人牙周膜干细胞的初步鉴定及体外成骨诱导

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改良法体外分离培养炎症来源的人牙周膜干细胞

改良法体外分离培养炎症来源的人牙周膜干细胞刘焱; 陈青宇; 赵晓霞; 高翔; 高俊武; 王靖宇【期刊名称】《《医学理论与实践》》【年(卷),期】2019(032)023【总页数】4页(P3764-3767)【关键词】炎症; 人牙周膜干细胞; 改良法; 体外培养【作者】刘焱; 陈青宇; 赵晓霞; 高翔; 高俊武; 王靖宇【作者单位】内蒙古自治区包头医学院口腔学院内蒙古包头市 014060; 内蒙古自治区包头医学院第一附属医院; 内蒙古自治区呼和浩特市第一医院【正文语种】中文【中图分类】R787牙周炎发病率高，是成人失牙最主要的原因。

能否有效控制感染并争取病损部位最大限度地组织再生和重建是控制牙周炎病程进展的重要评价指标。

随着组织工程材料和技术的日新月异及生物信号分子研究的快速进步，牙周组织再生进入了蓬勃发展的时代[1]。

存在于牙周韧带组织的人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells，hPDLSCs)增殖能力旺盛且具有多向分化潜能，经诱导可形成牙骨质/牙周膜样结构[2]。

hPDLSCs被认为是牙周组织工程中最理想的种子细胞，已成为牙周组织的再生、种植体周围缺损的修复以及正畸牙齿微环境改建过程中重要的细胞学基础[3]。

hPDLSCs主要来源于健康的乳牙及年轻恒牙，然而成年人中约80%罹患慢性牙周炎，其中20%为重度牙周炎。

对于这些患者，能否从炎症状态下的牙周韧带中成功分离得到自体健康的hPDLSCs；长期慢性炎症对hPDLSCs的细胞表型、增殖能力及干细胞生物学特性有无改变[4-6]都影响着i-hPDLSCs的临床应用。

常规方法分离和纯化i-hPDLSCs的成功率较低。

本实验采用改良酶消化组织块盖玻片培养法结合有限稀释克隆法分离和筛选i-hPDLSCs，获得单细胞克隆i-hPDLSCs，并在扩增后鉴定其生物学特性，以期为组织工程牙周再生治疗的种子细胞的筛选与培养提供理论基础和实验依据。

人牙周膜成纤维细胞培养与鉴定

人牙周膜成纤维细胞培养与鉴定沈慧娟;李琳娟;康娜【摘要】目的:培养人牙周膜成纤维细胞,并对其来源进行鉴定,为后期实验提供细胞来源.方法:选择20颗有正畸需求需拔牙矫治的年轻患者所拔的第一或第二前磨牙,采用组织块法分离并培养牙周膜成纤维细胞,通过形态学及免疫细胞化学SP法(对细胞进行波丝蛋白、角蛋白染色)进行鉴定.绘制生长曲线,观察细胞生长并计算细胞群体倍增时间.结果:细胞培养成功,表现为漩涡形或放射形生长,形态为长梭形.波丝蛋白染色呈阳性,抗角蛋白阴性,表明细胞来源中胚层.结论:成功从人牙周膜组织中分离培养出入牙周膜成纤维细胞.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2015(032)006【总页数】4页(P872-875)【关键词】人牙周膜成纤维细胞;细胞培养;免疫化学【作者】沈慧娟;李琳娟;康娜【作者单位】广西医科大学附属口腔医院正畸科南宁 530021;广西医科大学附属口腔医院正畸科南宁 530021;广西医科大学附属口腔医院正畸科南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R-33牙周膜成纤维细胞是牙周膜组织中数量最多、功能上最重要的细胞。

它能不断合成与降解胶原，维持牙周膜中胶原的更新与重建，以及通过分泌多种细胞活性因子刺激成骨细胞和破骨细胞完成牙周组织的修复与再生[1]。

利用人牙周膜成纤维细胞建立体外细胞系已成为国内外学者研究正畸牙移动的重要手段。

本实验采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞并进行鉴定，为下一步的正畸研究提供细胞来源，奠定了实验基础。

1.1 实验对象：人牙周膜均取自于2015年6月广西医科大学附属口腔医院口腔外科门诊就诊的11～16岁青少年因正畸需要而拔除的20颗健康前磨牙，均经自愿者知情同意，经过伦理委员会同意。

所选牙齿均为健康的第一或第二前磨牙，无龋坏、根尖周炎、牙周炎等，且该前磨牙无正畸治疗史。

1.2 试验材料及主要仪器设备：维森特培养基(DMEM)培养液；维森特胎牛血清(澳洲血源)；维森特胰蛋白酶(0.25%+0.1%EDTA)；维森特磷酸盐缓冲液(PBS)；四甲基偶氨唑盐(MTT，诺维赞)；抗波丝蛋白抗体、抗角蛋白抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)、多聚甲醛、sp试剂盒、辣根素、DAB溶液(二氨基联苯胺)、苏木精；25 mL塑料培养瓶、6孔板，96孔板。

人牙周膜干细胞培养

人牙周膜干细胞培养
上了研究生就开始养牙周膜干细胞，经历了小半年无数次的失败，可能有快100颗牙齿了吧，那些个无助和绝望的黑夜之后，最近终于摸到规律细胞大批量出来了，总结以下几点，个人觉得能较大幅度的提高成功率，希望对大家有帮助：
1.牙齿的来源当然是最重要的，越年轻的牙齿出来细胞越容易，成功率也越高，13岁以下的正畸牙和20岁以下的智齿都算是活性很好的，当然25岁以下的牙齿基本上都能出，这里只讨论相对较优的情况；
2.收牙的时候DMEM培养基＋10%双抗，最好2小时以内就处理了，记得离心管盖子要封口膜封上，而且牙齿直接从牙钳放入准备好的离心管，尽量减少污染风险，毕竟口腔三大菌。

3.具体操作分别有酶消化和组织块翻瓶酶消化这两种，就我的结果来说，翻瓶的成功率相对高些。

0.2ml血清铺瓶后尽量将组织块分的十分小，且组织块与组织块之间离得近些，这样万一其中某个出来了，其他的也会受它影响。

加入4ml20%培养基后，3.5-4小时翻瓶，翻了瓶之后就不要动它了,这点很重要，千万千万不要因为关心经常去看，5天后（也就是隔4天）再拿出来看，一般就能看到奇迹啦img（中间可以远远看看培养液干没，没干就等着）。

细胞出来之后每3天换一次液。

切记，一开始一定不要动它，让小宝宝自己好好的发挥，这点超级重要；
4.消化的时候1颗牙0.5ml I型胶原酶＋0.5ml中性酶，记得是根中1/3的牙周膜，不要太使劲刮下来牙骨质啦，刮的太靠根颈部和根尖则有可能导致其他细胞污染（牙龈上皮细胞、牙髓干细胞）。

5.牙周膜干细胞成功率本来就比较低，文献上说大概是30%，如果出不来也不要着急，你用心的话小细胞一定不会辜负你的。

来源于丁香园论坛nadiaa。

牙周膜干细胞的研究进展_0

牙周膜干细胞的研究进展牙周组织工程是牙周病治疗研究的热点，牙周膜干细胞是其关键种子细胞之一。

本文就牙周组织工程的相关研究和牙周膜干细胞的来源、分离与培养、细胞表型、生物学特性、功能影响因素和分子调控进行综述，并对其面临的挑战和前景作一讨论。

标签：牙周组织工程；牙周膜干细胞；挑战；展望Research progress on periodontal ligament stem cellsDong Zhengmou1，2, Liu Luchuan1.（1. Dept. of Stomatology, Institute of Field Surgery, Daping Hospital, The Third Military Medical University, Chongqing 400042, China; 2. Dept. of Stomatology, People’s Hospital of Hongan, Huanggang 438400, China）[Abstract]The periodontal tissue engineering has been a striking research on the treatment of periodontal dis－ease, and the periodontal ligament stem cell is one of the key seed cells on the periodontal tissue engineering. In this study, a related research on periodontal tissue engineering, and the source, isolated and cultured, cell pheno－type, biological characteristics, influential factor of function, molecular regulation on the periodontal ligament stem cells would be reviewed, meanwhile the challenges and prospects on it would be discussed.[Key words]periodontal tissue engineering；periodontal ligament stem cell；challenge；prospect牙周病是人类口腔疾病中的常见病和多发病，常导致牙周支持组织破坏或缺损，严重影响人类的生理和心理健康。

葛根素对人牙周膜干细胞成骨分化的作用

葛根素对人牙周膜干细胞成骨分化的作用作者：吴琳琳王彦郑雅心等来源：《中国美容医学》2013年第10期[摘要]目的：探讨葛根素对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells，hPDLSCs）成骨分化的影响。

方法：向体外培养的hPDLSCs中分别加入0.01mmol/L、0.1mmol/L和1mmol/L葛根素作为实验组，另设阳性对照组和空白组。

MTT法检测葛根素对hPDLSCs活性影响，采用免疫荧光法、碱性磷酸酶（alkaline phosphotase，ALP）试剂盒、茜素红染色及qRT-PCR对葛根素作用后hPDLSCs生物学特性作初步观察。

结果：0.01mmol/L葛根素可明显促进hPDLSCs增殖，免疫荧光染色显示实验组I型胶原蛋白（collagen-I，COL-I）和骨桥蛋白（osteopontin，OPN）均阳性表达；与空白组对比，实验组诱导7天后ALP活性升高，14天后茜素红染色见矿化结节形成，qRT-PCR检测ALP和骨钙蛋白（osteocalcin，OCN）分别在加药后7天和14天表达上调。

结论：葛根素能够促进牙周膜干细胞向成骨细胞分化。

[关键词]牙周膜干细胞；葛根素；成骨分化[中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2013）10-1067-05众所周知，雌激素缺乏会增加患牙周病的危险度引起牙槽骨迅速吸收牙齿松动[1]。

葛根素是从豆科植物野葛的干燥根中提取的一种异黄酮类化合物，可作为雌激素的替代药物发挥雌激素样作用[2]。

文献报道葛根素能够促进脐带间质干细胞向成骨细胞分化[3]。

人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells，hPDLSCs）具有多向分化潜能，在适当的条件下，可分化为成骨细胞、成牙骨质细胞、脂肪细胞及神经元样细胞[4]。

本研究旨在探讨葛根素对hPDLSCs成骨分化的影响，为临床牙槽骨再生的防治提供新的思路。

干细胞向成骨细胞诱导分化染色及鉴别方法

干细胞向成骨细胞诱导分化染色及鉴别方法干细胞向成骨细胞诱导分化染色及鉴别方法碱性磷酸酶（ALP）是成熟成骨细胞的标志性酶之一。

1 Gomori 钙钴法【染色原理】ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。

【孵育液配制】3%β-甘油磷酸钠5ml2%巴比妥钠5ml蒸馏水10ml2% CaCl2 10ml2% MgSO4 1ml【步骤】（1）将无菌的玻片放入培养皿中，传代时加入适量的细胞悬液，作细胞爬片，呆细胞长满玻片后取出。

（2）PBS冲洗后用冷丙醇固定10min，蒸馏水冲洗数次。

（3）入孵育液中，37℃孵育4-6h。

自来水冲洗数次。

（4）2%硝酸钴中浸3-5min，蒸馏水洗数次。

（5）1%的硫化铵中2min，自来水冲洗，自然干燥，封固。

【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。

2 偶氮偶联法：【孵育液配制】萘酚AS-BI磷酸盐20mgDMSO 0.5ml0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液（PH 9.2）50ml六偶氮副品红0.5ml1mol/L NaOH调PH 9-10，混合后过滤使用。

（六偶氮副品红：副品红400mg，浓盐酸2ml，双蒸水8ml混合过滤；临用前与等体积4%亚硝酸钠混合）【步骤】（1）细胞爬片成功后，PBS冲洗后，置入4℃10%甲醛固定10min。

（2）蒸馏水冲洗。

（3）将过滤孵液直接滴加于玻片上，室温下作用45min。

（4）流水冲洗，晾干。

（5）甘油明胶封固。

【结果】成骨细胞胞质中可见红色ALP阳性颗粒。

3 碱性磷酸酶染色试剂盒法：【作用原理】细胞内碱性磷酸酶在Ph9.4-9.6条件下水解磷酸萘酚AS-MX产生萘酚，后者被重氮盐捕获，生成不溶性有色沉淀。

【作用液配制】取2号储备液10ml，加3号液200ul，再加4号粉剂10mg，振摇速溶，立即过滤到细胞爬片上。

Wnt信号通路调节人牙周膜干细胞成骨分化及其机制研究

Wnt信号通路调节人牙周膜干细胞成骨分化及其机制研究Wnt信号通路调节人牙周膜干细胞成骨分化及其机制研究摘要：牙周膜干细胞（PDSCs）是一类具有自我更新和多向分化潜能的成纤维细胞样细胞，其在牙周组织再生与重建中起着重要作用。

近年来，Wnt信号通路成为研究PDSCs成骨分化的热点。

本研究通过分离培养PDSCs，采用不同浓度的Wnt信号通路激动剂，检测细胞增殖情况和成骨分化相关分子表达，揭示Wnt信号通路调节PDSCs成骨分化的机制，并探讨其在牙周组织再生与重建中的应用前景。

结果表明，Wnt信号通路激动剂处理能够提高PDSCs的增殖能力和成骨分化潜能，同时上调关键成骨转录因子RUNX2和osteocalcin的表达，下调抑制PDSCs成骨分化的因子Dkk-1和SOST的表达，对蛋白质水平的磷酸化调节也发挥重要作用。

总之，Wnt信号通路在调节PDSCs成骨分化过程中发挥着关键作用，为其在牙周再生领域的应用提供了新的思路和方法。

关键词：Wnt信号通路；牙周膜干细胞；成骨分化；RUNX2；osteocalcin；Dkk-1；SOST近年来，牙周组织再生与重建的研究备受关注，其中PDSCs作为一种重要的细胞来源受到越来越多的关注。

PDSCs具有自我更新和多向分化潜能，是牙周组织再生和重建中的重要细胞类型之一。

研究发现，Wnt信号通路在胚胎发育和成骨分化等生物学过程中发挥着关键作用。

因此，不少研究将目光投向Wnt信号通路在PDSCs成骨分化中的作用机制。

本研究通过对PDSCs进行不同浓度的Wnt信号通路激动剂处理，研究发现Wnt信号通路能够促进PDSCs的增殖和成骨分化。

同时，Wnt信号通路的激动对PDSCs关键成骨转录因子RUNX2和osteocalcin的表达起到调节作用，并且抑制具有抑制PDSCs成骨分化的因子Dkk-1和SOST的表达。

实验还发现，Wnt信号通路的调节作用可能与蛋白质水平的磷酸化有关。

牙周膜肌成纤维细胞的体外培养及其标志物的表达时效

牙周膜肌成纤维细胞的体外培养及其标志物的表达时效目的探讨人牙周膜肌成纤维细胞（MFB）体外培养及其标志物表达的时效性。

方法体外培养人牙周膜成纤维细胞（hPDLF），72 h内以5ug·L-1终质量浓度的转化生长因子（TGF）-B1诱导hPDLF向MFB转化，免疫细胞化学和免疫组织化学染色检测MFB标志物a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）表达情况。

分别进行12、24、48、72、96和120 h的MFB观察，采用流式细胞术观察MFB长时间培养的细胞活性，采用免疫细胞化学观察MFB长时间培养后的a-SMA表达情况。

结果经TGF-B1诱导后a-SMA呈阳性；诱导至120 h，a-SMA仍呈阳性，72 h内其表达稳定。

结论5 ug·L-1终质量浓度的TGF-B1成功诱导人牙周膜细胞向MFB转化。

MFB体外培养具有时效性，培养0-72 h，其状态稳定。

标签：人牙周膜成纤维细胞；肌成纤维细胞；a-平滑肌肌动蛋白本研究的前期体内试验证实，正畸牙牙周膜张力侧肌成纤维细胞（myofibroblast，MFB）可能参与了牙周膜改建和成骨细胞的成骨过程；但牙周膜内生物学环境复杂，在正畸生物力学的影响下，多种牙周膜细胞都可能出现类似于MFB标志物的表达情况；因此，要明确MFB在牙移动过程中可能发挥的作用，就需要进行体外试验，以明确MFB分泌细胞外基质及成骨的机制。

MFB 大多存在于组织处于外力环境时，而当外界张力因素去除掉后，MFB大多程序性死亡或退化消失。

研究MFB的功能，在成功诱导出MFB后还需明确MFB的活性，即MFB可以维持多久，这样才能确定MFB的体外观察时间。

本试验采用转化生长因子（transforming growth factor，TGF）-B1诱导人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblast，hPDLF）向MFB转化，从12 h起，分6个时间点对hPDLF进行最长120 h的观察。

基因芯片筛选人牙周膜干细胞成骨分化生物学标记物的研究

基因芯片筛选人牙周膜干细胞成骨分化生物学标记物的研究张雄;陈良娇;兰泽栋【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2016(037)014【摘要】目的：发现牙周膜干细胞（PDLSCs）骨向分化后显著高表达的环状RNA（circRNA），探索circRNA在PDLSCs骨向分化中生物学标记物的作用。

方法用酶消化法体外培养牙周膜细胞，通过免疫磁珠法分选出PDLSCs。

用普通培养基和成骨诱导培养基分别培养PDLSCs 21 d，茜素红染色检测矿化结节的形成，RT－qPCR检测碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）和Runt相关转录因子2（Runx2）的表达。

采用Arraystar公司的circRNA芯片检测PDLSCs骨向分化前后整体circRNAs的差异表达，将芯片中上调变化最显著的前10位circRNAs进行PCR引物设计，RT－qPCR检测circRNA的表达情况。

结果 PDLSCs骨向诱导21 d后，茜素红染色阳性，有大量矿化结节形成，ALP、OCN和Runx2表达量明显升高。

Hsa＿circ＿0008433在PDLSCs骨向诱导21 d后显著高表达。

结论Hsa＿circ＿0008433将来可能是PDLSCs骨向分化新的生物学标记物。

【总页数】4页(P2080-2083)【作者】张雄;陈良娇;兰泽栋【作者单位】广州医科大学附属口腔医院口腔医学重点实验室广州510140;广州医科大学附属口腔医院口腔医学重点实验室广州510140;广州医科大学附属口腔医院口腔医学重点实验室广州510140【正文语种】中文【相关文献】1.人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞和人牙周膜干细胞复合PHBHHx、PHBV支架成骨分化能力的体外研究 [J], 黄银莉;周洪;卢晓云;苏晓霞;钟天宇2.高浓度唑来膦酸对人牙周膜干细胞凋亡及成骨分化影响的实验研究 [J], 李萌宇; 俞叶佳; 施越琦; 戈旌; 王绍义3.CGRP对人牙周膜干细胞成骨分化和成血管能力影响的体外研究 [J], 王芳; 李汉青; 何家才4.人牙周膜干细胞成骨分化过程中P2X7受体mRNA的表达特点及作用研究 [J], 吴建书;汤俊岭5.雌激素微环境下非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化的研究 [J], 吴晓玲;郑茜;吕佳岭;赵娴;徐洁;余京泓;徐晓梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

地塞米松诱导牙周膜干细胞的定向成骨分化及凋亡

地塞米松诱导牙周膜干细胞的定向成骨分化及凋亡谷子芽;翟强;吕秋峰;彭灿星;刘芳菲;彭晖【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2013(000)040【摘要】背景：牙周膜干细胞是一类起源于牙组织的成体干细胞，具有良好的成骨分化能力，有望在骨组织工程中得到应用。

目的：观察成骨诱导液对牙周膜干细胞成骨分化能力及细胞早期凋亡的影响。

方法：从原代牙周膜组织中分离得到牙周膜干细胞，以1×104/cm2浓度铺板后开始诱导。

利用1，10，100 nmol/L地塞米松、β-磷酸甘油钠、维生素C为成骨诱导剂，以碱性磷酸酶活性检测、茜素红矿化结节染色、荧光定量PCR等方法对细胞成骨情况进行鉴定，采用AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡情况。

结果与结论：地塞米松可有效诱导牙周膜干细胞成骨分化，可显著提高碱性磷酸酶活性，促进茜素红矿化结节形成，提高成骨相关基因骨粘连蛋白及Ⅰ型胶原表达。

根据碱性磷酸酶活性和矿化结节实验结果，地塞米松的成骨诱导具有浓度梯度效应，其中100 nmol/L 地塞米松具有最佳成骨诱导能力。

细胞凋亡结果提示，地塞米松诱导的成骨分化具有一定促凋亡作用，可诱导牙周膜细胞的早期凋亡。

%BACKGROUND:Periodontal ligment stem cells are adult stem cells derived from dental tissues, which possess the capability of osteogenic differentiation. They are promising“seed cells”in bone tissue engineering. OBJECTIVE:To investigate the effects of osteogenic induction medium on the osteogenic differentiation and early apoptosis of periodontal ligment stem cells. METHODS:Periodontal ligment stemcells were isolated from primary periodontal ligament tissues and seeded on the plate at a density of 1×104/cm2. Osteogenic induction medium containing 1, 10 and 100 nmol/L dexamethasone,β-glycerophosphate and ascorbic acid were used. Alkaline phosphatase activity, mineral deposition staining and real time PCR were performed to assess the osteogenic capacity. AnnexinV/PI staining was used to detected apoptosis. RESULTS AND CONCLUSION:Dexamethasone effectively promoted osteogenic differentiation of periodontal ligment stem cells, by up-regulating alkaline phosphatase activity, enhancing mineral deposition and increasing osteogenic related gene (osteonectin and type Ⅰ col agen) expression. Alkaline phosphatase activity and mineralized nodule detection showed that osteogenic effects of dexamethasone were gradient-dependent, and 100 nmol/L was the best concentration. Apoptosis detection results indicated that osteogenic differentiation of dexamethasone for periodontal ligment stem cells could also induce cellapoptosis to some extent.【总页数】6页(P7090-7095)【作者】谷子芽;翟强;吕秋峰;彭灿星;刘芳菲;彭晖【作者单位】浙江省杭州口腔医院，浙江省杭州市310012;浙江省杭州口腔医院，浙江省杭州市 310012;浙江省杭州口腔医院，浙江省杭州市 310012;浙江省杭州口腔医院，浙江省杭州市 310012;浙江省立同德医院，浙江省杭州市 310012;浙江省立同德医院，浙江省杭州市 310012【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.地塞米松诱导牙周膜干细胞的定向成骨分化及凋亡 [J], 谷子芽;翟强;吕秋峰;彭灿星;刘芳菲;彭晖;2.寡核苷酸YW002对人牙周膜干细胞增殖、周期、凋亡和早期成骨分化的影响[J], 毕雪婷;申玉芹;徐晓薇;李文洁;王卓然;林崇韬3.应用钛表面二氧化钛纳米管诱导牙周膜干细胞成骨分化的实验研究 [J], 迟丹丹;徐海峰;李阳4.高浓度唑来膦酸对人牙周膜干细胞凋亡及成骨分化影响的实验研究 [J], 李萌宇; 俞叶佳; 施越琦; 戈旌; 王绍义5.MAPKs信号通路在内皮素-1诱导的牙周膜干细胞成骨分化过程中的作用研究[J], 梁莉;许亦权;杨楠;王辰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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人牙周膜干细胞的初步鉴定及
（同济大学附属Ｖ腔医院Ｖ腔内科．海ＩＩ上２０７）００２
【要】目的：体外培养、定人牙周膜干细胞（ｅｏｏｔｇｍｅｔｔｎｃｌ，ＤＳｓ并定向诱导分化为成骨细摘鉴ｐｒｄｎａｌａｎｓｌｅｌＰＬＣ）ｉｌｉｅｓ
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Ｙ腔颌面外科杂志２０ｌ０８年１０月第１８卷
第５期
ＪｕｎｌｆａａｄＭａｉｏａｉｕｇｒＶｏ１．Ｏｃｏｅ．０８ｏｒａｏｌｎｘｌｆａＳｒｅｙｌＮｏ５ｔｂｒ０Ｏｒｌｃｌ８２
ｄｉｆｒｎｉｔｏｅｔａｓｏＰＤＬｎｏｏｔｏｌｓｓｉｒ．Ｍｅｈｏｄ：ＰＤＩＳｒｉｏａｅｎｄｃｌｉａｅｆｅｅｔａｉｐｔｎｉｌｆｏｎＳＣｉｔｓｅｂａｔｎｖｔｏｔｓＯｓｗｅｅｓｌｔｄａｕｔｖｔｄ．ＰＤＬＳＣｓｏｆｐａｓｇｓｐｌｔｄａｎｉｆ５ｘ１ｃ．Ａｔ８ｓａｅ２ｗａａｅｔｄｅｓｔｏ０／ｍｙ０％ｃｎｕｅｅｈｅｕｍｓｃａｅｏａｎｉｕｃｎｅｉｏｆｎｃ，ｔｅｍｄｉｌｗａｈｎｇｄｔｎｄｉｇｍｄｕｍ．Ａｆｅｔｒ
ＡｌａｎｒｄＳｔｉｉｇａｄＬｃｉｉｅｔＰｓｉｅｘｒｓｉｎｏｏｌｇｎ．ＢＰＡＬｅｅｃｎｒｄｂｉｒｅｓｎｎｎＡＰａｔｔｔｓ．ｚｉａｖｙｏｉｖｅｐｅｓｏｆｃｌｅＩＳ，ｔａＰｗｒｏｆｍｅｙｉ
测骨涎蛋白（Ｐ）ＢＳ、Ｉ型胶原表达， — ＣＲＴＰＲ检测ＡＬＢＰｍＲＮ表达。结果：人ＰＬＣＰ、ＳＡＤＳｓ体外诱导培养２１ｄ后可见
钙结节形成，骨细胞相关蛋白及ｍＲＡ均阳性表达。结论：ＰＬＣ在体外诱导条件下具有成骨潜能成Ｎ人ＤＳｓ
ｉｍｍｕｏｉｏｈｍｉｔｎＴＰＲ．Ｃｏｃｕｉｎ：ＰＤＳａｅｉｄｃｄｉｔｓｅｂａｔｎｖｔ．ＰＳｓｈｖｈｎｈｓｅｅｓｙａｄＲ — ＣｔｒｎｌｓｏＬＣｓｃｎｂｎｕｅｎｏｏｔｏｌｓｓｉｉｏｒＤＬＣａｅｔｅ
【ｓｒｃ】ＯｂｅｔｅＴｏｔａｄｐｒ＇ｈｕａｅｉｄｎａｌａｅｔｔｍｃｌ（ＤＳｓｎｉｅｔａｈＡｂｔｔａｊｃｉ：ｏｉｌｅｎｕｉｔｅｈｍｎｐｒｏｔｌｉｍｎｓｅｓＰＬＣ）ａｄｎｓｇｔｔｅｖｓａ５ｏｇｅｌｖｉｅ
２１ｄｙｆｎｕｔｎｈｅｕｔｗｅｅｅａｕｔｄｂｉｒｎｒｄＳｓａｎｎ，ＡＬｃｉｉｅｔｍｎｏｉｔｃｅｓｒｎａｓｏｉｄｅｉｔｅｒｓｌｒｖｌａｅｙＡｌａｉｅｔｉｉｇｏｓｚＰａｔｔｔｓ．ｉｍｎｈｓｈｍｉｔａｄｖｖｏｙ
ＲＴ— ＰＣＲ．ＲｅｕｌｓＰＤＬＳｒｃｌｉａｅｎｄｄｉｅｅｔａｅｓｔ：Ｃｓｗｅｅｕｔｖｔｄａｆｒｎｉｔｄｉｖｔｏｗｉｃｉｅｆｅｉｎｗｈｃｒｎｉｅｔｄｂｉｒｔａｔｖｕｎｔｏ．ｈｉｈｗｅｅｍａｆｓｅｙ
胞，讨人ＰＬＣ的多向分化潜能：方法：体外分离、养人牙周膜细胞，探ＤＳｓ培待细胞达一定量后用有限稀释法进行克
隆化培养，选鉴定牙周膜十细胞（ＤＳ）矿化诱导培养２筛ＰＬＣ，１ｄ后检测钙结节形成情况、ＬＡＰ活性．疫细胞化学检免
【键词】牙周膜干细胞；胞克隆；导分化关细诱
［图分类号】８３１；８３中Ｑｌ．Ｑ１．２５［献标识码］文Ａ［文章编号】１０ —９９２０）５０１—５０５４７（０８０ —３８０
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（ｅａｔｅｔｆＯａＭｅｉｎ，ｏｐｔｏａｌｙＴｎｊＵｉｅｓ）Ｓａｇａ２０７，ｈｎ）ＤｐｒｎｒｌｄｉｅＨｓｉｏＳｍｔｏ，ｏｇｉｎｖｒｉｈｎｈｉ００２Ｃｉａｍｏｃｌａｆｔｏｇｔ，