脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的实验探究

同济医科大学博士学位论空脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的实验研究同济医科大学附属协和医院神经内科博士研究生：博士生导师：王耀明童萼塘教授中文摘要第一部分脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障通透性的免疫组织化学研究目的采用免疫组织化学的方法，研究脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障（ＢＢＢ）的通透性。

ｆ方法采用线栓法大鼠大脑中动脉闭塞的局灶性脑缺血模型，缺血１小时后再灌注，分别于再灌注后Ｏｈ、３ｈ、５ｈ、１２ｈ及２４ｈ，采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法，观察内源性免疫球蛋白００９Ｇ）在脑组织中的表达。

结果再灌注ｏｈ、３ｈ时，脑组织中未见ＩｇＧ的表达。

再灌注５ｈ时，缺血侧大脑半球纹状体有局灶性的ＩｇＧ表达。

再灌注１２ｈ时，缺血侧纹状体及新皮层可见有广泛的ＩｇＧ的表达，一些神经细胞和朦＿顺细胞的胞浆内亦有表达。

再灌注２４ｈ时，表达更加明显：】结论缺血ｌｈ再灌注３—５ｈ时，ＢＢＢ开始受损开放，通透性增加。

纹状体的ＢＢＢ较新皮层更易受损。

再灌注１２ｈ、２４ｈ，外渗的血清蛋白存在累积增加。

第二部分尼莫地平对脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障通透性的影响目的研究尼莫地平对脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障通透性的影响。

ｌ方法采用线栓法大鼠大脑中动脉闭塞的局灶性脑缺血模型。

缺血１ｈ后再灌注，分别于缺血前及再灌注后静脉注射尼莫地平。

采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法，观察再灌注１２ｈ时．内源性ＩｇＧ在脑组织中的表达，比较缺血前注射尼莫地平组、未注射尼莫地平组及再灌注后注射尼莫地平组三组大鼠脑组织中ＩｇＧ的表达水平。

结果末注射尼莫地平组大鼠，在再灌注１２ｈ时，缺血侧大脑半球纹状体及新皮层可见广泛的ｌｇＧ表达。

再灌注后注射尼莫地平组大鼠，ＩｇＧ的表达更加明显。

而缺血前注射尼莫地平组大鼠，ＩｇＧ的表达在新皮层仅见于微血管壁内。

在纹状体可见局灶性ＩｇＧ的表达。

ｊ结论脑缺血再灌注后注射尼莫地平可加重ＢＢＢ的损伤，使其通透性增加。

缺血前注射尼莫地平，可使再灌注后ＢＢＢ的损伤减轻。

第三部分脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障通透性的荧光定量分析目的通过敏感的荧光方法，定量分析脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障（ＢＢＢ）的通透性。

防法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（ＭＣＡＯ）模型，缺血‰后再灌注，采用依文思兰（ＥＢ）荧光的方法，分别观察了再灌注２ｈ、３ｈ、９ｈ、２４ｈ和４８ｈ时ＢＢＢ的通透性。

结果再灌注３ｈ时，缺血侧纹状体ＥＢ的含量开始增加（与假手术组相比Ｐ＜００５）。

再灌注９ｈ时，缺血侧新皮层ＥＢ的含量开始增加（Ｐ＜０．０１）。

而再灌２ｈ时纹状体ＥＢ的含量和再灌注２ｈ、３ｈ映，新皮层ＥＢ的含量与假手术组相比差别无显著性意义（Ｐ＞ｏ．０５）。

）结论脑缺血２ｈ再灌注２—３ｈＮ，纹状体的ＢＢＢ通透性开始增加。

再灌注９ｈ时，新皮层的ＢＢＢ通透性增加。

纹状体ＢＢＢ较新皮层更易受损。

ＥＢ荧光的方法可精确定量的反映ＢＢＢ通透性，是研究ＢＢＢ通透性理想的方法。

第四部分缺氧预处理对脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障通透性的影响目的探讨缺氧预处理对脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障（ＢＢＢ）通透性的影响。

防法大鼠经密闭缺氧的重复作用后，采用线栓法制备左侧大脑半球局灶性脑缺血模型，缺血２ｈ后再灌注９ｈ，采用依文思兰（ＥＢ）荧光定量的方法，观察ＢＢＢ的通透性，并与单纯脑缺血再灌注组和假手术组进行比较。

结果缺氧预处理组左侧纹状体ＥＢ的含量比单纯脑缺血再灌注组明显减少（Ｐ＜００１）。

缺氧预处理组左侧新皮层ＥＢ含量比单纯脑缺血再灌注组明显减少（Ｐ＜ｏ０５）：Ｉ结论缺氧预处理对脑缺血再灌注后ＢＢＢ的损伤有保护作用。

第五部分增强ＭＲＪ评价脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障的通透性目的通过增强ＭＲＩ来研究脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障的通透性。

Ｉ方法采用线栓法制备大鼠ＭＣＡＯ局灶性脑缺血再灌注模型。

特别在ＭＣＡＯ３ｈ、４ｈ、５ｈ、６ｈ后再灌注。

用１．５Ｔ超导型ＭＲ机进行大鼠脑冠状位扫描，随后经股静脉注入Ｇｄ．ＤＴＰＡ，迅速行同层间隙扫描（每隔ｌｏ分钟扫描一次），持续２ｈ。

以双侧对称的脑实质为兴趣区，测得兴趣区信号强度ｆＳｌｌ，求其增强率。

结果ＭＣＡＯ３ｈ组，再灌注８０分钟后缺血侧纹状体明显增强。

４ｈ组，再灌注５０分钟后有明显增强。

５ｈ组，再灌注２０分钟后有明显增强。

６ｈ组，再灌注后即刻可见明显增强。

每组缺血侧侧脑室在再灌注后立即可见明显强化。

１结论脑缺血时间越长，ＢＢＢ通透性增加所需的再灌注时间就越短。

缺血６ｈ再灌注后即刻出现ＢＢＢ破坏。

血脑脊液屏障较早受到破坏。

纹状体区ＢＢＢ比大脑皮层更易受损。

增强ＭＲＩ是一种敏感的在活体条件下检测ＢＢＢ损伤的理想方法。

关键词血脑屏障局灶性脑缺血免疫球蛋白Ｇ尼莫地平依文思兰缺氧预处理磁共振成像大鼠ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｙｏｆＢｌｏｏｄ－ＢｒａｉｎＢａｒｒｉｅｒＰｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｄｕｒｉｎｇＲｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｆｏｌｌｏｗｉｎｇＣｅｒｅｂｒａｌＩｓｃｈｅｍｉａＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＵｎｉｏｎＨｏｓｐｉｔａＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＷｕｈａｎＤｏｃｔｏｒａｌＣａｎｄｉｄａｔｅＤｏｃｔｏｒａｌＴｕｔｏｒ：ＷａｎｇＹａｏｍｉｎｇＰｒｏｆ．ＴｏｎｇＥｔａｎｇＡｂｓｔｒａｅｔＰａｒｔＩ．１ｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｅａｌｓｔｕｄｙｏｆｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｄｕｒｉｎｇｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｆｏｌｌｏｗｉｎｇｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎｉｎｒａｔｓ．０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｂｌｏｏｄ・ｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｄｕｒｉｎｇｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｆｏｌｌｏｗｉｎｇｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎ（ＭＣＡＯ）ｉｎｒａｔｓｕｓｉｎｇｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｒａｔｍｏｄｅｌｏｆｆｏｃａｌｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｗａｓｍａｄｅｂｙｉｎｓｅｒｔｉｏｎｏｆａｎｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌｎｙｌｏｎｓｕｔｕｒｅ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＧ（ＩｇＧ）ｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｔｉｍｅｐｏｉｎｔ（Ｏｈ，３ｈ．５ｈ，１２ｈ，２４ｈ）ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ１ｈｏｆＭＣＡＯｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｍｅｔｈｏｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＩｇＧｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｄｉｄｎ。

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