LAB精选新生儿溶血病检测操作规程D
溶血检查步骤
溶血检查步骤
溶血检查是一种检查红细胞膜完整性的常规检查之一，其主要步骤如下：
1. 采集血样：用无菌技术采集3-5ml的静脉血样，放入干净的试管中。
2. 标本处理：将采集得到的血样放置在室温下，待血液凝固后，用离心机离心10分钟，将血清和红细胞分离开。
3. 准备溶血试剂：将0.9%的氯化钠溶液加热至37℃，作为溶血试剂备用。
4. 加入溶血试剂：将离心后的红细胞沉淀中加入适量的溶血试剂，轻轻振动混合。
5. 孵育：将试管放置在37℃恒温水浴中孵育30分钟。
6. 观察结果：孵育后观察，如出现溶血现象，则说明红细胞膜有破损或缺陷，不能完全抵抗溶血试剂的作用。
需要注意的是，溶血试验是一种半定量检测方法，不同的检测条件和试验操作可能会对结果产生影响，因此，不同的实验室可能会有不同的标准和参考范围，需要根据具体情况进行解读。
新生儿溶血病实验室诊断及换血治疗
疑问
• 母亲D？ • 患儿母亲为弱D， • 误检为D阳性
• 治疗
D抗原分类
• D：常见的D抗原，普通抗-D血清、盐水法即可检出
• 弱D：D抗原数量减少或D抗原部分抗原表位缺失， 需用不同厂家的抗D血清，用盐水法和抗人球蛋白 法确认
• Ddel:需用吸收放散的方法确认
• 增强D
弱D检测
• 人类红细胞血型系统：30种不同的血型抗原 系统，240个以上的血型抗原
•
效价上升且>1:32
• 羊水胆红素测定：
•
妊娠28-30周抽羊水测定胆红素，在450nm处OD >0.15
• B超：胎儿及胎盘有无水肿
新生儿期诊断
• 临床表现：贫血、黄疸、水肿、肝脾肿大、
•
胆红素脑病等
• 外周血检测： • Hb、Ret、Hct、TBIL\DBIL、血型、Rh因子
• 脐血/新生儿血型抗体检测
谢谢 聆听
AB型(Rh+/-)血浆
ABO+Rh溶血 Rh血型同母亲的O型洗涤RBC
AB型(Rh+/-)血浆
* 情况紧急或血源困难时，也可采用ABO血型同患儿的Rh阳性血
HDN换血者用血质量要求
• 供血者两年内所有病原微生物检查阴性 • 要求用CMV（-）血
• 除粒细胞制剂外，所有成分血都应去除白细 胞
病例
Hb(g/L)
119
108
195
TB(mmol/L)
372
314
238
DB(mmol/L)
354
289
232
治疗
• 光疗、白蛋白、丙种球蛋白
• 换血： • O型RhD阴性洗涤红细胞 4U • +AB型RhD阴性冰冻血浆 250ml
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程PPT文档共52页
45、自己的饭量自己知道。——苏联
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己——德国43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验 标准检测流程
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法， 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现，法律就是这样 一种的 网，触 犯法律 的人， 小的可 以穿网 而过， 大的可 以破网 而出， 只有中 等的才 会坠入 网中。 ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏，庇 护着我 们大家 ；它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程
HDN产前免疫血液学试验检测标准
⒊ 第二次检测时可以使用第一次的 冻存标本做平行对照，有助于排除 实验技术和试剂红细胞的干扰。
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ 三、标本要求
❖ ⒈ 第一次检查：采集夫妇双方EDTA抗 凝血各3-5毫升。
❖ ⒉ 复查检查：采集夫妇双方EDTA抗凝 血3-5毫升。
❖ ⒊ 如果无配偶的血液标本，则无法检 测孕妇是否有针对其配偶特有的、低 频率抗原所产生的免疫性抗体。
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ （5）试验方法； ❖ （6）试验结果； ❖ （7）实验者、复核者签名； ❖ （8）如需复查，复查时间需注明； ❖ （9）参考值范围。 ❖ 七、试验报告参考格式（查看Word文
件）
HDN产后免疫血液学试验检测标准
新生儿溶血病产后血清学检测的目的
❖ 一、确定新生儿血型是否与母亲不 合；
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
❖ 四、交叉配血 ❖ ⒈ 推荐使用抗人球蛋白法做交叉配血，
试管法和微柱凝胶法均可。 ❖ ⒉ 按新生儿溶血病换血治疗血液的选
择原则，选择适合的血液成分。 ❖ ⒊ 母子ABO血型相同或选用O型洗涤红
细胞时，用母亲血浆做主侧交叉配血。
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
新生儿溶血三项试验结果分析及提示临床意义
DAT 游离试验 放散试验
结果分析
提示临床意义
++ +– –+ ++ –+ –– +– ––
+
有游离抗体，红细胞致敏 具备发生ABO系统HDN的条件
+
红细胞致敏
具备发生ABO系统HDN的条件
+
新生儿溶血病设计
新生儿溶血病(HDN)实验室检查一、父母及新生儿血型鉴定目的：研究父母、新生儿血型与新生儿溶血病的关系原理：用已知的IgM类特异抗体与受检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集来测定受检者细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定受检者的血型。
器材：小试管、记号笔、试管架、离心机、玻片、显微镜试剂：标准抗A、抗B血清、单克隆IgM型RhD抗血清（商品试剂）生理盐水标本：抗凝静脉血或末梢血实验步骤：制备受检者5%红细胞生理盐水悬液：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取管底下层的红细胞大约10滴于小试管中，加入生理盐水2ml，充分混匀红细胞与生理盐水。
2500r/min离心3min后弃上清液，重复洗涤3次。
自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水混匀，此即为5%的红细胞生理盐水悬液。
1、玻片法（1）取洁净的玻片1块，用记号笔画出小格，标明A、B、D（2）在玻片已标记的区域内滴加抗A、抗B血清、RhD抗血清各1滴（3）在滴加抗血清的小格中分别加入受检者5%红细胞生理盐水各1滴；不断轻轻转动玻片，使抗血清与红细胞充分混匀，持续约1~5min（4）观察并判断结果肉眼观察有无凝集或溶血反应，再用低倍镜观察，判断阴性、阳性和阳性强度。
2、试管法（1）取小试管3支，分别标记A、B、D（2）分别滴加抗A、抗B血清、RhD抗血清于相应标记的试管中（3）分别滴加受检者5%红细胞生理盐水悬液1滴于试管中，混匀（4）以1000r/min离心1min（5）观察并判断结果取出试管，先观察上层清液有无溶血现象，再将试管轻轻摇动使沉于管底的红细胞浮起，肉眼观察有无凝集及凝集强度。
注意事项：1、器材：所用器材必须干燥洁净、防止溶血；为避免交叉污染，试管、尖滴管均一次性使用。
2、试剂：分型血清质量性能应符合合格实际要求。
3、标本：受检红细胞标本新鲜，无细菌污染。
4、标准抗血清从冰箱取出待其平衡致室温后在使用，用毕后应尽快放回冰箱保存，减少细菌污染。
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的பைடு நூலகம்良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准 检测流程宋小川
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46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
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47、采菊东篱下，悠然见南山。
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48、啸傲东轩下，聊复得此生。
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49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
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50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
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新生儿溶血病检测的设计性实验
新生儿溶血病检测的设计性实验一．发病机制：1.胎儿期妊娠后期胎盘出血，胎儿红细胞进入母体循环系统。
2.胎儿红细胞被母体免疫系统识别。
3.刺激母体产生抗体。
4.抗体通过胎盘引起新生儿溶血病Rh新生儿溶血病：1. 2. 3.二实验原理由于母婴Rh血型不合，母体产生相应的IgG类Rh抗体，经过胎盘进入胎儿体内，与胎儿红细胞发生特异性的抗原抗体反应，从而破坏胎儿红细胞并引起一系列的临床症状。
运用直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验可检测出婴儿体内是否有来自母体的与婴儿相对应的IgG类Rh抗体。
三标本、试剂与器材1 标本（1）待检标本取婴儿抗凝血3~5ml，分离出血清和红细胞。
用生理盐水洗涤红细胞，混匀，以1000×g离心1min，去除上清液，再加入生理盐水，充分混匀，离心洗涤，如此反复洗涤4次。
第四次洗涤后尽量去除上清液，取试管底部的婴儿压积红细胞2滴用生理盐水配成2%~5%婴儿红细胞悬液，余下的婴儿压积红细胞备用；（2）阳性对照 IgG抗D抗体致敏的2%~5%RhD阳性红细胞悬液; （3）阴性对照正常人2%~5%红细胞悬液;2 试剂多特异性抗球蛋白试剂、但特异性抗IgD试剂、单特异性抗C3d试剂、0.5%菠萝酶或1%木瓜酶、谱红细胞、5%（A、B）指示红细胞、生理盐水、化学纯乙醚、0.2mol/L巯基乙醇货0.01mol/L二硫苏糖醇；3 器材试管、滴管、37水浴箱、56水浴振荡箱、台式离心机、显微镜等。
（一）婴儿红细胞直接抗球蛋白试验1)实验目的检测新生儿红细胞上是否存在不完全抗体。
2)实验原理不完全抗体多与其相应的红细胞结合，在盐水介质中不出现凝集反应。
Coomb试验利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，通过连接致敏红细胞表面的特异性Rh抗体，使致敏红细胞出现特异性凝集。
3)操作步骤1 取三只试管，表明待测标本管、阳性对照管、阴性对照管；2 待测标本管加入1滴2%~5%婴儿红细胞悬液，阳性对照管加入IgG抗D抗体致敏的2%~5%RhD阳性红细胞悬液，阴性对照管加入1滴正常人2%~5%红细胞悬液；3 各管加入抗球蛋白试剂2滴，混匀，1000r/min离心1min；4 判断结果斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，肉眼观察红细胞凝集情况。
新生儿溶血病检测
06
政策法规与伦理道德问题 探讨
相关政策法规解读
国家卫生健康委员会发布的《新生儿 疾病筛查管理办法》中明确规定了新 生儿溶血病的筛查、诊断和治疗等方 面的要求。
各地根据实际情况制定的实施细则和 操作规程，为新生儿溶血病的筛查和 诊疗提供了具体的指导和规范。
相关法律法规，如《母婴保健法》和 《献血法》等，也涉及到了新生儿溶 血病的防治和输血管理等方面的内容 。
抗体筛查
检测母亲体内是否存在与胎儿血 型抗原不配的血型抗体，以评估 溶血风险。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
直接抗人球蛋白试验
试验原理
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞是 否被抗体包被的一种方法。当红细胞 被抗体包被时，会发生凝集反应。
结果解读
若试验结果为阳性，说明新生儿红细 胞已被来自母亲的抗体包被，存在溶 血风险。
游离抗体试验与放散试验
伦理道德问题思考
新生儿溶血病筛查涉及到新生儿的隐私权和家长的知 情权等伦理道德问题，需要在保障新生儿健康的前提
下，充分尊重家长的意愿和选择。
在进行新生儿溶血病筛查时，需要遵循医学伦理原则 ，确保筛查的准确性和可靠性，避免对新生儿造成不
必要的伤害和痛苦。
对于筛查结果异常的新生儿，需要及时告知家长并进 行进一步的诊断和治疗，同时需要关注新生儿的心理
。
药物治疗方案选择依据
药物治疗方案应根据新生儿溶血病的严重程度、胆红素 水平及进展情况来选择。
中重度溶血病需给予白蛋白或免疫球蛋白等药物治疗， 以减轻溶血反应和降低胆红素水平。
轻度溶血病可给予苯巴比妥等肝酶诱导剂，以增加胆红 素代谢和排泄。
药物治疗过程中需密切监测新生儿生命体征和药物不良 反应，及时调整治疗方案。
新生儿溶血病血型血清学检查标准操程序
SOP_10-4 新生儿溶血病血型血清学检查标准操程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员。
四、操作步骤：新生儿溶血病包括:①母婴血型不合新生儿溶血病;②红细胞葡萄糖6磷酸脱氢酶缺陷;③球型红细胞增多症。
因为母婴血型不合所致新生儿溶血病为首先发现,所以新生儿溶血病特指为母婴血型不合所致的新生儿溶血,另外两种疾病是以疾病原因命名。
造成新生儿溶血病的抗体有：ABO系统（IgG抗A、IgG抗B、IgG抗AB）；Rh系统（抗D、抗E、抗Ce、抗cE、抗c）；Kidd系统（抗Jka、抗Jkb）；MNSs系统（抗-M、抗N、抗S、抗-s）；Kell系统（抗K、抗-k）；Daff系统（抗Fya、抗Fyb）；Diego系统（抗-Dia、抗-Dib）。
ABO系统新生儿溶血病多见于ABO血型不合的母子。
O型母亲多见(90%以上),多由IgG-AB所致。
A型、B型母亲少见(不足10%),多由IgG抗A或抗B所致。
Rh系统则多见于母子ABO血型相合者(母有输血史除外),以抗D为多见,为抗E,抗cE等。
其它系统为母子其它血型系统不相合。
1.原理：母体内存在与胎儿红细胞不相合的抗体。
抗体的产生是胎儿的红细胞抗原(由父亲而来的恰好是母体红细胞上所缺少)进入母体,刺激母体产生了免疫性抗体。
胎儿红细胞被来自母亲的IgG抗体所包被，并在婴儿的网状内皮系统内受到免疫必破坏。
另外，母亲有输血史,产生的免疫性抗体恰巧与胎儿红细胞抗原是相应的，也会发生新生儿溶血病。
2.检查方法2.1 ABO新生儿溶血病的检查* 母血清中天然抗体A （B ）用型物质或2-ME 中和后进行试验。
夫妇或母子间ABO 血型关系：妇 夫血型 子血型血型 血清抗体 配合 不配合 配合 不配合O 抗A 、B O A 、B 、AB O A 、BA 抗B A 、O B 、AB A 、O B 、ABB 抗A B 、O A 、AB B 、O A 、ABAB A 、B 、O 、AB A 、B 、AB（1）ABO 定型：新生儿血清中的同种抗体来源于母亲,所以新生儿的ABO 检查完全依靠细胞定型(正定型),如果ABO 定型为O 型,则可排除ABO-HDN 的可能。
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新生儿溶血病检测操作规程
1原理
新生儿溶血病一般特指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病（HDN ），可由多种原因引起。
临床常见的是ABO 、Rh 等血型系统。
胎儿和新生儿红细胞被来自母亲的IgG 抗体所包被，并在婴儿的网状内皮系统内受到免疫性破坏。
2试剂和材料
2.1母亲血样3-5ml，患儿抗凝血3-5ml
2.2抗人球蛋白试剂（包括广谱、IgG、C3）、2-Me应用液、抗-A、抗-B、抗-D、抗-C、抗-
c、抗-E血清试剂
2.35%A1、B、O型标准红细胞悬液
3方法
主要以三项试验为主①患儿直接抗人球蛋白试验②患儿游离抗体试验③吸收放散试验
3.1ABO 新生儿溶血病检测
ABO新生儿溶血病主要是由于胎儿红细胞A或B抗原与来自母体的抗A或抗B抗体反应的结果。
以母亲为O 型，胎儿为A 型或B 型的发病率为最高。
3.1.1 母、子（父）红细胞ABO 血型鉴定（参照ABO 血型鉴定）
3.1.2子红细胞试验
3.1.2.1子红细胞直接抗人球蛋白试验
RBC生理盐水洗3遍，配成5%RBC悬液，取小试管加1滴2-5%子RBC，加多特异性抗球蛋白1 滴，混匀离心看结果。
3.1.2.2子红细胞抗体放散试验：取经盐水洗涤的患儿压积RBC0.5-1ml,加等量盐水于试管中，56C水浴，不断振摇10分钟，然后置于56C温水离心管内，立即以1300g离心5分钟，
吸取上清液备用。
取3只试管，标记Ac、Be、Oc,将放散液分为3份分别加入3个小试管中，分别加2-5%A、B、O细胞1滴，37C水浴1小时（加PEG缩短至5分钟），取出后用生理盐水洗涤3遍，倒尽盐水，各加抗多特异性抗球蛋白1-2滴，混匀离心看结果。
3.1.2.3子血清中游中游离抗体检查
取3支小试管标明Ac、Be、Oc，每管加患儿血清2-4滴，分别加入2-5%A、B、O指示红细胞盐水悬液1 滴，混匀后离心，看结果。
如有凝集，说明有相应盐水抗体，不凝集将试管放入37C 水浴1小时（加PEG5分钟）后，用生理盐水洗3遍，吸尽盐水后，每管加多特异性抗球蛋白1
滴，离心看结果。
3.124母血清作产前检测
血清中IgG抗A抗B效价测定及血清抗体筛选。
详见产前检测。
3.2Rh新生儿溶血病检测
Rh血型系统的HDN是由于母婴Rh血型不合造成的，母亲的Rh免疫抗体作用于胎儿及婴儿，引起贫血和高胆红素血症，以D抗原不合为最多见，一般母亲曾有输血或妊娠史。
3.2.1母、子、父作ABO、Rh血型鉴定（参照ABO血型鉴定及Rh血型鉴定）。
母亲一般为Rh 阴性，患儿为Rh阳性。
3.2.2子红细胞试验
3.2.2.1子红细胞直接抗人球蛋白试验（同）。
3.222子红细胞抗体释放试验：直抗阳性者做此试验。
用三氯甲烷/三氯乙烯放散法，洗涤压积红细胞后，加等量盐水或AB型血清，再加2体积三氯甲烷/三氯乙烯等量混合液，用玻璃纸压住管口，颠倒混合1分钟，以3000~5000转/分离心3~5分钟，吸取上层樱红色液体放入另一试管，并将此含放散液试管置37E水浴5~10分钟，除尽三氯甲烷/三氯乙烯，用标准细胞鉴定抗体，方法同热放散抗体法。
3.2.2.3子血清游离抗体检测（同）。
3.2.2.4母血清ABO以外抗体检测：用配组细胞及丈夫或子细胞与母血清在盐水中看是否有凝集，再做酶法或抗人球法，阳性者作抗体鉴定及测抗体效价。
4结果判定
4.1ABOHDN结果判定
根据患儿三项试验结果按下表作结果判断：
母亲为0型，子为A型或B型，子红细胞直抗阳性或（和）游离抗体阳性，母亲IgG抗体抗A或抗B效价高者可疑为ABO新生儿溶血病。
4.2RhHD结果判定
母亲为Rh阴性、子为Rh阳性，子红细胞直抗阳性及抗体释放试验阳性即可判定为Rh 血型HDN游离抗体试验有时可表现为阴性。
3项试验均阴性则可否定为Rh血型HDN其他血型HDN可根据检测结果直接报。
5支持性文件
《全国临床检验技术操作规程》
6相关表单
WXXZ/QR/1202-035-D0《血型研究室试验记录》WXXZ/QR/LAB1401-001-D0《检验报告单》。