乳品中黄曲霉毒素 M1 残留检测方法研究进展

综述牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法

摘要：黄曲霉毒素M1具有强毒性和致癌性，严重危及摄入机体生命安全。

本文从理化性质、限量标准、检测方法比较等方面探讨牛奶中AFM1的情况，为提高牛奶质量安全提供信息依据。

关键词：牛奶 AFM1；检测方法1 理化性质黄曲霉毒素 M1（Aflatoxin M1，AFM1），分子式为 C 17H12O7，熔点（裂解温度）299℃，是黄曲霉毒素中一种二氢呋喃杂萘邻酮衍生物。

研究表明，AFM1是黄曲霉毒素B1（AFB1）的羟基化衍生物，即由AFB1转化而成。

它常温下呈片状结晶，溶于乙腈、甲醇、氯仿、丙酮等极性有机溶剂，非极性溶剂（乙醚、正己烷、石油醚等）不溶解。

AFM 1 的化学结构稳定，耐热耐酸。

AFM 1 毒性和致癌性均强，是已知的20种黄曲霉毒素中毒性最强的，仅次于AFB1，相当于5倍的氰化钾，40倍的砒霜。

经机体吸收后，作用于肝脏，易引起肝肿瘤和肝癌。

2 牛奶中AFM1限量标准AFM1是牛奶质量安全风险评估的主要危害因子，各国分别制定牛奶中AFM1限量。

其中欧盟各国对婴幼儿配方牛奶限量为0.025 μg/kg，我国规定婴儿乳品限量值为不得检出，牛乳中AFM1限值为0.5 μg/kg[1]。

3 检测方法目前牛奶中AFM1检测方法主要有薄层色谱分析法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱法（LC-MS）和快速检测法。

3.1 TLC法TLC法为定性半定量法。

利用黄曲霉毒素M1在365nm波长下发出蓝紫色荧光的特性，提取、浓缩、分离样品，在薄层板上显示荧光，对照标准品的荧光强度，定量含量。

此法为AFM1的经典方法，设备简单，适用于大规模的筛查研究，缺点为半定量方法，试验步骤多，干扰因素多且因接触AFM1有安全危害。

3.2 HPLC法利用免疫亲和柱或C18柱反复进行萃取和洗脱，分离试样中的AFM1，结合荧光检测器定量含量。

方法为：100ml试样加热至40℃，加入1.0gNaCl，5000r/min离心15min，50ml清澈液缓慢过免疫亲和柱或C18柱，10ml水、4ml乙腈洗脱备用。

生乳中黄曲霉毒素M1快速检测方法的比对

Quality Control生乳中黄曲霉毒素M1快速检测方法的比对李婕，曹学思，杨爱君*，何瑛，纪坤发，罗少杰广东燕塘乳业股份有限公司，广东广州 510000摘要：[目的]分析酶联免疫吸附法（ELISA）测定生乳中黄曲霉毒素M1残留量结果的重现性、回收率和精密度，以及胶体金免疫层析法与其结果的呼应度，证实2 种方法联合使用的可行性。

[方法]用胶体金快速检测试纸条对生乳样品中的黄曲霉素M1进行检测，并用黄曲霉毒素M1 ELISA检测试剂盒（鲜奶检出下限为0.018 μg/kg）做对照试验。

[结果]胶体金快速检测试纸条对生乳中不同浓度黄曲霉毒素M1残留量的检测结果呈现梯度效应，并能与ELISA检测试剂盒的定量检测结果呼应。

ELISA法对生乳中黄曲霉毒素M1不同浓度残留量的定量试验结果重现性较好，具有较高的稳定性。

回收率为94.83%～100.53%，RSD值在1.11%～3.01%之间。

[结论]2 种快速检测方法对生乳中黄曲霉毒素M1的测定便捷快速，结果稳定准确、可信度高，可作为乳品企业日常快速进行原奶验收工作的基础数据参考。

关键词：生乳；黄曲霉毒素M1；胶体金免疫层析法；酶联免疫吸附法文章编号：1671-4393（2023）12-0074-06 DOI:10.12377/1671-4393.23.12.150 引言黄曲霉毒素（Aflatoxin，AF）是迄今发现污染农产品毒力最强的一类生物毒素[1]。

常见的有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2，其中AFB1的含量与毒力最大[2]。

黄曲霉毒素B1通常存在于花生、玉米、坚果等农副产品中[3]。

黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的4-羟基衍生物[2]。

它是动物在摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料和食品后在体内产生的代谢物[4]，可致癌、致畸、致突变，其结构为二呋喃环和香豆素，溶于多种有机试剂，如氯仿、乙腈和甲醇等[5，6]，存在于作者简介：李婕（1989-），女，广东广州人，本科，食品工程助理工程师，研究方向为乳品质量安全检测；曹学思（1997-），女，广东广州人，本科，食品安全工程助理工程师，研究方向为乳品质量安全检测；何瑛（1987-），女，广东广州人，本科，食品安全高级工程师，研究方向为乳品质量检测和质量保证；纪坤发（1986-），男，广东汕头人，大专，食品安全工程师，研究方向为乳品质量检测；罗少杰（1962-），男，广东江门人，大专，食品技术员，研究方向为乳品质量检测。

黄曲霉素M1全套解决方案

泰乐祺科技推出奶及奶制品中黄曲霉素M1专业解决方案- 针对近日来国家质检总局公布了的蒙牛乳业（眉山）和福建长富纯牛奶抽查的产品被检出黄曲霉毒素M1超标的问题。

蒙牛乳业对此向民众进行了致歉申明，反应了民族企业的责任心和对食品安全的重视。

对于黄曲霉毒素M1的限量，在之前的相关食品卫生标准中有明确规定，其中：鲜乳及其乳制品（折算为鲜乳汁）不得超过0.5ug/kg;婴儿代乳食品不得检出黄曲霉毒素b1。

（GB 2761-2005国家标准—食品中真菌毒素限量 GB 9676-2003国家标准—乳及乳制品中黄曲霉毒素M1限量！黄曲霉毒素主要存在于谷物、坚果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些与人类血液，动物饲料相关的产品中。

霉菌的生长并不一定表明黄曲毒素的存在，因为黄曲毒素只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。

黄曲霉素B类具有蓝色荧光，G类具有绿色荧光。

除了蔬菜中常见的(B1,B2,G1,G2)，还有存在喂食了有毒饲料的奶牛的牛奶中的黄曲霉素M，其中毒性最高的M的代谢物为4－羟基化的产物Bs.黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。

其危害巨大，人类日常消费食品中如牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。

黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。

毒性是砒霜的100倍其实主要是指黄曲霉毒素比砒霜毒。

目前来讲，Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫检测法等。

液相色谱法可以精确的检测奶制品中黄曲霉毒素的微小含量。

而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。

作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商， 2010年泰乐祺科技投巨资成立了"检测应用实验室"，重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题，以期望快速提出解决方案。

HPLC与ELISA法测定牛奶中黄曲霉毒素M1的比较研究

ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇａｌｆａｔｏｘｉｎＭ１ｉｎｍｉｌｋｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＨＰＬＣａｎｄＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄ．
ＴｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｓｏｆＨＰＬＣｗｅｒｅ６８％－８５％ａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｓｏｆＥＬＩＳＡｗｅｒｅ９７％－１０９％．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＨＰＬＣａｎｄＥＬＩＳＡｈａｄｇｏｏｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ．ＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄｈａｄｌｏｗｃｏｓｔ，ｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｉｔｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｏｒｆｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆ
４８
第２２卷，第１期
ｌ３ｌ
化学分析计量
ＣＨＥＭＩＣＡＬＡＮＡＬＹＳｌＳＡＮＤＭＥＴＥＲＡＧＥ
Ｖｏ１．２２，Ｎｏ．１Ｊａｎ．２０１３
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－６１４５．２０１３．０１．０１３
（ＧｕｎｇａｄｏｎｇＳｈｎｔａｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＱｕａｌｉｔｙｎｄａＭｅｔｒｏｌｏｇｙＳｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎＴｅｓｔｉｎｇ，Ｓｈｎｔａｏｕ５１５０４１，Ｃｈｉｎａ）

高效液相色谱测定乳制品中黄曲霉毒素M1

1 材料和方法
1.1 仪器与试剂
Agilent 1260 超高效液相色谱仪（配荧光检测器）（美国 Agilent 公司）；3-18KS 高速冷冻离心机（德国 Sartorius 公司）；纯水净化仪（杭州永洁达净化科技有限公司）； ME3basic 振荡器（IKA 公司）。
关键词：FM1 是哺乳动物摄入被黄曲霉毒素 B1（Aflatoxin B1，AFB1）污染的饲料后通过在体内经羟基化作用转化成的代谢产物。AFM1 对光、热和酸都非常稳定，主要存在于动物的可食部分，如牛奶、肝、蛋类等，其中以牛奶最为常见，是目前发现的毒性、致癌性极强的天然有毒物，它能够对人及动物的肝脏组织产生破坏，严重时会导致肝癌甚至死亡。由于牛乳及其乳制品是人类（尤其是婴幼儿）的主要食品，乳制品营养丰富，能够增强人体免疫力，受到很多国家的重视。因此建立简便快捷高效的检测方法十分重要。
色谱柱；柱温 35 ℃；流速 1 mL/min （衍生剂：0.3 mL/min），进样量 50 μL；流动相为甲醇∶水 =54 ∶ 46 （V ∶ V）。荧光检测器，激发波长 360 nm，发射波长 440 nm。
1.2.3 提取方法称取 5 g 混合均匀的试样于 50 mL 离心管中（乳粉、特殊膳食等加入热水 , 涡旋混匀）。加入 10 mL 甲醇，涡旋 3 min。置于 4 ℃、6 000 r/min 下离心 10 min，将适量上清液或滤液转移至烧杯中，加 40 mL 水备用。将上述样液移过免疫亲和柱。收集全部洗脱液。在 50 ℃下氮气缓缓地将洗脱液吹至 1 mL 以下，用水定容至 1.0 mL，涡旋 30 s 混匀，0.22 μm 滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样。

乳与乳制品中黄曲霉毒素检测研究进展

乳与乳制品中黄曲霉毒素检测研究进展张振宇;王勇【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2022(49)7【摘要】黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)是霉菌产生的毒性极强的次级代谢产物,主要存在于乳与乳制品和霉变谷物中。

目前研究较多的黄曲霉毒素有黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))、AFB_(2)、AFG_(1)、AFG_(2)、AFM_(1)和AFM_(2),黄曲霉毒素物理与化学性质稳定,加热处理很难将其破坏,是目前公认的毒性最强的致癌物之一。

黄曲霉毒素不仅会造成动物营养不良及免疫力下降等问题,进入人体后还会对人体的肝脏造成极大的损害,而且原料乳中黄曲霉毒素的存在会对整个乳制品产业链造成严重的危害。

因此,建立简便的、特异性好、灵敏度高的检测乳与乳制品中黄曲霉毒素的方法具有十分重要的意义。

作者综述了乳与乳制品中黄曲霉毒素的检测方法进展,介绍了国内外近年来质谱法、电化学法、光谱法、色谱法、试纸条法等方法在检测乳与乳制品中黄曲霉毒素的应用,总结以上各种方法在检测乳与乳制品中黄曲霉毒素中的优势与其面临的挑战,并对今后乳与乳制品中黄曲霉毒素检测方法的发展方向进行了展望,以期为设计新的乳与乳制品中黄曲霉毒素检测方法提供思路。

【总页数】11页(P2820-2830)【作者】张振宇;王勇【作者单位】河南省济源市畜产品质量监测检验中心;河南省信阳市畜产品质量检验监测中心【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.乳及乳制品中黄曲霉毒素M1检测方法的比较--固相萃取柱法和免疫亲和柱法2.乳及乳制品中黄曲霉毒素M1研究进展3.乳与乳制品中黄曲霉毒素检测方法和限量标准研究4.乳与乳制品中黄曲霉毒素检测方法和限量标准研究5.乳与乳制品中黄曲霉毒素M_1研究进展因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

奶牛鲜乳中黄曲霉毒素Ml的产生及危害黄曲霉毒素Ml的检测方法 - 奶牛养殖

奶牛鲜乳中黄曲霉毒素Ml的产生及危害黄曲霉毒素Ml的检测方法-奶牛养殖奶牛生鲜乳中含有过高的黄曲霉毒素M1主要是由于其采食大量发生霉变的饲料、饲草,导致体内含有大量的黄曲霉毒素B1,通过体内代谢生成黄曲霉毒素M1,并存在于肝脏、肾脏、乳腺以及乳汁中,且经过24h就能够检测到牛奶中存在黄曲霉毒素M1.现主要介绍奶牛鲜乳中黄曲霉毒素Ml的产生及危害黄曲霉毒素Ml的检测方法，大家一起来具体了解一下：1、产生及危害哺乳类动物主要是采食污染有黄曲霉毒素Bl的饲料或者食品而导致分泌的乳汁中含有黄曲霉毒素Ml。

一般来说，农作物在生长过程中遇到各中自然灾害，如干旱、早霜、虫害、倒伏等，以及收获后在加工、运输、储藏过程中不合理，如贮藏湿度大等，都容易感染黄曲霉菌。

在温度、湿度适宜的条件下，就会生成一定数量的黄曲霉菌，黄曲霉毒素就是其产生的代谢物。

奶牛采食污染有黄曲霉毒素Bl的饲料后，进入的黄曲霉毒素Bl就会与微生物逐渐产生相互作用，其中10%作用的毒素能够在瘤胃内菌群的作用下发生降解，其他部分毒素即会被瘤胃吸收进入血液，并在体内的肝微粒体单氧化酶系的催化下，经由细胞色素P- 450的调节，导致黄曲霉毒素Bl末端存在的呋喃环C-10发生羟基化而生成黄曲霉毒素Ml。

由于黄曲霉毒素Ml没有活性，从而能够直接经由尿液排到体外，或者结合葡萄糖醛酸基转移酶而经由粪便排到体外或者通过乳汁排到体外，还有部分能够残留在肌肉内。

进入动物或者人类体内的黄曲霉毒素Ml，不仅能够抑制合成RNA、DNA，还能够抑制肝脏合成蛋白质，引起机体中毒，主要表现在以下三个方面，即损伤组织器官；抑制免疫功能；致畸、致癌、致突变，导致人类和动物发生胃癌、肾癌和肝癌等。

2、检测方法薄层色谱法(TLC)。

该方法是测定牛奶中黄曲霉毒素Ml含量的经典方法，是一种比较定性或者半定量的检测方法。

其原理是对牛奶样品进行提取、浓缩、薄层分离后，使黄曲霉毒素Ml能够在36b nm波长的紫外光下发出蓝紫色荧光，从而根据标准溶液的荧光强度以及其在薄层板上表明的荧光最低检出量相比较，进而计算其含量。

两种常用适配体的纳米金比色法快速检测牛奶中黄曲霉毒素M1的评价研究

苏柳，贺伟华，张干，等. 两种常用适配体的纳米金比色法快速检测牛奶中黄曲霉毒素M 1的评价研究[J]. 食品工业科技，2024，45（8）：284−292. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023050332SU Liu, HE Weihua, ZHANG Gan, et al. Evaluation of Gold Nanoparticles Colorimetric Sensing Based on Two Commonly Aptamer for Rapid Detecting Aflatoxin M 1 in Milk[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(8): 284−292. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023050332· 分析检测 ·两种常用适配体的纳米金比色法快速检测牛奶中黄曲霉毒素M 1的评价研究苏　柳1，贺伟华1, +，张　干1，陈爱亮2，章钢刚1，赖晓翠1，邓省亮1,*（1.江西省科学院微生物研究所，江西南昌 330096；2.中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，北京 100081）摘　要：目的：建立基于不同序列长度适配体的纳米金（Gold nanoparticles ，AuNPs ）比色传感法快速定量检测牛奶中的黄曲霉毒素M 1（Aflatoxin M 1，AFM 1），并评价目前文献报道中常用的21（A21）和72个碱基（A72）长度的AFM 1适配体在实际样品中的检测性能。

方法：采用柠檬酸钠还原法制备AuNPs 溶液，加入AFM 1适配体及AFM 1标准品后，适配体与AFM 1特异性结合形成特殊三维结构，随着NaCl 溶液加入，AuNPs 溶液的稳定性被破坏而发生聚集，导致溶液颜色变化，通过测定AuNPs 溶液的吸光值和吸收光谱定量检测AFM 1。

牛奶中黄曲霉毒素M1胶体金试纸条的研究

２０１４年１月
霞瑟礴究蓠器笈
ＦｏｏｄＲｅｓｅａｒｃｈＡｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ检测分析
７６
第３５卷第１期
ＤＯＩ：１０．３９６９ｄ．ｉｓｓｎ．１００５－６５２１．２０１４．０１．０２１
ｗａｓｓｔｕｄｉｅｄ．ＣｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｍａｒｋｅｄｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｍｏｎｏｅｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔａｌａｆｔｏｘｉｎＭ１ａｎｄｆｒｅｅｚｅｉｎｔｏｍｉ（￣ｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅａｇｅｎｔｓ，ｓａｍｐｌｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｃｕｓｈｉｏｎａｎｄｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｉｆｌｍｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｉｎｓｔａｌｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｔｒｉｐ．Ｔｈｅｒｅｓｕｈｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｗａｓ０．３Ｌｉｎｍｉｌｋ．Ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｉｍｅｗｉｔｈｉｎ１０ａｉｒｎ．Ｔｈｅｒｅ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔ（）ｅｓｔａｂｌｉｓｈａｒａｐｉｄａｓｓａｙｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｆａｔｏｘｉｎＭ１，ｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔ０ｇｒａｐｈｙａｓｓａｙ（ＧＩＣＡ）

免疫亲和柱净化-液相色谱串联质谱法检测乳及乳粉中的黄曲霉毒素M1

１．３．６质谱条件表２离子选择参数表
１．２．４乙酸铵
１．２．５Ｋ２ＨＰＯ４
１．２．６ＫＨ２ＰＯ４
１．２．７磷酸缓冲溶液：称取５２．７ｇＫ２ＨＰＯ４，备注：ａ代表定量离子３０．２ｇＫＨ２ＰＯ４，溶于５００ｍＬ中，用ｌＭ氢氧１．４检测方法化钠或盐酸溶液调节ＰＨ＝７，水定容至１Ｌ。称取２Ｏｇ（精确至Ｏ．０ｌｇ）试样（或ｌ０ｇ１．２．８黄曲霉毒素Ｍ－标准品：纯度＞９８％。固体试样，加１０ｍＬ水溶解）于５０ｍＬ离心图１黄曲霉毒素Ｍ，色谱峰（ＭＲＭ模式）１．２．９免疫亲和柱：ＮｅｏＣｏｌｕｍｎ黄曲霉毒管中，加入５ｇＮａＣ１，２０ｍＬ乙腈超声提取我们选择了来自不同地区和不同批号的素（０１／０８）。１０ｍｉｎ，４０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ，取上清溶液，１．２．１０１Ｏ％乙腈水溶液：在４５０ｍＬ水中几种常见乳制品的阴性样品进行添加测定。称质量五等分，取一份加入４０ｍＬ磷酸缓冲加入５０ｍＬ乙腈，混匀。结果如表３所示。溶液，混匀。４０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ，取上清待１．２．１１５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵水溶液（含０．１％净化。甲酸）：称取Ｏ．３８５ｇ乙酸铵，溶于１０００ｍＬ黄曲霉毒素免疫亲和柱，去掉柱子的顶水中，加入ｌｍＬ甲酸，混匀，超声３０ｍｉｎ。表ｌ几种乳制品黄曲霉毒素Ｍ。残留量测定结果（ｎ＝３）