胚层分化标记物的研究和应用为我们深入了解胚胎发育提供了重要工具和指导，也为疾病治疗和再生医学研究提供了新的思路和途径。
随着科学技术的不断发展，我们有望进一步揭示内胚层分化机制，为人类健康和疾病治疗做出更大贡献。
《医学免疫学教学课件》05 ck,cd,am
一条肽链参与多种CKR的组成，称为“共用链 ”或 “公有链”，主要与信号转导有关。特异性配体结合链称 为“私有链（private chain）。
CK功能的重叠性主要是由CKR共用链决定的。
Structure of the IL-2 and IL-4 receptors Common and private chain
Lecture 5 Cytokines (CK)
Leukocyte Differentiation Antigens & Adhesion Molecules
第六章 细胞因子 第八章 白细胞分化抗原与黏附分子
Part-1
Cytokines (CK)
主要内容
概念 CK的分类与命名 CK的共同特征 CK的受体 CK的生物学功能
细胞因子受体共用链
可溶性细胞因子受体 (sCKR )
sCKR 是CKR的一种特殊形式。sCKR的氨基酸序 列与mCKR 胞膜外区同源，仅缺少跨膜区和胞内区。 通过膜受体脱落或mCKR的不同剪接而形成。sCKR与 细胞因子特异性结合，但亲和力一般比mCKR低。
sCKR的产生机制 – 膜受体脱落 – mCKR 的不同剪接
➢免疫球蛋白受体超家族（Ig receptor superfamily） ➢I型细胞因子受体（红细胞生成素受体超家族） ➢II型细胞因子受体（干扰素受体家族） ➢III型细胞因子受体（肿瘤坏死因子受体超家族） ➢趋化因子受体家族（G蛋白偶联受体超家族或七跨
膜α－螺旋受体）
细胞因子受体分类
免疫球蛋白超家族：
免疫球蛋白超家族（IgSF） 细胞因子受体家族 C型凝集素家族 整合素家族 肿瘤坏死因子超家族（TNFSF） 肿瘤坏死因子受体超家族
免疫细胞
Developmental time course of TCR gene expression
T细胞发育的阳性选择
早期胸腺细胞为CD2+CD5+CD4-CD8-， TCRβ基因重排和表达，继而发育成双阳 性CD4+CD8+（DP） 机制：如DP细胞的TCRαβ能与胸腺基质 细胞表面的MHC-I和MHC-II类分子高亲 和力结合，被选择继续发育，否则凋亡
脑
神经元、胶质细胞、血细胞
间质干细胞
骨髓
肌肉细胞、骨骼、脂肪细胞
造血干细胞的生物学特征
1．自我更新（self-renewal） 造血干细胞 不对称有丝分裂 子代细胞1（早期祖细胞）：继续分化 子代细胞2（自我更新）：
（维持造血干细胞的全部生物学特征： 维持干细胞池大小、干细胞数量/质量不变。）
2．多向分化 * 造血干细胞早期祖细胞 对称性有丝分裂多向分化
T细胞的发育过程
造血干细胞(PHSC) 前体T细胞（有TdT）
成熟T细胞
效应T细胞
CD4+
CD8+
T细胞在胸腺内的发育
骨髓：pro-T 早期阶段：DN
CD4-CD8-
第二阶段：DP
CD4+CD8+
第三阶段：SP
CD4+CD8- 或CD4-CD8+
T细胞受体的发育
最早表达CD3δ基因
随即出现pTα的mRNA， TCRβ的胚系转录本
组织专一干细胞
* 是特定组织的起源细胞，具发育潜能； * 动物成体多数组织中保留有部分干细胞；
不同组织来源的干细胞可能互相转化。
神 经
骨髓环境
干
细 胞
脑部
根据 ERF 转录因子的结构特征可以将其分为四个亚类
根据ERF 转录因子的结构特征可以将其分为四个亚类。
第I 亚类：AP2/ERF结合域由59 个保守的氨基酸组成，位于蛋白的中部，转录调控域位于蛋白N 端；第II 亚类：AP2/ERF 结合域由58 个保守的氨基酸组成，位于蛋白的N 端，蛋白的C 末端存在一个EAR 基序；第III 亚类：AP2/ERF 结合域也由58 个氨基酸组成，其N 和C 两端各有一个酸性激活域，蛋白C 末端还有一个MAPK 作用位点。
第IV 类：AP2/ERF 结合域同样由58 个保守的氨基酸组成，位于蛋白的N 端，转录调控域位于C 端，此外N 末端还具有一个保守的MCGGAI(I/L)元件[68]ERFs类转录因子可以受到多种胁迫的诱导表达,同时参与不同胁迫信号转导途径的交叉应答,所以它在非生物胁迫中有十分重要的调控作用番前的?STE/JF/基因可以提高番莉根系发育过程中的耐盐性,还可以在转基因植株中表现较高的相对含水量和较低的丙二酸含量及电解质外渗,同时可以积累游离脯氨酸和可溶性糖含量,此外还调节抗逆相关基因、P5CS、DREB3】、的激活表达(Lu et al.,2011)。
Gao等(Gao et al.,2008)将番燕基因转入水稻,经过干旱和高盐处理后,同对照相比转基因植株的抗旱以及耐盐能力增强,并积累了脯氨酸含量,降低了叶片的水分流失。
另外,基因不仅可以影响含有GCC-box或DRE/CRT顺式元件的Z//>5、Wcor413L OsPrx和等胁迫相关的功能基因表达,还影响Os-CDP欠7、OsCDPKlS和OsCDP欠/9等调节基因的表达。
ERF类基因WXPl和WXP2可以使叶蜡积累并提高拟南芥的抗旱性(Zhangetal.,2007)。
己有许多研宄表明胁迫相关基因可以受外源的诱导表达,也有-?些基因虽然ABA对其表达无影响,但是确可以受到干早和低温等的诱导,这就又涉及到ABA依赖和ABA非依赖的非生物胁迫的信号转导途径,Zhu等(Zhu ct al.,2010)通过EMSA试验证明RAP2.6可以与CE丨顺式元件结合,进而可以调控AtABI4等ABA相关基因的特异表达。
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内皮细胞亚类marker基因
内皮细胞是构成血管内膜的主要细胞类型之一，具有多种功能，包括调节血管通透性、血液凝固、血管舒缩等。
内皮细胞在形态和功能上存在着一定的异质性，因此研究者通过分析和鉴定内皮细胞的亚类marker基因，可以更全面地了解内皮细胞的特点和功能。
1. CD31（PECAM-1）
CD31是内皮细胞最常用的标记基因之一，也是内皮细胞的典型标志物。
CD31是一种细胞间粘附分子，参与了内皮细胞之间的黏附和细胞外基质的相互作用。
此外，CD31还参与了内皮细胞的增殖和迁移，对血管生成和维持血管完整性起着重要作用。
2. vWF（von Willebrand factor）
vWF是一种血管内皮细胞特异性的分泌蛋白，也是内皮细胞的标记物之一。
vWF参与了血小板的黏附和凝聚，对血液凝固过程起着重要作用。
研究显示，vWF的表达水平与血管疾病的发生和发展密切相关，因此它被广泛应用于内皮细胞的鉴定和功能研究。
3. eNOS（endothelial nitric oxide synthase）
eNOS是内皮细胞中最重要的一种酶类标记物，它参与了一氧化氮（NO）的合成过程。
NO是一种重要的信号分子，能够调节血管的舒张和收缩，影响血压和血液流动性。
eNOS的表达水平与血管功能密切相关，因此它被广泛应用于研究内皮细胞的功能和血管疾病
的发生机制。
4. ICAM-1（intercellular adhesion molecule 1）
ICAM-1是内皮细胞表面黏附分子的一种，参与了炎症反应和免疫应答过程。
ICAM-1能够与白细胞表面的整合素结合，促进白细胞的黏附和迁移，从而参与了炎症反应和免疫细胞的介导的病理过程。
ICAM-1的表达水平与炎症疾病的发生和发展密切相关，因此它也被广泛应用于内皮细胞的炎症反应研究。
5. VE-cadherin（vascular endothelial cadherin）
VE-cadherin是一种细胞间黏附蛋白，是内皮细胞黏附的重要分子。
它参与了内皮细胞之间的黏附和细胞外基质的相互作用，对血管的形成和维持起着重要作用。
研究发现，VE-cadherin的表达水平与血管通透性和肿瘤血管生成密切相关，因此它也被广泛应用于研究内皮细胞的功能和血管相关疾病的发生机制。
6. CD34
CD34是一种跨膜糖蛋白，广泛表达于内皮细胞和造血干细胞表面。
在内皮细胞中，CD34参与了细胞增殖和迁移过程，对血管生成和维持血管完整性起着重要作用。
此外，CD34的表达水平与肿瘤的预后和治疗反应密切相关，因此它也被广泛应用于研究内皮细胞的功能和肿瘤血管生成的机制。
7. Tie2（tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-
like domains 2）
Tie2是一种内皮细胞特异性的受体酪氨酸激酶，参与了血管生成和血管稳定性的调控。
Tie2与其配体Angiopoietin-1结合后，可以激活多种信号通路，调节内皮细胞的增殖、迁移和存活，从而影响血管的形成和维持。
研究发现，Tie2的异常表达与血管疾病的发生和发展密切相关，因此它也被广泛应用于内皮细胞的功能研究和血管疾病的诊断和治疗。
8. P-selectin（CD62P）
P-selectin是内皮细胞表面的一种黏附分子，参与了炎症反应和血小板的黏附。
P-selectin能够与血小板表面的配体结合，促进血小板的黏附和聚集，从而参与了炎症反应和血小板介导的病理过程。
研究发现，P-selectin的表达水平与炎症疾病的发生和发展密切相关，因此它也被广泛应用于内皮细胞的炎症反应研究和血管疾病的发生机制。
9. Angiopoietin-2
Angiopoietin-2是一种内皮细胞特异性的分泌蛋白，参与了血管生成和血管通透性的调节。
Angiopoietin-2与其受体Tie2结合后，可以拮抗Angiopoietin-1对Tie2的激活作用，从而调节内皮细胞的增殖、迁移和存活，影响血管的形成和维持。
研究显示，Angiopoietin-2的异常表达与血管疾病的发生和发展密切相关，因此它也被广泛应用于内皮细胞的功能研究和血管疾病的诊断和治疗。
10. Endoglin（CD105）。