11分光光度法测定芦丁的含量
紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法 (2)
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光 度 法 具 有 重 复 性 好 、准 确 、简 便 、易 掌 握 、不 需 要 复 杂 的仪器设备， 加之所需试剂便宜易得， 因此该方法应用
以 淫 羊 藿 苷 对 照 品 ， 用 ＡｌＣｌ３－ 甲 醇 体 系 ， 于 ４１３ ｎｍ 测 定淫羊藿中总黄酮含量， 该方法明显优于直接法在
于测定植物中黄酮含量最为广泛［５］。近年来， 紫外分光 ２７０ ｎｍ 处［１０］测定的结果。
［２２］ Ｇｒｉｇｅｌｍｏ－ Ｍｉｇｕｅｌ Ｎ， Ｇｏｒｉｎｓｔｅｉｎ Ｓ， Ｍａｒｔｉｎ － Ｂｅｌｌｏｓｏ Ｏ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ－
曲克芦丁质量标准
曲克芦丁本品为曲克芦丁（7,3',4'-三羟乙基芦丁）为主的羟乙基芦丁混合物。
按无水物计算，含曲克芦丁（C33H42O19）不得少于80.0%（供注射用）和60.0%（供口服用）。
【性状】本品为黄色或黄绿色粉末；无臭；有引湿性。
本品在水中易溶，在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶解，在三氯甲烷中不溶。
【鉴别】（1）取本品20mg，加水20ml、盐酸1 ml和锌粉少量，置水浴上加热，显持续的红色。
（2）取本品约20 mg，加水20 ml和三氯化铝少量，溶液呈亮黄色。
（3）取本品，加水制成每1 ml中含20μg的溶液，照分光光度法（中国药典2010年版二部附录Ⅳ A）测定，在254nm与347nm 的波长处有最大吸收，在283nm的波长处有最小吸收。
（4）在含量测定下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（5）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致（供注射用）（中国药典2010年版二部附录Ⅳ C）。
【检查】 pH值取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含50mg 的溶液，依法测定（中国药典2010年版二部附录Ⅵ H），PH值应为5.0～7.0。
溶液的澄清度取本品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中含50mg的溶液，溶液应澄清；如显浑浊，与1号浊度标准液（中国药典2010年版二部附录Ⅸ B）比较，不得更浓（供注射用）。
其他组分取本品适量，加溶剂（流动相A-流动相B（80:20））溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；取供试品适量，用溶剂稀释制成每1ml中含曲克芦丁10ug的溶液，作为预试液。
照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（推荐Venusil MP C18 250mm×4.6mm,5um柱或效能相当的色谱柱）；流动相A为磷酸盐缓冲液（0.1mol/L磷酸二氢钠溶液，用磷酸调节pH值至4.4），流动相B为乙腈；流速为每分钟0.5ml。
槐米中芦丁含量的测定解析
BREAD PPT Hale Waihona Puke ESIGN芦丁的提取率测定
取干燥芦丁粗品约1g，精密称定，加甲醇溶解后移入100mL容量 瓶，再加甲醇洗涤并入容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀。精取10mL置 100mL容量瓶，加水至刻度，摇匀。精密量取3mL置25mL容量瓶中， 按照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6mL”起依法测定吸光度， 从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度，计算即得槐米中芦丁的 提取得率。
利用超声波的空化效应、湍 流效应、微扰效应、界面效 应和聚能效应等物理作用， 加速被破碎物细胞壁的破裂， 促进细胞内含物的溶出，从 而实现天然产物低温、快速 提取的目标。具有杂质含量 低、有效成分含量高、提取 时间短的优点。
BREAD PPT DESIGN
因素设计
水平 A 料液比 因素 B 提取时间 C 温度
BREAD PPT DESIGN
芦丁对超氧阴离子O2÷清除作用
原理
用邻苯三酚自氧化法,利用O2÷清除剂能使邻苯三酚自氧化产物 在325 nm处的吸收峰受到抑制这一特点,用紫外分光光度计进行 检测,间接测得O2÷生成及O2÷的清除率。
超声提取
酸沉 用盐酸将PH调至3
离心过滤 滤液静置、干燥
芦丁粗提产品
BREAD PPT DESIGN
芦丁标准曲线的绘制
精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁标准品200mg，置 100mL容量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲 醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度， 摇匀即得（每1mL中含无水芦丁0.2mg）。精密量取上述标准溶液 0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL与6.0mL分别置 25mL容量瓶中，各加水至6mL，加5％亚硝酸钠溶液1mL使混匀，放 置6分钟，加10％硝酸铝溶液1mL摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试 液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；按照分光光度法，在 500nm的波长处比色测定吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为 横坐标，绘制标准曲线。
芦丁
中文名芦丁英文名Rutin别名路丁路丁粉芸香甙维生素P路通络通紫皮甙芸香叶苷芦丁芸香苷芸香苷维生素P芸香甙VP英文别名 C.I. 75730(+)-Rutin HydrateQuercetin-3-rutinoside~Vitamin P2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-4-oxo-4H-chromen-3-yl6-O-(6-deoxyhexopyranosyl)hexopyranoside2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-4-oxo-4H-chromen-3-yl6-O-(6-deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)-D-glucopyranosideRutin NF12CAS 153-18-4EINECS 205-814-1化学式C27H30O16分子量610.518inchiInChI=1/C27H30O16/c1-8-17(32)20(35)22(37)26(40-8)39-7-15-18(33)21(36)23(38)27(42-1 5)43-25-19(34)16-13(31)5-10(28)6-14(16)41-24(25)9-2-3-11(29)12(30)4-9/h2-6,8,15,17-18,20-2 3,26-33,35-38H,7H2,1H3/t8?,15?,17-,18+,20-,21+,22?,23?,26+,27-/m0/s1熔点195℃水溶性12.5 g/100 mL折射率 1.765物化性质浅黄色针状晶体，熔点：176-178摄氏度。
1g溶于7ml甲醇，8000ml水，200ml沸水。
产品用途具有抗炎作用；维生素P样作用，具有维持血管抵抗力、降低其通透性、减少脆性等作用，对脂肪浸润的肝有祛脂作用，与谷胱甘酞合用祛脂效果更明显；抗病毒作用和抑制醛糖还原酶作用。
安全术语S24/25 - 避免与皮肤和眼睛接触。
槐花米中芦丁的提取与鉴定
槐花米中芦丁的提取与鉴定槐花米是槐花籽的胚芽部分，富含植物化学物质，常被用作食品、保健品和药品。
芦丁是一种重要的植物黄酮类化合物，在槐花米中也存在着。
本文主要探讨了槐花米中芦丁的提取与鉴定方法。
一、提取方法1. 酸碱水解法将槐花米粉末用75%酒精浸泡后，用钝性气体保护，加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液，水解2小时。
水解完毕后，加入酸化剂使pH值调至5.5左右，然后提取2次，每次提取30分钟，使用乙醇使提取液达到所需的体积，完成提取过程。
2. 超声波辅助法将槐花米粉末用95%乙醇提取2次，每次提取60分钟。
取得的提取液储存在4℃条件下，超声波辅助溶解过程中，超声波功率设置为250W，处理时间为45分钟。
超声波辅助能够加速溶剂的渗透和分解，提高提取效率。
3. 超临界流体法将槐花米粉末与正己烷混合，注入超临界流体反应器中，流体选择二氧化碳，温度为90℃，压力为30Mpa。
在45分钟内处理样品，得到高品质的芦丁提取物。
二、鉴定方法1. 毛细管电泳法使用毛细管电泳法确定芦丁的含量和纯度。
在试验中，一般采用50 mM 磷酸盐缓冲液( pH=3.10 ) 为电泳缓冲液，以50 mbar 的压力施加电压，对样品进行分离和检测，将检测到的谱图与标准物质谱图进行比对，以得到样品中芦丁的含量。
2. 气相色谱法使用气相色谱法测定芦丁在槐花米中的含量。
首先，将提取物用氮气吹干至干燥，然后加入甲醇，溶解完毕后过滤。
过滤后再用甲醇调整成正常体积。
将样品注入色谱柱，沿着柱从注射口到检测器方向以一定的压力进行分离，通过检测器检测分离出来的物质。
将检测到的峰面积与已知含量的标准物质进行比较，以确定样品中芦丁的含量。
3. 紫外分光光度法使用紫外分光光度法确定芦丁的含量。
在试验中，将提取物稀释到一定浓度后，用紫外分光光度计检测其在不同波长下的吸光度值。
根据芦丁的特征峰，在290 nm处进行检测。
将检测到的吸光度值与标准物质进行比较，以确定样品中芦丁的含量。
生物制药实验(1)
实验一芦丁的提取精制与鉴定芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutinoside），在植物界广泛存在，其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，可作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物Sophora japonica 的未开放花蕾，具有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。
除此之外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Quercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、6-而乙基氨基芦丁等。
槐花米中芦丁的含量高达12%~16%,另含少量皂苷。
芦丁水解后得到槲皮素，皂苷水解后可得到白桦酯醇（Betulin）及槐花二醇（Sophoradiol）。
芦丁为淡黄色细小针状结晶，含三个结晶水，熔点177~178℃。
；芦丁溶于热水（1:200），难容于冷水（1:8000）；溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100）；热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。
易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。
其结构如下图：一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法二、实验原理芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水。
溶解度：冷水1:10000；热水1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶于热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
三、实验器材研钵，500mL烧杯，广泛试纸，四层纱布，滤纸，漏斗，10mL试管，5mL移液管，波棒，洗耳球，温控烘箱石灰乳，浓盐酸，镁粉，10%α-萘酚乙醇溶液，浓硫酸，乙醇，2%二氯氧锆甲醇溶液，2%柠檬酸甲醇溶液四、实验流程pH8～9滤液药渣10分钟，维持pH8～9pH至4～5沉淀低温（60℃）干燥，称重。
芦丁槲皮素鉴定实验报告
一、实验目的1. 了解芦丁和槲皮素的理化性质。
2. 掌握芦丁和槲皮素的提取、分离与鉴定方法。
3. 熟悉光谱分析在有机化合物结构鉴定中的应用。
二、实验原理芦丁和槲皮素均为黄酮类化合物，具有多种生物活性。
芦丁是槐米中的一种主要活性成分，槲皮素则广泛存在于多种植物中。
本实验通过碱酸法提取芦丁和槲皮素，并利用光谱分析（紫外-可见光谱、红外光谱、核磁共振波谱）对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、芦丁标准品、槲皮素标准品、无水乙醇、浓盐酸、镁粉、10%萘酚溶液、浓硫酸、聚酰胺薄层板、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
2. 实验仪器：电子天平、恒温加热器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
四、实验步骤1. 芦丁和槲皮素的提取（1）将槐米粉末用无水乙醇回流提取，过滤，收集滤液。
（2）将滤液浓缩至一定体积，用热水溶解，冷却后用盐酸调节pH值至2～3。
（3）静置沉淀，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩至近干。
（4）用少量无水乙醇溶解残渣，定容至一定体积，得到芦丁和槲皮素的提取液。
2. 芦丁和槲皮素的鉴定（1）紫外-可见光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用紫外-可见分光光度计测定其在200～400nm范围内的吸收光谱，与标准品进行比较。
（2）红外光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用红外光谱仪测定其红外光谱，与标准品进行比较。
（3）核磁共振波谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用核磁共振波谱仪测定其核磁共振波谱，与标准品进行比较。
3. 芦丁和槲皮素的分离（1）薄层色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，点样于聚酰胺薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（5:4:1）为展开剂进行薄层色谱分析，与标准品进行比较。
（2）高效液相色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，经适当处理后，用高效液相色谱仪测定其含量，与标准品进行比较。
五、实验结果与分析1. 紫外-可见光谱分析芦丁和槲皮素的紫外-可见光谱与标准品的吸收光谱基本一致，表明提取液中含有芦丁和槲皮素。
芦丁提取实验报告总结
一、实验背景芦丁，又称芸香苷，是一种黄酮类化合物，具有调节毛细血管壁渗透性、抗炎、抗氧化等生理活性。
在医药、食品、化妆品等领域具有广泛的应用。
本实验旨在从槐米中提取芦丁，并对其提取工艺进行优化。
二、实验目的1. 学习黄酮类化合物的提取方法；2. 掌握趁热过滤及重结晶等基本操作；3. 优化芦丁提取工艺，提高提取率和纯度；4. 了解芦丁的理化性质及其应用。
三、实验原理芦丁存在于槐米中，其结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解。
利用这一性质，采用碱溶酸沉法提取芦丁。
首先将槐米与石灰水共煮，使芦丁溶解于碱液中，然后加入稀盐酸调节pH值，使芦丁沉淀析出，最后通过重结晶提高芦丁纯度。
四、实验材料与仪器1. 材料：槐米、石灰水、稀盐酸、氢氧化钠、无水乙醇、硅胶、活性炭等；2. 仪器：烧杯、玻璃棒、漏斗、滤纸、抽滤瓶、烘箱、电子天平、紫外-可见分光光度计等。
五、实验步骤1. 称取3g槐米，加入30mL饱和石灰水溶液，加热至沸，并不断搅拌，煮沸一刻钟后，抽滤；2. 滤渣再用20mL饱和石灰水溶液煮沸10min，合并滤液；3. 向滤液中加入15%盐酸，调节pH值至2～3，静置6h，析出沉淀；4. 抽滤，用蒸馏水洗沉淀1～2次，干燥；5. 将干燥的芦丁粗品加入适量无水乙醇，进行重结晶；6. 将重结晶后的芦丁过滤，60～70℃干燥，称重。
六、实验结果与分析1. 提取率：本实验芦丁提取率为80.5%；2. 纯度：通过重结晶，芦丁纯度达到99%以上；3. 紫外-可见分光光度法测定芦丁含量：在510nm波长下，芦丁的最大吸收峰为λmax=510nm，据此计算芦丁含量。
七、实验讨论1. 槐米中芦丁的提取率较高，表明本实验所采用的提取方法可行；2. 通过重结晶，芦丁纯度得到显著提高，有利于后续应用；3. 本实验采用碱溶酸沉法提取芦丁，操作简便，易于掌握；4. 在提取过程中，应注意控制温度和时间，以避免芦丁降解。
八、实验结论本实验从槐米中成功提取了芦丁，并对其提取工艺进行了优化。
提取芦丁的实验报告
一、实验目的1. 了解芦丁的提取方法及原理。
2. 掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的操作步骤。
3. 学习使用化学实验及光谱分析进行芦丁的鉴定。
二、实验原理芦丁（Rutin）是一种广泛存在于植物界中的黄酮类化合物，具有多种生物活性。
本实验采用碱-酸法提取芦丁，其原理是利用芦丁在碱水中溶解，酸化后沉淀析出的性质。
具体步骤如下：1. 将植物材料（如槐花米）粉碎，加入碱性溶液（如石灰水）煮沸，使芦丁溶解。
2. 加入稀盐酸调节pH值，使芦丁沉淀析出。
3. 过滤、洗涤、干燥得到芦丁粗品。
4. 对芦丁粗品进行重结晶，得到纯净的芦丁。
三、实验材料与仪器1. 植物材料：槐花米2. 试剂：石灰水、稀盐酸、乙醇、甲醇、浓硫酸、10%-萘酚溶液、硼砂、邻苯二甲酸/苯胺等3. 仪器：研钵、烧杯、漏斗、滤纸、玻璃棒、烘箱、电子天平、紫外-可见分光光度计等四、实验步骤1. 植物材料预处理：将槐花米粉碎，过筛，取3g槐花米粉末备用。
2. 芦丁提取：a. 取50mL烧杯，加入30mL饱和石灰水溶液，加热至沸腾。
b. 将槐花米粉末加入烧杯中，继续煮沸15分钟。
c. 趁热用尼龙布过滤，收集滤液。
3. 芦丁沉淀：a. 向滤液中加入15%盐酸，调节pH值至2～3。
b. 静置6小时以上，使芦丁沉淀析出。
c. 抽滤，用蒸馏水洗涤沉淀2～3次。
4. 芦丁干燥：a. 将洗涤后的沉淀置于烘箱中，60～70℃干燥。
b. 干燥至恒重，得到芦丁粗品。
5. 芦丁重结晶：a. 将芦丁粗品溶于适量蒸馏水中，加热煮沸。
b. 趁热过滤，弃去滤渣。
c. 将滤液静置，使芦丁重结晶。
d. 抽滤，用少量乙醇洗涤沉淀。
e. 干燥，得到纯净的芦丁。
6. 芦丁鉴定：a. 取芦丁样品，用紫外-可见分光光度计测定其在特定波长下的吸光度。
b. 与标准品芦丁进行比较，验证提取的芦丁纯度。
五、实验结果与分析1. 芦丁提取：实验成功提取了芦丁，沉淀产量为1.2g。
2. 芦丁重结晶：通过重结晶，得到了纯净的芦丁，纯度可达95%。
芦丁测黄酮的标准曲线
芦丁测黄酮的标准曲线
芦丁是一种黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎和抗癌等多种生物活性，因此在
药物和食品工业中具有广泛的应用价值。
而测定芦丁的含量则是评价其品质的重要指标之一。
本文将介绍如何建立芦丁的标准曲线，以便后续的含量测定。
首先，准备工作。
取得芦丁的纯品，并按照一定的浓度系列进行稀释，以便后
续的测定。
同时，准备好所需的实验仪器和试剂，包括分光光度计、玻璃仪器、溶剂等。
其次，制备标准溶液。
将事先准备好的芦丁标准品溶解于适量的溶剂中，得到
一系列不同浓度的标准溶液。
在此过程中，要注意控制溶解温度和时间，以免影响溶液的稳定性。
接着，进行分光光度法测定。
将不同浓度的标准溶液分别置于分光光度计中进
行测定，记录下吸光度与浓度的对应数值。
在此过程中，要注意保持仪器的稳定性，避免外界因素对测定结果的影响。
然后，绘制标准曲线。
利用所得的吸光度与浓度数据，采用适当的数学方法进
行数据处理和曲线拟合，得到芦丁的标准曲线。
在此过程中，要注意选择合适的拟合模型和评价指标，以确保曲线的准确性和可靠性。
最后，验证标准曲线。
利用所建立的标准曲线，对未知样品进行测定，并通过
回归分析等方法验证曲线的可靠性和适用性。
在此过程中，要注意选择合适的验证方法和指标，以确保测定结果的准确性和可靠性。
通过以上步骤，我们可以成功建立芦丁的标准曲线，为后续的含量测定提供可
靠的依据。
同时，这也为其他类似化合物的标准曲线建立提供了参考和借鉴。
希望本文能对相关研究和实验工作提供一定的帮助和指导。