干细胞培养与鉴定
干细胞培养中的细胞鉴定与鉴定方法
干细胞培养中的细胞鉴定与鉴定方法细胞鉴定是干细胞培养中至关重要的一步，它能够帮助科研人员确定细胞的纯度和特性，从而保证实验结果的准确性和可靠性。
在干细胞研究中，细胞鉴定的主要目的是检测细胞的多能性和细胞表面标记物的表达情况。
本文将介绍干细胞培养中常用的细胞鉴定方法，以及在干细胞培养中细胞鉴定的重要性。
一、细胞鉴定的重要性在干细胞培养中，细胞鉴定是确保所使用的细胞符合实验要求的关键步骤。
干细胞的特性和功能对于各种研究和应用领域具有重要意义，如再生医学、药物筛选、疾病模型的构建等。
因此，细胞鉴定的准确性对于确定细胞的纯度和特性是至关重要的。
细胞鉴定能够帮助研究人员确认所使用的细胞群体中是否存在其他非目标细胞类型的杂质。
通过检测细胞上的特定标记物，可以确定细胞的起源和特性，从而准确判断细胞的多能性。
此外，细胞鉴定还可以帮助研究人员监测细胞培养过程中的质量控制，及时发现并排除异常细胞。
细胞鉴定的结果直接影响着后续实验的设计和结果解释。
准确地进行细胞鉴定可以确保实验数据的可靠性和可重复性，而不准确的细胞鉴定可能会导致误导性的结论或不可靠的实验结果。
因此，在干细胞培养中，细胞鉴定是不可或缺的步骤，它有助于保证实验结果的准确性和可靠性。
二、常用的细胞鉴定方法在干细胞培养中，常用的细胞鉴定方法包括细胞表面标记物的检测和多能性的评估。
1.细胞表面标记物的检测通过检测细胞表面标记物的表达情况，可以确定细胞类型和特性。
常用的细胞鉴定方法包括流式细胞术（flow cytometry）、免疫细胞化学（immunocytochemistry）和细胞表面蛋白质鉴定（surface protein identification）。
流式细胞术常用于检测细胞表面蛋白质标记物的表达情况。
通过特定的抗体与细胞表面标记物结合，并使用荧光染料标记抗体来实现对标记物的定量检测。
该方法可以同时检测多个标记物，高通量检测，准确鉴定细胞群体中的不同细胞类型。
干细胞流程及注意事项说明
干细胞流程及注意事项说明干细胞是一类具有自我更新能力和分化潜能的细胞，具有广泛的应用前景。
在干细胞的研究和应用过程中，需要遵循一定的流程和注意事项，以确保研究的准确性和安全性。
一、干细胞流程1. 采集干细胞：干细胞可以从胚胎、成体组织和体外重编程等多种途径获得。
胚胎干细胞的获取需要通过胚胎移植、体外受精等方法，而成体组织干细胞则可以通过骨髓、脐带血等组织的提取获得。
体外重编程则是通过基因编辑技术将普通细胞转化为干细胞。
2. 培养干细胞：获得干细胞后，需要进行培养以维持其生长和增殖。
培养基的选择和配方对干细胞的生长和分化具有重要影响。
培养条件应提供适当的营养物质、生长因子和细胞外基质，同时控制培养温度、氧气浓度和pH值等因素。
3. 干细胞分化：干细胞具有多能性，可以向不同细胞类型分化。
通过控制培养条件和添加特定的诱导因子，可以使干细胞分化为神经细胞、心肌细胞、肝细胞等特定细胞类型。
分化过程中需要监测细胞表型和功能的变化，以确保分化的准确性和效率。
4. 细胞鉴定和纯化：在干细胞的分化过程中，需要进行细胞鉴定和纯化，以确保获得纯种的目标细胞。
常用的鉴定方法包括免疫细胞化学染色、流式细胞术和基因表达分析等。
通过这些方法可以确定细胞的表型和基因表达特征，并排除其他细胞类型的干扰。
5. 功能评估和应用研究：获得纯化的特定细胞后，可以进行功能评估和应用研究。
通过细胞功能评估可以了解其生物学特性和功能表现，如细胞增殖能力、分泌物产生、细胞迁移能力等。
在应用研究方面，干细胞可以用于组织工程、疾病模型建立、药物筛选等领域，具有很大的潜力。
二、干细胞研究和应用的注意事项1. 遵守伦理规范：干细胞的研究和应用需要遵守伦理规范，尊重生命和个体权益。
在胚胎干细胞的研究中，需要遵循胚胎保护和人类研究伦理的相关法律法规。
2. 安全控制：在干细胞的培养和分化过程中，需要注意细胞的无菌操作和安全控制。
保持培养器具和试剂的消毒和清洁，避免细菌、病毒等污染物的侵入。
人表皮干细胞的体外分离、培养及鉴定
人表皮干细胞的体外分离、培养及鉴定何黎顾华昆明医学院第一附属医院皮肤性病科云南[摘要]目的：探索实验条件下人表皮干细胞的体外分离、培养及鉴定。
方法：利用细胞工程方法进行组织分离及细胞培养：通过免疫组化方法，利用角蛋白单克隆抗体对培养的角质形成细胞进行鉴定，并利用表皮干细胞的相对特异标识分子——CK19对其进行检测分析。
结果：表皮自真皮较完整分离，电镜及免疫组化证实培养细胞为角质形成细胞，免疫组化结果显示：CK反应阳性，部分细胞CK19阳性，表明有表皮干细胞存在。
结论：体外分离、培养角质形成细胞成功，且分离得到的角质形成细胞中有表皮干细胞存在。
[关键词]：角质形成细胞表皮干细胞细胞培养角蛋白——19对于烧伤、急性创伤、某些疾病导致的皮肤缺损，尤其是大面积烧伤一直以自体皮移植作为首选方案，而自体皮肤不足是临床遇到的主要问题。
随着细胞培养技术和组织工程的出现，使许多脏器或组织体外重建成为可能。
人工皮肤的研制就是一个典型例子。
在这一技术中，种子细胞——角质形成细胞的体外培养，以及体外分离到的角质形成细胞中是否有在体外能大量增殖的表皮干细胞决定了能否成功构建人工皮肤。
为此本课题采用组织分离方法及细胞培养方法进行角质形成细胞体外分离及培养；通过免疫组化方法，利用人广谱单克隆抗体对培养细胞进行鉴定；并利用CK19对体外培养细胞中是否有表皮干细胞进行检测。
材料和方法一、材料1、取材选择6-26岁健康男性，行包皮环切术切除的包皮。
2、主要培养基及试剂(1)磷酸盐缓冲溶液（PBS和D-Hank’s液）：（2）培养基：K-SFM（Gibco公司），编号：37010，内含2.5ug表皮细胞生长因子（EGF）和25mg小牛垂体(BPE)：（3）分离酶：dispase（4）胰蛋白酶；（5）抗人广谱角蛋白单克隆抗体；（6）CK19单克隆抗体；（7）SP 超敏免疫组化试剂盒。
二、方法1、取材将包皮环切术切除的健康包皮组织放入50ml离心管中（内装10mlDMEM培养基，含青、链酶素及硫酸庆大酶素）。
干细胞培养中的细胞鉴定与鉴定方法
干细胞培养中的细胞鉴定与鉴定方法干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞，对于再生医学和组织工程学等领域具有重要意义。
在干细胞研究中，如何鉴定细胞的特性和状态是非常关键的，这决定了细胞是否具有干细胞特性以及是否处于特定分化状态。
本文将介绍干细胞培养中的细胞鉴定和鉴定方法。
细胞鉴定方法可以分为直接和间接两类。
直接方法是通过检测特定标记分子的表达来鉴定细胞的特性和状态。
间接方法是通过检测细胞的功能或特定的生物学特征来进行鉴定。
一、直接方法1. 免疫细胞化学染色：使用特异性抗体来检测特定标记分子的表达。
例如，使用抗伊普西岛素抗体（insulin）来检测胰岛干细胞的分化状态。
2.免疫荧光染色：利用荧光探针或荧光标记的抗体来检测细胞的表达。
例如，使用CD34抗体来检测造血干细胞的存在。
3.流式细胞术：通过标记特定的细胞表面标记物，然后用荧光染料进行细胞表达的定量检测。
这种方法可以同时检测多个标记物，非常适用于复杂的细胞鉴定。
4.蛋白质组学分析：通过质谱技术鉴定细胞中特定蛋白质的表达水平。
这种方法可以提供更全面的细胞特性信息。
5.基因组学分析：通过测定特定基因的表达水平来鉴定细胞的特性。
例如，使用RT-PCR（逆转录聚合酶链反应）来检测特定基因的mRNA水平。
二、间接方法1.功能鉴定：通过检测细胞的特定生物学功能来鉴定细胞的特性。
例如，使用CFU-GEMM（巨噬细胞-粒系-巨核细胞）分析来鉴定造血干细胞。
2.分化潜能鉴定：通过检测细胞向不同细胞类型分化的潜能来鉴定干细胞。
例如，使用胚胎体外培养（EB）法来鉴定胚胎干细胞的多向分化潜能。
3.遗传学鉴定：通过染色体分析或SNP分析等遗传学方法来鉴定细胞的遗传特性。
例如，通过染色体核型分析来鉴定细胞的倍性和染色体异常情况。
以上方法在干细胞培养中可以互相结合使用，以鉴定细胞的特性和状态。
同时，为了确保细胞的鉴定结果的准确性，还需要采取一系列措施来避免污染和非特异性反应。
干细胞检测标准
干细胞检测标准通常是由专业的医学和生物学机构或政府部门制定和监管的，以确保干细胞疗法的安全和有效性。
这些标准可能会根据不同的应用和国家而有所不同，但通常包括以下方面：
1. 干细胞源的鉴定：确定干细胞的来源，包括胚胎干细胞、诱导多能干细胞（iPSCs）或成体干细胞。
这涉及到严格的质控和身份验证，以确保所使用的细胞是干细胞。
2. 干细胞纯度：确保细胞样本中干细胞的纯度，以减少其他细胞类型的污染。
3. 干细胞培养和扩增：确定干细胞在体外培养和扩增过程中的质量控制标准，包括培养条件、培养基配方、细胞生长率等。
4. 功能性评估：评估干细胞是否具备预期的功能特性，这可能涉及到体外和体内的功能试验，以确保其适用于特定治疗目的。
5. 安全性评估：评估干细胞治疗的安全性，包括细胞潜在的不良影响和免疫反应。
6. 质量控制和质量保证：确保干细胞制备过程中的一致性和可追溯性，以及质量控制标准的实施，以防止污染或细胞不稳定性。
7. 临床试验：如果干细胞治疗计划用于临床试验或治疗，那么需要遵循国家和国际的临床试验标准和法规。
需要注意的是，干细胞治疗领域不断发展，相关标准和法规可能会随着科学研究和技术进步而发生变化。
因此，针对具体的干细胞治疗项目，您应该咨询专业的医疗机构或监管机构，以获取最新的检测标准和法规信息。
此外，确保从受许可的实验室或诊所获得干细胞治疗，以确保安全性和合法性。
动物干细胞实验报告
一、实验目的1. 探讨动物干细胞在生物学研究和临床应用中的潜力。
2. 学习动物干细胞分离、培养和鉴定等基本实验技术。
3. 分析动物干细胞在不同培养条件下的生长特性。
二、实验原理动物干细胞是一类具有自我更新和分化能力的细胞，能够分化成多种细胞类型。
动物干细胞的研究在再生医学、疾病治疗和药物研发等领域具有广泛的应用前景。
本实验主要涉及以下原理：1. 干细胞的自我更新：干细胞具有自我更新的能力，能够通过有丝分裂产生更多的干细胞。
2. 干细胞的分化：干细胞在特定信号的作用下，可以分化成特定类型的细胞。
3. 干细胞的鉴定：通过检测干细胞表面标志物和功能特性，可以鉴定干细胞的类型。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠、大鼠或兔等。
2. 培养基：DMEM/F12、DMEM、RPMI-1640等。
3. 细胞因子：表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、胰岛素、转铁蛋白、硒等。
4. 试剂：胰蛋白酶、抗凝剂、磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、DMSO、抗生素等。
5. 仪器：超净工作台、离心机、显微镜、酶标仪等。
四、实验方法1. 动物干细胞分离：（1）取实验动物的组织（如肝脏、骨髓等），用胰蛋白酶消化组织细胞。
（2）收集消化后的细胞悬液，用抗凝剂处理，离心分离细胞。
（3）用PBS洗涤细胞，调整细胞浓度。
2. 动物干细胞培养：（1）将分离得到的细胞接种于培养瓶中，加入含细胞因子的培养基。
（2）将培养瓶置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
（3）定期更换培养基，观察细胞生长情况。
3. 动物干细胞鉴定：（1）通过检测干细胞表面标志物（如CD34、CD44、CD90等）来鉴定干细胞的类型。
（2）通过检测干细胞的功能特性（如细胞增殖、分化等）来鉴定干细胞的活性。
4. 动物干细胞生长特性分析：（1）采用MTT法检测细胞增殖情况。
（2）采用集落形成实验检测细胞克隆形成能力。
（3）通过流式细胞术检测细胞表面标志物和功能特性。
干细胞实验室实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握干细胞的基本特性及其分离、培养方法。
2. 学习干细胞体外增殖和诱导分化的实验技术。
3. 了解干细胞在疾病治疗和生物医学研究中的应用前景。
二、实验原理干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，是生物体内重要的组织修复和再生来源。
本实验主要采用流式细胞术分离人外周血中的CD34+干细胞，并在体外进行培养和诱导分化。
三、实验材料与试剂1. 试剂：DMEM培养基、FBS、胎牛血清、CD34+抗体、CD34+抗体-PE、Annexin V-FITC、流式细胞术分析试剂等。
2. 仪器：流式细胞仪、倒置显微镜、CO2培养箱、离心机、移液器等。
3. 样本：人外周血。
四、实验步骤1. 外周血采集与分离- 采集人外周血5ml，加入肝素抗凝。
- 使用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心，分离单个核细胞。
2. CD34+干细胞的分离- 将分离的单个核细胞重悬于DMEM培养基中，加入CD34+抗体-PE，室温孵育30分钟。
- 加入Annexin V-FITC，室温孵育10分钟。
- 流式细胞术分析CD34+干细胞。
3. CD34+干细胞的培养- 将分离的CD34+干细胞重悬于DMEM培养基+FBS，置于CO2培养箱中培养。
- 每2-3天更换培养基。
4. 干细胞体外增殖- 在干细胞培养第3天，进行传代培养。
- 每2-3天更换培养基，观察细胞生长情况。
5. 干细胞诱导分化- 将增殖后的干细胞进行诱导分化实验。
- 分别诱导成骨、成脂、成软骨等方向。
6. 观察与结果分析- 使用倒置显微镜观察细胞形态变化。
- 利用流式细胞术检测细胞表型变化。
五、实验结果与分析1. CD34+干细胞的分离- 流式细胞术结果显示，CD34+干细胞比例为2.5%。
2. 干细胞培养- CD34+干细胞在体外培养过程中，细胞形态呈圆形，增殖良好。
3. 干细胞诱导分化- 成骨诱导实验：细胞形态发生改变，出现骨基质沉积。
- 成脂诱导实验：细胞形态发生改变，出现脂滴形成。
人骨髓间充质干细胞的培养与鉴定
人骨髓间充质干细胞的培养与鉴定目的分离培养人骨髓间充质干细胞（human bone marrow-derived mesenchymal stem cells，hBMSCs），体外观察其生长特性。
方法采用密度梯度离心结合贴壁培养法自脐血中分离间充质干细胞，倒置显微镜下观察其形态及生长情况；流式细胞仪分析细胞周期并检测细胞表面标志物。
结果纯化的hBMSCs 贴壁生长，呈均一梭形，具有较强的增殖能力，流式细胞仪分析P3代hBMSCs 稳定表达间充质干细胞表面抗原标志CD73，CD90和CD105等。
结论本实验分离培养的hBMSCs具有较强的增殖能力，表达间充质干细胞的表面标记。
Abstract：Objective To isolate and culture human bone marrow derived mesenchymal stem cells（hBMSCs），and to observe biological characteristics of hBMSCs. Methods Bone marrow mononuclear cells were separated by the method of density gradient centrifugation and MSCs were obtained by adhere culture.The cell morphology and their growth characteristics in vitro were observed under an inverted phase contrast microscope and the cell cycles were tested by flowing cytometry. Mesenchymal like stem cells were identified by surface marker with flow cytometry.Results hBMSCs were adhered like a fibroblast morphology and with pool like growth alinement.Flow cytometry showed that the third passage cells were positive for CD73，CD90and CD105 expression.Conclusion The MSCs from bone marrow in this study show great capability of proliferation.Key words：Bone marrow mesenchymal stem cells；Separation；Culture and identification间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是来源于中胚层的具有多向分化潜能的干细胞。
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ESC（胚胎干细胞）鉴定检测
• 染色体结构
核型分析：正常稳定的二倍体核型，小鼠（40， XX/ XY) 。
不随传代次数而改变。
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ESC（胚胎干细胞）鉴定检测
• 核型分析：显色技术
小鼠ES核型分析：40，XY
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ESC（胚胎干细胞）鉴定检测
• 全能性
体内分化：畸胎瘤实验 体外分化：EB（拟胚体）形成实验
• 细胞汇合度的判断
• 传代消化时间的控制 • 接种密度的控制
培养体系的选择
12
扩增传代-细胞汇合度的判断(MSC)
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扩增传代-消化时间的控制(MSC)
细胞消化15s
细胞消化35s
细胞消化55s
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扩增传代-接种密度的控制
不同物种、细胞类型之间接种密度有差异
MSC、ADSC：2×104/cm2~4×104/cm2
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培养体系的选择
干细胞的研究和利用过程中，最主要的提供最适生长环境，保持培养开始时细胞群 体的状态，这就要求培养条件始终如一，近乎呆板地坚守细节和常规。
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干细胞饲养员必备素质-细节决定成败
无菌意识，重中之重
• 规范化的无菌操作
超净台取用物品摆放、操作时细节问题 • 环境的控制
培养箱的定期消毒、水浴锅定期换水、大环境的控制等
解析：干细胞的培养与鉴定
产品经理：施真
主要内容
1. 干细胞原代提取及鉴定
2.干细胞培养体系与操作细节的重要性 3.OricellTM系列干细胞产品及售后服务
2
原代培养过程
3
原代取材
组织来源（个体年龄、健康状况）
BMSC、ADSC：成人（18-45周岁）、大鼠和小鼠（4周龄）、兔和狗（1-3 周龄） NSC：大鼠（孕龄14.5天的胚胎）；小鼠（孕龄12.5天的胚胎） ESC：小鼠（见栓后3.5天的孕鼠）
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NSC（神经干细胞）鉴定检测
Rat NSC nestin staining
Mouse NSC nestin staining
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NSC（神经干细胞）鉴定检测
分化能力
• 自然分化 加入含血清培养液，继续培养约7天，可分化为神经元、星型胶质细胞及 少突胶质细胞。三者的分化比例约为(16±7)%， (75±7)%和( 5±3)%。 • 定向分化
生物试剂使用前仔细阅读产品说明书 操作干细胞时动作轻柔
• 复苏、传代、冻存等步骤重悬细胞的过程
培养基使用前复温、细胞接种之后摇匀、各种干细胞
接种密度的控制、试剂保存时避免反复冻融等
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OricellTM系列干细胞产品及售后服务
干细胞
细胞培养耗材、分子耗材
培养基 冻存液
细胞因子
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干细胞相关试剂及耗材
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MSC（间质干细胞）鉴定检测
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MSC（间质干细胞）鉴定检测
• 诱导分化能力鉴定：成骨诱导（茜素红染色）
诱导前（汇合度65%-70%）
染色前
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成骨诱导
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MSC（间质干细胞）鉴定检测
• 诱导分化能力鉴定：成脂诱导（油红O染色）
诱导前（融合度90-95%）
成脂染色前
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MSC（间质干细胞）鉴定检测
NSC（神经干细胞）鉴定检测
少突胶质细胞方向分化（OSP Staining）
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ESC（胚胎干细胞）鉴定检测
形态学：集落样或克隆样生长 特异性转录因子/抗原表达：表达OCT-4，Nanog； SSEA种属间表达有差异 染色体结构：传代过程中保持正常稳定的核型
全能性：具有向胚胎的三个胚层来源的所有细胞分化 的能力
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神经干细胞（NSC）
广泛存在于成年或胚胎哺乳动物大脑内
可分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞。
6
胚胎干细胞（ESC）
胚胎干细胞(embryonicstemcellES, 细胞)是指胚泡期 的内细胞团中分离出的尚未分化的、能在体外培养、 具有发育全能性的早期胚胎细胞 无限增殖、自我更新
NSC：1.0-2.0×105cells/mL
ESC：1×104/cm2~2×104/cm2
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纯化鉴定
纯化方法：多次传代进行纯化 常规检测：细菌、真菌检测；支原体检测；内毒素检测； 鉴定检测：增殖能力、生长形态、特异性抗原表达、核型 分析、诱导分化能力等
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常规检测
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鉴定检测共通项目
50 40 30 20 10 0 1 2 3 4
Day
5
6
7
细胞倍增的时间区间即细胞对数生长期，细胞传代、实验等多应在此 区间进行。可在细胞生长曲线的对数生长期找出细胞增加一倍所需的 时间，即倍增时间。
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MSC（间质干细胞）鉴定检测
形态学 表面抗原标记 多向分化能力
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MSC（间质干细胞）鉴定检测
大鼠神经干细胞-贴壁培养
小鼠神经干细胞-悬浮培养
小鼠神经干细胞-贴壁培养
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NSC（神经干细胞）鉴定检测
特异性抗原表达
• Nestin (神经干细胞标志物)阳性表达率≥75%
• β3-tubulin（神经元标志物）阳性表达率 ≤10%
• GFAP (星形胶质细胞标志物)阳性表达率≤10% • GalC或OSP（少突胶质细胞标志物）阳性表达率≤10%
• 试剂： Ficoll淋巴细胞分离液，分离出密度在1.077±0.001g/L
之间的淋巴细胞
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密度梯度离心法
• • • • • • • • 用 1xPBS 按照 1：1 的比例稀释骨髓； 稀释后的骨髓沿离心管壁缓慢铺到淋巴细胞分离液上； 离心； 离心完毕，小心吸取中间云雾状单个核细胞层； 离心，加入培养基重悬接种； 3天之后首次换液； 其后，每隔2-3天换液； 待细胞到80%融合的时候进行传代。
1.神经元方向分化：用无血清无生长因子诱导液诱导，可使分化比例升至
60%以上。 2.少突胶质细胞分化：加入T3或insulin可使分化比例大大提高。
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NSC（神经干细胞）鉴定检测
Rat NSC 神经元方向分化（Tubulin Staining)
星型胶质细胞方向分化（GFAP Staining)
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Hale Waihona Puke 产品售后服务内容51
售后技术支持服务
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贴心咨询服务
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完善的售后质量保障服务
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ESC（胚胎干细胞）鉴定检测-形态学
小鼠ES：紧密牢固结合、 多层密集立体生长，呈堆 积状，边缘清楚，细胞核 大、核仁明显、核浆比高。 有MEF 无MEF，无血清培养体系
人ES：相对松散、扁平 状集落,集落内细胞界限 隐约可见
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ESC（胚胎干细胞）鉴定检测
• 特异性表达
抗原 人ES 小鼠ES Oct-4 + + Nanog + + SSEA-1 — + SSEA-3 + — SSEA-4 + —
分子生物学耗材（ Labcon系列）
全美进口●55周年历史●FDA/USP认证
• • • • 吸头 微量离心管 PCR产品系列 储样管、储样架等
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细胞治疗用细胞因子
Cyagen团队特别针对免 疫细胞、干细胞培养开发的 一系列SCTSTM高活性细胞因 子产品，拥有高活性、高纯 度、高稳定性、无热源、无 外源因子污染等特点，更适 合干细胞、再生医学、免疫 学等研究使用。 常见治疗用细胞因子： IL-1α、IL-2、IL-4、IL-7 、IL-12、IL-15、GM-CSF、 IFN-γ、TNF-α
• 形态学:梭形、成纤维样细胞 原代：克隆样生长 传代后：均质、旋涡状排列
Human
Rat
Mouse
Dog
Monkey
Rabbit
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MSC（间质干细胞）鉴定检测
• 表面抗原标记（流式鉴定）： MSCs属混杂细胞群，其表面抗原也具有非专一性,
它表达了间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志，如粘附因子、生长因子和细 胞因子受体以及整合素家族等。
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贴壁筛选法
• 取大鼠/小鼠的后肢股骨和胫骨； • 用1mL注射器吸入培养基后冲洗骨髓腔，将骨髓全部冲洗出来； • 骨髓悬液进行离心； • 弃上清，用培养基重悬细胞，接种到1个T25或者T75培养瓶中； • 3天后换液，以后每隔2-3天换液，待细胞80-90％融合时传代。
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扩增传代
传代时机的控制（MSC为例）
可分化为三个胚层来源的各种组织及细胞类型
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分离细胞
分离方法的选择 • BMSC：密度梯度离心法（人、猴、狗） 贴壁筛选法（大鼠、小鼠、兔） • ADSC：胶原酶消化法 • NSC：无血清培养基自然筛选法
• ESC：囊胚内细胞团迁移法
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密度梯度离心法
• 密度梯度离心法：不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离 心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域 上形成区带的方法。
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OricellTM系列无蛋白非程序冻存液
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OricellTM系列耗材
细胞培养耗材的选择
• 干细胞培养板、培养瓶 （特殊TC处理表面，更适用于干细胞的贴壁培养） • 神经元/神经干细胞培养板 （多肽包被，无需PLL/Laminin预处理，保存时间长） • 15ml、50ml离心管 （透明度更高、耐更高转速）
取材部位
BMSC：髂骨或胸骨、后肢股骨和胫骨 ADSC：抽脂手术的脂肪组织或腹股沟 NSC：胚胎大脑GE区 ESC：囊胚内细胞团
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间质干细胞（MSC）