高效液相色谱法流动相的注意事项
高效液相色谱法流动相配制标准操作规程
1 目标 明确高效液相色谱法流动相配制过程，确保操作过程规范性。
2 适用范围 适适用于试验室高效液相色谱法流动相配制。
3 职责 试验室分析人员负责按本规程进行操作。
4 定义 无。
5 内容 5.1 流动相批号编写标准
流动相批号按配制日期编制。如批号 0609 代表 06 月 09 日配制流动相。 5.2 流动相配制 5.2.1 含水流动相和不含水流动相配制所用量筒应区分开。配制不含水有机溶剂类流动相所用量 筒必需是干燥，不得有水。 5.2.2 依据流动相配制要求体积百分比，在清洁带塞量筒中分别倒入对应溶剂；若该流动相需加 入适量酸或碱，则戴上一次性手套，用专用注射器吸收要求体积酸或碱，加入量筒；盖上塞子， 摇匀，振摇过程中应注意排气。 5.2.3 含盐缓冲液类流动相配制应依据流动相配制要求体积百分比，分别称取要求重量盐于清洁 带塞量筒中，加入适量纯水，振摇；待固体完全溶解后，再加纯水至要求刻度，盖上塞子，摇匀。 5.2.4 若该流动相对 pH 值有特殊要求，依据流动相配制要求体积百分比，用酸/碱调整 pH 值，用 pH 计测定，直至流动相 pH 值在要求范围内。 5.3 流动相抽滤 5.3.1 含水流动相和不含水流动相抽滤装置应区分开。抽滤不含水有机溶剂类流动相所用装置必 需是干燥，不得有水。 5.3.2 抽滤装置准备：将过滤器套在三角瓶上，用镊子夹取 0.45um 水系或有机滤膜一张，放在过 滤器上（滤膜应将滤孔完全覆盖住）；再将量杯压在滤膜上，量杯边缘和过滤器边缘对齐；用夹 子将过滤器和量杯边缘固定在一起（注意调整夹子位置，不得将抽滤嘴挡住）；将抽滤软管口润 湿后，套在抽滤嘴上。 5.3.2 抽滤：将少许配制好流动相倒入量杯，观察是否有漏液。若有漏液现象，须重新固定过滤 器和量杯。若无漏液现象，则继续往量杯中倒入流动相（注意：不要超出最大刻度），开启真
简述高效液相色谱法中流动相的要求
简述高效液相色谱法中流动相的要求
高效液相色谱法是一种分离和分析化学样品的优秀技术。
在高效液相
色谱法中，流动相的选择是非常重要的，因为它不仅影响色谱分离的效率，也决定了检测灵敏度和分离度。
在高效液相色谱法中，流动相的要求主要包括以下几个方面：
1.溶解度：流动相应当是对分离物有较好的溶解度。
如果流动相的溶
解度不够好，则可能会导致某些物质无法被很好地分离出来。
此外，流动
相的溶解度过高则可能导致某些物质在固定相上直接沉淀或附着。
2.稳定性：流动相应当在一定时间内保持稳定，以便对样本进行分离
和分析。
如果流动相的稳定性不够好，则可能会出现峰形变、噪声等问题。
3.精度：流动相应当具备一定的精度，以便保证样品分离和检测结果
的准确性和可重复性。
如果流动相的精度不够好，则可能导致结果不一致
或无法进行复现性研究。
4.兼容性：流动相应当与固定相兼容，以便保证正确的分离。
如果流
动相与固定相不兼容，则可能导致某些固定相材料受损，影响分离质量。
5.选择性：流动相应当具备一定的选择性，以便对不同化学物质进行
分离。
选择不同的流动相可以实现对物质的不同选择性和分离效果。
液相色谱流动相的选择依据及使用注意事项
液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，它使用液体作为流动相，在不同组分之间进行分配和分离。
在液相色谱分析中，流动相是至关重要的，它直接影响分离效果、分析速度和结果准确度。
合理选择液相色谱流动相并注意使用时的一些问题是非常重要的。
一、液相色谱流动相的选择依据1. 样品的性质液相色谱中流动相的选择应考虑样品的性质，包括溶解性、稳定性、挥发性等。
对于极性样品，常使用极性溶剂作为流动相；对于不容易溶解的非极性样品，可以选择非极性溶剂作为流动相。
2. 柱子的选择不同的柱子需要选择不同的流动相，以保证分离效果。
对于反相色谱柱，一般使用的是乙腈或甲醇和水的混合物作为流动相；对于正相色谱柱，则需要选用不同的极性溶剂作为流动相。
3. 分离效果流动相的选择应考虑到所需的分离效果。
对于需要高分离效果的分析，流动相的组成和流速需要进行精细调控；对于一些不需要高分离效果的分析，可以适当简化流动相的组成，提高分析效率。
4. 色谱柱的保护对于某些对色谱柱有损害的物质，可以考虑在流动相中添加一些保护剂，以延长柱子的使用寿命。
二、使用注意事项1. 流动相的配制在使用液相色谱分析时，需要注意流动相的配制。
流动相的配制应准确、稳定，避免在实验中因流动相的质量问题导致结果失真。
2. 流速的控制流速的控制对于分析结果的准确性和重现性有着重要影响。
在选择流速时，需要根据分离效果的要求以及柱子的性能来进行合理的设定。
3. 流动相的贮存流动相在储存和使用过程中需要注意避免受到污染和氧化。
定期更换和清洗流动相的储存容器，保持流动相的纯净度和稳定性。
4. 流动相的回收在实验结束后，应注意对流动相进行回收和处理，避免对环境造成污染。
总结回顾：液相色谱分析中流动相的选择和使用是至关重要的。
合理选择流动相，可以提高分析的准确性和重现性；注意使用时的一些问题，可以延长柱子的使用寿命并保护环境。
需要根据样品的性质、柱子的选择以及分离效果来综合考虑流动相的配制和使用。
高效液相色谱流动相
高效液相色谱流动相高效液相色谱的流动相(Mobile Phase)液相色谱流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
与气相色谱相比较，液相色谱流动相不仅可选择范围比较大，而且它是影响分离的一个非常重要的可调节因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。
一、流动相溶剂的选择高效液相色谱中所选用的流动相溶剂必须能保证该色谱系统的分离过程可重复进行:溶剂的纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求;溶剂应当不干扰检测器的工作;在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
对液相色谱溶剂的要求: 1)溶剂要有一定的化学稳定性, 不与固定相和样品组分起反应。
2)溶剂应与检测器匹配，不影响检测器正常工作。
3)溶剂对样品要有足够的溶解能力，以提高检测灵敏度。
4) 溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5) 溶剂的沸点低，有利于制备色谱的样品回收。
液相色谱流动相溶剂的选择步骤选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等选择合适洗脱强度的溶剂:简单样品，2 ? k'? 5;复杂样品，0.5 ? k'? 20 改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值二、表征溶剂特性的重要参数 1)溶剂沸点、分子量、相对密度、介电常数、偶极距、折射指数、紫外吸收截止波长、与液相色谱分离密切相关的最重要的溶剂特性参数是溶剂强度参数?? ，溶解度参数?? ，极性参数P'和粘度η。
2) 溶剂洗脱强度溶剂洗脱强度指流动相中溶剂的洗脱能力。
在吸附色谱中, "溶剂洗脱强度"与溶剂极性成正比;而在反相色谱中，溶剂极性越大, 洗脱能力越小。
在液相色谱常用混合溶剂作流动相。
混合溶剂的P'具有加和性: P'ab= ??aP'a，?? bP'b , ??为某一溶剂的体积分数。
液相流动相的使用注意事项汇总
液相流动相的使用注意事项汇总流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制，选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别，会影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
01选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1～2mL甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
hplc的注意事项
HPLC，即高效液相色谱法，是一种在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着广泛应用的技术。
在使用HPLC进行实验时，需要注意以下事项：流动相的纯度：流动相必须是高纯度的，以保证色谱柱和检测器的性能。
如果流动相中含有杂质，可能会堵塞色谱柱，影响分离效果。
流动相的脱气：流动相在使用前需要进行脱气处理，以避免在实验过程中产生气泡，干扰实验结果。
样品处理：对于复杂的样品，需要进行适当的预处理，如提取、浓缩、纯化等，以去除干扰物质，提高分离效果。
色谱柱的清洗和维护：色谱柱是HPLC的核心部件，需要定期清洗和维护，以保证其性能和使用寿命。
检测器的选择：根据实验需求选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等。
实验条件的选择：根据实验需求选择合适的实验条件，如流速、流动相组成、柱温等。
数据的记录和处理：实验过程中需要记录详细的实验数据，并采用适当的软件进行数据处理和分析。
总之，使用HPLC进行实验需要注意细节，严格遵守实验操作规程，以保证实验结果的准确性和可靠性。
高效液相色谱仪操作注意事项
高效液相色谱仪操作注意事项流动相：1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。
样品：1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。
5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；使用过程中注意轻拿轻放。
操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server （一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开O n line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
高效液相注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项1、使用流速一般为1.0ml/min，最高不超过2.0ml/min，压力一般不超过25MPa，最高不超过30MPa。
2、使用温度一般不高于50℃，最高不高于60℃（特殊要求的除外）。
3、试剂瓶上应注明试剂名称，配制人员以及配制日期，同时写好仪器使用记录。
4、开机后，先用色谱乙腈或甲醇（使用前要超声，脱气）冲洗约30分钟，流动相中若含磷酸盐缓冲液，用5%乙腈或8％甲醇溶液（配制后超声，脱气）冲洗约30分钟再换流动相；若不含磷酸盐缓冲液，可直接换流动相；若不含有机溶剂,用注射用水冲洗约30分钟再换流动相。
更换时注意停泵！5、分析完毕，用5%乙腈或8％甲醇溶液冲洗约30分钟再换乙腈或甲醇冲洗约30分钟。
6、流动相使用前用有机滤膜过滤，超声波脱气约2分钟，使用时间一般不超过3天，且每次使用前都要重新抽滤。
7、注射用水、5%乙腈或8％甲醇溶液使用前用0.45微米有机滤膜过滤（若过滤速度太慢可用少量乙腈冲洗滤膜），超声波脱气约2分钟，当天配制，当天使用。
8、冲洗用乙腈和甲醇用0.45微米有机滤膜过滤，以后每3天用0.45微米有机滤膜过滤1次。
9、使用微孔滤膜时应注意水系和有机系，水系滤膜不能用于抽滤含有有机溶剂的溶液。
10、所用水均为注射用水或纯化水（限当天使用），乙腈、甲醇均为色谱纯。
11、使用过程中，注意压力变化，若压力过低或者过高，及时查明原因。
注：以上注意事项以C18柱为例，若为其它特殊色谱柱，要根据要求相应调整。
特殊柱子的使用：1、阳离子柱：不能接触有机溶剂，一般保存在水中，使用时注意管路中的有机溶剂。
2、硅胶柱：反相：使用时同C18柱；正相：注意溶剂的混溶，正己烷、正庚烷与甲醇、水、乙腈不互溶，可用异丙醇过渡。
高效液相色谱仪维护1、保持仪器室和仪器的干净整洁，同时打开排风扇保持室内良好的通风。
2、每次开机仪器均应通过自检，否则根据说明书的要求进行处理，在任何时候出现异常情况或若遇操作人员处理不了的情况时，需及时报请相关领导批准后进行处理或请专业维修人员进行处理。
高效液相注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项1、使用流速一般为1.0ml/min，最高不超过3.0ml/min（制备），压力一般不超过25MPa，最高不超过30MPa。
2、使用温度一般不高于50℃，最高不高于60℃（特殊要求的除外）。
3、试剂瓶上应注明试剂名称，配制人员以及配制日期，同时写好仪器使用记录。
4、开机后，先用色谱乙腈或甲醇（使用前要超声，脱气）冲洗约30分钟，流动相中若含磷酸盐缓冲液，用5%乙腈或8％甲醇溶液（配制后超声，脱气）冲洗约30分钟再换流动相；若不含磷酸盐缓冲液，可直接换流动相；若不含有机溶剂,用注射用水冲洗约30分钟再换流动相。
更换时注意停泵！5、分析完毕，用5%乙腈或8％甲醇溶液冲洗约30分钟再换乙腈或甲醇冲洗约30分钟。
6、流动相使用前用有机滤膜过滤，超声波脱气约2分钟，使用时间一般不超过2天，且每次使用前都要重新抽滤。
7、注射用水、5%乙腈或8％甲醇溶液使用前用0.45微米有机滤膜过滤（若过滤速度太慢可用少量乙腈冲洗滤膜），超声波脱气约2分钟，当天配制，当天使用。
8、冲洗用乙腈和甲醇用0.45微米有机滤膜过滤，以后每3天用0.45微米有机滤膜过滤1次。
9、使用微孔滤膜时应注意水系和有机系，水系滤膜不能用于抽滤含有有机溶剂的溶液，过滤装置目前实验室只有一套，请大家一定倍加珍惜，过滤时，实验人员必须守在旁边。
10、所用水均为超纯水或市售哇哈哈用水（限当天使用），乙腈、甲醇均为色谱纯。
11、样品进样前，必须用色谱级溶剂溶解，再经有机滤头过滤，方可进样。
12、使用过程中，注意压力变化，若压力过低或者过高，及时查明原因。
注：以上注意事项以C18柱为例，若为其它特殊色谱柱，要根据要求相应调整。
13、戴安液相分析和制备时需更换定量环及检测池，请根据需要更换，若有疑问，请咨询负责人。
特殊柱子的使用：1、阳离子柱：不能接触有机溶剂，一般保存在水中，使用时注意管路中的有机溶剂。
2、硅胶柱：反相：使用时同C18柱；正相：注意溶剂的混溶，正己烷、正庚烷与甲醇、水、乙腈不互溶，可用异丙醇过渡。
使用高效液相色谱仪的注意事项
使用高效液相色谱仪的注意事项
使用高效液相色谱仪的注意事项包括：
1.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
2.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
3.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子
一小时，然后用甲醇（或甲醇水溶液）冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。
4.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
5.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
6.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→
单向阀检查并清洗，清洗方法：①以异丙醇作溶剂冲洗；②放在异丙醇中间用超声波清洗；③用10％稀硝酸清洗。
7.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免
产生气泡。
8.试管的洁净问题：高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法，
如果因使用不洁净的试管，便会影响试验结果的准确性。
例如，在用甲醇作溶剂来溶解样品时，所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的，因此，在每次进样时，都有一个保留时间固定的干扰峰存在，后经证实，此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生，换用玻璃试管后，干扰峰消除。
总之，高效液相色谱仪使用时需要注意以上问题，以保证仪器的正常运转和实验结果的准确性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高效液相色谱法流动相的注意事项高效液相色谱法（High-Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术。
在进
行HPLC分析时，流动相的选择和使用是非常重要的。
下面将详细介绍
关于HPLC流动相的注意事项。
1.流动相的选择：在选择流动相时，要考虑所分离的样品的性质，包括其溶解性、极性、酸碱性等。
一般情况下，流动相可以是纯溶剂
或溶剂混合物，其中溶剂混合物可以根据需要进行优化。
常见的HPLC
流动相溶剂包括水、有机溶剂（如甲醇、乙腈、二氯甲烷等）以及酸、碱溶液。
2.流动相的pH值调节：流动相的pH值对于样品的分离和检测具
有重要影响。
在某些情况下，需要调节流动相的pH值以改变样品的离
子状态或结构。
这可以通过加入缓冲剂来实现，一般情况下，可以根
据样品的性质选择合适的缓冲剂。
3.流速的控制：流速的选择应根据需要平衡分离效果和分析时间。
流速过快可能导致峰形变宽、分离不理想，而流速过慢则会延长分析
时间。
因此，需要根据样品的性质和分离要求合理选择流速，并在实
验过程中进行优化。
4.流动相的净化和除气：使用之前，流动相需要经过净化处理以
去除悬浮物和杂质。
此外，流动相中的气泡也会对分离效果产生干扰，因此需要除去气泡。
可以通过超声波处理、真空处理或使用气体瓶来
除去气泡。
5.流动相的稳定性：流动相的稳定性对于HPLC分析至关重要。
在
实验过程中，需要定期检查流动相的配制是否正确，是否出现沉淀、
杂质等问题。
另外，一些样品可能会与流动相产生反应或降解，导致
流动相的不稳定，需及时调整。
6.流动相的储存和保养：为了确保流动相的质量和稳定性，需要
正确储存和保养。
一般情况下，流动相应避光保存，并在使用前用滤
膜过滤以去除杂质。
当流动相已经使用一段时间后，可能会积聚杂质
或可溶性样品残留，此时需要更换或清洗柱和系统以保持分析结果的
准确性。
7.设备和仪器的选择和检查：在进行HPLC分析时，需要选择适当
的设备和仪器，并定期检查和维护。
例如，采用合适的柱子、检测器
和泵，检查管路和连接口是否密封，以及进行校准和实验参数的验证。
8.防止流量不稳定：流量的稳定性对于HPLC分析结果的准确性至
关重要。
因此，在进行HPLC分析时，需要确保流量传感器的正确操作、流量调节的稳定以及测定流量的准确性。
综上所述，HPLC流动相的选择和使用需要仔细考虑，流动相的质
量和稳定性对于分离和检测结果具有重要影响。
通过正确选择流动相
和合理优化实验条件，可以提高HPLC分析的准确性和效率。