药物的抗病毒实验
熊胆贝母止咳胶囊的体外抗病毒作用的实验观察
熊贝止 咳胶囊 ： 为棕 黄色粉 末 ， ．ｇ粉末 相 当 ５ ５ １Ｏ ． ｇ生 药
量Hale Waihona Puke 由四川 华 星 中 医药 有 限公 司提 供 ， 号 ： １６ １ Ｉ 批 ００ ０ 。称 取
１Ｏ 粉末溶于 １ ｍｌ ｎ ’ 溶 液 中， ．ｇ ０ ｋＳ Ｈａ 配制成 １：１ Ｏ的药液 ， 然 后 以此药液用 Ｈａ ｋ Ｓ 作倍 比稀 释成 １：２ ｎ ’液 Ｏ作起 始浓度 ， 供
１２ ２ 抗病毒试验 ： １０ Ｃ ￣ｏ ．． 将 ０ Ｔ Ｉ 的流感病毒川属 ９ 和 ｃ ３ ９ ＶＢ
分别加人 ＭＩ Ｋ和 Ｈｅ Ｘ： ｌ ａ细胞 培养板 中 ，０ ￣ ・孔＿ ， １０ ｌ 。置孵 箱 分别吸附 ２ Ｏ ． ｈ和 １５ ， 去病 毒液 后 ， ＭＤ Ｋ细胞 培养 板 ．ｈ倾 于 Ｃ 分别加人熊胆贝母 止 咳胶 囊 １： ５ ０ １：２ ４ ０稀释 液 和病 ２ ６ ０８ 毒唑 １： Ｏ ２ ～１： ０ ８ ２ ４ ０稀 释液 ， 观察 药 物抗 流 感病 毒川 属 ９ Ｉ ９
所 提供 ， 四川大学华 西 医学 中心微生 物教研 室冻存 传代 培养 ，
１ 材 料与 方法
１ １ 试 验 药 物 ．
的作用 ； 而于 Ｈｅａ ｌ细胞 培养板 中分 别加 人熊 胆 贝母止 咳胶 囊 和病毒 唑 １： Ｏ １：６ ０稀释 液 ， 察药 物对 ｃ ３ ４～ ４ 观 ＶＢ 的作 用 ；
１０ ｌ 孔～ ， ０￣ ・ 每药物浓度 ３孔 ， 并设 细胞 和病毒 对 照 ， ３ ℃ 置 ７ ５ ０ 孵箱中培养 ， 日观察 细胞病 变 ， Ｃ ２ 逐 当病 毒对 照组 出现 ３ ＋（ ＋＋＋） 而细胞对照组细胞生长 良好 、 ， 形态正 常时 ， 即可 终
医学课题实验报告范文(3篇)
第1篇实验名称：某新型抗病毒药物的药效学及安全性评价一、实验目的本实验旨在研究某新型抗病毒药物（以下简称“药物”）的药效学及安全性，为该药物的进一步研发和应用提供科学依据。
二、实验材料1. 实验药物：某新型抗病毒药物（纯度≥98%，批号：XXXXX）2. 实验动物：昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半，由某医学院实验动物中心提供3. 实验试剂：生理盐水、DMEM培养基、青霉素、链霉素等4. 实验仪器：生物显微镜、电子天平、恒温培养箱、细胞培养箱等三、实验方法1. 药物预处理将药物溶解于生理盐水中，配制成所需浓度的药物溶液。
2. 动物分组及给药将小鼠随机分为5组，每组10只，分别为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组。
空白对照组给予等体积的生理盐水，其余各组分别给予不同浓度的药物溶液，给药剂量分别为0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg和5mg/kg，每天给药1次，连续给药7天。
3. 药效学实验（1）病毒感染实验：采用病毒攻击小鼠模型，观察药物对病毒感染的保护作用。
（2）细胞实验：采用细胞培养模型，观察药物对病毒复制的影响。
4. 安全性评价（1）一般毒性实验：观察动物的行为、外观、体重等指标。
（2）血液学指标检测：检测动物血清中的白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白等指标。
（3）肝肾功能指标检测：检测动物血清中的ALT、AST、BUN、Cr等指标。
四、实验结果1. 药效学实验结果（1）病毒感染实验：低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠的死亡率明显低于空白对照组（P<0.05），表明药物具有显著的抗病毒作用。
（2）细胞实验：低剂量组、中剂量组和高剂量组细胞的病毒滴度明显低于空白对照组（P<0.05），表明药物对病毒复制具有抑制作用。
2. 安全性评价结果（1）一般毒性实验：给药期间，各组动物的行为、外观、体重等指标未见明显异常。
（2）血液学指标检测：各组动物的血液学指标均在正常范围内。
制药实验报告
实验名称：新型抗病毒药物的筛选及活性评价一、实验目的1. 筛选具有抗病毒活性的新型药物；2. 评价筛选药物的活性及安全性；3. 为新型抗病毒药物的研发提供实验依据。
二、实验原理病毒感染是导致多种疾病的主要原因之一，抗病毒药物的研究与开发对于治疗病毒性疾病具有重要意义。
本实验采用体外细胞培养技术，利用病毒感染细胞模型，筛选具有抗病毒活性的新型药物。
三、实验材料1. 细胞：人胚肾细胞（HEK293）；2. 病毒：乙型肝炎病毒（HBV）；3. 药物：待筛选的新型抗病毒药物；4. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、病毒颗粒、细胞毒性检测试剂盒等。
四、实验方法1. 细胞培养：将HEK293细胞接种于培养瓶中，在37℃、5%CO2的条件下培养至对数生长期；2. 病毒感染：将待检测的药物分别加入培养的细胞中，设定不同浓度梯度，同时设置病毒对照组和药物对照组；3. 感染后细胞处理：在药物处理48小时后，收集细胞，进行病毒感染；4. 病毒滴度测定：采用ELISA法测定病毒滴度，计算药物抑制率；5. 细胞毒性检测：采用MTT法检测药物对细胞的毒性作用；6. 安全性评价：观察药物对细胞形态的影响，评价药物的安全性。
五、实验结果1. 药物筛选结果：通过ELISA法测定病毒滴度，筛选出具有抗病毒活性的新型药物；2. 药物活性评价：不同浓度的药物对病毒感染细胞具有不同程度的抑制作用，其中某浓度药物抑制率最高；3. 细胞毒性检测：MTT法检测结果显示，该药物在有效浓度范围内对细胞无明显毒性作用；4. 安全性评价：观察细胞形态，药物对细胞无明显损伤，安全性较高。
六、实验结论1. 成功筛选出具有抗病毒活性的新型药物；2. 该药物在有效浓度范围内对病毒感染细胞具有显著的抑制作用；3. 该药物在实验条件下对细胞无明显毒性作用，安全性较高。
七、实验讨论1. 本实验采用体外细胞培养技术，筛选出具有抗病毒活性的新型药物，为新型抗病毒药物的研发提供了实验依据；2. 通过ELISA法和MTT法检测，评价了药物的活性及安全性，为药物的临床应用提供了参考；3. 本实验结果为后续深入研究提供了基础，有望为抗病毒药物的研发提供新的思路。
药效实验报告
实验名称：某新型抗病毒药物的药效评估实验目的：通过对某新型抗病毒药物的药效进行实验评估，验证其有效性、安全性和临床应用价值。
实验时间：2021年10月1日至2021年10月31日实验地点：某大学医学院药理实验室实验材料：1. 实验药物：某新型抗病毒药物（以下简称“药物A”）2. 对照药物：已知有效抗病毒药物（以下简称“药物B”）3. 实验动物：健康昆明小鼠50只，体重18-22g4. 实验试剂：病毒培养液、病毒感染液、细胞培养液、抗生素等5. 实验仪器：细胞培养箱、生物显微镜、酶标仪、离心机、冰箱等实验方法：1. 动物分组：将50只昆明小鼠随机分为5组，每组10只，分别为药物A高剂量组、药物A中剂量组、药物A低剂量组、药物B组和空白对照组。
2. 病毒感染：将各组小鼠分别用病毒感染液进行病毒感染，感染剂量为病毒滴度10^6 TCID50。
3. 药物处理：感染后24小时，药物A高剂量组、药物A中剂量组、药物A低剂量组和药物B组分别给予药物A或药物B进行处理，药物剂量分别为50mg/kg、25mg/kg、12.5mg/kg和50mg/kg。
空白对照组给予等体积的生理盐水。
4. 观察指标：观察各组小鼠的生存时间、病毒滴度、体重变化、组织病理学变化等指标。
5. 数据统计：采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析，比较各组之间的差异。
实验结果：1. 生存时间：药物A高剂量组、药物A中剂量组、药物A低剂量组和药物B组的生存时间均明显长于空白对照组，且随着药物剂量的增加，生存时间逐渐延长。
具体数据如下：- 空白对照组：平均生存时间（7.2±1.5）天- 药物A高剂量组：平均生存时间（14.5±2.1）天- 药物A中剂量组：平均生存时间（12.3±1.8）天- 药物A低剂量组：平均生存时间（10.6±1.6）天- 药物B组：平均生存时间（13.2±1.9）天2. 病毒滴度：药物A高剂量组、药物A中剂量组、药物A低剂量组和药物B组的病毒滴度均明显低于空白对照组，且随着药物剂量的增加，病毒滴度逐渐降低。
抗病毒药物的作用机制及耐药性研究
抗病毒药物的作用机制及耐药性研究研究方案：抗病毒药物的作用机制及耐药性研究引言：抗病毒药物在预防和治疗病毒感染方面发挥着重要的作用。
然而，由于病毒的快速变异和适应性，耐药性的出现已成为临床治疗的一个重要挑战。
探究抗病毒药物的作用机制及耐药性研究是十分必要的。
一、研究目的和意义：本研究旨在深入了解抗病毒药物的作用机制及其与病毒耐药性之间的关系，为抗病毒药物的研发和临床应用提供理论依据。
二、研究方法：1. 实验材料：- 抗病毒药物：选择常见的抗病毒药物，如抗HIV药物、抗流感药物等。
- 病毒株：选择对应的病毒株，如HIV、流感病毒等。
- 细胞系：选择适合的细胞系进行细胞培养，如HEK293细胞、Vero细胞等。
- 实验仪器：包括细胞培养设备、流式细胞仪、PCR仪等。
2. 实验设计：a) 病毒感染实验设计：- 无药物组：将细胞接种于培养板中，以无病毒治疗作为对照组。
- 有药物组：将细胞接种于培养板中，添加抗病毒药物，设不同浓度的组别。
b) 耐药性检测实验设计：- 低浓度药物选择实验：将具有一定浓度抗病毒药物的病毒株接种于细胞上，反复培养，逐步增加药物浓度。
- 点突变筛选实验：通过PCR等方法，筛选不同药物浓度下的病毒株。
3. 数据采集与分析：a) 病毒感染实验：- 通过细胞存活率、病毒复制水平等指标，确定不同浓度下抗病毒药物的有效性。
- 通过Western blot、ELISA等方法，研究抗病毒药物对相关蛋白表达及细胞信号通路的影响。
b) 耐药性检测实验：- 通过文库构建与高通量测序技术，分析病毒反应突变，并研究突变位点对药物耐药性的影响。
- 建立耐药突变的模型，探讨不同变异情况下对抗病毒药物的反应。
三、研究内容：1. 抗病毒药物作用机制研究：a) 研究不同抗病毒药物的作用机制，如阻断病毒复制、抑制特定蛋白等。
b) 探究抗病毒药物对细胞信号通路的调节作用，如信号传导、细胞凋亡等。
2. 耐药性研究：a) 分析不同药物浓度对病毒株的选择压力，并探讨药物浓度与病毒耐药性之间的关系。
药厂要做的实验报告(3篇)
第1篇实验名称：新型抗病毒药物的体外活性筛选及药效学评价一、实验目的1. 筛选出具有抗病毒活性的新型药物。
2. 评价该药物的药效学特性，为临床应用提供依据。
二、实验材料1. 药物：待筛选的新型抗病毒药物（以下简称药物A）。
2. 对照药物：已知具有抗病毒活性的药物（如利巴韦林）。
3. 病毒株：流感病毒A/H1N1。
4. 细胞：MDCK细胞（犬肾上皮细胞）。
5. 试剂：细胞培养试剂、病毒培养试剂、药物溶解剂等。
三、实验方法1. 细胞培养：将MDCK细胞接种于96孔板，于37℃、5%CO2培养箱中培养24小时，待细胞生长至约80%时，用于实验。
2. 病毒培养：将流感病毒A/H1N1接种于MDCK细胞，于37℃、5%CO2培养箱中培养，收集病毒感染后的细胞。
3. 实验分组：将96孔板分为空白组、药物A组、药物A高浓度组、药物A低浓度组、对照组和阳性对照组。
4. 药物处理：向各实验组细胞中加入不同浓度的药物A，对照组加入等体积的溶剂，阳性对照组加入已知抗病毒药物。
5. 细胞培养：将各实验组细胞继续培养24小时，收集细胞。
6. 病毒滴度测定：将各实验组细胞接种于96孔板，加入病毒悬液，于37℃、5%CO2培养箱中培养，观察细胞病变情况，计算病毒滴度。
7. 数据处理：采用SPSS软件进行统计分析，比较各组病毒滴度的差异。
四、实验结果1. 药物A对流感病毒A/H1N1的抑制作用：药物A在不同浓度下对流感病毒A/H1N1具有抑制作用，且随着药物浓度的增加，抑制作用逐渐增强。
2. 药物A与对照药物的比较：药物A在相同浓度下对流感病毒A/H1N1的抑制作用与对照药物相似，表明药物A具有较好的抗病毒活性。
3. 药物A的半数抑制浓度（IC50）：药物A的IC50为10μM，表明药物A具有较好的抗病毒活性。
4. 药物A的安全性评价：药物A在实验浓度范围内对细胞无明显毒性作用。
五、实验结论1. 药物A具有较好的抗病毒活性，对流感病毒A/H1N1具有抑制作用。
十味板蓝根颗粒剂抗病毒作用的实验研究
Ｃ ｉｅ ｕｎｌｆ ｒｇ ｐｌａｏ ｄ ｎｏｉ ， ｏ８Ｎ ． Ｏ ｔ ｅ２ １ ｈｎｓ Ｊ ｒａｏＤ ｕ Ａ ｐ ｃ ｉ ａ Ｍｏｉｒ ｇＶ １， ｏ ， ｃ ｂｒ ０ １ ｅｏ ｉｔｎｎ ｔｎ ． ５ ｏ
十昧板蓝根颗粒 剂抗病 毒作用的实验研究
ｏ ｙｏｏ ｉｉ ｎ ｙｏ ａｈｃｅｆｃ． ｅ ｕ ｔ ： ｍｐ ｔ ａ ｉ ｓｔ ｉ ｒｎ ｌｓｈ ｄ ｓｉｈ ｙｏｏ ｉ ｆｅ ｔ ｎＨｅ － ｎ ｌ ｅｌ ｆｃ ｔｔｘｃｔ ａ ｄｃ ｔｐ ｔｉ ｆｅ ｔＲ ｓ ｌｓ Ｃｏ ｏｍｄｒｄｘｉａｉ ｓｇａ ｕｅ ａ ｌ ｔ ｔｔｘｃｅ ｃ ｐ ２ａ ｄＨｅａｃ ｌ ｙ ｄ ｇ ｃ ｏ ｓ
细胞 维持液为含有 ２ ％胎牛血清 的 Ｄ Ｍ ； ＭＥ 常规加 入
解毒 中药 ， 究 其抗 病毒 作 用可 为 临床 应用 提 供参 研
考依据 。
【 通信作者 ｌ 邱彦 ， 博士， 男， 主管药师， 研究方向： 药理学。Ｅ ｍ ｉ — ａ ｌ ｑ ｙｎ １ ９ ６ ． ｍ ｉ ａ ２ ８ ＠１３ ｏ ｕ ｃ
于 ３ Ｉ吸附 ２ｈ ７ｃ ＝ 后均弃去病毒 液 ， 分别加入 ６ 个不 同 浓度 （ ０ ０ ５ ０ ２ ０ １５ ６ 和 ３ ｇｍＬ ） １０ ， ０ ， ５ ， ２ ， ３ １ ・ 。 的十味
板 蓝根溶 液和利 巴韦林药 液 ， 每个浓度 ４ 孔 ， 个 同时 均设 溶剂对照 、 病毒对 照及正常 细胞 对照 ， ３ 置 ７℃ ， ５ Ｏ： ％Ｃ 培养 箱 中连 续培 养 ９ ， ６ｈ 每天 于倒 置 显微镜 下观察 细 胞病 变 ， 录 病变 情况 。当病毒 对 照达 到 记 “＋ ＋ 时 ， ＋ ＋ ” 判定结果 ， 如果细胞对照生长 良好 ， 加入 药物的细胞 出现 “ ＋ ” ＋ ＋ 以上病变 时 ， 可判定该 浓度 的
中药药物性口罩抗流感病毒(H1N1)的实验研究的开题报告
中药药物性口罩抗流感病毒(H1N1)的实验研究的开题报告一、研究背景和意义自2009年开始，H1N1甲型流感病毒在全球范围内流行。
耐抗药性、复发性、死亡率高等特点已经成为公共卫生问题。
口罩作为一种重要的自我防护措施，已经广泛应用于日常生活和医疗领域。
中药中含有丰富的活性化合物，研究中药制备的口罩的抗病毒性，可以为预防和控制流行性病毒提供新的策略和方法。
二、研究目的本研究旨在探索中药药物性口罩对H1N1甲型流感病毒的抗病毒作用，并分析中药药物对口罩的质量和抗病毒效果的影响，为制备有效的抗病毒口罩提供参考。
三、研究方法1.中药药物筛选：选取具有药用价值的中药材，进行体外抗病毒实验。
通过对不同中药药物口罩的抗病毒性和对病毒复制的影响等指标进行测定，筛选出具有一定抗病毒能力的药物。
2.制备中药药物性口罩：在普通口罩的基础上，采用细粉末覆盖的方法制备中药药物性口罩。
3.体外抗病毒实验：采用细胞培养技术，通过测定病毒复制能力、病毒感染程度等指标来评估不同中药药物性口罩的抗病毒作用。
四、研究预期结果通过对不同中药药物筛选和制备中药药物性口罩，实验结果可以提供以下预期结果：1.筛选出具有抗病毒作用的中药药物。
2.制备出抗病毒作用的中药药物性口罩。
3.通过体外抗病毒实验，探究中药药物性口罩的抗病毒作用。
4.为预防和控制H1N1甲型流感提供新的自我防护策略和方法。
五、研究意义本研究可以为中药制备的口罩的应用和推广提供技术支持，为防止病毒传播提供新的策略和方法，促进公共卫生领域的发展，提高人民群众的生活质量和生命安全。
十味板蓝根颗粒剂抗病毒作用的实验研究
十味板蓝根颗粒剂抗病毒作用的实验研究司梁宏;陶震;刘静;刘梅;邱彦【期刊名称】《中国药物应用与监测》【年(卷),期】2011(008)005【摘要】Objective: To investigate the antiviral activity in vitro of compound radix isatidis granules against Coxackie virus B3 and HSV- Ⅱ.Methods: The antiviral activities of compound radix isatidis granules in cells were assessed by observation of cytotoxicity and cytopathic effect. Results: Compound radix isatidis granules had slight cytotoxic effect on Hep-2 and Hela cells (TD0 = 1 mg·mL-1), the drug above concentration 125 μg·mL-1 can depress the infection of HSV- n on Hela cells. The drug above concentration 250 μg·mL-1 can depress the cytopathic effects on Hep-2 cells caused by CVB3 and have protective effects on both Hep-2 and Hela cells. Besides, with the increase of drug concentration, the CPE features declined and the cell survival rate rose significantly Conclusion: The assay results showed that the compound radix isatidis granules had remarkable inhibition on the cytopathic effects of Coxsackie virus B3 and HSV- Ⅱ in vitro.%目的:探讨十味板蓝根颗粒剂体外抗柯萨奇病毒B3株(CVB3)、单纯疱疹病毒II型(HSV II)的作用.方法:采用组织细胞培养法,观察药物毒性和细胞病变效应,评价十味板蓝根颗粒剂的细胞毒性及抗病毒效果.结果:十味板蓝根颗粒剂对Hep-2和Hela细胞毒性均较低(TD0为1 mg·mL-1),浓度在125μg·mL-1以上时,可以明显抑制HSV-II病毒对Hela细胞感染;浓度达250 μg·mL-1以上时,明显抑制CVB3病毒对Hep-2细胞的致病变作用,对Hep-2和Hela细胞有保护作用,并且随着药物浓度的增加,CPE特征逐渐减弱,病毒抑制率(细胞存活率)明显升高.结论:十味板蓝根颗粒剂在体外能明显抑制CVB3和HSV-II病毒的致细胞病变作用.【总页数】4页(P275-278)【作者】司梁宏;陶震;刘静;刘梅;邱彦【作者单位】解放军454医院药剂科,江苏,南京,210002;解放军454医院药剂科,江苏,南京,210002;解放军454医院药剂科,江苏,南京,210002;解放军454医院药剂科,江苏,南京,210002;解放军454医院药剂科,江苏,南京,210002【正文语种】中文【中图分类】R965【相关文献】1.利咽康颗粒剂抗病毒作用的实验研究 [J], 宋光熠;王实;王伟;张广新;刘永林;李开明2.十味板蓝根颗粒剂抗炎作用的实验研究 [J], 司梁宏;黄宁;刘静;刘梅;陆瑜;邱彦3.十味板蓝根颗粒剂治疗风热感冒临床疗效观察 [J], 司梁宏;张丽玲;朱元元;李燕思;马静;邱彦4.十味板蓝根颗粒解热镇痛作用的实验研究 [J], 邱彦;司梁宏;刘静;刘梅5.十味板蓝根颗粒剂治疗上呼吸道感染的临床观察 [J], 司梁宏;尚宁;李燕思;马静;邱彦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
6—O—取代阿昔洛韦衍生物的合成及其抗病毒活性研究
6—O—取代阿昔洛韦衍生物的合成及其抗病毒活性研究目的探讨6-O-取代苯基阿昔洛韦衍生物的合成及测定其抗病毒活性。
方法采用先导化合物为阿昔洛韦，对其分子中的碱基进行结构修饰，进行6-O-取代阿昔洛韦衍生物的合成。
将阿昔洛韦作为对照，应用体外抗HSV-Ⅰ及HSV-Ⅱ测定6-O-取代阿昔洛韦衍生物的抗病毒活性。
结果体外抗HSV-Ⅰ及HSV-Ⅱ的病毒活性均以6-O-苯基阿昔洛韦相对于阿昔洛韦为较弱。
结论6-O-取代阿昔洛韦虽然对于阿昔洛韦抗病毒活性作用较弱，但其毒性较小。
标签：6-O-取代阿昔洛韦衍生物；合成；抗病毒活性；研究随着社会医疗水平的不断提高，核苷类抗病毒药物虽然对于单纯疱疹病毒感染的临床疾病治疗较为有效[1]，但此类药物具有较大毒副作用及耐药性[2]，本次研究就6-O-取代阿昔洛韦衍生物的合成及其抗病毒活性进行探讨研究。
1物质合成及抗病毒活性实验1.1合成路线阿昔洛韦分子属开环核苷类抗病毒化合物，根据其构效关系及作用机制将其分子中的碱基结构进行修饰，具体应用阿昔洛韦作为先导化合物，利用取代苯氧基取代嘌呤环上的6-OH，合成总计11个6-O-取代苯基阿昔洛韦衍生物[3]，具体步骤见图1。
1.2合成实验本次研究具体阿昔洛韦衍生物合成实验有以下几个步骤，即制备酚钠、双乙酰化阿昔洛韦、制备单乙酰阿昔洛韦、制备6-Cl-6-脱氧-2′-O-乙酰阿昔洛韦及制备6-O-苯基阿昔洛韦[4]，具体各个实验步骤阐述如下。
1.2.1酚钠的制备称取苯酚0.95g，即10.1mmol，与10mmol即0.4gNaOH 溶于10mLH2O中，搅拌溶解，减压并置于P205干燥器中真空干燥。
1.2.2双乙酰化阿昔洛韦的制备称取73mmol阿昔洛韦即16.5g与100mL醋酐加热溶解，应用回流反应3～5h，经薄层色谱显示反应完全后减压蒸除醋酐，静置常温后过滤。
应用丙酮、二氯甲烷及水冲洗滤饼，待冲洗完毕应用丙酮再次冲洗，烘干得到双乙酰化合物。
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3. 药物对鸡胚的毒性作用
选用健康的9~11日龄鸡胚，消毒备用。将 受试药和对照药作10倍系列稀释5~6个浓度， 如100mg/ml、10mg/ml、1mg/ml、 100μg/ml、10μg/ml，每个浓度接种5胚， 0.25ml /胚。35℃培养5 d后观察结果（死 亡/存活）。确定两种药物对鸡胚的最大无 毒剂量（TC0），用于正式实验。
4.3血凝和血凝抑制实验 （1）血凝实验
血凝实验的具体操作方法，参照本教材的第四章第四节内 容：病毒的分离培养鉴定和血清学检测。 [结果判断] 以“+”号多少表示血凝程度： ++++ 100％的RBC发生血凝，形成花边拉网状，红细胞 呈薄层均匀铺于板孔底，呈细沙状或薄膜状； +++ 75％的RBC发生血凝，红细胞虽铺于孔底，呈细沙 状，但边缘不整有下沉趋势； ++ 50％的RBC发生血凝，红细胞在孔底呈一环状，四 周有小凝集块； + 25％的RBC发生血凝，红细胞在孔底沉聚呈小圆点， 边缘不光滑，周围有小凝集块； - 100％的RBC沉积，红细胞于孔底呈一小圆点，边缘 光滑整齐，无凝集现象。 以使50％的RBC发生凝集的最高稀释倍数，为病毒的血凝 效价。计算药物的MIC。
第六节 药物的抗病毒实验
一、目的和要求 1.掌握药物体外抗病毒的实验方法和操作步
骤。 2.熟悉病毒感染性动物模型的建立和评价。
二、内容
（一）原理
病毒是一类结构简单、非细胞形态的专性细 胞内寄生的微生物，必须在易感的活的动物、 鸡胚或细胞内才能进行复制增殖。因此可用 动物、鸡胚或细胞来进行病毒培养和药物的 抗病毒试验。可通过观察细胞培养液酸碱度 的变化、病毒致细胞病变效应（CPE）、病 毒滴度（PFU）改变、病毒基因组mRNA水 平变化、鸡胚尿囊液或动物血清等相应指标 的改变，来判断药物的抗病毒试验效果。
流感病毒、 腮腺炎病毒
流感病毒初次分离
绒毛尿囊膜 尿囊腔 羊膜腔
9-10 9-11 12-14
绒毛尿囊膜 尿囊液 羊水
某些嗜神经性病毒
卵黄囊
5-6
卵黄液
2. IFV-FM1的50%鸡胚感染量（EID50）测定 用生理盐水将病毒作10倍系列稀释，分别 接种鸡胚，0.1ml /胚，同时设正常对照， 共6组，每组5胚。35℃孵育72 h，置4℃冰 箱过夜，收集尿囊液做血凝试验，按ReedMuench法计算FM1的EID50。
4.1鸡胚接种 （1）孵育9~10 d左右的鸡胚，在照蛋灯下用蜡笔
标出气室和胎位。 （2）鸡胚直立于固定架上，气室端向上，按常规以
碘酒，酒精消毒。 （3）用磨蛋器在气室中央磨一小孔，再用碘酒擦拭。 （4）用lml注射器吸取病毒悬液，针头从气室小孔
刺入，沿胚胎的长轴刺入0.5~1.0cm深度；此时 针头已在尿囊腔中，注入0.2ml病毒悬液。 （5）拔出针头，用镊子将胶布沾酒精烧灼后将小孔 封闭，置于35~36℃温箱内培养二天，每天翻动 两次，用照蛋灯检视一次。培养二天后。置 20℃冰箱2 h后，无菌操作收获尿囊液。
（二）材料
1. 9~10 d日龄鸡胚，壳白净且厚薄均匀的鸡 卵（莱亨鸡的受精卵由于卵壳薄，在孵育 过程中便于检查，为首选）
2. Hep-2细胞或MDCK细胞 3.病毒：如IFV（FM1株）、RSV（Long株） 4.药物：试验药物，阳性对照药 5.动物：小鼠等 （三）操作方法
一）鸡胚法
鸡胚培养为常用的病毒培养法之一，目 前主要用于痘类病毒、粘病毒、疱疹病毒 的分离、鉴定、制备抗原和疫苗的生产等。
4.2尿囊液的收获 （1）从冰箱中取出鸡胚，用碘酒，酒精消毒
气室部位。 （2）用无菌镊子除去胶布并去除气室部分的
卵壳。 （3）用无菌的毛细吸管插入尿囊腔中轻轻吸
取尿囊液（避免血管破裂），置于无菌试 管中。 （4）获得的尿囊液取一部分做血凝和血凝抑 制试验（定性），判断病毒的增殖情况并 对病毒进行鉴定；同时做无菌实验。
将病毒液配成4个血凝单位。血凝抑制实 验的方法，参照本教材的第四章第四节内 容：病毒的分离培养鉴定和血清学检测。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
二）细胞培养法
主要根据细胞对病毒的敏感性选择适宜 细胞株。人类病毒用人或猴的组织较敏感， 因此，研究人的病毒性疾病常用人胚肾、 人胚肺或人羊膜细胞。组织培养的方法中 以单层细胞培养是最常用的方法，它又有 原代和次代细胞培养、二倍体细胞株和传 代细胞系三种类型。本实验仅介绍对传代 细胞的操作方法。
（2）病毒血凝抑制实验
根据血凝试验滴定的病毒血凝效价，以 “2＋”的凝集者含有1个病毒血凝单位。 如流感病毒的血凝效价为1:160，即病毒液 稀释至1:160时，每0.25ml中含1个血凝单 位，若要将0.25ml病毒液配制成含4个血凝 单位时，应稀释成1:（160÷4），即1:40 稀释。在做血凝抑制试验时用4个血凝单位。
1.接种方法 病毒的鸡胚培养法主要有四种接种途径， 即尿囊腔、绒毛尿囊膜、羊膜腔和卵黄囊， 不同的病毒应选择各自适宜的接种途径， 并根据接种途径确定鸡胚的孵育日龄（见 表）。下面将以流感病毒为例进行说明。
表6-1 鸡胚孵育日龄及接种途径选择
•接种病毒名称 接种部位
鸡胚日龄
收获材料
痘类病毒、 单纯疱疹病毒
1.病毒TCID50滴定 （1）原理
多数病毒感染体外培养的细胞后，常引起细胞
形态学改变，如细胞团缩、裂解和细胞肿大等， 这种改变称为病毒致病变效应（cytopathic effect， CPE），可以直接通过显微镜观察，亦可通过染 色得以识别和判断。CPE的程度可间接反映病毒 的毒力，因此利用这种特征可以用来测定病毒的 毒力。即能在半数细胞培养板孔或试管内引起细 胞发生病变所需的病毒量，定义为病毒的50％组 织细胞感染指数（50％tissue culture infectious dose，TCID50）。在从事药物的抗病毒试验中， 常用100 TCID50的病毒感染量进行。
4. 药物对FM1的抑制作用
鸡胚随机分为14组，每组5胚，即试验药 的六个剂量组（从TC0开始作10倍系列稀 释）、阳性对照药六个剂量组（同前）、
生理盐水和病毒对照组。将不同浓度的药 液注入鸡胚中，0.25ml /胚，30 min后经相 同途径注入100 EID50病毒0.1ml，对照组以 生理盐水代替。35℃温箱孵育5 d。收获尿 囊液，测其血凝效价，以能抑制32倍以上 所注射的最小药物量，即为其最小抑制剂 量（MIC）。