氨基酸的测定方法
茚三酮显色法测定氨基酸含量
❖（3）茚三酮显色液：称取85mg茚三酮和 15mg还原茚三酮，用10ml乙二醇甲醚溶解 （15ml/组）
❖ 还原型茚三酮按下法制备：称取0.5g茚三酮， 用12.5ml沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。将 0.5g维生素C用25ml温蒸馏水溶解，一边搅 拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中， 不断出现沉淀滴定后继续搅拌15min，然后 在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗 涤3次，真空干燥，置五氧化二磷真空干燥 器中保存备用
• 样品同时做三份取平均数
四、结果与计算
• 氨基酸的含量(g/100ml)=X*100
——X为查标准曲线所获得每ml含量g数
• 自配样品
——X*250/称取克数（X为查标准曲线所获得 每ml含量g数）
——250为稀释的倍数
• 五、讨论与分析
• 六、思考题
茚三酮是否可用于氨基酸和蛋白质的 定性鉴定？
实验三 茚三酮显色法测定氨基酸含量
一、实验原理
• 茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。氨与 茚三酮和还原性茚三酮反应，生成紫色化 合物。颜色的深浅与氨基酸的含量成正比， 可通过测定570nm处的光密度，测定氨基 酸的含量
二、试剂与材料
❖（1）标准氨基酸溶液：配制成0.3mM溶液 （本实验用赖氨酸）(已配)
•（4）60%乙醇（50ml/组 ） •（5）样品液：每ml含0.5-50ug氨基酸（已配） •（6）分光光度计 •（7）水浴锅
三、操作方法
1、标准曲线的制作
• 分别取0， 0.2, 0.4, 0.6, 0.8,1.0ml0.3mM的 标准氨基酸溶液于试管中，用水补足到1ml。各加 入1ml2M醋酸缓冲液；再加入1ml茚三酮显色液，充 分混合后盖住试管口，在100℃水浴中加热15min， 用自来水冷却。放置5min后，加入3ml60%乙醇稀释， 充分摇匀，用分光光度计测定OD570（脯氨酸和羟脯 氨酸与茚三酮反应呈黄色，应测定OD440）。以OD570 为纵坐标，氨酸酸样品的测定：
总氨基酸含量的测定方法
总氨基酸含量的测定方法测定总氨基酸含量，听上去是不是有点高大上？其实啊，这个过程就像做一道简单的家常菜，虽然听起来复杂，做起来却很有趣。
氨基酸是蛋白质的基本构件，想想看，咱们身体里那一堆营养物质，都是要靠它们搭建起来的。
很多时候，我们吃的食物，里头的氨基酸含量就能告诉我们，这东西到底能不能补充能量，能不能让我们更强壮。
咱们就来聊聊，怎么测定这些小家伙的含量。
准备工作很重要。
你得有样本，可能是牛肉、豆腐或者鸡蛋，反正都是能吃的东西。
咱们就需要一些试剂。
这些试剂呢，像是厨房里的调料，少了可不行。
常见的有氢氧化钠、盐酸，还有一些专门用来显色的试剂，像那种喝了会变色的饮料，嘿嘿，效果可是杠杠的。
要是没这些东西，那就像做菜没盐，味道就不对了。
然后，就是要进行提取。
简单来说，就是把氨基酸从食物里“榨”出来。
这个步骤得小心翼翼，像煮汤时要控制火候，太大了会糊，太小了则不够味。
把样品放进溶液里，加热搅拌，让氨基酸慢慢溶解。
就像在调和一杯鸡尾酒，直到所有的成分都融合在一起。
提取出来的液体就是你的“氨基酸汤”，记得把它过滤掉杂质，留好清汤。
咱们得进入显色阶段。
这个环节可神奇了，氨基酸遇到试剂，颜色会变得好看得很。
不同的氨基酸有不同的显色反应，就像不同的花朵在阳光下各自盛开。
我们可以用分光光度计来测量这些颜色的深浅，深色就代表氨基酸含量高，浅色那就是少得可怜。
这个过程就像在给食物上色，看着渐渐变得绚丽，心里也是美滋滋的。
不过，数据出来后可别急着欢呼。
我们需要做一些计算，把颜色的强度换算成氨基酸的浓度。
这就像在餐馆里结账，得把每样菜的价格加在一起，才能知道最终要花多少银子。
根据标准曲线，把测得的值代入，最终就能得到你食物里的氨基酸总含量。
简简单单，经过一番“烹饪”，就能得到一份“营养报告”。
记得记录结果，像在做日记一样。
无论你测得的结果是高还是低，都代表着不同的营养价值。
要是高，那可得好好利用，加入日常饮食；要是低，也别气馁，可以考虑多吃些高蛋白的食物，像是肉类、鱼类、豆类，保证你身体里的氨基酸不缺。
8第六章 氨基酸定量测定
1.原理： 强离子交换树脂－二乙烯苯树脂： 交联度大，8-12％。 树脂的结构紧密，孔隙度小，适用于分子较小的氨 基酸的分离。选用Na型的树脂。
吸附：一般在pH2.2溶解样品，由于pH比较低，氨 基酸的H＋解离被抑制，氨基酸带正电荷，可以与阳 离子交换树脂发生交换。
样品 液
分离 柱
M
Na+
pK1
COOCH2(CH2)4+NH3
+NH 3
pK2 9.0
COO CH2(CH2)4+NH3 NNH2 NH2
赖氨酸的等当电＝（ pK1＋pK2）/ 2 = 9.75
洗脱：当pH2.2，3.3，4.9等缓冲液相继流经树脂时， 随着pH逐渐升高，氨基酸失去正电荷，与树脂结合 减弱，从树脂上脱落下来。由于氨基酸的氨基不同， 因此与柱子的结合能力不同。 酸性氨基酸带的正电荷少，等电点比较低，碱性氨 基酸带的正电荷多，被置换下来的pH比较高。
吹数分钟(或置于70～80℃烘
箱中烘干)即可观察到紫红色
的氨基酸斑点，脯氨酸例外，
为黄色斑点。
用铅笔圈出氨基酸斑点，量出溶剂前沿的距离及 各斑点中心与起点之间的距离，并计算各氨基酸 的Rf值。
原点到层析点中心的距离
Rf＝ 原点到溶剂前沿的距离
标准氨基酸薄层层析色谱
氨基酸的性质与Rf之间的关系
层析的分离是基于氨基酸的非极性性质。 物质的极性越小（即非极性越大）,在有机溶剂中分 配就越多，迁移率Rf就越大；
混合样
加样
洗脱剂
分离结果
影响电离的基团：氨基、羧基、胍基、咪唑基、酚基。
洗脱顺序： 酸性氨基酸，中性氨基酸，芳香族氨基 酸，碱性氨基酸 日立832型氨基酸分析仪的洗脱顺序： 天门冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，半胱，缬，蛋， 异亮，亮，酪，苯丙，赖，氨，组，精
氨基酸的测定方法
食物中氨基酸的测定方法测定食物中的胱氨酸使用过甲酸氧化-氨基酸自动分析仪法，测定色氨酸使用荧光分光光度法，测定其它氨基酸使用氨基酸自动分析仪法。
一、氨基酸自动分析仪法1.原理食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。
2.适用范围GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。
本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。
其最低检出限为10pmol。
本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定3.仪器和设备3.1真空泵3.2恒温干燥箱3.3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。
用去离子水冲洗干净并烘干。
3.4真空干燥器（温度可调节）3.5氨基酸自动分析仪。
4.试剂全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。
4.1浓盐酸：优级纯4.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。
4.3苯酚：需重蒸馏。
4.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L4.5缓冲液：4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.24.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。
4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。
4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。
发酵饲料原料氨基酸测定方法
发酵饲料原料氨基酸测定方法发酵饲料是一种常见的饲料形式，通过微生物的发酵作用，可以将一些廉价的原料转化为高质量的饲料。
而饲料中的氨基酸是动物生理功能的基本组成部分，也是评价饲料质量的重要指标之一。
因此，准确测定发酵饲料中氨基酸的含量对于饲料生产具有重要意义。
常用的发酵饲料原料氨基酸测定方法主要有以下几种：一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是一种常用的氨基酸测定方法。
该方法通过将样品溶解并进行适当的预处理后，将氨基酸分离并通过色谱柱进行定量分析。
这种方法具有准确度高、灵敏度高、分析速度快等优点，被广泛应用于发酵饲料中氨基酸的测定。
二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的氨基酸测定方法。
该方法将样品中的氨基酸通过酸水解等预处理方法转化为气体化合物，然后通过气相色谱仪进行分离和定量分析。
这种方法具有分离效果好、分析速度快等优点，但对于一些热稳定性较差的氨基酸，需要进行适当的保护处理。
三、生化分析法生化分析法是一种传统的氨基酸测定方法，主要通过酶促反应将样品中的氨基酸转化为其他化合物，并通过光度计等仪器进行测定。
这种方法操作简便，灵敏度较高，但对于一些特殊的氨基酸，可能存在反应不完全的情况，影响测定结果的准确性。
以上三种方法在发酵饲料中氨基酸测定中都有其独特的优势和适用范围。
在选择合适的方法时，需要考虑样品的特性、测定的准确度要求、设备的可用性等因素。
此外，为了提高测定结果的准确性，还需要注意样品的采集和保存，避免外界污染和氨基酸的降解。
总结起来，发酵饲料原料氨基酸测定方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和生化分析法等。
选择合适的方法可以准确测定发酵饲料中氨基酸的含量，为饲料生产提供科学依据，提高饲料的质量和营养价值。
同时，为了保证测定结果的准确性，还需要注意样品的采集和保存等实验细节。
综上所述，发酵饲料原料氨基酸测定方法对于饲料生产具有重要意义。
氨基酸测序的几种方法
氨基酸测序的几种方法
氨基酸测序是生物学中非常重要的一项技术，它可以帮助我们了解蛋白质的结构和功能。
在氨基酸测序中，有几种常用的方法，下面我们来一一介绍。
1. Sanger测序法
Sanger测序法是一种经典的测序方法，它是通过DNA聚合酶在DNA模板上合成新链，同时加入一种特殊的二进制反应淬灭剂，使得在每个位置上只有一种氨基酸被加入。
然后，通过电泳分离不同长度的DNA片段，就可以得到DNA序列。
这种方法可以测序较长的DNA片段，但是需要大量的时间和成本。
2. 质谱法
质谱法是一种快速、高效的氨基酸测序方法。
它利用质谱仪对蛋白质进行分析，通过测量蛋白质分子的质量和荷电量，可以确定蛋白质的氨基酸序列。
这种方法可以测序较短的蛋白质片段，但是需要高端的仪器和技术。
3. Edman降解法
Edman降解法是一种经典的氨基酸测序方法，它是通过将蛋白质分子中的N端氨基酸逐步去除，然后进行分析，得到氨基酸序列。
这种方法可以测序较短的蛋白质片段，但是需要大量的时间和成本。
4. 高通量测序法
高通量测序法是一种新兴的氨基酸测序方法，它利用高通量测序仪对蛋白质进行分析，可以同时测序多个蛋白质分子，大大提高了测序效率。
这种方法可以测序较长的蛋白质片段，但是需要高端的仪器和技术。
氨基酸测序是生物学中非常重要的一项技术，它可以帮助我们了解蛋白质的结构和功能。
不同的测序方法有各自的优缺点，我们需要根据实际情况选择合适的方法。
氨基酸的分析方法
氨基酸的分析方法
氨基酸的分析方法主要有以下几种：
1. 比色法：利用氨基酸中的吸收光谱特性进行定量分析。
对于有色氨基酸，可以直接用此方法进行分析，如色氨酸、酪氨酸等。
对于无色氨基酸，需事先进行衍生化反应，如二羧基二氨基联苯胺(DTNB)法，测定半胱氨酸含量。
2. 氨基酸自动分析仪：常用的分析方法是自动氨基酸分析仪，其原理是利用离子交换色谱技术对氨基酸进行分离和检测。
该方法操作简便，自动化程度高，可同时分析多种氨基酸，用于生化实验和质量检测。
3. 氨基酸序列测定法：利用氨基酸测定仪测定氨基酸的相对分子质量，进而测定氨基酸的分子序列，通常用于蛋白质结构分析和生物活性研究。
4. 纸层析法：利用氨基酸的亲水性和疏水性差异进行分离，通常用于初步鉴定氨基酸的含量和组成。
该方法简便易行，但准确性较低，仅可作为定性或半定量分析方法。
5. 高效液相色谱法：利用高效液相色谱技术对氨基酸进行分离和检测。
该方法灵敏度高、重复性好、分辨率高，可用于生化分析和质量检测。
氨基酸测定方法
氨基酸测定方法一、引言氨基酸是构成蛋白质的基本单位，因此对于蛋白质的研究和分析，氨基酸的测定是非常重要的。
目前，常用的氨基酸测定方法主要有色氨酸法、二硫化物法、硫酸铜法、乙醇胺法、二甲基乙二胺法等。
本文将从样品处理、试剂配制、实验步骤和数据处理等方面详细介绍氨基酸测定方法。
二、样品处理1. 样品收集：选择适当的组织或液体样品进行采集，如血清、尿液等。
2. 样品预处理：根据不同样品特点进行预处理，如尿液中可加入少量硝酸使其变为无色透明状态。
3. 样品保存：在低温条件下保存样品以避免其蛋白质降解。
三、试剂配制1. 氢氧化钠溶液：取固体氢氧化钠加入去离子水中搅拌至完全溶解。
2. 硫代乙酰胺溶液：取固体硫代乙酰胺加入去离子水中搅拌至完全溶解。
3. 氨基酸标准溶液：将各种氨基酸按照一定比例加入去离子水中，调节pH值至7.0左右。
4. 还原剂：取固体羟肟酸钠加入去离子水中搅拌至完全溶解。
四、实验步骤1. 样品处理：取适量的样品加入硫代乙酰胺溶液中，混合均匀后放置于60℃恒温水浴中反应20分钟。
2. 加入还原剂：将还原剂加入反应体系中，混合均匀后再次放置于60℃恒温水浴中反应20分钟。
3. 加入氢氧化钠溶液：将氢氧化钠溶液加入反应体系中，混合均匀后放置于60℃恒温水浴中反应30分钟。
4. 加入试剂：取适量的氨基酸标准溶液和待测样品分别加入反应体系中，混合均匀后放置于室温下静置10分钟。
5. 测定吸光度：使用分光光度计在570nm波长下测定反应体系的吸光度值。
五、数据处理1. 绘制标准曲线：将不同浓度的氨基酸标准溶液分别测定吸光度值，绘制标准曲线。
2. 计算待测样品中氨基酸含量：根据待测样品的吸光度值和标准曲线计算其中氨基酸含量。
3. 数据统计分析：对实验数据进行统计分析，如平均值、方差等。
六、注意事项1. 实验过程中要注意卫生和安全，避免试剂进入眼睛和口腔。
2. 样品处理时要避免过度稀释或过度浓缩，以保证实验结果的准确性。
测定氨基酸,磺基水杨酸的方法
测定氨基酸,磺基水杨酸的方法
测定氨基酸的方法主要有以下几种：
1. 布鲁斯试剂法：使用布鲁斯试剂与氨基酸发生反应，生成紫色或蓝色络合物，通过比色法或光度法来测定氨基酸的含量。
2. 紫外光谱法：氨基酸在紫外光下有特征性的吸收峰，通过测量吸收峰的强度来确定氨基酸的浓度。
3. 核磁共振法：使用核磁共振仪器对氨基酸样品进行分析，通过观察氨基酸在不同磁场下的共振信号来确定其结构和浓度。
磺基水杨酸的测定方法主要有以下几种：
1. UV-Vis光谱法：磺基水杨酸在紫外光下有特征性的吸收峰，通过测量吸收峰的强度来确定其浓度。
2. 氯化亚砜法：磺基水杨酸与氯化亚砜反应生成产物，通过测量产物浓度来确定磺基水杨酸的浓度。
3. 离子色谱法：使用离子色谱仪对磺基水杨酸进行分析，通过观察峰的面积或高度来确定其浓度。
请注意，以上方法仅为常用的测定方法之一，具体使用哪种方法还要根据实际情况来确定。
总氨基酸的测定方法
总氨基酸的测定方法
嘿，咱今儿就来聊聊总氨基酸的测定方法！这可是个挺有意思的事
儿呢。
你想想看，氨基酸就像一群小精灵，在我们的身体里跑来跑去，发
挥着各种重要的作用。
那要怎么知道它们一共有多少呢？这就需要一
些特别的方法啦。
比如说比色法，就好像是一个超级侦探，能通过颜色的变化来找出
氨基酸的踪迹。
把样本和一些试剂放在一起，然后观察颜色的变化，
就可以大致知道氨基酸的量啦。
这是不是很神奇呀？
还有茚三酮显色法，它就像是一个魔法棒，能让氨基酸显现出独特
的色彩。
当茚三酮和氨基酸相遇，哇哦，就会产生奇妙的反应，让我
们能清楚地看到它们的存在。
另外呢，高效液相色谱法也很不错哦。
它就像一台精准的仪器，能
把各种氨基酸一个一个地分辨出来，然后准确地告诉我们它们的含量。
那这些方法难不难呢？其实呀，只要你用心去学，就会发现也没那
么难啦。
就像学骑自行车一样，一开始可能会摇摇晃晃，但多练习几
次就会啦。
你说，如果没有这些测定方法，我们怎么能更好地了解氨基酸在我
们身体里的情况呢？怎么能知道该怎么补充它们，让我们更健康呢？
这些方法不只是在实验室里有用哦，在很多领域都能派上用场呢。
比如在食品行业，能帮助我们检测食品中的氨基酸含量，让我们吃得更放心。
在医学领域，更是能帮助医生诊断疾病，制定治疗方案呢。
所以呀，总氨基酸的测定方法可真是太重要啦！咱可得好好了解了解，说不定哪天自己也能动手测一测呢！这难道不是一件很有趣的事情吗？你难道不想去尝试尝试吗？。
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食物中氨基酸的测定方法测定食物中的胱氨酸使用过甲酸氧化-氨基酸自动分析仪法，测定色氨酸使用荧光分光光度法，测定其它氨基酸使用氨基酸自动分析仪法。
一、氨基酸自动分析仪法1.原理食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。
2.适用范围GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。
本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。
其最低检出限为10pmol。
本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定3.仪器和设备3.1真空泵3.2恒温干燥箱3.3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。
用去离子水冲洗干净并烘干。
3.4真空干燥器（温度可调节）3.5氨基酸自动分析仪。
4.试剂全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。
4.1浓盐酸：优级纯4.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。
4.3苯酚：需重蒸馏。
4.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L4.5缓冲液：4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.24.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。
4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。
4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。
4.6茚三酮溶液4.6.1 pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH.H2O）168g，加入冰乙酸（优级纯）279ml，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5.2。
4.6.2茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜（C2H6OS）和乙酸锂溶液（2.6.1）50ml加入4g 水合茚三酮（C9H4O3.H2O）和0.12g还原茚三酮（C18H10O6.2H2O）搅拌至完全溶解。
4.7高纯氮气：纯度99.99%。
4.8 冷冻剂：市售食盐与冰按1：3混合5.操作步骤5.1样品处理：样品采集后用匀浆机打成匀浆（或者将样品尽量粉碎）于低温冰箱中冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。
5.2称样：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。
均匀性好的样品如奶粉等，使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；均匀性差的样品如鲜肉等，为减少误差可适当增大称样量，测定前再稀释。
将称好的样品防于水解管中。
5.3水解：在水解管内加6mol/L盐酸10～15ml（视样品蛋白质含量而定），含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。
打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50ml 容量瓶内，用去离子水定容。
吸取滤液1ml于5ml容量瓶内，用真空干燥器在40～50℃干燥，残留物用1～2ml水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mlpH2.2的缓冲液溶解，供仪器测定用。
5.4测定：准确吸取0.200ml混合氨基酸标准，用pH2.2的缓冲液稀释到5ml，此标准稀释浓度为5.00nmol/50μL，作为上机测定用的氨基酸标准，用氨基酸自动分析仪以外标法测定样品测定液的氨基酸含量。
6.计算上机样品液（50mL）中氨基酸量（nmol）=上机标准液（50mL）中氨基酸量（nmol）×样品峰面积氨基酸标准峰面积所以，100g样品中氨基酸的mg 数=上机样品液中氨基酸量（nmol）×f ×Mr×100m×V×106式中f--样品的稀释倍数Mr--氨基酸的相对分子量m--样品质量（g）V--上机时的进样量（此处为50mL）7.其他7.1测定条件（以Beckman-6300型氨基酸自动分析仪为例）缓冲液流量：20mL/h；茚三酮流量：10mL/h；柱温：50、60和70℃；色谱柱：20cm；分析时间：42min。
7.2标准出峰顺序和保留时间序号出峰顺序保留时间/min 序号出峰顺序保留时间/min1 天冬氨酸5.55 9 蛋氨酸19.632 苏氨酸6.60 10 异亮氨酸21.243 丝氨酸7.09 11 亮氨酸22.064 谷氨酸8.72 12 酪氨酸24.525 脯氨酸9.63 13 苯丙氨酸25.766 甘氨酸12.24 14 组氨酸30.417 丙氨酸13.10 15 赖氨酸32.578 缬氨茇16.65 16 精氨酸40.757.3允许差：同实验室平行测定或连续两次测定结果相对偏差绝对值≤12%。
二、食物中胱氨酸的测定方法---氨基酸自动分析仪法（过甲酸氧化）1.原理在用盐酸水解蛋白质的过程中，胱氨酸易被破坏，现多采用过甲酸氧化法将蛋白质中的胱氨酸及半胱氨酸氧化成半胱磺酸，其反应如下：SH NH2 O SO3H NH2 OCH2 CH COOH+3H C OOH CH2 CH COOH+3H C OH半胱氨酸过甲酸半胱磺酸甲酸生成的半胱磺酸可在氨基酸自动分析仪上进行测定，与标准半胱磺酸比较，计算其含量。
2.适用范围参照中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所编写的食物营养成分测定法第三版。
适用于食物中胱氨酸的测定。
3.仪器水解瓶：耐压螺盖玻璃管或硬质试管，体积20～30mL，用去离子水冲净并烘干，电热减压蒸发器。
4.试剂过甲酸：取9mL分析纯甲酸加入1mL30%过氧化氢混合，在室温放置2小时以上。
5.操作步骤5.1过甲酸氧化：称取一定量的食物样品置于水解瓶中，使样品含蛋白质在5～10mg，加入1mL过甲酸试剂，在室温放置3小时。
加1mL乙醇终止氧化。
将样品瓶置于电热减压器中，于45℃减压蒸干，用1mL去离子水淋洗瓶壁，再蒸干，反复3次，以除去过甲酸。
5.2盐酸水解：同食物中氨基酸（16种）测定方法5.3在Bekman6300氨基酸自动分析仪上，在注文50℃时用pH3.25柠檬酸缓冲液洗脱，半胱磺酸的出峰时间约在1.78分钟。
6.计算上机样品液（50μl）中半胱磺酸量=上机标准液中半胱磺酸量（nmol）×样品峰面积半胱磺酸标准峰面积100g样品中胱氨酸mg数=上机样品中半胱磺酸量（nmol）×D×M×100W×E×106×2式中D：样品稀释倍数M：胱氨酸分子量（ng）W：称样量（g）E：上机时的进样量（此处为50μl）三、食物中色氨酸的测定--荧光分光光度法1.原理食物中蛋白质在酸水解过程中，其色氨酸极易被分解，本法用碱水解蛋白质，直接测定色氨酸的天然荧光。
在蛋白质水解液中，只有色氨酸和酪氨酸可以检测到荧光。
在pH为11时，色氨酸的荧光强度比酪氨酸大100倍，且两种氨基酸的荧光峰相差40多nm，利用此特点，可在有大量酪氨酸的存在下，检测色氨酸的含量。
2.适用范围参照中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所编写的食物营养成分测定法第三版。
适用于食物中色氨酸的测定。
3.仪器3.1荧光分光光度计3.2减压蒸发器3.3螺旋盖大口瓶（瓶盖要有橡皮垫）3.4聚四氟乙烯管3.5小玻璃球3.6烘箱4.试剂（1）5mol/L NaOH：内含0.5%可溶性淀粉，临用前配制。
（2）4mol/L 尿素（pH=11）（3）6mol/L盐酸（4）溴百里酚蓝指示剂：称取0.1g溴百里酚蓝加0.1mol/L氢氧化钠1.6ml，配成0.05%水溶液。
（5）高纯氮（含量99.999%）（6）辛醇甲苯溶液：内含1%辛醇（7）色氨酸标准液：（1mg/ml）：称取色氨酸标准，用0.005mol/L的氢氧化钠溶液溶解，贮存于冰箱保存。
5.操作步骤5.1称取含粗蛋白质约5mg的食物样品，置于聚四氟乙烯管中，加含可溶性淀粉的5mol/L 氢氧化钠1ml，加入1滴辛醇。
5.2将各管分别盖上小玻璃球，放入1只带螺旋盖的大口玻璃瓶中，将瓶置于减压蒸发装置中，加冰和盐降温，减压至真空度1.3Kpa10mmHg以下，继续保持15min，充氮气再减压，如此反复3次，迅速旋紧大口瓶的螺旋盖。
5.3将充氮气的大口瓶置于烤箱内，在110℃水解样品22小时。
5.4冷却大口瓶，用重蒸馏水将样品分别洗至25ml容量瓶中，（内含6N Hcl 0.7ml）用溴百里酚蓝为指示剂调pH至中性，用重蒸水定容至刻度。
5.5吸取样品液1ml，于10ml带盖试管内，用pH11的4mol/L尿素溶液稀释至刻度，在激发波长为280nm，发射波长为360mm下测定荧光强度，根据标准色氨酸的荧光强度曲线，计算样品中色氨酸含量。
5.6色氨酸标准曲线：用前将标准贮备液稀释成每ml含100，200，300，400μg的色氨酸标准系列。
取每种浓度的标准液各1ml（双份）与样品管同样加试剂，同时水解，以色氨酸标准浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制标准曲线。
6.计算每100g样品中的色氨酸含量（mg）=A×D×1001000×W式中A：根据标准曲线得到的每ml测定液中色氨酸的含量（mg）D：稀释倍数W：取样量（克）。