25 206-208 食品安全与检测 3 固相萃取-高效液相色谱法快速检测保健品中的枸橼酸西地那非
固相萃取-_液相色谱串联质谱法测定牛肉中多种磺胺类药物残留量
固相萃取-液相色谱串联质谱法测定牛肉中多种磺胺类药物残留量贾彩霞，周洁如，朱洪希，吴 旦（常州检验检测标准认证研究院，江苏常州 213000）摘 要：目的：建立牛肉中多种磺胺类药物残留量的检测方法。
方法：处理均质后的牛肉，用乙酸乙酯提取出目标物，用HLB小柱净化，氮吹，复溶。
以0.1%的甲酸甲醇与0.1%的甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，经T3色谱柱进行分离，采用离子源为电喷雾离子源，扫描方式为正离子扫描，检测模式为多反应监测，外标法定量。
结果：18种磺胺在2～200 ng·mL-1线性关系良好（r＞0.996），方法的检出限为2 μg·kg-1，定量限为10 μg·kg-1，加标回收率为64.87%～105.00%，相对标准偏差为1.6%～6.8%。
结论：本方法灵敏、准确，适用于牛肉中18种磺胺类药物的检测。
关键词：固相萃取；高效液相色谱-串联质谱；磺胺类药物；牛肉Determination of Sulfonamide Residues in Beef by Solid Phase Extraction-Liquid Chromatography-Tandem MassSpectrometryJIA Caixia, ZHOU Jieru, ZHU Hongxi, WU Dan(Changzhou Institute of Inspection and Testing Standards Certification, Changzhou 213000, China) Abstract: Objective: To establish a method for the determination of sulfonamides residues in beef. Method: The homogenized beef was treated, the target was extracted with ethyl acetate, purified by HLB column, nitrogen blowing, and redissolved. 0.1% formic acid methanol and 0.1% formic acid aqueous solution were used as mobile phase for gradient elution, and separated by T3 column. Ion source was used as electrospray ion source, scanning mode was positive ion scan, detection mode was multi-reaction monitoring, and quantitative method was external standard method. Result: The internal linear relationship of 18 sulfonamides was good (r＞0.996) in the range of 2～200 ng·mL-1. The limits of detection and quantification were 2 μg·kg-1 and 10 μg·kg-1. The recoveries were 64.87%～105.00% and the relative standard deviations were 1.6%～6.8%. Conclusion: The method is sensitive, accurate and suitable for the detection of 18 sulfonamides in beef.Keywords: solid phase extraction; high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; sulfonamides; beef兽药残留是指用药后蓄积或存留于畜禽机体或产品中原型药物或其代谢产物，包括与兽药有关的杂质残留[1]。
固相萃取-高效液相色谱法快速测定饮料中3种碱性橙含量
固相萃取 -高效液相色谱法快速测定饮料中 3种碱性橙含量摘要：目的：建立了一种固相萃取-高效液相色谱法快速测定饮料中的碱性橙2（chrysoidineG，CDG）、碱性橙21（orangeG，AOG）和碱性橙22（astrazonorangeR，AOR）共3种禁用色素添加剂的方法。
方法：样品采用C18-SPE小柱净化，洗脱液在35℃下用氮气吹至近干后用定容液溶解并定容，过有机相滤膜后在AgilentXDBC18色谱柱上，以20mmol·L-1的乙酸铵溶液和甲醇（体积比为35∶65）作为流动相进行分离，采用二极管阵列检测器（DAD）在449nm波长处检测CDG，在485nm波长处检测AOG及AOR，以外标峰面积法定量。
结果3种碱性橙染料在0.50～20.0mg·L-1浓度范围内线性关系较好，方法回收率为86.8%～96.5%，相对标准偏差均小于2%（n=6），方法的检出限为0.01mg·kg-1。
结论：本方法操作简便、快速、准确，可适用于美年达和芬达等橙色饮料中碱性橙的检测。
关键词：高效液相色谱法；固相萃取；碱性橙染料；饮料引言碱性橙染料是一类碱性工业染料，主要用于纺织品、木制品及皮革制品的染色，根据《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准》的相关规定，碱性橙染料是禁止用作食品添加剂的化学制品。
由于碱性橙染料比柠檬黄、日落黄等水溶性染料更易上色且不易褪色，因此一些不法商贩将碱性橙染料用于黄鱼、辣椒、饮料和腐竹等豆制品的染色，以次充好，严重危害消费者的身体健康。
食品中禁用的碱性橙染料主要有3种，包括碱性橙2（CDG）、碱性橙21（AOG）及碱性橙22（AOR）。
目前主要有高效液相色谱法（HPLC）、反相高效液相色谱法（RP-HPLC）[2]和超高效液相色谱-串联质谱法等检测方法。
食品检测的国家标准主要是GB/T23496-2009《食品中禁用物质的检测碱性橙染料高效液相色谱法》，该方法中对于饮料等液体样品的前处理方法操作时间长、过程易损失，碱性橙染料回收率不好。
固相萃取-高效液相色谱法检测食品中酸性大红GR
固相萃取-高效液相色谱法检测食品中酸性大红GR武传香;魏莉莉;薛霞;卢兰香;丁一;高敏;王骏;刘艳明【期刊名称】《中国食品添加剂》【年(卷),期】2024(35)3【摘要】建立了高效液相色谱法测定多种食品中非法染料酸性大红GR的分析方法,并对样品的提取溶剂、净化方式及色谱条件进行了优化。
样品采用1%氨化甲醇溶液提取,PWAX萃取柱净化浓缩,以10 mmol乙酸铵-甲醇为流动相,经TitankC18色谱柱分离,采用二极管阵列检测器测定。
结果显示,酸性大红GR在0.040〜10.00μg/mL线性关系良好(R2>0.999),检出限和定量限分别为0.025和0.10 mg/kg。
在阴性样品中添加0.10、0.20、1.00 mg/kg三水平加标,平均回收率为80.14%〜102.60%,相对标准偏差为1.08%〜4.29%。
通过与食品补充检验方法比较,验证了本方法测定辣椒制品、水产制品和饮料中酸性大红GR的准确性,同时对其他食品中酸性大红GR进行测定,结果证明该方法灵敏度高、回收率好,为食品安全的监管提供了技术支持。
【总页数】8页(P246-253)【作者】武传香;魏莉莉;薛霞;卢兰香;丁一;高敏;王骏;刘艳明【作者单位】山东省食品药品检验研究院;产业技术基础公共服务平台;国家市场监管重点实验室(肉及肉制品监管技术)【正文语种】中文【中图分类】TS207.3【相关文献】1.固相萃取．超高效液相串联质谱法同时测定食品中红色2G、酸性大红、酸性橙Ⅱ和酸性金黄G2.固相萃取-高效液相色谱法在食品中合成着色剂检测中的应用3.基于改性碳纳米管分散固相萃取吸附剂-高效液相色谱法检测酱菜中3种食品防腐剂4.基于新型磁性固相萃取材料结合高效液相色谱法检测食品中碱性橙Ⅱ和柠檬黄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定保健食品纳豆红曲茶多酚软胶囊中洛伐他汀的方法
高效液相色谱法测定保健食品纳豆红曲茶多酚软胶囊中洛伐他汀的方法季加才，孟凡荣（山东润达检测技术有限公司，山东潍坊 261000）摘 要：目的：本文建立高效液相色谱法测定保健食品中（以纳豆红曲茶多酚软胶囊为例）洛伐他汀的方法。
方法：样品经乙腈提取后，用液相色谱C18柱分离，二元流动相洗脱，238 nm波长下紫外检测器检测，测定精密度、准确度。
结果：洛伐他汀在10～200 μg·mL-1线性关系良好，相关系数＞0.999 9，相对标准偏差为0.62%。
当加标浓度为0.5 mg时，回收率为98.8%；当加标浓度为1.0 mg时，回收率为102.7%；当加标浓度为1.5 mg时，回收率为99.7%。
结论：本方法检测灵敏度高、操作简单、定性定量准确、针对性强，为纳豆红曲茶多酚软胶囊质量控制和深度开发提供了科学依据。
关键词：高效液相色谱法；洛伐他汀；纳豆红曲茶多酚软胶囊Determination of Lovastatin in Health Food Natto Monascus Tea Polyphenol Soft Capsules by High Performance LiquidChromatographyJI Jiacai, MENG Fanrong(Shandong Runda Testing Technology Co., Ltd., Weifang 261000, China) Abstract: Objective: To establish a method for the determination of lovastatin in health food by high performance liquid chromatography. Method: After being extracted with acetonitrile, the sample was separated using a liquid chromatography C18 column, eluted with a binary mobile phase, and detected with a UV detector at a wavelength of 238 nm for precision and accuracy. Result: The linear range of lovastatin was 10～200 μg·mL-1, the correlation coefficient was more than 0.999 9, and the relative standard deviation was 0.62%. When the concentration was 0.5 mg, the recovery rate was 98.8%. When the concentration was 1.0 mg, the recovery rate was 102.7%. When the concentration was 1.5 mg, the recovery rate was 99.7%. Conclusion : This method has high sensitivity, simple operation, accurate qualitative and quantitative, and strong pertinence. It provides a scientific basis for the quality control and in-depth development of natto monascus tea polyphenol soft capsule.Keywords: high performance liquid chromatography; lovastatin; natto monascus tea polyphenol soft capsules洛伐他汀由红曲霉在其生长后期产生，能有效降低血浆胆固醇[1]。
保健品中11种PDE5抑制剂非法添加物快速检测方法研究
保健品中11种PDE5抑制剂非法添加物快速检测方法研究摘要：建立一种高效液相色谱同时测定保健食品中11种那非类非法添加物质的定性及定量分析方法,采用超高液相色谱串联质谱对阳性样品进行快速确证或定性定量分析。
样品中的那非物质经乙腈提取后, 液相方法采用Eclipse Plus C18色谱柱（4.6mm×150mm，3.5μm）, 以甲醇-乙腈-20mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%乙酸) 进行梯度洗脱, 二极管阵列（PDA）检测器进行检测。
结果表明，11种物质在40 min内有良好的分离度, 在0.2-10 μg/mL范围内线性关系良好（R2≥0.998）,检出限(LOD)均为10mg/kg，定量限(LOQ) 均为30mg/kg, 平均回收率为91.37%~104.26%。
而液质方法采用Athena C18 HPLC C18（2.1 mm×100 mm，3μm）色谱柱分离，5mM乙酸铵水溶液（0.1%乙酸）和乙腈为流动相进行梯度洗脱，多反应模式监测，外标法定量。
结果表明：11种物质在0.2～50 ng/mL范围内线性关系良好（R2≥0.999）；检出限(LOD)为均10 μg/kg；定量限(LOQ)均为30μg/kg；平均回收率为85.2%～106.3%；相对标准偏差均小于10%。
该方法简便、快捷、准确度高, 适合保健食品中非法添加物质的快速检测和准确定量。
统计近３个月检测的样品，发现补肾壮阳类产品中非法添加成分检出率高，需引起相关监管部门的重视。
关键词：保健品; PDE5抑制剂; 高效液相色谱；超高液相色谱串联质谱磷酸二酯酶5抑制剂（PDE5）蛋白质同化剂因其具有改善男性勃起功能障碍、提升体能及维持肌肉强度的作用，常被不法厂商添加于提高免疫类作用的保健品中[1]，但长期服用会造成肝脏损伤、内分泌失调等严重的不良反应。
因此，我国明确禁止在保健食品中添加化学药物成分。
但近年来媒体陆续报导有不法商家向保健酒中非法添加西地那非等磷酸二酯酶5抑制剂（PDE5）及其衍生物，以达到壮阳、滋补、强身、保健、抗疲劳等功效[2]。
固相萃取-高效液相色谱法快速测定食品中7种合成着色剂
固相萃取-高效液相色谱法快速测定食品中7种合成着色剂马桂娟;汤丽华;朱捷;马雪梅
【期刊名称】《食品安全导刊》
【年(卷),期】2017(000)036
【摘要】采用固相萃取-高效液相色谱法测定食品中7种合成着色剂(柠檬黄、苋菜红、日落黄、胭脂红、诱惑红、亮蓝、赤藓红).样品经无水乙醇:氨水:水(7:2:1)提取后,固相萃取柱净化,浓缩后采用Diamonsil C18色谱柱分离,外标法定量.结果表明,在1.0～50.0 mg/L范围内,各合成着色剂的浓度与峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数(r)在0.99997～0.99999,各目标化合物回收率84.3％～100.1％,相对标准偏差(RSD)0.86％～3.56％.该方法简单、快捷、满足检测要求,可用于快速测定各类食品中7种合成着色剂的含量.
【总页数】2页(P53-54)
【作者】马桂娟;汤丽华;朱捷;马雪梅
【作者单位】宁夏回族自治区食品检测中心;宁夏回族自治区食品检测中心;宁夏回族自治区食品检测中心;宁夏回族自治区食品检测中心
【正文语种】中文
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固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种有机化合物，化学式为C3H6N6，是一种白色结晶性固体，可溶于水和乙醇，主要用作工业生产中的原料，如氰酸酯树脂、氰酸脂和脲醛树脂等。
但由于其高氮含量，三聚氰胺还可以在一定条件下成为一种良好的氮肥料。
三聚氰胺在奶制品中的使用引起了广泛的争议。
2008年，中国发生了因三聚氰胺被加入奶粉中而导致大量儿童发生尿路结石的事件，震惊了全国。
由于三聚氰胺过量摄入会对人体肾脏造成严重危害，因此对奶制品中三聚氰胺的含量进行准确检测和控制成为了至关重要的工作。
二、实验目的本实验旨在利用固相萃取-高效液相色谱法对液态奶中三聚氰胺进行含量测定，以确保奶制品中三聚氰胺的安全性。
三、实验原理固相萃取技术是一种分离和富集化合物的方法，其原理是利用吸附剂（固相萃取柱）对样品中的目标化合物进行富集，并通过一系列的洗脱步骤将目标化合物从吸附剂上洗脱出来。
在本实验中，我们将使用固相萃取技术将液态奶中的三聚氰胺富集到吸附剂上，并进行洗脱处理以得到纯化的三聚氰胺化合物。
高效液相色谱法是一种分离和定性化合物的方法，其原理是利用固定在色谱柱上的填料对化合物进行分离，通过流动相的作用使化合物在填料中进行逐步分离，并通过检测器对分离后的化合物进行检测和定量。
在本实验中，我们将使用高效液相色谱法对洗脱后的三聚氰胺进行检测和定量分析。
四、实验步骤1. 样品准备：将液态奶样品装入适当的容器中，以备后续的固相萃取处理。
2. 固相萃取：将样品经过预处理后注入固相萃取柱中，利用固相萃取柱对三聚氰胺进行富集。
3. 洗脱处理：使用洗脱液将固相萃取柱中富集的三聚氰胺进行洗脱处理，得到纯化的三聚氰胺化合物。
4. 高效液相色谱分析：将洗脱后的三聚氰胺样品注入高效液相色谱仪中，利用色谱仪对三聚氰胺进行检测和定量分析。
5. 数据处理：根据高效液相色谱仪得到的检测结果，计算出液态奶中三聚氰胺的含量。
五、实验结果根据实验数据分析，我们得到了液态奶中三聚氰胺的含量为x mg/L。
食品中那非类物质的测定(BJS 201805)
附件食品中那非类物质的测定（BJS 201805）1 范围本标准规定了食品（含保健食品）基质中90种那非类物质的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。
标准中方法一超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法，适用于饮料、果冻、蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、酒类及咖啡等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊、软胶囊等剂型）中90种那非类物质的定性和定量测定。
标准中方法二超高效液相色谱-串联高分辨质谱法，适用于饮料、果冻、蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、酒类及咖啡等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊、软胶囊等剂型）中90种那非类物质的筛查和定性确证。
方法一超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法2原理试样经甲醇超声提取，过滤后，滤液供超高效液相色谱—三重四极杆串联质谱仪测定，外标法定量。
3试剂和材料注：水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 甲醇（CH3OH）：质谱级。
3.1.2 甲酸（HCOOH）：质谱级。
3.1.3 乙酸乙酯（C4H8O2）：分析纯。
3.1.4 盐酸（HCl）：分析纯。
3.2 试剂配制3.2.1 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀释至1000mL，用滤膜（4.3）过滤后备用。
3.2.2 盐酸甲醇溶液（1+99）：取盐酸1mL用甲醇稀释至100mL。
3.2.3 甲醇水溶液（1+1）：将甲醇与水等体积混合。
3.3 标准品西地那非等90种物质标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。
3.4 标准溶液配制—1 —3.4.1标准储备液（200 μg/mL）：分别精密称取Lodenafil carbonate（46罗地那非碳酸酯）、Sildenafil dimer impurity（63西地那非二聚体杂质）、Vardenafil dimer（69伐地那非二聚体）标准品（3.3）各10mg，用盐酸甲醇溶液（1+99）溶解并稀释至50mL，摇匀；分别精密称取其余87种标准品（3.3）各10 mg，用甲醇溶解并稀释至50mL，摇匀，制成浓度为200 μg/mL标准储备液。
固相萃取-高效液相色谱串联质谱法
固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定原料奶中5种环境雌激素残留量的研究李雪1,2，牟光庆1，陈历俊1,2,*，姜铁民2（1.大连工业大学食品学院，辽宁大连116034；2.北京三元食品股份有限公司，北京100076）摘要：建立固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定原料乳中环境雌激素（雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、双酚A）的方法。
原料乳用NH2-SPE固相萃取小柱进行富集，旋转蒸发浓缩后，采用高效液相色谱串联质谱法测定。
实验结果表明：各待测物在0.01 ~0.5μg/mL 范围内具有良好的线性关系，相关系数均大于0.9978，加标回收率为68.5%~105.6%，RSD 为2.56%~7.59%，最低检出限为0.22 ~0.56μg/L（S/N=3）。
本方法操作简便，快速灵敏，适合于牛奶中痕量环境雌激素的残留分析检测。
关键词：高效液相色谱串联质谱，固相萃取，环境雌激素，原料奶，残留检测Research of the determination of 5 kinds of environmental estrogens residues in raw milk by solid phase extraction-high performance liquid chromatographytandem mass spectrometryLI Xue1,2,MU Guang-qing1,CHEN Li-jun1,2,*,JIANG Tie-min2 （1.College of Food Science and Technology,Dalian Polytechnic University , Dalian 116034,China;2.Beijing Sanyuan Foods Co., Ltd, Beijing 100076,China）Abstract: A solid phase extraction-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry method for simultaneous determination of environmental estrogens including estrone,estradiol,estriol,diethylstilbestrol and bisphenol A in raw milk was established. 5 kinds of environmental estrogens were extracted from the raw milk sample by a NH2-SPE column, and concentrated with a rotary evaporator. The extract was analyzed by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometric.Results showed that:a good linear range from 0.01~0.5μg/mL with correlation coefficient of above 0.9978 was obtained.The extraction recovery were 68.5%~105.6% and the relative standard deviation were 2.56%~7.59%.The limit of detection was 0.22~0.56μg/L(S/N=3).The descri bed method was simple,sensitive and accurate.*通讯作者：陈历俊，chlj@。
快速检测技术在食品安全监管中的应用
食品安全快速检测贯穿风险、生产经营、消费监管等环节，食品通过实验室进行检测难以从本质对其进行跟踪，使用范围受限，快速检测技术检测时间短，且灵敏度高，快速席卷食品检测市场中，切实实现“舌尖的安全”目标。
1 快速检测技术在食品安全监管中的作用首先，强化食品安全监管力度。
快速检测技术不仅耗损时间较短，而且操作便捷，无需通过繁琐的仪器便可完成食品检测，所以此种检测方式具有良好的经济性，可实现对食品安全监管成本控制。
其次，补充实验检测。
人们生活水平提升，市场出售食品趋于多样化，增加食品检测工作量，所以若仅依靠传统试验方式，难以对市场食品进行全面检测。
快速检测技术适用于更多的食品，预测食品中安全问题，如生产加工前原材料验收以及农药残留快速检测，鉴定其残留农药是否合格，对原料品质予以严格把控。
最后，在重大安全保障中发挥作用[1]。
2 快速检测技术在食品安全监管中的应用2.1 免疫分析技术免疫分析技术作为核心快速检测技术之一，其主要应用抗原及抗体的特异性反应优势，将其进行有效融合，利用相关技术将其体积放大，便于人员在仪器下直接观察。
免疫分析技术中包含多个，既具备良好的特异性，又拥有较强的灵敏度，不仅可检测食品中的有害微生物，而且可检测食品中残留农药，转基因食品也为重要检测对象。
免疫胶体金技术示踪标记物是胶体金，白磷等还原剂可对氯金酸溶液具有一定的还原作用。
免疫胶体金技术操作简易，未需要具有特殊设备和试剂，可对检测进行准确判定，所以食品检测中，该技术可作为定性或半定量分析。
酶联免疫技术检测速率较快，且精确性较高，是常用的一类检测技术，该技术基本原理是，酶标记抗体或酶标记抗原进行的抗原体反应，然后通过酶与底物的颜色反应，根据其呈现的颜色判定检测结果。
酶联免疫技术可检测食品中的有害微生物，如金黄色葡萄球菌等[2]。
2.2 酶抑制技术酶抑制技术是目前应用较为广泛的检测方法之一，实际操作便捷，且检测速率较快，成本较低，是常用的快速检测技术。
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现代食品科技Modern Food Science and Technology2010, Vol.26, No.2固相萃取-高效液相色谱法快速检测保健品中的枸橼酸西地那非
钟华1，梁淑明2，曾伟杰2，高凯雯2（1.珍奥集团股份有限公司，辽宁大连 116001）（2.广州菲罗门科学仪器有限公司，广东广州 510620）摘要：采用固相萃取－高效液相色谱法对保健品中的枸橼酸西地那非进行测定。样品经Strata X-C固相萃取小柱净化，用Phenomenex Kinetex C18柱分离，乙腈-10 mM 醋酸铵（V/V=35/65）为流动相，经液相色谱检测。结果表明，枸橼酸西地那非在0.5~80 µg/mL的浓度范围之间具有良好的线性关系（R2 = 0.9995），加标回收率大于90%。该方法简单，快速，精密度和准确度高，适用于保健品中枸橼酸西地那非的测定。关键词：固相萃取；高效液相色谱法；枸橼酸西地那非文章篇号:1673-9078(2010)2-206-208
Determination of Sildenafil Citrate in Health Foods by High
Performance Liquid Chromatography with Solid Phase ExtractionZHONG Hua1, LIANG Shu-ming2, ZENG Wei-jie2, GAO Kai-wen2(1.Zhen-Ao Group. Ltd., Dalian 116001, China)(2.Guangzhou FLM Scientific Instrument Co., Ltd, Guangzhou 510620, China)Abstract: A solid phase extraction and high performance liquid chromatography method for the determination of sildenafil citrate in health foods was established. The sample was purified with Strata X-C solid phase extraction column. The chromatographic separation was performed on a Phenomenex Kinetex C18 column with mobile phase of acetonitrile-10 mM ammonium acetate (V/V=35/65). The calibration curve was linear within the range of 0.5-80 µg/mL (R2 = 0.9995). The recovery was over 90%. The method was simple, fast and accurate. It can be used to determine the sildenafil citrate in health foods.Key words: solid phase extraction; high performance liquid chromatography; sildenafil citrate
206枸橼酸西地那非(Sildenafil citrate)，结构式如图1，它通过选择性抑制环磷酸鸟苷特异的5型磷酸二酯酶，是第一个用于治疗男性勃起功能不良(erectile dysfunction，简称ED)的药物[1]，由于其相关的
相关的不良反应，需在医生指导下使用。国家食品药品监督管理局规定所有含枸橼酸西地那非的食品均不合法。但是，往往有些厂家在保健食品中非法添加枸橼酸西地那非，对服用者造成严重的危害。目前，对保健食品中枸橼酸西地那非的检测有分光光度法[2]、薄层色谱法[3]、高效液相色谱法[4]、毛细管电泳法等[5]。由于保健品成分复杂，基质干扰大，且非法添加的枸橼酸西地那非含量低，因此对样品的前处理较为关键。本文采用固相萃取技术对样品进行前处理，对其中的西地那非进行富集后，应用高效液相色谱法对其进行检测，该法简单、快速、准确。收稿日期：2009-10-12图1 枸橼酸西地那非的结构式Fig.1 Structure of sildenafil citrate1 材料与方法1.1 主要仪器HITACHI L2000 HPLC 色谱仪（L2130 泵；L2400 紫外检测器）；超声波清洗器（天津东康科技有限公司）；氮吹仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；离心机（湘仪离心机仪器有限公司）。1.2 试剂枸橼酸西地那非标准品（中国药品生物制
品检定所）；固相萃取小柱：Strata X-C 60 mg/3 mL （Phenomenex）；乙腈（色谱纯，德国Merck）；甲
酸、氨水、醋酸铵（分析纯，广东光华化学有限公司）；文中所用水均为超纯水。1.3 色谱条件色谱柱：Phenomenex Kinetex C18 2.6 µm 50 mm x 4.6 mm；流动相：乙腈-10 mM 醋酸铵（V/V=35/65）；流速：1.8 mL/min；柱温：室温；检测波长：290 nm；进样量：10 µL1.4 标准溶液配制精确称取100 mg枸橼酸西地那非标准品于100
mL容量瓶中，加入流动相50 mL使溶解，再用流动相定容至刻度，配制成1 mg/mL的储备液。取储备液适量，用流动相逐级稀释，配制成浓度分别为0.5、5.0、10.0、20.0、40.0 、80.0 µg/mL的标准溶液。1.5 样品处理固体样品：称取样品10 g，研磨均匀，然后精密称取2 g研磨均匀的样品，加入1%甲酸甲醇溶液10 mL，超声提取30 min后用1%甲酸甲醇溶液补足体积，过滤，取5
mL滤液作为待净化液。液体样品：按样品体积比1%加入甲酸，过滤，精密取滤液5 mL作为待净化液。Strata X-C小柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化平衡后，将待净化液分次过该小柱，
再分别用3 mL水和3 mL甲醇清洗，抽至近干后，用5%氨水甲醇溶液洗脱3次，每次1 mL，收集洗脱液。整个过程流速小于1 mL/min。洗脱液用氮气吹干，1 mL流动相溶解，0.45 µm滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。2 结果与讨论2.1 固相萃取条件的选择保健品中成分复杂，简单的液-液萃取并不能除去大部分杂质，会严重干扰西地那非的液相测定。Strata-X-C 是混合型阳离子交换固相萃取小柱，对碱性化合物有很强的专属选择性，成功用于复杂样品中三聚氰胺等碱性化合物的纯化和浓缩[6]。西地那非为碱性化合物，本法利用其碱性性质，采用Strata-X-C对样品进行纯化和浓缩，分别使用水和甲醇清洗，除去大部分水溶性和脂溶性杂质，再用5%氨水甲醇溶液洗脱碱性的西地那非。当不采用固相萃取技术对空白保健酒样品和加标保健酒样品进行测定时，结果见图2，在西地那非峰旁有干扰峰，干扰西地那非的测定；而采用固相萃取技术后，结果见图3，除去了干扰西地那非峰测定的杂质峰，使检测准确可靠。本固相萃取方法净化效果好，回收率稳定
，平均为95.8%（20 µg/mL，RSD=3.9%，n=6）。图2 未使用固相萃取时(a)空白酒样品和(b)加标酒样品（8 mg/mL）的色谱图Fig. 2 The HPLC chromatograms of (a) a blank sample and (b) a sample spiked with the standard (8 mg/L)
2.2 色谱条件的选择
本法试验了不同比例的乙腈与0.1%甲酸水溶液以及乙腈与不同浓度醋酸铵水溶液作流动相的效果，发现乙腈与10 mM醋酸铵水溶液作流动相时，峰形对称、尖锐，检测灵敏度高。本法还采用实验室常用的紫外检测器检测，适用于一般实验室的常规检测分析。本法使用了50 mm长的Kinetex C18色谱柱。Kinetex C18色谱柱是一种新型核-壳技术填料色谱柱,由于大大改善了填料的传
质阻抗影响，可以在常规液相色谱仪器上实现超高压液相的性能，从而达到快速、高效的效果，大大提高工作效率，且不受仪器条件的影响，方便在各个实验室进行方法转移。在流速1.8 mL/min下，西地那非在约2.5 min处出峰，没干扰。枸橼酸西地那非标准品、空白样品和加标样品的高效液相色谱图见图3。图3 (a)枸橼酸西地那非标准溶液（20μg/mL）、(b)空白酒样品及(c)加标酒样品（20mg/L）的色谱图Fig.3 The HPLC chromatograms of (a) sildenafil citrate standard solution (20μg/mL), (b) a blank sample and (c) a sample spiked with the standard (20 mg/L)
2.3 标准曲线线性范围和检出限
将西地那非标准系列溶液依次进样，外标法定量。以浓度c为横坐标，峰面积A为纵坐标进行线性回归，得到标准工作曲线。在0.5-80.0µg/mL浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系，线性方程为y= 6398.9x-4511.9，r2 =0.9995。将标准样品逐级稀释至信噪比为3时的浓
度为最低检出浓度，测得结果为0.05 μg/mL。2.4 回收率和精密度试验取已知不含枸橼酸西地那非的空白保健酒样品进行标准添加试验，每个添加量为20.0 mg/L和40.0 mg/L，分别做6个平行试验，计算回收率及精
密度，结果见表1。结果表明，本方法回收率高，重现性好，可用于保健品中枸橼酸西地那非的测定。表1 精密度和回收率测定结果（n=6）Table 1 Recovery and repeatability of sildenafil citrate (n=6)加标量(mg/L)2040121.736.6218.538.2检测结
果(mg/L)318.942
417.537.5519.33561837.2平均回收率（%）94.994.3精密度RSD（%）7.86.2
2.5 样品测试结果
采用本方法对市售的5种保健品进行检测，未检出样品中含有枸橼酸西地那非。3 结论本法采用阳离子交换固相萃取小柱对样品进行净化后，进行高效液相色谱分析。固相萃取可除去样品中的大量杂质，再使用高效的液相色谱柱使枸橼酸西地那非能够快速出峰（仅约2.5 min）而不会受杂质峰干扰。该方法操作简单，
省时快速，精密度和准确度高，可用于片剂、胶囊剂、丸剂等固体保健品和口服液、酒类等液体保健品中枸橼酸西地那非的检测。参考文献[1]Boolell M, Gepi-Attee S, Gingell JC, etc. Sildenafil, a novel effective oral therapy for male erectile dysfunction. British Journal of Urology, 1996, 78: 257-261[2]廖晓玲,曹仲文,任雅瑾,等.紫外分光光度法测定枸橼酸西地那非片含量[J].海军医学杂志, 2003, 24(1): 56-57[3]Mikami E, Ohno T, and Matsmoto H. Simultaneous identification/determination system for phentolamine and sildenafil as adulterants in soft drinks advertising roborant nutrition. Forensic Science International, 2002, 130:146-149[4]梁丽梅,李桃.高效液相色谱法测定藏鞭金丹、三肾丸中