血吸虫的检测与血吸虫病的诊断_高艳春
血吸虫病诊断标准
血吸虫病诊断标准（WS261-2006）1 范围本标准规定了血吸虫病的诊断依据、诊断原则、诊断标准和鉴别诊断。
本标准适用于全国各级疾病预防控制机构和医疗机构对血吸虫病的诊断。
2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准：2.1血吸虫病是由血吸虫寄生于人体内所引起的寄生虫病。
在我国特指日本血吸虫病，是由日本血吸虫寄生于人和哺乳动物体内所引起的疾病。
2.2急性血吸虫病由于人在短期内一次感染或再次感染大量血吸虫尾蚴而出现发热、肝脏肿大及周围血液嗜酸粒细胞增多等一系列的急性症状。
潜伏期大多为30d～60d，平均约41.5d。
2.3慢性血吸虫病是指人体经常接触疫水或少量多次感染血吸虫尾蚴使临床表现较轻，或无症状、体征。
急性血吸虫病未治愈者，也可演变为慢性血吸虫病。
2.4晚期血吸虫病是指出现肝纤维化门脉高压综合征，严重生长发育障碍或结肠显著肉芽肿性增殖的血吸虫病患者。
病人由于反复或大量感染血吸虫尾蚴，未经及时、彻底的治疗，一般经过2年～10年的病理发展过程，可演变成晚期血吸虫病。
3.1流行病学史（参见附录A）3.1.1发病前2周至3个月有疫水接触史。
3.1.2居住在流行区或曾到过流行区有多次疫水接触史。
3.2临床表现（参见附录A）3.2.1发热、肝脏肿大及周围血液嗜酸粒细胞增多为主要特征，伴有肝区压痛、脾脏肿大、咳嗽、腹胀及腹泻等。
3.2.2无症状，或间有腹痛、腹泻或脓血便。
多数伴有以左叶为主的肝脏肿大，少数伴脾脏肿大。
3.2.3临床有门脉高压症状、体征，或有结肠肉芽肿或侏儒表现。
3.3实验室检测3.3.1下列试验至少有一种反应阳性（见附录B）3.3.1.1间接红细胞凝集试验。
3.3.1.2酶联免疫吸附试验。
3.3.1.3胶体染料试纸条法试验。
3.3.1.4环卵沉淀试验。
3.3.1.5斑点金免疫渗滤试验。
3.3.2粪检找到血吸虫虫卵或毛蚴（见附录C）。
3.3.3直肠活检发现血吸虫虫卵（见附录C）。
3.4吡喹酮试验性治疗有效4 诊断原则根据流行病学史、临床表现及实验室检测结果等予以诊断。
血吸虫病诊断标准和处理-中国疾病预防控制中心
血吸虫病诊断标准及处理原则GB 15977—1995根据《中华人民共和国传染病防治法》及《中华人民共和国传染病防治法实施办法》制定本标准。
1 主题内容与适用范围本标准规定了各期血吸虫病的诊断标准，治疗方法及防治原则。
本标准适用于疫区专业机构开展血吸虫病防治工作和全国各级各类医疗卫生机构对血吸虫病患者的诊治。
2 诊断原则根据疫水接触史，结合发热、腹泻、肝肿大、肝纤维化门脉高压等主要症状、体征及寄生虫学检查，血清免疫学检查，血象检查结果等，予以诊断。
3 诊断标准3.1 急性血吸虫病3.1.1 发病前2周至3个月有疫水接触史。
3.1.2 发热、肝脏肿大与周围血液嗜酸粒细胞增多为主要特征，伴有肝区压痛、脾肿大、咳嗽、腹胀及腹泻等。
3.1.3 粪检查获血吸虫卵或毛蚴(详见附录A)。
3.1.4 环卵、血凝、酶标、胶乳等血清免疫反应阳性(环卵沉淀试验环沉率≥3％及(或)间接血凝滴度≥1∶10，酶标反应阳性，胶乳凝集试验滴度≥1∶10)(详见附录B)。
疑似病例：具备3.1.1与3.1.2。
确诊病例：疑似病例加3.1.3。
临床诊断：疑似病例加3.1.4。
3.2 慢性血吸虫病3.2.1 居住在流行区或曾到过流行区有疫水接触史。
3.2.2 无症状，或间有腹痛、腹泻或脓血便。
多数伴有以左叶为主的肝脏肿大，少数伴脾脏肿大。
3.2.3 粪检查获血吸虫卵或毛蚴，或直肠活检无治疗史者发现血吸虫卵，有治疗史者发现活卵或近期变性虫卵(详见附录A)。
3.2.4 无血吸虫病治疗史或治疗3年以上的病人，环卵沉淀试验环沉率≥3％及(或)间接血凝试验滴度≥1∶10，酶标反应阳性，胶乳凝集试验滴度≥1∶10；未治或治后1年以上的病人血清血吸虫循环抗原阳性(详见附录B)。
疑似病例：具备3.2.1与3.2.2。
确诊病例：疑似病例加3.2.3。
临床诊断疑似病例加3.2.4。
3.3 晚期血吸虫病3.3.1 长期或反复的疫水接触史，或有明确的血吸虫病治疗史。
血吸虫ppt课件
症的发生。
药物治疗需要在医生的指导下 进行，根据患者的病情和身体 状况制定个性化的治疗方案。
药物治疗过程中需要注意药物 的副作用和不良反应，及时调
整药物剂量和种类。
支持治疗
支持治疗是在药物治疗的基础上，为患者提供必要的营养、休息和护理，以提高患 者的身体状况和免疫力。
PART 03
血吸虫病的预防与控制
控制传染源
及时发现和治疗血吸 虫病患者，以降低传 染源的传播风险。
对患者进行治疗后， 应采取措施防止再次 感染。
对患者进行治疗后， 应定期进行复查，确 保治愈。
切断传播途径
避免接触可能含有血吸虫尾蚴的 水体，如池塘、河流、湖泊等。
在接触水体时，应穿戴防护服、 手套、鞋袜等个人防护用品。
血吸虫对人类和动物的危害
对人类的危害
血吸虫病是一种严重危害人类健康的寄生虫病。感染后，患者会出现发热、腹 痛、腹泻、脓血便等症状。长期感染可能导致肠道病变、肝硬化、门脉高压等 疾病，甚至危及生命。
对动物的危害
血吸虫病对家畜和野生动物也有很大的危害。感染后，动物会出现消瘦、贫血 、生长发育受阻等症状，严重时甚至死亡。血吸虫病对畜牧业和野生动物保护 工作造成了很大的影响。
2023-2026
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症状总结
慢性血吸虫病病程较长，可表现为长 期间断性腹泻、脓血便、贫血、消瘦 等症状。
诊断方法
慢性血吸虫病的诊断需要进行多次粪 便检查，寻找虫卵。同时，抗体检测 和肠镜检查也有助于明确诊断。
晚期血吸虫病的症状与诊断
症状总结
晚期血吸虫病病情严重，可出现腹水、巨脾、门脉高压等严重并发症。
牛血吸虫病的诊断、治疗及预防
疫病防治ＬＩＶＥＳＴＯＣＫＡＮＤＰＯＵＬＴＲＹＩＮＤＵＳＴＲＹＮｏ．１１，２０２３牛血吸虫病的诊断、治疗及预防方德成天峻县木里镇畜牧兽医站，青海天峻８１７２９９摘 要 牛血吸虫病是一种由血吸虫感染引发的传染性疾病，具有传播速度快、致死率高等特征，可严重影响肉牛健康生长。
疫病检测部门可根据牛血吸虫病的发病经过和临床表现，通过实验室诊断法，确定肉牛是否感染了血吸虫病。
同时，养殖人员应结合养殖区的规模和实际情况，制定科学合理的预防方案，如实施封洲禁牧措施、建设沼气池、加大血吸虫病的宣传力度、制定严格合理的管理制度和加强饲养管理等方式，有效降低血吸虫病的发病率。
关键词 牛血吸虫病；诊断；治疗；预防措施ｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８ ０４１４．２０２３．１１．０１８ 引言牛血吸虫病又被称为日本分体吸虫病，主要是由日本血吸虫寄生引发的一种传染性疾病。
该病主要在我国的长江流域及以南地区流行，具有传播速度快、致死率高等特征，可严重影响肉牛健康生长。
该寄生虫的中间宿主主要是钉螺。
牛血吸虫病的发病时间有一定的季节性，夏秋季气温偏高的时候最易发生，并且该病对犊牛的危害更大，因为犊牛的免疫力弱，一旦感染上，死亡率高达９０％。
血吸虫的成虫会寄生在患病牛的主静脉和肠系膜小静脉内，随着时间的推移会产生大量虫卵，这些虫卵会顺着血液进入到病牛的其他组织器官中从而引起病变，且会随着病牛的粪便排出体外，威胁其他健康牛的生命安全。
发病牛群的临床表现感染血吸虫病的肉牛有慢性和急性２种情况。
其中，慢性感染的主要临床特征为结肠发生病变、肠道变窄等；急性感染的主要临床症状为发高烧、肝脏明显肿大、粪便带血。
血吸虫病的发病后期会表现出肝硬化、腹中严重积水、静脉扩张、贫血等，对患病牛的粪便进行检测方可最终确诊。
大多数动物感染血吸虫病的临床症状都相似，其中牛感染的情况最为严重。
病理变化通过观察发现，病死肉牛消瘦，供血严重不足，将其进行解剖，观察到其皮下脂肪严重萎缩，肝脏肿大且上面有灰白色或黄色的沙粒状结节。
血吸虫病的检查项目有哪些？
血吸虫病的检查项目有哪些？
检查项目：血吸虫皮内试验、血吸虫胶乳凝集试验、血吸虫斑点酶联免疫吸附试验、血吸虫酶联免疫吸附试验、血吸虫间接血凝试验、便常规、肠镜、血吸虫环卵沉淀试验、血吸虫抗体、血清免疫球蛋白（Ig）
1.病原检查从粪便内检查虫卵或孵化毛蚴以及直肠黏膜活体组
织检查虫卵。
（1）直接涂片法重感染地区病人粪便或急性血吸虫病人的黏液血便中常可检查到血吸虫虫卵，方法简便，但虫卵检出率低。
（2）毛蚴孵化法可以提高阳性检出率。
（3）定量透明法用作血吸虫虫卵计数。
（4）直肠黏膜活体组织检查慢性及晚期血吸虫病人肠壁组织增厚，虫卵排出受阻，故粪便中不易查获虫卵，可应用直肠镜检查。
2.免疫检查（1）皮内试验（IDT）一般皮内试验与粪检虫卵阳性的符合率为90%左右，但可出现假阳性或假阴性反应，与其他吸虫病可产生较高的交叉反应；并且病人治愈后多年仍可为阳性反应。
此法简便、快速、通常用于现场筛选可疑病例。
（2）检测抗体血吸病人血清中存在特异性抗体，包括IgM、IgG、IgE等，如受检者未经病原治疗，而特异性抗体呈阳性反应，对于确定诊断意义较大；如已经病原治疗，特异性抗体阳性，并不能确定受检者体内仍有成虫寄生，因治愈后，特异性抗体在体内仍可维持较长时间。
（3）检测循环抗原由于治疗后抗体在宿主体内存留较长时间，其阳性结果往往不能区分现症感染和既往感染，也不易于评价疗效。
循环抗原是生活虫体排放至宿主体内
的大分子微粒，主要是虫体排泄、分泌或表皮脱落物，具有抗原特性，又可为血清免疫学试验所检出。
从理论上讲，CAg的检测有其自身的优越性，它不仅能反映活动性感染，而且可以评价疗效和估计虫种。
血吸虫病的免疫学检验方法分析
血吸虫病的免疫学检验方法分析目的：分析总结血吸虫病的几种免疫学检验方法，从而提高血吸虫病的免疫学诊断准确率。
方法：以血吸虫尾蚴和虫卵作为抗原的尾蚴膜试验和环卵沉淀试验。
结果：本实验具有较高敏感性。
结论：检测血吸虫的各种试验成为临床辅助诊断的有效手段，在流行病学调查中尤具重要作用。
标签：血吸虫病；免疫学检验；细胞在血吸虫病的免疫学诊断中，除试用过几乎所有的各种免疫学检验方法外，还有以血吸虫尾蚴和虫卵作为抗原的尾蚴膜试验和环卵沉淀试验。
敏感性、特异性较高且使用广泛的主要的试验方法有皮内试验、环卵沉淀试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验。
1 资料与方法1.1 一般资料为Ⅰ型变态反应试验。
当经皮内注入血吸虫抗原时，抗原与相应IgE抗体结合，引起肥大细胞和嗜碱粒细胞脱颗粒，释放组织胺使毛细血管扩张，血管壁通透性增强，出现丘疹和红晕等反应。
成熟虫卵内毛蚴的分泌排泄物具有良好的抗原性，它从虫卵内渗出后；如与血吸虫感染者的血清作用时，可在虫卵周围形成特异性沉淀物。
用可溶性血吸虫卵抗原致敏的绵羊红细胞与患者血清中的相应抗体，可呈现凝集反应。
同间接ELISA，用日本血吸虫卵可溶性抗原包板，检测血清标本中的抗体。
1.2 方法1.2.1 国内供应的血吸虫皮试抗原有2种。
一种为1∶8 000成虫干粉冷热浸抗原，另一种为1∶3 000新鲜成虫匀浆抗原。
按无菌操作用结核菌素注射器，26号皮试针头于受试者前臂屈侧面注入血吸虫抗原0.03 ml。
亦可用一直径0.5 cm的印章在前臂做一印记，注入抗原布满整个圆面积，注射量相当于0.03 ml。
15 min后观察结果，测量丘疹的最大直径，凡等于或大于0.8 cm即为阳性反应[1]。
1.2.2冰冻干燥或热处理超声血吸虫卵国内有成品供应。
1.2.2.1 用熔化的石蜡在洁净的载玻片上划两条相距约20 mm的直线，在蜡线之间滴加受试者血清2滴。
1.2.2.2 用针尖挑取干卵100～150个加入血清中，混匀，覆盖24 mm×24 mm 盖玻片，盖玻片四周围石蜡密封。
血吸虫病诊断与鉴别诊断
日本血吸虫病临床表现
• 胸部X线片检查大多数有明显的肺实质病变， 胸部 线片检查大多数有明显的肺实质病变， 线片检查大多数有明显的肺实质病变 早期见两侧肺纹增加， 早期见两侧肺纹增加，继而肺出现散在性 点状浸润，边缘模糊，以中下部为多。 点状浸润，边缘模糊，以中下部为多。病 变一般在3～ 个月后逐渐消失 个月后逐渐消失。 变一般在 ～6个月后逐渐消失。偶见虫卵 沉积胃幽门部或胃底部粘膜下层， 沉积胃幽门部或胃底部粘膜下层，可见组 织增生，胃壁增厚、肉芽肿、息肉等改变， 织增生，胃壁增厚、肉芽肿、息肉等改变， 形成溃疡时， 形成溃疡时，常有呕血及幽门梗阻等引起 的临床表现，常可误诊为溃疡病或胃癌。 的临床表现，常可误诊为溃疡病或胃癌。 此外，偶见虫卵沉积皮肤、输卵管、 此外，偶见虫卵沉积皮肤、输卵管、子宫 颈、心包、胰腺、肾上腺、睾丸、付睾等 心包、胰腺、肾上腺、睾丸、 部位，引起局部病变。 部位，引起局部病变。
日本血吸虫病临床表现 • 中等型（Ⅱ度）腹水患者腹水较明显 中等型（ 腹围80～ ），能耐受水但不 （腹围 ～90cm），能耐受水但不 ）， 耐钠，对间歇应用利尿剂反应尚好， 耐钠，对间歇应用利尿剂反应尚好， 部分患者有低白蛋白血症， 部分患者有低白蛋白血症，少数病人 有低钠血症。重型（ 有低钠血症。重型（Ⅲ度）患者腹围 常＞90cm，腹水存在时间常在 月以 ，腹水存在时间常在3月以 无自发性利尿， 上，无自发性利尿，对利尿剂常无反 应，多数有低白蛋白血症，半数以上 多数有低白蛋白血症， 患者有低钠血症， 患者有低钠血症，可能有功能性肾功 能衰竭表现，对水与钠均不能耐受。 能衰竭表现，对水与钠均不能耐受。
慢性血吸虫病诊断标准 A. 有疫水接触史； 有疫水接触史； B. 无症征，或肝左叶肿大，间有腹痛，腹 无症征，或肝左叶肿大，间有腹痛， 泻或脓血 C. 粪便检查出虫卵或毛蚴，或直检查出虫卵， 粪便检查出虫卵或毛蚴，或直检查出虫卵， 有治疗史者应为近期变性虫卵或活虫卵。 有治疗史者应为近期变性虫卵或活虫卵。 D. 免疫学检测阳性。或有治疗史治后三年 免疫学检测阳性。 检测阳性，循环抗原检测阳性。 检测阳性，循环抗原检测阳性。 疑似病例： 疑似病例：A+B； ； 确诊病例： 确诊病例：A+B+C； ； 临床诊断：A+B+D； 临床诊断： ；
间插血吸虫病诊断与治疗PPT
Part Two
血吸虫病的诊断
临床表现
发热：体 温升高， 持续不退
腹痛：腹 部疼痛， 可能伴有 腹泻
肝脾肿大： 肝脏和脾 脏肿大， 可能伴有 黄疸
血尿：尿 液中出现 血丝或血 块
皮肤病变： 皮肤出现 红斑、瘙 痒等症状
呼吸困难： 呼吸急促， 可能伴有 咳嗽、胸 痛等症状
诊断依据
临床症状：发热、腹痛、腹泻、乏力等 实验室检查：血常规、尿常规、粪便常规等 影像学检查：X线、CT、MRI等 病原学检查：粪便虫卵检查、血清学检查等 流行病学调查：了解患者居住地、职业、生活习惯等 病理学检查：组织病理学检查等
保持良好的卫生 习惯，如勤洗手、 洗澡等
预后情况分析
治疗效果：早 期发现和治疗，
预后良好
注意事项：避 免接触疫水， 加强个人卫生
复发风险：治 疗后仍有复发 风险，需定期
复查
并发症：可能 出现肝硬化、 肠梗阻等并发 症，需及时治
疗
复发预防措施
定期复查：定期进行血吸虫病检测，及时发现复发迹象 保持卫生：保持个人卫生，避免接触污染水源 药物治疗：根据医生建议，按时服用抗血吸虫病药物 健康饮食：保持均衡饮食，增强免疫力
手术治疗
手术目的：切除病变部位，防止病情恶化 手术方法：开腹手术、腹腔镜手术等 手术风险：出血、感染、术后并发症等 术后护理：抗生素治疗、营养支持、定期复查等
支持治疗
营养支持：提供足够的营养， 增强免疫力
药物治疗：使用抗血吸虫药物， 如吡喹酮等
手术治疗：对于严重病例，可 能需要进行手术治疗
心理支持：对患者进行心理疏 导，减轻心理压力
保护易感人群
加强宣传教育，提高公众对血吸虫病的认识和防范意识 改善环境卫生，减少血吸虫病的传播途径 加强水源管理，防止血吸虫病通过水源传播 加强医疗保健，定期进行血吸虫病筛查和治疗
血吸虫病诊断方法及研究进展
血吸虫病诊断方法及研究进展长期以来，血吸虫病诊断研究，一直是血吸虫病研究的重点之一，并连续被列为国家医药卫生科技七五、八五、九五、十五攻关项目，成为血吸虫病防治中的热门课题。
血吸虫病的诊断一般可以分为临床诊断和实验诊断。
前者主要依据病史和体症，虽有一定参考价值，但往往缺乏足够的依据，不易和其他疾病相区别，难以确诊病人。
因此，必须依赖实验诊断，实验诊断可分为病原学诊断、免疫学诊断及其他辅助诊断方法。
一、病原学诊断研究进展（一）病原学诊断的地位传统的病原学检查方法，有粪检和直肠镜检。
尼龙绢集卵法、水洗沉淀法及改良加藤氏法等粪检方法，依然是基层疫区常用并首选的诊断方法。
粪检或无治疗史者直检，为确诊血吸虫病人的最好依据。
只要在受检者粪便中或未经治疗的患者活体组织内发现了血吸虫卵，即可确诊为血吸虫病人，是确定感染的最直接、最可靠的指标。
自从1903年Kasai氏首次在病人粪便中找到血吸虫卵以来，粪便检查一直是确诊血吸虫病和考核疗效常用的方法。
粪便检查主要包括两大内容即检查虫卵和孵化毛蚴两种方法。
检查虫卵：尼龙筛集卵法、沉淀法、透明法、改良加藤氏法；毛蚴孵化法：三角烧瓶法、塑料杯顶管法。
由于新中国成立以来，党和政府高度重视血吸虫病的防治工作，我国血防取得举世瞩目的成绩，无论是从病人的感染率或是感染度方面都显著下降，病人粪便中虫卵数大大减少，同其他检查方法比较，粪检的阳性率较低，漏诊多，因而改进粪检方法，提高粪检质量就一直是查病工作中的一个重要课题。
事实上，粪检方法随着血防工作形势的发展，一直在不断的改进和提高，大量的现场查病工作也积累了丰富的经验。
此外，血吸虫并非肠道内寄生虫，故非所有的虫卵都能随便排出，在粪便中查到的虫卵仅占雌虫产卵数的16%。
在成虫排卵前期或者是非排卵期，就缺乏诊断价值，粪检也就失去了意义。
而在发病后期，肠壁组织纤维增生，肠壁增厚，虫卵不易穿透肠壁而造成粪便中虫卵数减少，粪检时不易获得阳性结果而导致漏检。
血吸虫病诊断与鉴别诊断
日本血吸虫病临床表现
• 2．有症状者 以腹泻、腹痛为多见，日 1～2次，便稀、偶带血，重者有脓血便， 伴里急后重。常有肝脾肿大，早期以肝肿 大为主，尤以左叶为主。随着病情进展， 脾渐增大，一般在肋下2～3cm，无脾功 能亢进和门脉高压征象。但随病变进展， 每有乏力、消瘦、劳动力减退、进而发展 为肝纤维化。 • 胃与十二指肠血吸虫病很少见，多在 手术或胃镜检查活检发现虫卵而确诊。
日本血吸虫病临床表现
• 1．发热 急性患者都有发热。热度高低、 热型、热程及全身反应视感染轻重而异。 体温多数在38～40℃间，热型以间歇型为 多见、次为弛张型，午后升高，伴畏寒， 午夜汗出热退。无明显毒血症症状。但重 度感染者，高热持续不退，可有精神萎靡、 意识淡漠、重听、腹胀等，可有相对缓脉， 易误诊为伤寒。发热期限短者2周，重症患 者可长达数月，伴贫血、吸虫病诊断标准
A. 长期反复疫水接触史，可有治疗史。 B. 门脉高压，侏儒，结肠肉芽肿等。 C. 粪便检查发现虫卵或毛蚴，直检查出虫 卵。 D. 血清学检查阳性。 疑似病例：A+B； 确诊病例：A+B+C； 临床诊断：A+B+D；
日本血吸虫病临床表现
•
视病期、感染度、虫卵沉 积部位以及人体免疫应答的不 同，临床上可分为急性、慢性 和晚期三种类型以及异位损害。
日本血吸虫病临床表现
• 6．肾脏损害 少数患者有蛋白尿、 管型和细胞则不多见。动物实验提 示血吸虫病性肾炎与免疫复合物有 关。 • 急性血吸虫病病程一般不超过6个 月，经杀虫治疗后，患者常迅速痊 愈。如不治疗，则可发展为慢性甚 或晚期血吸虫病。
日本血吸虫病临床表现
• （二）慢性血吸虫病
流行区居民自 幼与疫水接触，小量反复感染绝大多 数表现为慢性血吸虫病。急性期患者 不经治疗或治疗不彻底亦可演变为慢 性甚或发展为晚期血吸虫病。 • 1．无症状患者 无任何症状或体征， 常于粪便普查或因其他疾病就医时发 现。
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血吸虫的检测与血吸虫病的诊断X高艳春,李爱菊,范小林,邱承洲,张熊禄,胡乔生(赣南师范学院现代分子科学与新材料技术研究所,江西赣州 341000)
摘 要:血吸虫的检测在血吸虫病的防治中具有极其重要的作用,总结了血吸虫不同生长期的检测方法和技术,并对其进行了评价分析和发展趋势的展望.关键词:血吸虫;检测方法;诊断中图分类号:R383.2+4 文献标识码:A 文章编号:1004-8332(2005)03-0007-05
在我国血吸虫主要分布在长江中下游一带及长江流域以南地区的江苏、浙江、湖南、湖北、安徽、江西、四川、云南、广东、广西、福建、上海等12个省、市、自治区的409个县(市、区)范围内.目前,全国钉螺分布面积达2.22万公顷,累计血吸虫病人1200多万例.全国以湖南岳阳、湖北荆州两个地区的血吸虫病流行最为严重.20世纪80年代中期,血吸虫病防治策略由消灭媒介螺蛳转向以化疗为主的综合性防治措施,由此血吸虫病的诊断工作愈显重要.寻找简洁迅速,准确灵敏,且具有考核疗效和防治效果以及监测疫情的检测方法,是当前迫切需要解决的问题.因此,综述前人对血吸虫的检测方法,对今后开发和研制新的检测方法和技术具有重要的理论价值和指导意义.1 血吸虫常见的检测方法1.1 粪便中血吸虫卵的检测方法因为血吸虫寄生在肠系膜血管内,所产生的卵要经过一定的过程才能到达宿主肠腔,随粪便排出,而入肝的虫卵就无从排出.所以血吸虫卵的检查就不易于作定量计数.可以用对血吸虫卵内成熟毛蚴的检查来弥补虫卵检查的不足.对粪便中血吸虫卵的检查可分为下列几种:厚涂片透明法[1] 厚涂片透明法也叫加藤法.取粪便置于载玻片上,用浸透甘油透明液的玻璃纸覆盖,
轻压.镜检时需特别注意与未受精蛔虫卵的鉴别.此法与常规直接涂片法相比可提高虫卵的检出率.改良加藤法[2、3] 该法对加藤法做了改进,以减少所需粪检量.Katz用长方形卡片纸,在纸片中心作一
6mm直径的小孔,置于玻片上,将经过筛滤过的粪便移入小孔中,然后移去纸片.Peters则将粪量减为20mg,涂片透明时间自24h缩短至15min.改良加藤法不仅降低了粪量,而且使时间缩短.过滤集卵镜检法 (1)定量集卵直检法[4]:取粪便置于网兜内搅拌荡洗后,移去网兜,将粪液倒入接有滤菌器的塑料针筒内滤过,然后取出尼龙网片置载玻片上直接镜检观察虫卵特征并统计虫卵数.定量集卵直检技术的敏感性高,虫卵检出率明显高于加藤法,与集孵法相当;并且该法检出的虫卵形态不变,结构清晰,很容易辨认,诊断准确.(2)改良滤纸集卵法[5]:用福尔马林和水将粪便稀释,然后取此稀释液在滤纸上过滤,冲去粪渣,将滤纸置于培养皿中,用水将滤纸打湿后镜检虫卵.检出的毛蚴呈紫色,卵壳不着色.该法可以保存滤纸留作记录,并可避免虫卵的散失,但其检出率较低.孵化法 孵化法就是将除去粪渣后的粪便沉淀进行孵化,使毛蚴在短时间内孵出,以达到检测血吸虫目的的一种方法.具体又分为:尼龙袋法[6]、顶管法[7]、集孵法与促孵法[8]等.该法检出率高于常规方法,但用时太长,工作量大.科技工作者对粪检操作的自动化也进行了研究.彭道仪等设计了S-B型手摇粪便荡洗机,其检测效果优于量杯沉淀法和尼龙袋集卵法.陈争等设计了血吸虫病粪检球击集卵机,将装有大便标本的尼龙袋和瓷球装进滚桶,洗净色素而虫卵存留袋内[9].1.2 组织内虫卵检测法[10]
2005年 赣南师范学院学报 l.3第三期 JournalofGannanTeachersCollege June.2005
X收稿日期:2005-05-1 修回日期:2005-05-16
基金项目:国家自然科学科学基金资助项目(50478117). 作者简介:高艳春(1980)),男,山东潍坊人,赣南师范学院化学与生命科学系2004级硕士研究生,主要从事血吸虫检测等方面的研究.成虫寄生在肠系膜静脉时,部分虫卵可随血流至肝等处,在肠组织内的部分虫卵可以排至外界.在病人患病后期,成虫虽继续排卵,但由于肠组织纤维增生的加重,虫卵出现于粪便的比例也相应地减少,因而检查存在组织内的虫卵亦不失为一种有效的检测方法.活体组织的选择和检测:直肠粘膜内组织检查 有如下几种方法:(1)组织钳夹取粘膜法:用直肠镜观察肠壁粘膜情况,选择有黄点或组织病变部位钳取组织粘膜.(2)刮检法:用直肠粘膜刮来刮取组织粘膜,刮检后仅有少量渗血,一般不需止血处理.与直肠粘膜活检法相比,该法阳性检出率虽略低,但检出活卵或近期变性卵的机会要高得多.(3)直肠显微镜检:用直肠显微镜的前后触夹住肠粘膜,在原位对肠粘膜进行检查[11].此法的优点为不损伤组织,安全方便.肝活组织检查 原理与直肠活组织检查相同,方法改为穿刺.本法给予病人的痛苦比直肠活组织检查大,且万一发生出血较难控制,故适用范围极窄.穿刺物除了作压片镜检外,也可作病理切片,借以了解病程及治疗后的恢复情况.这是肝穿刺的有利之处.1.3 皮试检测法[12]
按无菌操作,用皮试针于受试者前臂曲侧面注入抗原0.03mL.亦可用一直径0.5cm的印章,在前臂做一印记,注入抗原布满整个圆面积,相当于0.03mL.15min后观察结果,测量丘疹的最大直径,凡等于或大于0.8cm即为阳性反应.作为过筛方法,皮内反应的操作比较简便,观察结果也较简易快速,可节省大量人力和时间,故适用于现场调查.在基本消灭或接近基本消灭血吸虫病地区,对无血吸虫病史对象可用皮内反应过筛,皮试阳性者,再进一步检查.在与疫区毗邻的非疫区进行查病时,也可用皮内反应过筛,这样可以减少粪检数量.1.4 血清化验检测法血清的检测可通过下述反应和试验进行:尾蚴膜反应[13] 日本血吸虫活尾蚴与日本血吸虫病患者血清共同孵育,其体表能产生一个透明的套
膜.取受检者血清于玻片挑入尾蚴,置于孵箱.在有血吸虫感染的人或动物血清内,阳性反应表现为透明胶状物的形成.本法有较高的敏感性和特异性,具有早期诊断价值,据动物实验结果,感染后一周就可出现阳性反应.环卵沉淀反应[14] 成熟虫卵内渗出的抗原与血吸虫感染者的血清抗体相遇时就在虫卵周围形成特异
性沉淀物.环卵沉淀反应(COP或COPT)由Oliver-Gonzalez提出,嗣后一系列报道都证明该法有很高的敏感性和特异性,并且有评价疗效的价值.其主要方法有:组织内环卵沉淀反应[15]、酶联环卵沉淀反应(EL-COPT)[16].间接血凝试验[17] 将一系列倍比稀释血清加到血凝板上,并分别加入致敏细胞悬液,振荡,静置.以出
现凝集反应的最高稀释度为阳性反应终点.间接血凝试验由于有高度的敏感性和一定的特异性,并且器材简单,操作快速,可作为血吸虫病普查过筛流行病学调查的工具.间接血凝试验的早期诊断意义,在动物实验中亦已得到证实.胶乳凝集试验(LA)[18] 以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体,将抗原通过物理吸附或化学结合方法连结在颗
粒表面,作为抗原试剂.将此胶乳试剂1滴加入待测血清中,如有抗体存在则出现清晰凝集颗粒即为阳性反应.早期采用物理吸附法,制成的抗原批间差异大,反应重复性不佳,未能广泛应用.最近改用化学交联方法制成虫卵抗原胶乳试剂,克服了上述缺点,测试结果证明有较好的敏感性和特异性.酶免疫试验 (1)酶联免疫吸附试验(ELISA)[19]:Engvall等首先建立了酶联免疫吸附试验,他们把抗体或抗原吸附于聚苯乙烯试管壁上制成固相免疫吸附剂,用以测定抗原或抗体.Voller等改用聚苯乙烯微量反应板代替塑料管作为固相免疫吸附剂获得成功后,ELISA开始迅速得到推广和应用[20].ELLSA方法简易,试剂用量少,比较经济,适宜于自动化和大规模应用[21].(2)酶标记抗原对流免疫电泳(ELCIEP)[22]:将虫卵抗原标记上辣根过氧化物酶,然后将此抗原与受检血清进行常规的对流免疫电泳,最后用能产生沉淀的相应底物系统处理,产生有色的反应,借以检测标本中特异抗体的存在.当抗原与抗体孔间呈现明显的棕红色沉淀线为阳性反应.ELCIEP除对血吸虫病具有辅助诊断价值外,还具有与环卵沉淀反应相似的疗效考核价值.(3)酶联免疫方法还包括:斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)[23]、金黄色葡萄球菌A蛋白-酶联免
8 赣南师范学院学报 2005年疫吸附试验(SPA-ELISA)[24]、动力学-酶联免疫吸附试验(K-ELISA)[25]、亲和素-生物素酶联免疫吸附试验法(ABC-ELISA)[26]等.裘丽姝等报告用脲酶结合物和尿素-溴甲酚紫底物系统检测血吸虫病,阳性反应底物由黄色变为紫色,适合于目测法判断结果,其敏感性和特异性与用辣根过氧化物酶系统的一致[27].Hancook等介绍了一种快速ELISA测定法,称作FAST-ELISA.FAST-ELISA的敏感度和特异性都与常规ELISA相当[28].胶体金免疫层析法[29] 取待测血清加入试纸条的进样孔,置室温15min后观察结果.当检测线和对照
线均出现红色为阳性反应.该法具有操作简单、快速、特异、敏感和易保存的优点,适宜于门诊和农村地区现场查病.胶体染料试纸条法(DDIA)[30] 将待测血清和标记染料加入PVC小杯中,用试纸将其吸干后,观察结
果.当检测带与对照带均出现紫蓝色条带则为阳性[31].DDIA是近年研制的用染料标记的日本血吸虫可溶性虫卵抗原检测日本血吸虫病人血清抗体的方法,其操作简单、快速,并且具有较高的敏感性和特异性[32].现场应用表明DDIA适用于血吸虫病中、低度流行区大规模化疗对象筛查和血吸虫病传播阻断的考核[33、34].其他方法 其他血清反应方法还有荧光抗体测定法[35]、放射免疫测定法[36].1.5 循环抗原和免疫复合物的检测法酶联免疫吸附试验(双抗体夹心法)[37] 兔(羊)抗AwAj-TCAIgG用碳酸缓冲液配成溶液,用于包被
塑料板,孵育.用1%BSA-PBS将样本及结合物稀释,孵育.底物采用H2O2与5-氨基水杨酸混合液,底物于室温作用1h后以450nm读取OD.所有OD均减去同板空白的最高值,抗原滴度则以最终稀释度的OD显著高于阴性对照的倒数为终点.一只高度感染病兔血清用纯化的CAA标定后,作为已知抗原浓度的参考标准.125ICIq法检测循环免疫复合物 用血清与巴比妥缓冲盐水混合,加入125lClq和PEG孵育,离心,测沉淀中的放射性.本法属非特异性诊断方法.测定循环免疫复合物水平对免疫病理研究有参考价值.其他方法 用于检测循环抗原的方法还有琼脂扩散[39]、免疫电泳及补体结合试验[40]等,这些方法敏感度较低.2 血吸虫病的诊断2.1 诊断用抗原的应用长期以来,使用的诊断抗原主要是血吸虫和虫卵的整体固相或可溶性成分.由于这些粗抗原中含有其它寄生虫或宿主的共同成分,而影响到免疫诊断的特异性.因此,鉴定和分离特异性的抗原分子已成为80年代以来研究的主流.从血吸虫不同发育阶段的主要血清学抗原中分离抗原分子 (1)尿素溶解虫卵抗原[41]:Tsang等采用高浓度尿素对曼氏血吸虫卵离心后的残渣进行再提取,获得尿素溶解性的卵抗原成分,并证明在ELISA测定中此种抗原的活性和特异性优于可溶性虫卵抗原.继之又对日本血吸虫卵残渣做同样处理,也获得了好的结果.(2)成虫微粒体抗原[42]:薛海筹等对成虫微粒体抗原成分进行了研究,从日本血吸虫成虫匀浆中分离微粒体抗原.分得的成虫微粒体粗抗原(JAMA-C)与可溶性成虫抗原(JSAA)并进行抗原活力比较,证明前者的活力显著高于后者.裘丽姝等继而又对此抗原进行了提纯,所提纯的JAMA在K-ELISA测定中与血吸虫病患者血清显现出高的活力.在微量滴定板ELISA中也表现出高的敏感性和特异性.从异源生物的交叉成分中鉴定出有诊断价值的抗原 如KLH是一种从海洋贝类组织中纯化出来的与血吸虫各个发育阶段均具有共同抗原分子.经研究证明,KLH对血吸虫病早期诊断,区别急、慢性感染具有实用价值[43].重组抗原的应用 重组抗原是将确定的理想诊断分子制备出抗体,继而从表达文库中筛选出目的克隆基因,用DNA重组技术生产抗原.肖西志、于三科等应用重组的日本血吸虫组织蛋白酶L诊断日本血吸虫感染牛.虽然组织蛋白酶L在临床上的应用还需大量的实验来验证,但其临床应用前景仍十分看好[44].合成肽抗原的应用[45] 合成肽抗原系在天然抗原的表位特性化基础上进行.一般来说,用于免疫诊断