纳豆激酶的溶栓实验
纳豆激酶分离纯化及体外溶栓和溶血作用研究
纳豆激酶分离纯化及体外溶栓和溶血作用研究纳豆是日本的传统大豆发酵食品，由纳豆芽孢杆菌发酵而成，在日本已食用近千年。
1987年，须见洋行等经过对上百种食物的筛选，首次发现纳豆含有溶解血栓纤维蛋白的成分，并命名为纳豆激酶(nattokinase,NK)。
研究表明，NK 是纳豆发酵过程中纳豆芽孢杆菌分泌的一种丝氨酸蛋白酶[1]。
进一步的研究表明，NKc具有很强的体内外溶栓作用，与传统的容栓剂相比，NKc具有易提取、成本低廉和能口服吸收溶栓等优点，因而可能成为新一代的溶栓药物[2-4]。
为了对NKc的开发提供理论依据，本实验室在研究NKc纤溶活性之后，进一步对其体外溶栓和溶血作用进行研究。
1 材料与方法1.1 材料菌株：为本实验室自日本纳豆分离纯化菌种，保存于养琼脂斜面，营养琼脂配方为：细菌培养用胰蛋白胨(bacto-tryptone)，1%；细菌培养用酵母抽提物(b acto-yeast extract)，0.5%；NaCl,0.5%；细菌培养用琼脂粉(bacto-agar powd er)，1.5%PH7.2。
纳豆、纳豆提取液：按文献[5]介绍方法制备。
血平板：用生理盐水配制1%琼脂，加入新鲜脱纤兔血，混匀倾注平板，冷却凝固即成。
主要试剂：凝血酶、纤维蛋白原、标准尿激酶（中国药品生物制品检定所）；蚓激酶(30×104 U•粒-1，北京百奥药业有限责任公司)；牛血清白蛋白(上海生化试剂公司)；低相对分子质量标准蛋白质(兔磷酸化酶：Mr97.4×103,牛血清白蛋白：Mr66.2×103,兔肌动蛋白：Mr43.0×103,牛碳酸酐酶：Mr31.0×103,胰蛋白酶抑制剂：Mr20.1×103,鸡蛋清溶菌酶：Mr14.4×103)（上海生化试剂公司）；其他试剂均为国产分析纯。
1.2 方法1.2.1 NKc分离纯化纳豆提取液经35%～75%饱和度硫酸铵分段盐析，离心收集沉淀，用50mmol•L-1磷酸缓冲液（PH 7.4）溶解，充分透析后获得纳豆激酶粗酶（NKc），再经Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱（1.0cm×60cm）层析，分管收集纤溶活性较高部分，脱盐，冷冻干燥后获得层析纯纳豆激酶（NKc），SDS-PAGE电泳检测纯度。
纳豆溶解血栓的原理
纳豆溶解血栓的原理纳豆是指一种由大豆经过发酵而产生的食品，其在日本等东亚地区被广泛消费。
纳豆内含有纳豆激酶（nattokinase）这一特殊的酶类物质，据称具有溶解血栓的作用。
纳豆激酶在近年来引起了许多科学家的关注，并且其作用机制也成为研究的热点。
血栓形成是一种维持体内动态稳态的重要过程，有助于止血，但也可能导致血栓性疾病，如心脑血管疾病。
血栓形成主要涉及两个方面的机制：凝血和纤溶。
凝血是指在血管损伤后，由于凝血因子的激活，使得血小板聚集并形成血块的过程。
而纤溶则是指溶解血块的过程，主要由纤溶酶系统调控。
纳豆激酶作为一种纤溶酶，能够促使纤溶酶的活动，从而加速纤维蛋白溶解，进而导致血块的溶解。
纳豆激酶是一种产生自Bacillus subtilis natto的酶，其主要活性成分是一种蛋白酶，具有显著的纤溶活性。
纳豆激酶的纤溶活性主要通过两个机制来发挥作用。
首先，纳豆激酶可以直接激活纤溶酶。
在纤溶酶系统中，纤维蛋白溶解主要由组织型纤溶酶原酶（tissue-type plasminogen activator，tPA）催化纤维蛋白原转化为纤维蛋白溶解酶（plasmin）完成。
纳豆激酶能够直接与tPA作用，使tPA的活性增强，从而增加纤维蛋白的溶解效果。
除了影响tPA的活性外，纳豆激酶还能间接影响纤溶系统。
纳豆激酶在体内被吸收到血液循环中后，可以与纤溶系统中的一种酶抑制物质进行结合，称为α2-抗纤溶酶（alpha-2-antiplasmin，α2-AP）。
纳豆激酶能够解离α2-抗纤溶酶与纤溶酶之间的结合，使得纤溶酶的活性增强，进而促使血块溶解。
此外，纳豆激酶还具有其他多种作用机制，也可能参与到血栓的溶解过程中。
例如，纳豆激酶能够抑制血小板的聚集，减少血小板与血管内皮的粘附，从而避免血栓进一步形成。
此外，纳豆激酶还能降低高密度脂蛋白（HDL）与纤溶酶的结合，增加纤溶酶的活性。
虽然纳豆激酶在体外和体内的实验证据表明其具有纤溶作用，但其在人体内的活性和溶栓效果仍存在争议，因为大部分研究仅限于体外和动物实验。
纳豆激酶粗提液的体外溶栓抑菌实验
纳豆激酶粗提液的体外溶栓抑菌实验饶颖竹;陈蓉;阮倩玲;肖桂元【期刊名称】《蛇志》【年(卷),期】2004(16)1【摘要】目的探讨纳豆激酶粗提液的体外溶栓、抑菌作用.方法以大豆为培养基,米曲霉为菌种,发酵制得成熟纳豆,用不同饱和度(NH4)2SO4对粗提液进行盐析,所得沉淀溶于生理盐水中,用纤维蛋白平板法测定其活性,确定提取纳豆激酶的分级沉淀范围.用体外溶栓法测纳豆激酶粗提液的体外溶栓作用.用平板打孔法及纸片扩散法测不同浓度纳豆抑菌物质的体外抑大肠杆菌作用.结果纳豆激酶的(NH4)2SO4分级沉淀范围选择在60%.纳豆激酶粗提液对血块的溶解作用较同样活力大小的尿激酶强.纳豆抑菌物质粗提液对大肠杆菌都具有一定的体外抑制作用,当浓度大于50%,抑菌圈直径随着浓度的增高而增大.结论纳豆激酶粗提液具有较好的体外溶栓作用,并对大肠杆菌具有一定的抑制作用.【总页数】4页(P7-10)【作者】饶颖竹;陈蓉;阮倩玲;肖桂元【作者单位】湛江市临床医学研究所,广东,湛江,524037;湛江师范学院生物系,广东,湛江,524048;湛江师范学院生物系,广东,湛江,524048;湛江市临床医学研究所,广东,湛江,524037【正文语种】中文【中图分类】R977.3【相关文献】1.纳豆激酶粗提液对小鼠实验性高脂血症的降脂作用 [J], 袁淑云2.电针后大鼠中脑腹侧部粗提液对体外培养的多巴胺能神经元生称发育… [J], 梁希彬;田德全3.菜籽饼中植酸粗提液的体外抗氧化能力初探 [J], 汤务霞;祝佳;熊治渝;刘超4.金银花醇提液对根管粪肠球菌的体外抑菌实验 [J], 王淑贤;杨旭5.纳豆激酶的分离纯化及体外溶栓特性研究 [J], 陈晓飞;周伏忠;陈国参;谢宝恩;宁萌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《心脑血管纳豆溶栓》课件
市场需求增长
随着人口老龄化和心脑血 管疾病发病率的上升，纳 豆溶栓市场需求将不断增 长。
国际市场拓展
推动纳豆溶栓产品走向国 际市场，提升国际竞争力 。
行业规范化发展
加强行业监管，推动纳豆 溶栓行业规范化、可持续 发展。
纳豆溶栓的未来研究方向与挑战
深入探究纳豆激酶的作用机制
01
进一步揭示纳豆激酶在溶栓过程中的具体作用机制，为新药研
纳豆溶栓的作用机制
• 纳豆激酶通过激活纤溶酶原，使其转化为纤溶酶，从而降解纤维蛋白，实现溶栓作用。同时，纳豆激酶还能抑制血小板聚 集和凝血因子的活性，进一步降低血栓形成的风险。
纳豆溶栓的历史与发展
• 纳豆溶栓的研究始于20世纪80年代，经过多年的研究和实 践，证实了其安全性和有效性。近年来，随着科技的进步和 研究的深入，纳豆激酶的提取和制备技术得到了不断改进， 为其在临床上的广泛应用提供了可能。目前，纳豆溶栓已经 成为一种有效的自然疗法，被广泛应用于心脑血管疾病的预 防和治疗。
《心脑血管纳豆溶栓 》ppt课件
目录
• 纳豆溶栓介绍 • 心脑血管疾病概述 • 纳豆溶栓在心脑血管疾病中的应用 • 纳豆溶栓的实践与案例 • 纳豆溶栓的未来展望
01
纳豆溶栓介绍
纳豆溶栓的定义
• 纳豆溶栓是指利用纳豆激酶（nattokinase，NK）的溶栓作用 ，来溶解血栓的一种方法。纳豆激酶是一种从纳豆中提取的蛋 白酶，具有强烈的纤溶活性，能够直接作用于纤维蛋白，将其 降解，从而达到溶解血栓的效果。
心脑血管疾病的危害与影响
总结词
心脑血管疾病具有高发病率、高致残率和高死亡率的特点，对个人和社会造成巨大的危 害。
详细描述
心脑血管疾病是一种严重的公共卫生问题，具有高发病率、高致残率和高死亡率的特点 。这些疾病会导致心肌梗死、脑梗塞、脑出血等疾病的发生，给患者带来极大的痛苦和 生命危险。同时，治疗心脑血管疾病的医疗费用也给家庭和社会带来了巨大的经济负担
纳豆激酶自然界唯一可以溶解血栓的天然物质
纳豆激酶自然界唯一可以溶解血栓的天然物质血栓的克星纳豆激酶被国际血栓溶解学会认定为自然界唯一可溶解血栓的天然物质。
是世界“首次安全”消除动脉硬化斑块及血栓的健康品。
世界公认的天然的阿司匹林。
中国中医药研究所从中国10000多种中草药中，寻找溶解血栓的成分，但都没有找到。
目前临床上用的尿激酶、链激酶、纤溶酶、蚓激酶等临床常用的第一代溶栓药物等，药价贵，作用时间短，尿激酶在血液中的半衰期为4—20分钟。
同时需要静脉注射，使用不方便。
纳豆中的纳豆激酶是直接分解血栓的纤维蛋白酶。
属于第二代溶栓药物。
康健之道纳豆激酶溶解血栓的作用可以持续8—12个小时。
而且可以口服由肠道吸收，是目前众多纤溶药物所无法比拟的。
纳豆激酶溶解血栓是常用溶栓药物：尿激酶、链激酶、纤溶酶、蚓激酶活性的4倍。
纳豆激酶最受期待的独特功效就是：提升人体分解排除血栓的能力，对血液和血管进行一次彻底疏通、清洗和保养，每天服用2次，就可以实现全天24小时的心脑保护。
纳豆激酶成为日本人们常备预防心脑血管疾病首选的健康食品。
美国国家医学科学院临床观察美国国家医学科学院在120家中心医院进行了30万例的临床观察，实验人群包括血栓偏瘫、四肢麻木、心肌梗塞、头痛、高血压、动脉硬化、失眠，静脉曲张，痔疮、糖尿病病人等，实验证明了纳豆激酶降低心脑血管疾病死亡率可达30%。
可使高脂血症患者的寿命平均延长7年。
纳豆激酶使用后情况8小时后血管内血栓开始溶解。
服用1～2个月为症状缓解期，头痛，头晕，失眠，心慌，胸闷等症状减轻。
服用3～4个月为病灶治疗期，血栓稳步溶解，血脂平稳下降，脑部、心脏、四肢阻塞的血管被打通，血管富有弹性，管腔增大，分化出新的脑神经细胞。
四肢感觉有力。
记忆力加强，服用5～6个月为功能康复期，血压，血脂趋于正常，元气得到恢复，脏腑阴阳平衡，中风患者在这一阶段逐渐感觉到胳膊、腿、手有劲了，精神明显好转，眼睛有神。
一年以后，全身血液更新，血管斑块等被清除出体外，血液畅通无阻。
纳豆激酶背景
纳豆激酶纳豆激酶是来自新鲜纳豆中的蛋白质,实验证明其能溶解陈旧血栓。
血栓是血管内的血凝块,可出现在动脉,也可在静脉。
动脉血栓如果阻断血流,将导致该动脉支配区域的缺血,由于血液的功能是运输氧气,所以,缺血就会缺氧,缺氧就导致细胞的能量产生障碍。
缺少能量时,细胞功能低下,甚至死亡。
同样,静脉血栓若阻断血流,将导致汇入该静脉的血管区域淤血,这也抑制循环,产生细胞缺氧。
因此,血栓的形成会导致细胞缺氧,降低细胞功能,当许多细胞受累时,该器官就出现功能障碍,产生相应症状。
如果这些细胞正执行着重要任务,如生命中枢受到缺氧影响,将导致死亡;心肌细胞受到影响将减少泵血。
所以,心脑血管发生血栓,后果十分严重,这成为人类死亡与致残的重要原因;不仅如此,每个器官都可能受血栓影响,导致缺血、缺氧,引起上千种病症!因此,血栓是当今世界上亟待解决的难题。
解决此问题的关键是溶解血栓,疏通血管!但目前,市场上使用的溶栓药物,如链激酶、尿激酶、蛇毒等,都只能作用于新形成的血栓,超过4小时以上的血栓,这些药物效果极差。
而临床上,患者经常是在家发病,到医院等做完相关检查,确认血栓病时,已超过4小时。
此时血栓已老化,形成陈旧血栓,这时开始用溶栓药物,效果不佳。
因此,寻找对陈旧血栓有溶解活性的药物就显得特别关键!终于,日本学者须见洋行博士发现,新鲜纳豆能够溶解血栓,后经分离、纯化和结构确认,证实实现溶栓活性的是一个由275个氨基酸组成的多肽,并将其命名为纳豆激酶。
近些年来,世界上数百个实验室在纳豆激酶的生物合成、提取、分离、纯化、结构确认，稳定性、生物活性、毒理和体内过程分析以及制剂等方面进行了大量研究工作,证明其对陈旧血栓有强大溶解活性。
并证明其疗效确切、性质稳定、质量可控、使用安全,现已具备开发成新药的条件。
纳豆激酶的最佳应用是成为溶栓药物,但,将纳豆激酶开发为药物尚需十余年时间,在这期间,可能要有上千万人发病,等纳豆激酶得到新药批文,怕有数百万人得不到有效的治疗而去世!这是大家不愿看到的。
纳豆激酶溶栓实验流程
纳豆激酶溶栓实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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在开展纳豆激酶溶栓实验之前，要做好充分的准备工作。
纳豆激酶被科研证实的八大功效！
纳豆激酶被科研证实的八大功效！展开全文1、纳豆可以溶解血栓：纳豆激酶，可直接分解血栓，每克湿纳豆溶栓效果相当于尿激酶1600IU。
纳豆激酶对血栓的作用时间长达8-12小时，而尿激酶作用时间只有30分钟。
尿激酶只能注射，纳豆激酶即可注射也可口服，而且可以在毛细血管中发挥作用。
纳豆在日本已食用1000年，是一种安全的食用血栓预防剂。
2、纳豆可以有效减肥，帮助降低餐后血糖：纳豆菌在肠内大约能坚持1周左右，可以促进其它有益菌增殖。
肠内细菌，重量约为1公斤。
当然它需要饵食供给。
人体吸收的营养就成为肠内细菌的饵食而被吞噬，再加上纳豆激酶可燃烧脂肪,由此就能减肥。
还有纳豆粘物质发挥了浸溶、包裹的作用。
因而纳豆减肥是缓型有效的,不会反弹。
然而餐后血糖值出现明显下降趋势，是非常直观的。
一是纳豆菌吞噬葡萄糖和粘物质的作用,二是纳豆中的高弹性蛋白酶（或称胰肽酶E，Elastase）,抑制了血糖增加。
它具有与猪胰脏所含的这种酶的作用，而猪胰腺的弹性蛋白酶已用于高血糖的**药物。
3、纳豆可以防止骨质疏松：纳豆辅助补钙的机理是：骨质是由维生素K2和优质蛋白质先形成骨元蛋白，再与钙生成骨质，蓄积骨中，增加骨密度这三大要素缺一不可。
纳豆中包含大豆异黄酮和维生素K2。
大豆异黄酮能防止骨中钙的溶解，而维生素K2则能够将钙固定于骨中。
也就是说，大豆异黄酮和维生素K2的组合能相互协力，起到强骨的作用。
4、纳豆可以抗菌消炎：日本长野县卫生公害研究所进行的实验表明，纳豆的提取液可将3万各0-157致病性大肠杆菌减少到40个以下。
最近的科学实验也已确认，纳豆菌对抑制0-157同类的0-111、0-144病原性大肠杆菌以及其它病原菌诸如，金黄色葡萄球菌、沙门氏杆菌、李斯特菌等同样有抑制作用。
抗菌机理在于纳豆菌能够产生杀菌物质吡啶二羧酸。
5、纳豆可以调节肠胃，润肠通便，排毒养颜：纳豆菌不受胃液的强酸影响，并很快在肠道内定植。
纳豆菌所产生的吡啶二羧酸，有效杀灭、抑制肠道内的有害菌和病毒。
新型溶栓剂纳豆激酶的研究进展
新型溶栓剂纳豆激酶的研究进展【摘要】纳豆激酶是一种由纳豆菌产生的具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶，与传统的一些溶栓剂相比，其具有安全性好、成本低、经口服后可迅速入血、纤溶活性强、作用时间长等优点。
有望被开发为新一代的口服抗血栓药物。
本文就纳豆激酶的结构、理化性质、活性测定方法，作用机制以及开发现状和应用前景等方面进行了综述。
【关键词】血栓；纳豆激酶；活性测定；溶栓功能【Abstract】 Nattokinase is a kind of serine proteinase that has strong fibrinolytic activity produced by Bacillus subtilis （natto）．As compared with some traditional thrombolytics，nattokinase possesses the advantages of safety，low cost，and effective by oral administration etc．Some advances in nattokinase research were reviewed in this paper，mainly its structure,physicochemical properties, biological function of dissolving fibrin, activity assay method and its prospect.【Key words】 thrombosis；nattokinase；activity assay；dissolve fibrin血栓疾病是一类严重危害人类健康和生命的疾病，包括心血栓、脑血栓、肺栓塞和末梢动静脉血栓等常见疾病。
据估计，全世界有血栓性疾病患者约1500万人，其中每年死于心脑血栓疾病的就高达1200万人。
神奇的溶栓物质—纳豆激酶
神奇的溶栓物质—纳豆激酶
神奇的溶栓物质—纳豆激酶
纳豆经过纳豆菌发酵产生丰富的纳豆激酶，纳豆充分搅拌后产生的黏黏拉丝的物质是黏蛋白，是营养的精华所在，有效的保护好纳豆激酶的活性。
纳豆激酶是目前为止最有效的溶栓物质，其溶栓效果是尿激酶的19倍，每克纳豆中所蕴含的纳豆激酶相当于1600IU尿激酶的溶栓效果。
纳豆激酶对血栓的作用时间长，尿激酶在人体内作用时间仅仅4-20分钟，而纳豆激酶作用却长达12小时，所以建议早晚必备食用纳豆。
纳豆激酶的发现
1980年，美国芝加哥大学医学院，一位日本学者突发奇想，将纳豆发酵物和尿激酶分别滴到人工血栓平板上。
2个小时后，纳豆发酵物竟然把血栓溶解掉。
偶然无处不在，一种全新的溶栓物质，就这样被发现了，这种物质提取于纳豆，故称之为——纳豆激酶。
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纳豆激酶的溶栓实验
人工血栓试验简介：1987年，纳豆博士须见洋行实验证明纳豆激酶（nk）具有溶解血栓的药作用。
这个试验是须见洋行教授在美国芝加哥某血液研究所进行担任研究员时进行的试验。
试验的原理是因为血栓的主要成分就是蛋白质；另外在人体中凝血酶可以使得纤维蛋
白原构成纤维蛋白，也就是我们常说道的血栓的主要共同组成物质，所以须见到洋行博士
使用了纤维蛋白原＋凝血酶去制作人工血栓，也就是类似人体的蛋白质然后将从超市买回
的纳豆放进人工血栓中观测，这就是大家晓得的两点半试验．两点半试验说明，纳豆具备
体外熔化人体血栓的促进作用。
之后的大量动物试验和人体试验都证明纳豆中所含的纳豆
激酶不但能体外溶栓，还能通过口服就能够达至体力溶栓的效果。
体外溶栓试验是最好的，也是能够简单操作的试验．纳豆都可以达到体外溶栓效果，
如果是纳豆激酶的提纯物，溶解速度就更加快速，通常正常人体体温３７度下，只需要十
几分钟就能看到很明确的溶栓效果．
反之如果一个产品连体外溶栓效果都没，我们应批评它是否是存有活性的纳豆产
品．生动纳豆具备体外溶栓功能，但是如果没活性的纳豆或者纳豆加工食品，那么就是没
任何溶栓效果的．通过试验我们必须能够检验该产品是否是存有活性的纳豆产品。
该产品是否具有体外溶栓的效果。
该产品是否具有持续体外溶栓效果。
（常温放置时
间越长，溶解范围越大）为什么不用人血进行试验首先只有医疗机构、科研单位等才有资
格采血、化验，且必须由经过专业技术培训的医务工作者进行，未取得医疗机构执业许可
证不得开展血压测量、血液检测的诊疗行为。
现场进行抽血、化验是非法的，涉嫌非法行医．另外，人体每天都会生成血栓，这是人体的一个正常生理现象．血栓形成后抗凝系统
作用于血栓，这个平衡机制维系着我们的健康．随着年龄的增长，压力，或疾病的出现，
身体的抗凝能力都会下降，这个时候就不能及时溶解血栓，因而发生血栓类疾病．因此，
不是光靠一滴血，或一时的检测，就能说明什么问题．血栓的形成有着合理的行程过程和
诸多因素，也不是说身体里有血栓，就要恐慌，只要明白人体的机制，就能明白血栓检测
是没有实际意义的．纳豆激酶溶解血栓实验步骤；
①制作人工血栓在人抽取纤维蛋白原内重新加入凝血酶，数分钟后即可构成人工血栓，为白色液态状。
②在人工血栓上放置纳豆激酶产品（胶囊内含物）
③演示人体温度37度，将人工血栓的器皿置放于热水杯之上。
④10分钟左右，纳豆激酶周围的血栓逐渐融化。
⑤30分钟，1个小时分别观测纳豆激酶周围血栓熔化情况，血栓熔化：白色固状的血栓熔化为液体。