质粒转化大肠杆菌实习报告--附实验图片
质粒转化大肠杆菌
03
鉴定
采用电泳、紫外分光光度计等方法对纯化的质粒进行鉴定，确保其质量和浓度达到要求。
质粒的纯化和鉴定
01
提取质粒
从细胞中提取出质粒DNA，常用的方法有碱裂解法和煮沸法等。
02
纯化
通过一系列步骤将质粒中的蛋白质和其他杂质去除，得到纯净的质粒。
将大肠杆菌细胞在冰上放置一段时间，然后进行离心处理，去掉上清液，留下沉淀的感受态细胞。
实验室安全
质粒转化涉及细菌操作，需要注意生物安全。在处理细菌时，应遵循正确的生物安全程序，包括使用适当的个人防护装备和按照规定进行操作。
生物安全
安全注意事项
实验操作注意事项
试剂准备
正确准备实验所需的各种试剂，包括缓冲液、培养基和抗生素等，确保试剂的质量和有效性。
实验建议：为了提高实验的效率和准确性，建议在实验前进行预实验，以验证实验条件和操作步骤的正确性。同时，建议在实验过程中做好详细记录，以便于分析和总结实验结果。
克隆筛选
转化大肠杆菌
质粒转化大肠杆菌的结果分析
04
转化效率定义
转化效率是指目的基因整合到受体细胞染色体DNA中的比例，以及每个受体细胞中目的基因的拷贝数。
转化效率检测方法
通过southern印迹杂交、荧光定量PCR和菌落计数等方法进行转化效率的检测。
转化效率的检测
鉴定方法
将转化子进行DNA测序以确定目的基因序列是否正确，同时进行表型特征鉴定，例如抗生素抗性、插入失活等。
《质粒转化大肠杆菌》
xx年xx月xx日
目录
contents
质粒转化实验简介质粒转化前的准备质粒转化大肠杆菌的步骤质粒转化大肠杆菌的结果分析实验注意事项与建议参考文献
质粒转化大肠杆菌
2023-10-29
目录
• 质粒转化大肠杆菌概述 • 质粒转化大肠杆菌实验流程 • 质粒转化大肠杆菌影响因素 • 质粒转化大肠杆菌实验结果分析
目录
• 质粒转化大肠杆菌应用与前景 • 质粒转化大肠杆菌实验数据记录
与分析表格（示例）
01
质粒转化大肠杆菌概述
质粒定义与特点
质粒
质粒是一种裸露的、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环 状DNA分子。
转化效率评估
转化效率定义
转化效率是指外源DNA导入受体细胞并实现稳定遗传的频率。在大肠杆菌转化实验中，转化效率是指每微克质粒DNA能够 成功转化大肠杆菌的菌落数。
转化效率影响因素
转化效率受到多种因素的影响，如质粒DNA的浓度、受体菌的种类和状态、转化条件等。通过对这些因素的调控，可以优 化转化效率。
特点
质粒具有宿主细胞独立性，即质粒可以在宿主细胞内进行自我复制，并且不 会干扰宿主细胞的正常生命活动。此外，质粒还可以携带和表达外源基因， 被广泛地应用于基因克隆、基因表达等生物技术中。
大肠杆菌定义与特点
大肠杆菌
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，属于革兰氏阴性菌。
特点
大肠杆菌具有繁殖快、易于培养、遗传背景清楚等优点，因此被广泛地应用于基因克隆、基因表达等生物技术 中。此外，大肠杆菌还是一种常见的食品污染源，容易引起食物中毒等疾病。
培养温度与时间
培养温度和时间不适宜可能导致细胞活力下降，影响转化效率。
质粒浓度与纯度
质粒浓度
质粒浓度过高可能导致细胞中毒，影响转化效率；质粒浓度过低则可能导致转化效率下降。
质粒纯度
质粒纯度不足可能导致其他杂质干扰转化过程，影响转化中，适宜的转化温度可 以提高转化效率。
实验 14以质体DNA对大肠杆菌进转型作用(Transformation)
實驗 14以質體DNA 對大腸桿菌進行轉型作用(Transformation)概述很多分子生物策略之所以成功，是與能有效地取得感興趣之DNA載體有關。
進行細菌轉型作用最常用的一種方法是加入大量的calcium chloride，導致大腸桿菌的細胞壁發生結構上的變化，而有利於質體DNA(載體)進入細菌細胞內。
另一種較迅速的方法是在LB培養液中加入冰的10%(w/v)PEG,5%(w/v) dimethyl sulfoxide(DMSO)，及50mM magnesium chloride，只須一個步驟就可以製備出勝任細胞(Compentent cell)，之後可以保存直至有需要時再拿出來用(Chung et al,1989)。
一般來說，將質體DNA引入細胞中有三個主要步驟:(1)勝任細胞之製備；(2)使勝任細胞轉型;(3)篩選轉型細胞。
大部份大腸桿菌品系的轉型效率在105-108之間(即每ug質體中轉型細胞之數目)。
影響此效率之因子與勝任細胞狀況或吸收DNA之能力有關。
而這兩項因子又愛○1是否用對數生長期之細胞○2處理時是否將細胞保持在4°C下○3曝露於冰的calcium chloride的時間等所影響。
勝任細胞製備完成後，利用熱休克處理，使細胞外梢的油脂變性而刺激轉型作用。
爾後給予一段時間恢復後，可用對抗生素之抗性標記，進行篩選工作。
不同的細胞品系和載體之理想轉型作用效率，有不同的係數和條件。
有些因子如質體的大小，DNA的異構現象(緊密的，直線狀的，或有缺口的)及抗生素標記的篩選等，都會影響轉型作用之實驗結果。
試劑/工具名稱規格數量一瓶氯化鈣(Calcium ChlorideSolution)離心管10-15ml 數支大腸桿菌LE 392 一瓶LB平板(LB培養液加20g洋菜/L)一瓶含氨卡青黴素(ampicillin)的平板一瓶LB培養液一瓶一瓶含氨卡青黴素(ampicillin)的LB培養基pRY121 DNA 一瓶TE緩衝液一瓶試管13x100mm 數支氯化鈣離心管大腸桿菌LE 392 LB平板含氨卡青黴素的平板LB培養液含氨卡青黴素的LB培養基 pRY121 DNATE緩衝液試管儀器/設備名稱規格數量4°C離心機一台37°C培養箱一台分光光度計一台37°C恆溫振盪器一台45°C水浴一台4°C離心機37°C培養箱分光光度計37°C恆溫振盪器45°C水浴導師注意事項1﹒以無菌方法將大腸桿菌LE 392移到含5ml LB液體培養基的試管中，並在37°C下振盪培養一個晚上。
质粒转化
重组质粒转化大肠杆菌
•
LB培养基的配方如下:
• • • • • • • • • • • 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 10g/L 另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前 使用最广的原核表达菌种E.coli的生长) 固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加 好抗生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴 中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致 抗生素失效，并充分摇匀。 3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外 下照10-15分钟。 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用
原
理
在一定条件下，经过连接后的ＤＮＡ片段 与感受态细胞混合保温，可以进入感受态细胞。 进入感受态细胞的ＤＮＡ分子通过复制、表达， 实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传 性状。将经过转化后的细胞在选择性培养基中培 养，即可筛选出转化体，即带有异源ＤＮＡ分子 的受 • 2. 含Ampicillin的LB固体培养基，LB液体培养基。 • 3. 0.1M CaCl2溶液 • 4. 待转化质粒 • 5 恒温摇床，恒温培养箱，台式高速离心机，无菌工作 • 台，低温冰箱，恒温水浴锅，分光光度计，微量移液 • 枪，EP管（离心管），100ml烧瓶。
质粒转化大肠杆菌
质粒的结构与功能
质粒是一种裸露的、独立于细菌染色 体外并具有自我复制能力的双链环状 DNA分子。
质粒在细菌中发挥着重要的遗传调控 作用，可以促进细菌的进化与适应环 境。
质粒携带特定的基因，赋予细菌某些 表型特征，如抗性、代谢性、致病性 等。
大肠杆菌的遗传特性
大肠杆菌是一种常见的革兰氏阴 性细菌，具有多种遗传特性，如
抗性、代谢性、致病性等。
大肠杆菌的染色体和质粒共同构 成其基因组，调控其生命活动和
适应性。
大肠杆菌的基因组相对较小，易 于进行遗传操作和基因工程研究
。
转化过程的分子机制
转化过程是指将外源DNA分子导 入受体细胞，并使其获得新的遗
传特性的过程。
在大肠杆菌中，转化过程主要依 赖于细胞表面的受体蛋白与外源 DNA分子的结合，以及DNA分
质粒转化反应
将转化后的细胞在合适的选择培 养基上培养，筛选出转化子。
转化细胞的筛选与鉴定
转化细胞的筛选
在选择培养基上，通过观察菌落的生 长情况，筛选出含有目的质粒的转化 子。
转化细胞的鉴定
通过PCR、酶切等分子生物学方法对 转化子进行鉴定，验证目的质粒是否 成功转化到大肠杆菌中。
04
转化效率的影响因素及优化策 略
转化子基因表达水平的检测
基因表达水平的定量分析
通过qPCR、Western blot等技术手段，对转化子中的目的基因表达水平进行定 量分析，了解转化子中目的基因的表达情况。
基因表达谱的比较
将转化子与未转化子的基因表达谱进行比较，找出差异表达的基因，分析转化对 基因表达的影响。
转化子稳定性的评估
转化子的稳定性检测
感受态细胞制备
大肠杆菌感受态细胞的制备及重组子的转化_实验报告
分子生物学实验报告实验名称：大肠杆菌感受态细胞的制备及重组子的转化班级：生工xxxx姓名：xxx学号：xxx日期：xxx大肠杆菌感受态细胞的制备及重组子的转化1 引言在分子生物学日益普及的今天，基因操作已成为一项重要的常规技术。
体外连接的DNA重组体导入合适的受体细胞便能大量地复制、增殖和表达，从而得到大量的重组基因，其中尤以转化为主[1]。
感受态细胞的制备是分子生物学研究中的一个重要环节，其制备质量的好坏直接影响到后续实验工作的进行。
本次实验的目的旨在了解转化的概念，及其在分子生物学研究中的意义，学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。
2 材料和方法2.1 实验原理质粒DNA需经过转化过程（transformation），才能将其导入感受态细胞（competent cell）或者大肠杆菌体中，然后通过寄主细菌的系统来达到复制DNA 的目的。
进行细菌转化作用最常用的一种方法是加入大量的氯化钙（calcium chloride），导致大肠杆菌的细胞壁发生结构上的变化，变成感受态细胞，而有利于质体DNA进入细菌细胞内。
大部分大肠杆菌品系的转化效率在105-108之间，即每μg质粒DNA中成功的转化细胞数目，影响此效率的因子与感受态细胞状況或吸收DNA的能力有关。
而这2项因子又受细菌是否处于对数生长期、处理时是否将细胞保持在4°C以下，以及氯化钙处理细胞的时间影响。
感受态细胞制备完成后，利用热休克处理，使细胞质膜的油脂变性而刺激转化作用，而后给予一段时间恢复后，可用对抗生素之抗性标记，进行筛选工作。
本实验是利用冰冷的氯化钙溶液制备感受态细胞，其转化效率约在105-107之间。
转化（transformation）是将异源DNA分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传形状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。
本实验以E coli DH5α菌株为受体细胞，用CaCl2处理受体菌使其处于感受态，然后与pMD18-T载体共保温，实现转化。
质粒DNA转化大肠杆
3）转化操作： 受体细胞的预处理或感受态细胞的制备对转 化率影响最大。对于Ca2+ 诱导的完整细胞转化而 言，菌龄、CaCl2处理时间、感受态细胞的保存期 以及热脉冲时间均是很重要的因素，其中感受态 细胞通常在12-24小时内转化率最高，之后转化率 急剧下降。 4）试剂纯度与器皿的洁净度： 转化过程中，所用的试剂（CaCl2，甘油，水） 必须是高纯度的。所用器皿尽量酸洗后乙醇洗涤， 超声后用超纯水淋洗。
1970年Mandel和Higa发现用CaCl2 处理过的大 肠杆菌能够吸收噬菌体DNA，此后不久，Cohen等 人用CaCl2法实现了质粒DNA转化大肠杆菌的感受 态细胞，其整个操作程序为： 1）将处于对数生长期的细菌置入0℃的CaCl2低渗溶液 中，使细胞膨胀，同时Ca2+使细胞膜磷脂层形成液 晶结构，使得位于外膜与内膜间隙中的部分核酸酶 离开所在区域，这就构成了大肠杆菌人工诱导的感 受态； 2）此时加入DNA，Ca2+又与DNA结合形成抗DNase的 羟基-磷酸钙复合物，并粘附在细菌细胞膜的外表 面上；
（6）弃尽上清液，将菌体置于冰水浴中，用30ml预 冷的100mmol/L CaCl2溶液轻轻混匀洗涤一次。 （7）4℃，6 000转/分离心10min。 （8）弃尽上清液，将沉淀用1ml预冷的CaCl2-甘油混 合液重新轻轻悬浮。 （ 9 ）200µl/ 管 分装至预冷 的 EP管 中（ 冰水 浴 中操 作），迅速置–80℃冰箱冷冻保藏。
3. 试剂与器材 1. 材料：p1300-TaSTK质粒、DH5a大肠杆菌感受 态菌液 2. 试剂：LB液体培养基、含有100µg/ml Kan抗生 素的LB固体培养基、20mg/ml IPTG, 20mg/ml X-Gal(二甲基甲酰胺DMF配制，避光保存) 3. 仪器：摇床、培养箱、超净工作台、超低温冰 箱、水浴锅 4. 其他：涂棒 、微量移液器
质粒转化大肠杆菌
1. 培养细胞：将大肠杆菌细胞在含有适当抗生素的培养基中培养至对数生长期。2. 准备电激装置：准备电激仪和相应的电激仪耳害。3. 转化质粒：将待转化的质粒加入到含有培养细胞的电击培养基中，将细胞和质粒混合均匀后放入电激仪中进行电击处理。4. 复苏细胞：将转化后的细胞在富含营养的LB培养基中复苏恢复生长。
实验步骤
1. 培养细胞：将大肠杆菌细胞在含有适当抗生素的培养基中培养至对数生长期。2. 转化质粒：将待转化的质粒加入到培养细胞中，并对细胞进行热激处理，一般为42℃、45秒。3. 复苏细胞：将转化后的细胞在富含营养的LB培养基中复苏恢复生长。
电激法
电激法是一种常用的质粒转化方法，其原理是利用脉冲电场使细菌细胞膜瞬间发生通透性改变，使质粒能够穿过细胞膜进入细胞。实验步骤
THANKS
03
总结
总结
质粒转化大肠杆菌是一种常用的基因传递方法，通过热激、电激或化学方法将外源质粒引入细菌细胞中。不同的转化方法在操作步骤和效果上有所差异，实验者可以根据具体需求选择适合的转化方法。参考文献：1. 清华大学生物技术教育中心.《生物技术实验方法及原理》.清华大学出版社，2008.
THE END
质粒转化大肠杆菌
CONTENTS
简介基本原理总结
01
简介
简介
质粒转化是指将外源质粒引入细菌细胞中的过程，是生物技术中常用的基因传递方法之一。大肠杆菌是转化实验中最常用的宿主细胞之一，其转化效果较好且操作简便。本章将介绍质粒转化大肠杆菌的基本原理、实验步骤和注意事项。
02
基本原理
本原理
质粒转化大肠杆菌的基本原理是通过热激、电激或化学方法使细菌细胞膜发生破裂，使外源质粒能够进入细胞内。质粒经过转化后可以在细菌中复制和表达，从而实现基因的传递。热激法电激法化学方法
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细胞转基因技术研究进展
1实验内容：原核细胞转基因:大肠杆菌感受态细胞的制备, 转化和鉴定
2实验原理及技术介绍：
细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。
各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。
但是在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。
如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。
所谓感受态，是指细菌生长过程中的某一阶段的培养物，只有某一生长阶段中的细菌才能作为转化的受体，能接受外源DNA而不将其降解的生理状态。
感受态形成后，细胞生理状态会发生改变，出现各种蛋白质和酶，负责供体DNA的结合和加工等。
细胞表面正电荷增加，通透性增加，形成能接受外来的DNA 分子的受体位点等。
本实验为了把外源DNA（重组质粒）引入大肠杆菌，就必须先制备能吸收外来DNA分子的感受态细胞。
在细菌中，能发生感受态细胞是占极少数。
而且，细菌的感受态是在短暂时间内发生。
目前对感受态细胞能接受外来DNA分子的本质看法不一。
主要有两种假说:一种是局部原生质体化假说——细胞表面的细胞壁结构发生变化，即局部失去细胞壁或局部溶解细胞壁，使DNA分子能通过质膜进细胞。
另一种是酶受体假说——感受态细胞的表面形成一种能接受DNA的酶位点，使DNA分子能进入细胞。
本实验通过CaCl2对特定的大肠杆菌处理，制备感受态的细菌。
这些细菌可使每微克超螺旋质粒DNA，如一些插入目的DNA片段的重组质粒，产生5×106~2×107个转化的菌落。
当质粒与这些大肠杆菌混合后，质粒粘附在大肠杆菌的表面，在42℃的温度时，大肠杆菌出现热休克，质粒可通过大肠杆菌细胞膜上形成的空隙进入菌体内。
随后，加入LB培养液，于37℃振动培养可使细菌复苏，并且表达质粒编码的抗生素抗性基因，提高转化效率。
转化成功的大肠杆菌可以在相应抗生素培养皿中传代，形成菌落。
本实验以E.coli DH5a菌株为受体细胞,并用CaCl2处理,使其处于感受态,然后与质粒共保温,实现转化。
由于质粒带有氨苄青霉素抗性基因(Amp)，可通过Amp抗性来
1
筛选转化子。
如受体细胞没有转入PBS，则在含Amp的培养基上不能生长。
能在Amp 培养基上生长的受体细胞（转化子）肯定已导入了PBS。
质粒转化大肠杆菌的主要有两个用途:1、重组质粒的鉴定。
2、为扩增质粒和其它载体作准备。
3材料,试剂与设备
3.1材料
E.coli DH5α菌株:Rˉ,Mˉ,Ampˉ；质粒DNA——实验室提供，eppendorf管。
3.2设备
恒温摇床,电热恒温培养箱,台式高速离心机,无菌工作台,低温冰箱, 恒温水浴锅, 制冰机,微量移液枪。
3.3试剂
1.LB培养基：胰蛋白胨10g/L, 酵母膏提取物5g/L, NaCl 10g/L,琼脂1510g/L, PH=7.4, 121℃高压灭菌20min。
2.Amp母液：实验室配制
3.含Amp的LB固体培养基:将配好的LB固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右,加入Amp储存液,使终浓度为50ug/ml,摇匀后涂板。
5.0.05mol/L CaCl2溶液:称取0.28g CaCl2 (无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,定容至100ml,高压灭菌。
4操作步骤
4.1受体菌的培养
从LB平板上挑取新活化的 E.coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。
将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml LB液体培养基中,37℃振荡培养2-3小时至OD600 ＝0.5左右。
4.2感受态细胞的制备 (CaCl2法)
1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。
2、弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。
3、弃去上清,加入200ul预冷0.05mol/L的CaCl2溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液。
4、感受态细胞分装成200μl的小份。
2
3
4.3 转化
1、从4℃冰箱中取200μl 感受态细胞悬液，立即置冰上。
2、 加入质粒DNA 溶液(含量不超过50ng ,体积不超过10μl ),轻轻摇匀,冰上放
置30分钟后。
3、42℃水浴中热击90秒或37℃水浴5分钟,热击后迅速置于冰上冷却3-5分钟。
4、向管中加入1ml LB 液体培养基(不含Amp ),混匀后37℃振荡培养10—30min ,
使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Amp )。
5、将上述菌液摇匀后取15μl 涂布于含Amp 的筛选平板上,再用塑料带密封，然
后正面向上放置半小时,待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿,37℃培养16-24小时。
同时做两个对照:
对照组1：以同体积的无菌双蒸水代替DNA 溶液,其它操作与上面相同。
此组正
常情况下在含抗生素的LB 平板上应没有菌落出现。
对照组2：以同体积的无菌双蒸水代替DNA 溶液,但涂板时只取5μl 菌液涂布于
不含抗生素的LB 平板上，此组在正常情况下应产生大量菌落。
5 结果
5.1结果照片如下：
实验组 ：Amp+质粒
对照组1 ：Amp+水
对照组2：水
由上图可知，实验组长了一些菌落，对照组1没有长菌落，对照组2长了大量菌落。
5.2结果分析：
对照组1、2相互对照可知，大肠杆菌原本不能在含有Amp的培养基中生长，而且在不含Amp的培养基中生长得很好。
对照组1与实验组相互对照可知，只有转入质粒的大肠杆菌能够在含有Amp 的培养基中生长。
实验组与对照组1、2对照可知，只有很少部分的大肠杆菌转入了质粒，此次实验的转化率比较低。
5.3转化率较低原因分析：
1.由于在对数中期的大肠杆菌易生成感受态。
所以可能是制感受态时受体细胞
不再对数中期导致制得的感受态细胞太少，导致转化率很低。
2.在使用用移液枪的时候注射质粒时过快或者用手混匀的时候用力过大，导致
一些受体细胞破裂死亡。
3.可能是质粒浓度过高，转化的时候进入大肠杆菌内的质粒过多而使大肠杆菌
胀破死亡，因而导致转化率降低。
4.另外，实验操作过程中操作的人过多，染菌的可能性变大使转化率变低。
5.4为了提高转化效率, 实验中要考虑以下几个重要因素：
1)细胞生长状态和密度。
密度不足或过高会使转化率下降。
4
2)质粒DNA的质量和浓度。
用于转化的质粒DNA应主要是共价闭环DNA。
转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，量过多货体积过大时，转化率下降。
3)试剂的质量。
4)防止杂菌和其他外源DNA的污染。
5)根据所需质粒DNA的特性，设置相应的选择性培养基进行筛选，有的可能
还需进行多补筛选。
6讨论感受态的制作和质粒转化是分子生物学实验最基本的操作技术。
这次实习的一个很重要的目的就是学会这两种技术。
结果表明我所操作的实验组转化率较低。
而化合物及无机离子对转化率有影响：在Ca2+的基础上，联合其他二价金属离子(如Mn2+，CO2+)、DMSO或还原剂等物质处理细菌，可使转化率提高100～1000倍。
所以在以后实验中可以利用这一点对本实验中所用的CaCl2法制备感受态加以改进，以提高转化率。
细菌经0℃CaCl2处理后转化率随时间的推移而增加，24h达到最高，之后转化率逐渐下降。
所以在实验中要用0℃CaCl2处理大肠杆菌的时间比此次实验中所处理的时间稍作延长，亦可提高转化率。
另外目前制备感受态方法主要有电转化和CaCl2转化法，这两种方法都是目前实验室制备感受态的基本方法。
但是它对于我们这样的初学者来说仍略显复杂。
最近从网上找到一种更为简捷有效的大肠杆菌感受态细胞制备的方法[1]，只需一步室温离心便能够获得与常规方法效价相近，并能够长期保存的大肠杆菌感受态细胞。
实验结果显示新方法制备的感受态细胞每微克转化菌落数达 1 0
5---1 06。
个，可以满足在质粒中进行的常规克隆需要达到了CaCl
法的效果。
而
2
且所制备的感受态细胞能较长时间 (一8 0℃，至少可保存9个月) 冷冻保存而转化效率不会下降，适于一次大量制备并长期保存使用，这种方法也可以考虑为我所用，简化实验步骤提高转化率。
若成熟的话可以在制备感受态细胞时长期使用。
7参考文献：
【1】代红星;张庆桥;樊宝良. 一种简捷有效的大肠杆菌感受态细胞制备方法. 安徽农业科学2008年第29期
5。