荧光原位杂交临床应用
双色荧光原位杂交法检测乳腺癌及临床应用评价
双色荧光原位杂交法检测乳腺癌及临床应用评价潘小平;洪晓绿【摘要】目的建立双色全细胞荧光原位杂交法(FISH)检测乳腺癌,并评价其检测乳腺癌的临床应用价值.方法针对乳腺癌的常见易感基因Her-2,用不同的荧光素进行标记,建立FISH法,并对我院160例乳腺癌石蜡组织进行检测.结果建立的FISH法检测结果稳定,在160例乳腺癌组织中FISH检出62例阳性,阳性率为38.8％(62/160),且随着肿瘤越大,淋巴结转移数目越多,病理级别越高,阳性检出率也越高;FISH检测阳性率在肿瘤大小组(pT0和pT1～pT4)、病理级别组(G1和G2～Gx)和区域淋巴结组(pN0和pN1-3～pNx)之间不存在差异,各组间p值均大于0.05,但在组织类型组间(导管型和小叶型)却存在显著性差异(x2 =14.6,＜0.01).结论FISH法检测乳腺癌HER-2基因的阳性率,只与乳腺癌的组织类型有关,而与肿瘤的大小、淋巴结转移的数目以及病理级别无关,且该法操作简单,结果快速且稳定,宜在临床工作中开展.【期刊名称】《现代医院》【年(卷),期】2014(014)001【总页数】3页(P11-13)【关键词】原位杂交;乳腺癌;HER-2【作者】潘小平;洪晓绿【作者单位】广州市花都区人民医院广东广州 510800;广州市花都区人民医院广东广州 510800【正文语种】中文乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，全球每年约有120万妇女罹患乳腺癌，其中约50万妇女死于该疾病，其发病率还以每年2%的速度递增［1］。
在我国占全身恶性肿瘤的7% ～10%，仅次于宫颈癌［2］。
HER－2基因位于17号染色体，编码生长因子受体，在20% ～30%的乳腺癌中高度表达［3］，并且该基因的表达与乳腺癌的发生、发展及预后关系密切［4］，因此，检测HER－2表达的情况不仅有助于评估患者预后，也有助于治疗方案的选择。
目前，HER－2的检测常采用免疫组织化学(IHC)法，但该方法只能检测蛋白的含量，且影响因素较多，尤其是早期的乳腺癌中该蛋白含量较低，检出率也较低。
原位杂交和免疫荧光
原位杂交和免疫荧光
原位杂交和免疫荧光是两种常见的分子生物学实验方法。
这两种
方法都可以用于研究生物分子的定位和分布情况，进而揭示生物学过
程和功能。
下面我们分别来介绍一下这两种方法。
原位杂交是一种常用的分子生物学技术，主要用于检测和定位细
胞或组织中特定的DNA或RNA序列。
原位杂交的基本步骤包括：制备
探针，标记探针，处理样品，杂交和探针探测。
通常情况下，原位杂
交用于检测单个基因或特定基因家族的成员，可用于研究基因组结构、基因表达和基因型等方面。
该技术在医学诊断和药物开发方面也有广
泛应用。
免疫荧光是一种检测生物分子定位和分布情况的常用方法。
它利
用抗体与标记化学物质（如荧光素）相结合，通过荧光显微镜观察生
物分子的定位和分布情况。
免疫荧光主要应用于研究细胞内的蛋白质
定位和分布，也可用于研究病毒感染等方面。
该技术不仅能够静态观
察生物分子的分布情况，还可以通过时间分辨光学显微镜观察生物分
子的动态行为。
虽然原位杂交和免疫荧光技术各自有其独特的应用范围和特点，
但它们有一个共同的优点，即能够在不破坏组织结构的情况下观察分
子分布及定位情况。
这种特性使得这两种技术成为研究生物分子功能
和生物学过程的重要工具。
总之，原位杂交和免疫荧光技术是分子生物学领域内的两个重要
实验方法。
它们都能够在细胞或组织中观察特定生物分子的定位和分
布情况，为揭示生物学过程和功能提供帮助。
FISH技术在白血病中的应用~
FISH技术在白血病中的应用目前荧光原位杂交技术已被广泛用于遗传性疾病、肿瘤研究及临床诊断和治疗监测。
在临床应用中，荧光原位杂交技术凭借其较高的灵敏度和特异度，已在产前诊断、实体瘤（乳腺癌、膀胱癌、宫颈癌、肺癌）以及血液系统肿瘤的诊断和治疗检测中得到了迅速的发展。
血液系统肿瘤是我国十大高发肿瘤之一，随着对疾病发病机制的深入研究，发现细胞遗传学对肿瘤分型、诊断、治疗和预测预后都具有重要的意义。
但常规的细胞遗传学分析（CC）方法只能分析中期染色体，而对间期细胞、复杂核型细胞和染色体微缺失无法进行诊断。
而FISH技术弥补了CC在这方面的不足，因此被广泛用于血液肿瘤的研究、诊断等方面。
在临床上对血液肿瘤的FISH检测主要集中在以下几个方面：①染色体异位形成的融合基因检测如慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia，CML）的BCR-ABL融合基因检测，急性粒细胞白血病（acute myelocytic leukemia，AML）M3中的PML-RARA融合基因检测和M2b中的AML1-ETO融合基因检测。
对融合基因的检测不但有助于对疾病的诊断，还能帮助我们估计患者预后情况以及选择有效的治疗方案。
②基因缺失的检测一些关键基因的缺失有助于我们对肿瘤进行诊断以及预后判断。
但是目前的染色体显带技术分辨率低，只有大于4.5 Mb的缺失才能检测到，而FISH分辨率高，可以弥补染色体显带技术用于检测微小缺失的不足。
在临床应用中，如通过荧光原位杂交发现慢性淋巴细胞性白血病患者的P53基因缺失提示患者的预后很差，疾病进展较早，且对联合化疗不敏感，多数生存期仅为3个月。
而同样在慢性淋巴细胞性白血病患者中，如检测到13q单一缺失则提示患者预后较好，中位生存期可达到133个月。
③对异性间造血干细胞移植的植入状态监测目前异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem celtransplantation，allo-HSCT)是治疗血液系统恶性和非恶性疾病的有效手段。
荧光原位杂交(fish)
荧光原位杂交技术荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization），简称FISH。
是利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶DNA分子或RNA分子杂交，通过在荧光显微镜或共聚焦激光扫描仪下观察荧光信号，来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布，或者是结合了荧光探针的DNA区域或RNA分子在染色体或其他细胞器中的定位。
中文名fish外文名fluorescent in situ hybridization建立时间1986年发展历程1969年，Pardue和John等两个研究小组开始采用放射性标记DNA或28S RNA发明了原位杂交技术（ISH）。
尽管当时原位杂交技术已经具有较高的特异性和灵敏度，但鉴于放射性同位素自身特性的局限，如安全性、空间分辨率低、不稳定性等问题，这项技术仅限于实验室研究方面的应用。
1986年科研工作者开始利用异硫氰酸盐荧光素来标记探针，并在荧光显微镜下进行观察分析，建立了荧光原位杂交技术（FISH）。
1989年，Delong首次使用荧光标记寡核苷酸探针检测单个微生物细胞。
由于FISH技术具有敏感度高、信号强、背景低、快速等优点，该方法在环境微生物的检测中得到了广泛的应用。
随着科技的迅速发展，FISH探针标记物越来越多，不仅从单一荧光发展到多色荧光检测，而且应用范围也进一步扩大，不仅可以用于分裂相细胞而且可以用于间期细胞检测，为FISH技术的临床应用打下了坚实的基础。
操作步骤编辑播报（1）样品的固定；（2）样品的制备和预处理；（3）预杂交；（4）探针和样品变性；（5）用不同的探针杂交以检测不同的靶序列；（6）漂洗去除未结合的探针；（7）检测杂交信号，进行结果分析·荧光信号观察：将处理好的样品置于荧光显微镜下，选择分散较好的区域来观察。
三色（或者更多）荧光激发下，观察到不同颜色的荧光图像。
通常选用20X物镜来扫描样品杂交区域，40X或100X物镜下观察样品，从一定的方向进行计数，并对计数情况进行分析。
荧光原位杂交技术在植物学中的应用
荧光原位杂交技术在植物学中的应用篇一：《荧光原位杂交技术在植物学中的应用》我记得那是一个阳光明媚的周末，我和朋友小花一起去植物园游玩。
植物园里繁花似锦，各种植物在微风中轻轻摇曳，仿佛在向我们展示着它们独特的魅力。
我们漫步在一片花海之中，小花突然指着一朵娇艳欲滴的花朵问我：“你说，这些植物是怎么在这么复杂的环境里生存、繁殖的呢？科学家们是怎么研究它们的呢？”我笑着说：“这你就不知道了吧，有一种超厉害的技术叫荧光原位杂交技术，在研究植物学方面可是有大用处呢。
”你看，植物的细胞就像一个小小的王国，里面有着各种各样的‘居民’，像染色体这些重要的‘居民’，它们藏着植物的很多秘密。
荧光原位杂交技术就像是一个超级侦探，能够准确地找到这些‘居民’并且给它们做上特殊的标记。
比如说，科学家们想要知道某种植物的基因在染色体上的具体位置，就像要在一个大迷宫里找到特定的宝藏一样困难。
但是荧光原位杂交技术这个‘侦探’呢，它会带上特殊的荧光‘标记笔’，把要找的基因标记得清清楚楚。
就好比在黑暗中打开了一盏灯，一下子就找到了目标。
我和小花走到一棵大树下，靠着树干休息。
我继续说道：“这个技术还能帮助科学家研究植物的进化呢。
你想啊，植物经过漫长的岁月不断地演变，就像一场超级漫长的接力赛。
不同植物之间的亲缘关系有时候很难判断，但是荧光原位杂交技术就像是裁判手中的秒表，可以精确地对比不同植物染色体之间的相似性。
相似的部分越多，说明它们的亲缘关系就越近。
这就好比你和你的亲戚，你们长得越像，可能关系就越亲近一样。
”小花眼睛里闪烁着好奇的光芒，她说：“那这个技术是不是还能发现植物的一些疾病或者缺陷呢？”我点点头说：“那当然啦。
植物有时候会生病，就像我们人会生病一样。
有些疾病是因为染色体或者基因出了问题。
荧光原位杂交技术可以迅速地检测到染色体上有没有异常的地方，是哪个基因发生了突变。
这就像是医生给植物做一个全面的体检，能够及时发现问题，然后想办法解决。
荧光原位杂交技术快速诊断胎儿染色体数目异常应用分析
荧光原位杂交技术快速诊断胎儿染色体数目异常应用分析刘宇仁【摘要】目的：分析荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization ，FISH）在快速诊断胎儿染色体数目异常中的应用。
方法：对本院2009年1月－2012年1月接受产前诊断的1500例孕妇，利用荧光原位杂交技术检测其羊水间期核细胞的染色体数目。
结果：1500例孕妇中27例胎儿诊断为21‐三体综合征；6例为18‐三体综合征；2例为13‐三体综合征；1例为45，XO（特纳综合征）；1例47，XXY ；1例47，XYY ；共检查出38例胎儿染色体数目的异常。
结论：在产前快速诊断胎儿染色体数目的异常中应用荧光原位杂交技术，具有简便、快捷、准确等特点，在临床应用中有一定价值。
【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2014(000)013【总页数】3页(P1791-1793)【关键词】荧光原位杂交;产前诊断;羊膜穿刺【作者】刘宇仁【作者单位】湖南省醴陵市妇幼保健院产前检查室 412200【正文语种】中文【中图分类】R446新生儿中染色体出现异常的发生率近似为0.83%，其中大约一半新生儿因遗传物质总量变化而引起生长发育缓慢、智力下降、性发育异常以及畸形等临床表现［1］。
近些年来国内通常采用血清学三联检查为诊断染色体异常的手段，与孕妇年龄及胎龄等标准结合筛选高危个例并给予产前诊断［2］。
Klinger等学者［3］在1992年初次使用FISH技术直接检验未培养过的羊水细胞，产前诊断的时间显著缩短。
目前由于FISH操作技术的简便性及稳定的性质逐渐引起广泛重视。
本组研究采用FISH探针试剂盒快速检验1500例羊水标本的X、Y、21、18、13等5条染色体的数目。
现将结果报告如下。
1 资料与方法1.1 一般资料研究对象为对本院2009年1月－2012年1月接受产前诊断的1500例孕妇，年龄20～46岁，平均年龄（30±1.8）岁，胎龄18～30周，平均胎龄（25±1.4）周。
染色体荧光原位杂交技术
因为杂交和分带同步进行效果不佳，有 人采用FL(fractional length)来测量。以 杂交信号相对于某固定位置(如端粒)旳长 度占该染色体长度旳百分比来表达。
在不分带旳情况下，特定旳染色体能够 经过着丝粒特异，或端粒特异旳探针进 行共杂交来拟定。复，称为 染色体绘图。
影响杂交成果旳参数有下列几种：探针浓
度，杂交时间，探针大小，杂交温度，
染色质变性条件，染色体旳制备和硬化 程度，RNase作用条件，用于降低背景 旳非特异性竞争DNA和醋酸酐处理．其 中有几种原因影响杂交信号旳强度和特 异性，详细旳讲是DNA探针旳纯度；用 于杂交反应旳探针旳大小．小心掌握好
这些条件，我们就能得到没有荧光背景 旳特异性信号。
1.4 分带和信号定位
• 染色体旳分带能够在杂交前，也能够在杂交后， 高辨别旳染色体标本是取得好旳带形旳基础。常 用旳分带措施有：G(Giemsa)带、Q(Quinacrine) 带、R(Reverse)带，涉及色霉素chromomycin A3 ／偏端霉素distamycin A 法；hoechst33258／ propidium iodide[3，8—二氨基—5—[3—(二乙基 －甲基氨)丙基]6－苯菲碘]法，DAPI[DAPI：4， 6—diamidino，2—phenylindole 2HCl]／ propidium iodide法，染色体旳分带也能够直接用 AluLIHs(LI homo sapiens)或Alu之间旳顺序和染 色体杂交而得到类似R带旳条带，更多旳人在努 力使杂交信号和分带能够同步在显微镜下看到。
荧光原位杂交(FISH)
荧光原位杂交（FISH ）实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH ）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。
目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。
FISH 的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。
由于DNA 分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。
与传统的放射性标记原位杂交相比，荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点，因此在分子细胞遗传学领域受到普遍关注。
杂交所用的探针大致可以分类三类：1）染色体特异重复序列探针，例如α卫星、卫星III 类的探针，其杂交靶位常大于1Mb ，不含散在重复序列，与靶位结合紧密，杂交信号强，易于检测；2）全染色体或染色体区域特异性探针，其由一条染色体或染色体上某一区段上极端不同的核苷酸片段所组成，可由克隆到噬菌体和质粒中的染色体特异大片段获得；3）特异性位置探针，由一个或几个克隆序列组成。
探针的荧光素标记可以采用直接和间接标记的方法。
间接标记是采用生物素标记DNA 探针，杂交之后用藕联有荧光素亲和素或者链霉亲和素进行检测，同时还可以利用亲和素-生物素-荧光素复合物，将荧光信号进行放大，从而可以检测500bp 的片段。
而直接标记法是将荧光素直接与探针核苷酸或磷酸戊糖骨架共价结合，或在缺口平移法标记探针时将荧光素核苷三磷酸掺入。
直接标记法在检测时步骤简单，但由于不能进行信号放大，因此灵敏度不如间接标记的方法。
实验用具及材料 相关溶液的配制1）20×SSC ：175.3g NaCl ，88.2g 柠檬酸钠，加水至1000mL （用10mol/L NaOH 调pH 至7.0）。
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荧光原位杂交临床应用
荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）是一种在细胞或组织的水平上探测特定DNA序列的技术。
它通过将荧光标记的探针与目标DNA序列特异性结合，然后通过显微镜观察荧光信号的分布情况来研究细胞或组织中的基因组结构和功能。
荧光原位杂交技术在临床应用中具有广泛的应用价值，可以用于遗传疾病的诊断、肿瘤的分子分型和预后评估等方面。
荧光原位杂交技术的临床应用主要体现在以下几个方面：
1. 遗传疾病的诊断：荧光原位杂交技术可以用于检测染色体异常，帮助医生进行遗传疾病的诊断和预后评估。
例如，通过针对染色体上特定基因的FISH分析，可以鉴定出染色体异常引起的唐氏综合征、爱德华氏综合征等遗传疾病。
2. 肿瘤的分子分型：荧光原位杂交技术可以通过检测肿瘤细胞中染色体的异常改变，帮助医生对肿瘤进行分子分型，指导治疗方案的选择。
例如，FISH技术可以用于检测HER2基因在乳腺癌中的扩增情况，从而判断乳腺癌患者对靶向治疗药物的敏感性。
3. 肿瘤的预后评估：荧光原位杂交技术可以通过检测肿瘤细胞中染色体的异常改变，预测肿瘤的预后情况。
例如，FISH技术可以用于检测白血病细胞中BCR-ABL融合基因的存在，从而判断患者对靶向治疗药物的疗效和预后。
4. 检测微小缺失和重复：荧光原位杂交技术可以通过检测染色体上微小缺失或重复的情况，帮助医生进行染色体疾病的诊断和预后评估。
例如，FISH技术可以用于检测儿童发育迟缓症患者的染色体微缺失情况，从而帮助医生进行个体化治疗。
荧光原位杂交技术作为一种高灵敏度、高特异性的分子生物学技术，在临床应用中具有广泛的应用前景。
它可以帮助医生进行遗传疾病的诊断、肿瘤的分子分型和预后评估等方面，为患者的个体化治疗提供重要的依据。
随着技术的不断进步和发展，相信荧光原位杂交技术在临床应用中的作用会越来越重要，为人类健康事业做出更大的贡献。