苦菊提取物的抗氧化活性研究

食品与药品　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　２０１１年第１３卷第０３期　９３　苦菊提取物的抗氧化活性研究　陈超杰　，秦海林　，邓安瑁　，王爱平　（１．新药安全评价研究中心，２．中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室　中国医学科学院／北京协和医学院，北京１０００５０）　摘要：目的研究苦菊提取物的体外抗氧化作用。方法苦菊经９５％乙醇加热回流、石油醚脱脂、乙酸乙酯提取和大孔吸　附树脂乙醇洗脱，取６Ｏ％乙醇的洗脱液挥于后得到提取物。通过二苯代苦味酰自由基（ＤＰＰＨ·）和超氧阴离子（Ｏ　一·）清　除能力的检测，及２，２’．偶氮．双．（２．脒基丙烷）氯化二氢（ＡＡＰＨ）诱导的红细胞溶血模型的测试，总体评价该提取物的体　外抗氧化活性。结果该提取物能有效清除ＤＰＰＨ·和０　。，其清除能力呈浓度依赖性，且清除Ｏ　。·的能力比阳性对照药维生　素Ｃ更佳。同时，该提取物能有效防￣ＡＡＰＨ诱导的兔红细胞溶血，提示具有预防机体细胞组织氧化应激损伤的作用。结　论苦菊提取物具有很好的抗氧化活性，为其在食品和药品的抗氧化剂应用提供参考。　关键词：苦菊；二苯代苦味酰自由基；超氧阴离子；红细胞溶血；抗氧化活性　中图分类号：１１２８２。７　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２．９７９Ｘ（２０１１）０１—００９３—０４　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ　ｅ／／ｄｉｖｉａ　Ｌ．　ＣＨＥＮ　Ｃｈａｏ￣ｉｅ　，ＱＩｙ　Ｈａｉ—ｌｉｎ　，ＤＥＮＧ　Ａｎ－ｊｕｎ　，ＷＡＮＧ　Ａｉ—ｐｉｎｇ　ｆ１．ＮｅｗＤｒｕｇＳａｆｅｔｙＥｖａｌｕａｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ，２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏａｃｔｉｖｅＳｕｂｓｔａｎｃｅｓａｎｄＲｅｓｏｕｒｃｅｓ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｈｅｒｂａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＭａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆＭｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ＆Ｐｅｋｉｎｇ　Ｕｎｉｏｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１　０００５０，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ　ｅｎｄｉｖｉａ　Ｌ—Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｃ　ｅｎｄｉｖ　Ｌ．　ｗａｓ　ｒｅｆｌｕｘｅｄ　ｗｉｔｈ　９５％ｅｔｈａｎｏｌ　ａｎｄ　ｄｅｆａｔｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ　ｅｔｈｅｒ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　

收稿日期：　基金项目：　作者简介：　通讯作者　

２０１０—１２—１０　“重大新药创制”科技重大专项课题（２００８ＺＸ０９３０５—００１）　陈超杰（１９８２一），男，广西梧州人，博士研究生，研究方向为药物安全性评价　王爱平，男，博士生导师，研究方向为药物安全性评价Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇａｉｐｉｎｇ＠ｉｍｍ．ａｃ．ｃａ　

素、维生素等。ＸＦ．１经形态特征，１６Ｓ　ｒＤＮＡ序列比　对及系统发育树分析，与Ａｒａｎｉｃｏｌａｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｕｓ有９９．７％　同源性，初步认为同种。Ａｒａｎｉｃｏｌａ　ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｕｓ为近　年新发现的肠杆菌科新菌种，目前国际上正式命名尚　未公布，因此关于该菌的文献报道甚少，１９９９年Ｐａｒｋ　等　发现该菌，并初步研究了其生理特性。但该菌所　产分泌物的种类以及是否有致病性尚不明确，这是决　定应用价值的最关键问题，今后以此为研究方向进行深　入研究。　

参考文献　［１】周世水，丁金国，姚汝华．海洋微生物药物的开发和应用［Ｊ１．　工业微生物，２００２，３２（２）：４８—５１．　［２】胡艳红，张庆林，王正平．海洋微生物生物活性代谢物研究进　展及技术问题【Ｊ］．科学技术与工程，２００４，４（２）：１６０—１６３．　［３］Ｍａｒｘ　Ｊ　Ｃ，Ｂｌａｉｓｅ　Ｖ，Ｃｏｌｌｉｎｓ　Ｔ，ｅｌ　ａ１．Ａ　ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ　ｏｎ　ｃｏｌｄ　ｅｎｚｙｍｅｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ　ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ　ａｎｄ　ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ　ａｓｋｅｄ　ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ［Ｊ］　

Ｃｅｌｌ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ，２００４，５Ｏ（５）：６４３—６５５．　ｆ４】张士瑞，马军英，范晓．海洋生物技术原理【Ｍ］．北京：海洋出　版社，１９９７：１０—１３．　［５］杨丽，闰志勇，王斌，等．嗜麦芽寡养单胞菌Ｄ２株基因组文　库的构建及部分克隆的分析［Ｊ］．医学研究生学报，２０１０，２３　（４）：３６９—３７１．　【６］Ｇａｒｒｉｔｙ　Ｇ　Ｍ，Ｂｅｌｌ　Ｊ，Ｌｉｉｂｕｍ　Ｇ．Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉｏ１ｏｇｙ（ｓｅｃｏｎｄ　ｅｄｉｔｉｏｎ）［Ｍ］．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｂｅｒｌｉｎ　Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，　２００４：８０—８３．　［７］闫志勇，王斌，苏维奇，等．多重半套式ＰＣＲ检测细菌１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因方法的建立［Ｊ］．青岛大学医学院学报，２００ｌ，３７　（１）：２２—２４　［８］张桂红，付勇，刘彦仿．来源于中国青蛙的一种核糖核酸酶　新基因的克隆和序列分析［Ｊ］．医学研究生学报，２０ｌ０，２３　（１）：ｌ１０一ｌ１２　『９］９　宋欣．微生物酶转化技术［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００４：　

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自由基是导致油脂类产品氧化变质和造成机体氧　化应激损伤的主要因素，因此具有清除自由基能力的　抗氧化剂是防止食品变质和防治氧化损伤相关疾病的　最主要手段之一【ｌ】。　苦菊（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ　ｅｎｄｉｖｉａ　Ｌ．）是菊科菊苣属的一　种栽培植物，学名栽培菊苣，又称苦苣　。苦菊源自　欧洲，是欧美地区常用的色拉或食用蔬菜。有研究发　现，苦菊中含有一定量的抗氧化活性成分，是其防治　多种与氧化应激损伤相关的慢性疾病的理论基础ｐ】。　我国已成功引种栽培苦菊并出售，其清甜爽口的特点　也逐渐受到中国老百姓青睐。但至今仍缺乏对国内栽　培的苦菊生物活性的研究报道。本文提取分离苦菊，　并通过体外模型检测其抗氧化活性，为进一步探究苦　菊在食品和医药领域的应用提供依据。　１材料　１．１原料　苦菊购自北京新发地蔬菜批发中心，经鉴定为菊　科菊苣属植物苦菊。　１．２试剂　二苯代苦味酰自由基（ＤＰＰＨ·）、２，２’．偶氮．　双一（２一脒基丙烷）氯化二氢（ＡＡＰＨ）、水溶性维生　素Ｅ类似物（Ｔｒｏｌｏｘ）、维生素Ｃ、乙二胺四乙酸二　钠（ＥＤＴＡ．Ｎａ，）、还原型辅酶Ｉ烟酰胺腺嘌呤二核　苷酸二钠（ＮＡＤＨ—Ｎａ　）、吩嗪硫酸甲酯（ＰＭＳ）和硝　基四氮唑蓝（ＮＢＴ）均购自Ｓｉｇｍａ．Ａｌｄｒｉｃｈ公司，乙　醇、石油醚、乙酸乙酯、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）等　试剂皆为国产分析纯。大孔吸附树脂购自日本三菱　（ＤＩＡＩＯＮ　ＨＰ２０）。　１．３仪器　酶标仪（美国ＭＤ，Ｓｐｅｃｔｒａ　Ｍａｘｌ９０）；高速冷　冻离心机（德国Ｓｉｇｍａ，３Ｋ１８）；电子天平（北京赛　多利斯天平有限公司，ＢＳ２０１Ｓ）。　１．４动物　雄性新西兰家兔１只，１２～１５周龄，体重３．０　ｋｇ，　购自北京富豪实验动物养殖中心。单笼饲养，自由进　食饮水。　２方法　２．１苦菊提取物的制备　苦菊干燥全草５．８　经９５％乙醇回流提取３次（８０　Ｌ×２　ｈ、７０Ｌ×１　ｈ、６８ＬＺ１　ｈ），过滤合并滤液，减　压浓缩所得浸膏混悬于７０％乙醇溶液中。混悬液继续　经石油醚提取４次（２，１．５，１．５，１．５　Ｌ），所得到的　乙醇层经减压浓缩至无醇味，加水混悬约２．３　Ｌ，并经　乙酸乙酯提取３次（１．５，１．２，１．２　Ｌ），提取后所得的　水层约２．２　Ｌ，过大孔吸附树脂，分成水部分（１４　Ｌ）　和６０％乙醇部分（１５　Ｌ）。其中６Ｏ％乙醇部分浓缩　后挥千得到重约４０　ｇ的棕色粉状颗粒，即为苦菊提取　物。　２．２　ＤＰＰＨ·清除能力的检测　ＤＰＰＨ·清除能力检测的操作步骤根据文献［４】略　加调整：反应体系在９６孔板中进行，溶于ＤＭＳＯ的　待测样品每孔加入２０　Ｌ，随后迅速加入１００　Ｉｘｍｏｌ／Ｌ　的ＤＰＰＨ·（溶于无水乙醇）１８０　，震荡混匀后采用　酶标仪于５ｌ７　ｎｍ波长处检测吸光度（　），同时以　２０　的ＤＭＳＯ代替待测液作为空白对照，空白调零　孔为２０　ＤＭＳＯ和１８０　无水乙醇。经过多个时间　点的检测，以不再发生改变的　值作为最终测量值。　ＤＰＰＨ·清除率的计算公式为：　ＤＰＰＨ·清除率＝［１一　Ｊ．４。）】Ｘ　１００％　其中，Ａ　为待测样品组　值，Ａ　为空白对照组