全自动免疫亲和在线净化—高效液相色谱法快速测定粮食中赭曲霉毒素A
药食两用类食品中赭曲霉毒素A的高效液相色谱-荧光检测方法
药食两用类食品中赭曲霉毒素A的高效液相色谱-荧光检测方法傅武胜;邱文倩;郑奎城;吕华东;郭斌;严小波【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2011(032)014【摘要】目的：采用免疫亲和净化和高效液相色谱技术，建立淀粉、糖类药食两用食品中赭曲霉毒素A的测定方法。
方法：样品粉末经甲醇-水（8：2，V／V）涡旋、超声及振摇提取，提取液以磷酸盐缓冲液稀释后，用商品免疫亲和柱净化，含有赭曲霉毒素A的甲醇洗脱液用高效液相色谱技术分析，C18反相色谱柱分离，荧光检测器测定。
结果：赭曲霉毒素A的最低检出浓度为1．0ug／kg（gsw=3）；在0．5～100ng／mL范围内，峰面积与质量浓度呈线性关系（r=0．9995）；以不含赭曲霉毒素A的太子参、莲子、薏苡、麦冬和龙眼肉为加标基质，【总页数】5页(P298-302)【作者】傅武胜;邱文倩;郑奎城;吕华东;郭斌;严小波【作者单位】福建省疾病预防控制中心,福建福州350001;福建省疾病预防控制中心,福建福州350001;福建省疾病预防控制中心,福建福州350001;福建省疾病预防控制中心,福建福州350001;福建中医药大学,福建福州350001;福州大学化学化工学院,福建福州350001【正文语种】中文【中图分类】O656.31【相关文献】1.应用超高效液相色谱结合荧光检测法测定酿造原料和啤酒中的赭曲霉毒素A [J], 朱德伟;蔡国林;陆健2.高效液相色谱-荧光检测法检测大米中的赭曲霉毒素A [J], 梁桂娟;张琼;杨波3.免疫亲和柱净化高效液相色谱荧光法测定调味品中赭曲霉毒素A [J], 王雄;赵旭博;吴继宗;果旗;李峻峰;雷丰华4.溶剂萃取-高效液相色谱法测定油脂类食品中荧光增白剂1,4-二苯基-1,3-丁二烯的迁移量 [J], 程慧; 赵洁; 沈康俊; 张泓; 刘曙5.牛、羊奶中莫昔克丁残留高效液相色谱荧光检测方法的建立 [J], 沈昕;张玉洁;李丹;孙红洋;朱馨乐;黄耀凌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定甘草流浸膏中赭曲霉毒素A的含量
swallowing difficulties[J].Eur J Clin Nutr,2013,67Suppl2:S9-S12.DOI:10.1038/ejcn.2013.224.[9]Kuperminc MN,Stevenson RD.Growth and nutritiondisorders in children with cerebral palsy[J].Dev DisabilRes Rev,2008t,14(2):137-146.DOI:10.1002/ddrr.14. [10]Campanozzi A,Capano G,Miele E,et al.Impact ofmalnutrition on gastrointestinal disorders and grossmotor abilities in children with cerebral palsy[J].BrainDev,2007,29(1):25-29.DOI:10.1016/j.braindev.2006.05.008.[11]Andrew MJ,Parr JR,Sullivan PB.Feeding difficulties inchildren with cerebral palsy[J].Arch Dis Child Educ PractEd,2012,97(6):222-229.DOI:10.1136/archdischild-2011-300914.[12]Cheong JL,Hunt RW,Anderson PJ,et al.Head growth inpreterm infants:correlation with magnetic resonanceimaging and neurodevelopmental outcome[J].Pediatrics,2008,121(6):e1534-e1440.DOI:10.1542/peds.2007-2671.高效液相色谱法测定甘草流浸膏中赭曲霉毒素A的含量欧阳吉德邓湘波康乐刘冠琼郴州市食品药品检验检测中心，湖南423000通信作者：欧阳吉德，Email：【摘要】目的建立甘草流浸膏中赭曲霉毒素A的免疫亲和层析净化高效液相色谱法含量测定方法。
免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生高效液相色谱法检测粮油中黄曲霉毒素
１ 材料 与方 法
１１ 仪 器 与 试 剂 ．
Ｈ １０ Ｐ １０型 高 效 液相 色 谱 仪 ； １ Ｔ ８型 高速 搅 拌 均 质 器 ； ＭＴ 一 ８ ０ Ｎ ２ ０ Ｄ型 氮 吹仪 ； 化学 衍 生池 （ 光 中检 维康 公 司 ） 和
２ 结果 与讨 论
２１ 免 疫 亲 和 柱 的 应 用 ［ ．
１ ． 提 取 与 净 化 ４
准确 称取 ２． ５０ｇ粮 、 样 品 于 ２ ０ 油 ５ ｍＬ均 质 杯 中 ， 人 加
５ｇ氯 化钠 、２ １５ｍＬ甲醇一 （ 水 体积 比为 ７ ： ， 速均 质 ０３ 高 ０） ２ｍ ｎ 用槽 纹 滤纸 过 滤到 干净 的烧 杯 中 。取 ２ Ｌ滤液 ， ｉ， ０ｍ 加 入 ２ ０ｍＬ水 稀 释 混 匀 ． 玻 璃 纤 维 滤 纸 过 滤 。取 滤 液 用 ｌ ．以 １ ２滴／ ０ｍＬ ～ ｓ的速率将 其通 过 Ａ ａ ｅ Ｐ免疫 亲 和 ｉ ｒ Ｔｓ
亲 和 柱 吸 附 的 杂 质 洗 脱 ， 后 再 用 极 性 强 的 溶 剂 （ 常 用 最 通
甲醇 （ 谱 纯 ）Ａｂ （ ｌ ２Ｇｌ Ｇ ） 准 品 ；ｉ ｌ ｉ 色 ； Ｔｓ Ｂ 、 、 和 ２标 Ｂ Ｓｍｐｉ － ｃ
ｔ ８ ｙ １５型纯 水机 制备 的超 纯水 。
１ ． 色谱 条 件 ２
免 疫 亲 和 柱净 化 一 柱后 光 化 学 衍 生 高效 液 相 色 谱 法 具 有 简 便 、 速 、 化效 果 好 的特 点 ， 近年 的文 献 中多 有 报 快 净 在
道 ． 目前 尚 未形 成 国标 方法 ， 于取 得认 证 资 格 的第 三 但 对 方 检 测 实 验 室 而 言 ， 在 本 实 验 室 采用 该 方 法 必 须 进 行 要 验 证 实验 。
多功能净化柱-高效液相色谱法同时检测食用油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A
０ ． ８ ｍＬ ／ ｍ ｉ ｎ ． 柱 温为 ３ ５℃ ， 改 变 波 长 荧 光 检 测 并 对 方 法 学进 行 考 察 。 结 果 ： Ａ Ｆ Ｂ ． 在０ Ｉ ２ ５． ９ ９ ９ ９ ） ， Ａ Ｆ Ｇ ， 在０ ． ５ ～ ４ ０ ． ４ ｎ ｇ ／ ｍ Ｌ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ７ ） ， Ａ Ｆ Ｂ 在 ０ ． ０ ６ ～ １ ０ ． ０ ６ ｎ ｇ ／ ｍＬ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ９ ） ， Ａ Ｆ Ｇ ２ 在０ ． ０ ６ － １ ０ ． ０ ８ ｉ ｒ ｇ ／ ｍ Ｌ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ９ ） ， Ｏ Ｔ Ａ在 １ ． ０ ｌ ～ ５ ０ ． ５ ｎ ｇ ／ ｍ Ｌ （ ｒ ：１ ． ｏ ０ ） 范 围 内呈 良好 线 性 关 系 ， ５种 毒 素 的加 标 平 均 回 收 率 为 ９ １ ． ４ ０ ％～ １ ０ ９ ． ３ ６ ％ 样 品 检 测 结 果表 明 ， ２ ０批 食 用油 样 品 中有 ４批 样 品检 测 结 果 呈 阳 性 ， 均 受 到 黄 曲 霉 毒 素 Ｇ． 、 Ｇ ： 的 污 染 。 结论 ： 该 方法准确 、 快速 ， 能 够广 泛 用 于食 用油 中黄 曲霉 毒 素 Ｂ ． 、 Ｂ 、 Ｇ ， 、 Ｇ 和赭 曲 霉毒 素 Ａ 的 定 量检 测 。 关键词 ： 多功 能净 化 柱 ， 高 效 液 相 色谱 ， 黄 曲 霉毒 素 ， 赭 曲霉 毒 素 Ａ
ｏ ｆ ｅ ｄ ｉ ｂｌ ｅ ｏ ｉ ｌ ｗａ ｓ ｃ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｄ ｏ ｕ ｔ ｂ ｙ ｈｉ ｇ ｈ ｐｅ ｒ ｔ ｏ ｒ ｍａ ｎｃ ｅ ｌ ｉ ｑｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐｈ ｙ ． Ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｓ：Ａｆ ｔｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｗａ ｓ ｖ ｏ ｒ ｔ ｅ ｘ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｃ ｅ ｎ ｔ ｉｆ ｒ ｕｇ ｅ ｄ， ｔ ｈｅ ｔ ａ ｒ ｇ ｅ ｔ ｔ ｏ ｘ ｉ ｎ ｗａ ｓ ｐ ｕｒ ｉ ｉｅ ｆ ｄ ｂ ｙ ｍｕｈｉ ｆ ｕｎ ｅ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｐ ｕｒ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ， ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ Ｓ ＨＩ ＭＡＤＺＵ Ｉ ｎ ｅ ｒ ｔ ｓ ｉ ｌ ０ＤＳ—Ｃ Ｉ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ
高效液相色谱-荧光检测法检测大米中的赭曲霉毒素A
高效液相色谱-荧光检测法检测大米中的赭曲霉毒素A梁桂娟;张琼;杨波【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2015(034)008【摘要】利用高效液相色谱-荧光检测法测定大米中的赭曲霉毒素A含量,确定了检测条件为:AgilentC18(150 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,柱温25℃,流动相为乙腈-水(1％甲酸)=45:55,流速1.0 mL/min,进样量10 μL;激发波长333 nm,发射波长460 nm.结果表明,赭曲霉毒素A在0～200 ng/mL范围内线性关系良好(R2=0.999 16),平均加样回收率为77.7％～81.1％,平均相对标准偏差(RSD)为2.1％～3.1％,检出限为0.8 ng/kg.该方法快速准确,适用于大米中的赭曲霉毒素A 含量的测定.【总页数】3页(P136-138)【作者】梁桂娟;张琼;杨波【作者单位】贵州省产品质量监督检验院,贵州贵阳550004;贵州省产品质量监督检验院,贵州贵阳550004;贵州省产品质量监督检验院,贵州贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】O657.72【相关文献】1.应用超高效液相色谱结合荧光检测法测定酿造原料和啤酒中的赭曲霉毒素A [J], 朱德伟;蔡国林;陆健2.高效液相色谱-荧光检测法测定塑料儿童玩具中苯并ue15e唑类荧光增白剂 [J], 周雯鹂;陈茂龙;许宙;朱绍华;丁利3.反相高效液相色谱–荧光检测法测定面粉、淀粉中10种二苯乙烯类阴离子型荧光增白剂 [J], 刘燕;李俊超;乔青青;卫润鑫;薄尤优;王昇;陈莎莎4.高效液相色谱法检测小麦、大米中赭曲霉毒素A [J], 谢妮;徐强;吕相征;蔡原5.微波萃取-高效液相色谱荧光检测法测定食品包装用纸中11种荧光增白剂 [J], 周良春;马俊辉;张晓飞;文彬羽;李双琦;杨婷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
AM-AM-FS-Is-00104 食品-谷类及谷类产品中赭曲霉素A的测定-第一部分：用硅胶纯化的高效液相色谱法
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食品——谷类及谷类产品中赭曲霉素地测定
——第一部分：用硅胶纯化地高效液相色谱法
．适用范围：
本方法为欧洲标准，适用于含量大于μ赭曲霉素地测定.
．原理概要：
试样用盐酸进行酸化，及氯化镁增强离子强度后，再用甲苯对赭曲霉素()进行抽提.抽提液用小型硅胶色谱柱进行纯化，赭曲霉素用反相高效液相色谱()测定，及用荧光进行识别和校正.如果需要，试验结果可通过在甲醇溶液中用三氟化硼衍生物进行校验.
．主要仪器和试剂：
.仪器：
常规实验室仪器，主要有：实验室用磨粉机；旋转蒸发器；机械振荡器；分光计；离心管和冷却离心机；固相抽提柱；溶剂罐；膜过滤器；微型注射器；装置.
.主要试剂：
分析时，除非特别说明，否则应用分析纯级试剂.水要用蒸馏水或符合地一级.溶剂应是级.主要试剂有：无水硫酸钠、冰醋酸、盐酸溶液、氯化镁溶液、乙腈、甲苯、正己烷、二氯甲烷、丙酮、乙醇、溶剂混合物(甲苯冰醋酸混合液)、溶剂混合物（丙酮甲苯混合液）、溶剂混合物(甲苯冰醋酸混合液)、流动相、三氟化硼及其甲醇溶液、赭曲霉素及其标准溶液、赭曲霉素校正液、次氯酸钠溶液. ．过程简述：
．.样品制备：
试样磨粉直到能全部通过筛子，并混合均匀.称取约试样，精确至.放入锥形瓶中，加入盐酸和氯化镁，搅拌后，加甲苯，然后进行萃取，得到赭曲霉素溶液. ．.测试：
进行测定.测定前先做校准曲线及赭曲霉素识别.
．精确度：
重复性：同一分析者应用相同装置连续分析两次，绝对偏差超过重复限地不能超过；再现性：不同实验室、不同分析者，采用相同方法不同设备得到地结果，两次绝对偏差超过再现限不能超过.
．来源：
国际标准化组织，：()。
免疫亲和柱净化_柱后光化学衍生_高效液相色谱法检测粮油中黄曲霉毒素
粮油食品科技 第 20 卷 2012 年 第 2 期
a． 稻谷空白样品； b． 稻谷加标样品； c． 食用油空白样品； d． 食用油加标样品 图3 各样品色谱图
3
结论
经实验考察采用免疫亲和柱纯化、 在线光化学
衍生化、 反相高效液相色谱法荧光检测器检测黄曲 霉毒素， 黄曲霉毒素最低检出限 B1 可至 0． 5 μg / kg （ S / N = 3） ， 这一数值远低于国家卫生标准对粮油中 黄曲霉毒素 B1 的限量
［4 ］
图2
衍生后的 AFT 标准色谱图
2． 3
线性范围及检出限 B2 、 G1 和 G2 ） 混合标 取适量的黄曲霉毒素 （ B1 、
准储备液， 用甲醇配制成系列浓度的混合标准溶液 ， B2 、 G1 和 G2 ） 按选定的条件测定。黄曲霉毒素 （ B1 、 的质量浓度与其峰面积具有良好的线性关系 ， 结果 见表 1 。在空白样品中加入标准品， 根据 3 倍信噪 0． 2 、 比的峰响应值， 得出方法的检出限分别为 0． 5 、 0． 7 、 0． 2 μg / kg（ AFsB1 、 AFsB2 、 AFsG1 和 AFsG2 ） ， 检 测限是指在样品介质中目标物的最低可检测浓度 （ 或绝对量） ， 通常以被测物信号和背景噪音比 S / N （ N = 噪声， S = 被测物信号 / 单位重量 ） 为 2 ～ 3 时的 被测物的绝对量来表示。
表1 黄曲霉 毒素 G2 G1 B2 B1 线性范围 / （ ng / mL） 0． 16 ～ 3． 30 黄曲霉毒素的线性回归方程
由于黄曲霉毒素 B 1 在水溶液中会发生荧光淬 在进行高效液相色谱法测定前要衍生化处理 ， 灭， 目前黄曲霉毒素有两种衍生方法即柱前衍生法和 柱后衍生法 。 柱前衍生法主要有三氟乙酸法和稀 盐酸法 ， 柱后 衍 生 法 主 要 有 电 化 学 衍 生 溴 法 和 碘 法、 三氟乙 酸 法 及 光 化 学 衍 生 法 。 本 实 验 采 用 的 光化学衍生 法 ， 不需要特殊的化学试剂和增加额 也不需要电化学衍生池等 ， 此方法较其他 外的泵 ， 方法免去了试剂使用较多 、 衍生过程复杂 、 操作繁 琐的不利因素 ， 其原理是利用环状化合物在紫外光 照射下能产生荧光这一特性， 采用光化学衍生技术 对黄曲霉毒素进行衍生化处理， 从而实现对其进行 测定的目的。图 1 ～ 图 2 分别是 4 种黄曲霉毒素衍 生前后经光化学衍生器的标准色谱峰比较图 ， 由两 张图比较可看出未经光衍生黄曲霉 4 种毒素不能完 全出峰。
超高效液相色谱快速测定粮食中黄曲霉毒素含量
超 高效液相色谱快速测定粮食 中黄 曲霉毒素含量
赵 群， 徐 振 斌
１ ３ ０ ０ ６ １ ） （ 吉林 省 粮油卫 生 检验监 测 站 ， 吉林 长春
［ 摘要 ］ 建立了免疫亲和柱净化一 超高效液相 色 谱 法快速测定粮食 中 黄 曲霉毒素的检测方法。样品经粉碎 ， ７ ０ ％ 甲醇提取后 ， 用免疫亲和柱净化 、 氮吹浓缩， 采用 ｃ ８ 色谱柱（ ５ ０ ｍ ｍ ｘ ３ ｍ ｍ， １ ． ７ ｘ Ｉ ｍ） 分 离。以甲醇一 水（ 醇 ： Ｖ水 ＝ ４ ５ ： ５ ５ ） 为 流动 相 ， 流速 为 ０ ． ２ ｍ Ｌ ／ ｍｉ ｎ ， 进样量为 ２ Ｌ， 荧光检 测 器检 测 ， 激发 波长 为 ３ ６ ０ ｎ ｍ， 发 射 波 长为 ４ ４ ０ ａ ｍ， 无需衍生。黄曲霉毒素 Ｂ 、 Ｂ ： 、 Ｇ 、 Ｇ 的保 留时间小于 ５ ｍ ｉ ｎ ， 从样品前处理到结果分析整个过程小于 ４ ５ ｍ ｉ ｎ 。 根据 ３ 倍信噪比（ Ｓ ／ Ⅳ ） 的峰响应值 ， 确定黄曲霉毒素（ Ｂ 、 Ｂ ： 、 Ｇ 、 Ｇ ） 检 出限分别为 ０ ． ０ ９ ０ 、 ０ ． ０ ２ ０ 、 ０ ． ０ １ ９ 、
术有 限公 司 ； Ｐ Ｌ ４ ０ ３ １ Ｃ电子 分 析天平 ： 梅 特 勒上 海有 限公司 ； 氮吹仪 ： 美国 Ｏ ｒ ｇ ａ ｎ ｏ ｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｅ ｓ 公司 ； Ｍｉ ｌ ｌ ｉ — Ｑ超 纯 水 ： 美 国 Ｍｉ ｌ ｌ ｉ ｐ ｏ ｒ ｅ 公司 ； 黄 曲霉毒 素标 准 品（ 纯度 ≥９ ９ ％） ： 以色列 Ｆ ｅ ｒ ｍ ｅ ｎ ｔ ｅ ｋ 公 司； 甲醇 （ 色
人体健康 ， 是危害最严重的真菌毒素 ］ 。污染粮食
的黄 曲霉 毒素 主要有 Ｂ 。 、 Ｂ ： 、 Ｇ。 和Ｇ ： 。 我国 Ｇ Ｂ ２ ７ ６ １ —
食品中赭曲霉毒素的检测-HPLC法
食品中赭曲霉毒素HPLC检测法1.0液相色谱条件：色谱柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）流动相：乙腈/水/乙酸（99+99+2）流速：1mL/min检测器：荧光检测器，激发波长333nm,发射波长477nm进样体积：20-50uL2.0 样品的提取2.1 粮食及粮食制品：研磨样品，但不要研成粉末，使所称样品的95%通过20目筛，置25克研磨的样品于磨口量筒中，加入5克氯化钠和100mL提取液（甲醇：1%碳酸氢钠溶液=8:2），手动震荡3分钟，然后用定量滤纸过滤，收集滤液10ml，加40ml水稀释，混匀后，用玻璃纤维滤纸过滤，收集滤液A。
2.2酒类：取脱气酒类样品(含二氧化碳的样品使用前先置于4℃冰箱冷藏30min，超声脱气)或不含二氧化碳样品20g于磨口量筒中，用提取液（150g氯化钠，20g碳酸氢钠，水定容至1L）至100ml，混匀，用定量滤纸过滤，收集滤液B。
2.3酱油、醋、酱及酱制品：取25g样品，用提取液（甲醇：1%碳酸氢钠溶液=8:2）定容至50ml，混匀，用定量滤纸过滤，取10ml滤液，加40ml水稀释，混匀后，用玻璃纤维滤纸过滤，收集滤液C。
3.0 亲和柱操作3.1粮食及粮食制品：将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下，准确移取10mL滤液A，注入玻璃注射器，调节压力，使上述滤液以1滴/秒的流速通过免疫亲和柱，直至空气进入柱子。
用10ml 纯水以2滴/秒的流速冲洗柱子，直至空气进入柱子。
3.2酒类：将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下，准确移取20mL滤液B，注入玻璃注射器，调节压力，使上述滤液以1滴/秒的流速通过免疫亲和柱，直至空气进入柱子。
用5ml 纯水以2滴/秒的流速冲洗柱子，直至空气进入柱子。
3.3酱油、醋、酱及酱制品：将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下，准确移取10mL滤液C，注入玻璃注射器，调节压力，使上述滤液以1滴/秒的流速通过免疫亲和柱，直至空气进入柱子。
用10mlPBS缓冲液及10ml纯水以2滴/秒的流速冲洗柱子，直至空气进入柱子。
小麦中赭曲霉毒素A含量测定方法的改进研究
小麦中赭曲霉毒素A含量测定方法的改进研究作者：和霁恬邵志凌放茂良来源：《粮食科技与经济》2018年第01期[摘要]目的：优化GB 5009.96-2016中赭曲霉毒素A检测的前处理方法和色谱条件，以适应大批量样本的检测。
方法：样品经甲醇：水（V：V=80：20）漩涡提取、免疫亲和层析净化，超高效液相色谱法测定。
色谱条件为Thermo Scientific Hypersil GOLD C18反相柱（100mm×2.1mm，粒径1.9μm），流动相为1%乙酸水-乙腈（V：V=60：40），流速为0.25mL/min，进样量4μL，柱温：25℃，荧光检测激发波长333nm，发射波长460nm。
结果：赭曲霉毒素A在1.00～20.00ng/mL时具有良好的线性关系，相关系数R2=0.999 7，加标回收率为82.9%～90.1%，精密度RSD5.1%～6.1%。
本方法实验用时和流动相用量分别比国标法减少72.8%和87.5%。
结论：本方法适用于小麦中赭曲霉毒素A含量的测定且更灵敏、高效和环保。
在大批量样品分析中可有效节约时间、材料成本。
[关键词]小麦；赭曲霉毒素A；超高效液相色谱；免疫亲和柱；漩涡提取中图分类号：S512.1 文献标识码：A DOI：10.16465/431252ts.20180114赭曲霉毒素A（Ohratoxin A，OTA）主要由曲霉属、青霉属等真菌污染产生，在谷物中的污染率和污染水平最高，具有肝肾毒性。
我国食品安全国家标准中真菌毒素的限量值为5.0μg/kg。
目前用于赭曲霉毒素A定量分析的方法主要有高效液相色谱法、液相色谱质谱联用法、酶联免疫法、薄层色谱法、免疫胶体金法和免疫亲和柱法等，GB 5009.96-2016采用了免疫亲和层析净化-高效液相色谱法、离子交换固相萃取柱净化-高效液相色谱法、免疫亲和层析净化-液相色谱串联质谱法、酶联免疫吸附测定法和薄层色谱测定法共5种方法。
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霉毒素A的方法，增加了免疫亲和柱的使用次数，提 高了检测的自动化水平和检测效率，降低了检测成
本,以满足大规模样品准确定量的需求。
第34卷第6期 谢 刚等 全自动免疫亲和在线净化一高效液相色谱法快速测定粮食中赭曲霉毒素A 115
1材料与方法
1.1仪器与 Spark通用全自动高效液相色谱，配RIDA®
常用的OTA检测方法主要有胶体金试纸条 法［一7］、酶联免疫法或免疫传感器⑹、生物传感器 法［］、间接竞争免疫分辨荧光免疫分析 ［0］、液相色谱 法或液质联用法［1一15］等方法。薄层色谱法由于操 作复杂，目前应用较少。胶体金和酶联免疫方法用 于快速筛查。液质联用仪检测需要高端的质谱仪。 离线净化的普通高效液相色谱方法目前应用较多， 但存在净化过程操作繁琐、分析速度较慢等问题。
摘 要 建立了全自动免疫亲和在线净化-高效液相色谱法快速测定粮食中赭曲霉毒素A( Ochtatoxin A,OTA)的方法。玉米、小麦样晶经乙睛-水(60：40，卩:卩)提取,3% Tween - 20 (m/卩)水溶液10倍稀释后， 用自动进样器注入RIDA® CREST在线固相萃取系统，经赭曲霉毒素A免疫亲和小柱净化后，以乙睛-2%乙 酸水(50：50,卩:卩)为流动相，流速为1.0 mL/min,C18色谱柱(150 mm X 3.5 mm ,3.5 "m)分离，荧光检测器测 定。根据3倍信噪比的峰响应值，确定赭曲霉毒素A的检出限为0.24 Rg/kg,在0.012 5 ~0.5^g/L范围内呈 线性相关,值为0.999 8；在玉米、小麦样晶中加标回收率为80. 1% -106.9%，变异系数为2.4% ~8.2% 0 本方法一次装柱可检测60个样—,24 h可检测100个样—，满足谷物中赭曲霉毒素A快速准确定量检测的 需要。
2019年6月 第34卷第6期
中国粮油学报
Journal of the Chinese Cereals and Oils Association
Vol.34,No.6 Jun. 2019
全自动免疫亲和在线净化一高效液相色谱法 快速测定粮食中赭曲霉毒素A
谢刚V 李丽2黎睿2王松雪2王硕1
(天津科技大学食品工程与生物技术学院1,天津300457 / (国家粮食和物资储备局科学研究院2,北京100037 /
盐酸、乙酸m、乙酸(分析纯)。
1.2赭曲霉毒素A标准溶液的
定 的赭
动
成
毒素A溶液标准 的 工作液等 勺
0. 012 5 〜0.5ng/mL。
1.3
1.3.1
液：60%乙青水(F/F),量取400
mL超纯水和600 mL乙青，超声15 min。 1.3.2 样品稀释液:含3% Tween - 20 ( m/V、水溶
液，称取3 g Tween -20溶于100 mL超纯水。
1.3.3 流动相A：2%乙酸水，量取1 000 mL超纯
,
20 mL
酸, 超 15 min。
1.3.4 活化液(1A) ：20 mmol乙酸鞍，调节pH至
6.80 -7.00o
1.3.5 淋洗液(1D)：20 mmol 乙酸鞍 和 22.5 mM
对花生、无花果干、红辣椒粉等样品中4种黄曲霉 毒素检测方法进行验证［9一21］,发现在线自动化净
化样品显著提高了分析效率和重现性，降低了检测
成本。
本研究采用全自动在线净化技术，使用将抗体
耦合到耐压聚合物的免疫亲和柱(1 mm ID X
10 mm)，
RIDA® CREST ICE
置,建立了在线净化液相色谱检测玉米、小麦中赭曲
硼砂以及0. 9% Triton X - 100的水/甲醇溶液
(90/10.V/V/V)，调节 pH 至 8.3 -8.5。
1.3.6 洗脱液：含20 mM乙酸竅的水/乙青/乙酸
(33/60/7 ,V/V/V)。
1.4在 固相萃取Байду номын сангаас高效液相色谱法测定条件
液相色谱条件(表 1): Agilent ZORBAX Eclipse
曲霉毒素A的方法［6-17］。目前在日常液相检测中
也常使用免疫亲和柱离线净化装置净化，这些离线
自动净化方法提高了检测结果的可比性、节省了时
间和人力成本，但样品前处理步骤较为繁琐，免疫
亲和柱只能使用1次,离线净化检测耗材成本仍然 较高，检测效率仍然较低［8］。2012年，研究人员尝
试通过特殊处理的免疫亲和预柱(2. 1 mm ID X 50 mm)在线净化-柱后漠衍生-高效液相色谱法
关键词玉米小麦赭曲霉毒素A在线免疫亲和柱净化高效液相色谱 中图分类号:TS210.7 文献标识码:A 文章编号：1003 -0174(2019)06 -0114 -06 网络出版时间：2019 -05 -15 10：03：00 网络出版地址:http ://kns. cnki. net/kcms/detail/11.2864. TS. 20190515. 1002. 024. html
基金项目：国家重点研发计划(2016YFF0201100) 收稿日期:2018 -09 -04 作者简介:谢刚，男,974年出生，研究员，粮油质量安全 通信作者:王硕，男，1969年出生，教授，食品营养与安全
早在1991年，就有报道使用离线自动固相萃取高效 液相色谱法测定里谷物及其制品中黄曲霉毒素和赭
CREST
系统、荧光检测器;OtaTest在
Pulverisette14 速旋转粉碎机；SIG-
MA3 -30K离心机；VX -川振荡器。
赭 毒素A 溶液；甲醇、乙月青：色谱纯;
Milli - Q超纯水；四鹏酸钠(硼砂)、曲拉通X - 100
(Triton X -100)、吐温-20、碳酸氢钠、氢氧化钠、浓
赭曲霉毒素主要是由曲霉属和青霉属产生的一 类有毒的次生代谢物，其中赭曲霉毒素A (ochratoxin A,OTA)毒性最强,能产生如胚胎毒性、致畸性、致癌 性、免疫毒性、肝毒性等严重的毒性,被世界卫生组 织的国际癌症研究组织列为2B级疑致癌物质［］。 此外,OTA稳定存在于谷物、酒类、干果、坚果、咖啡 和豆类等农作物及其制品中［一3］。目前，GB 2761 — 2017中规定谷物及其制品中赭曲霉毒素A限量为 5.0 p,g/kg［4］。