杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展
细胞融合与杂交瘤技术
1.动物细胞筛选方式
抗药性筛选系统：利用生物细胞对药物敏感性
差异筛选杂种细胞。 如，亲本A：对氨苄青霉素敏感，对卡娜霉素不敏 感
亲本B：对卡娜霉素敏感，对氨苄青霉素不敏 感
杂种细胞可以在含有两种抗生素的培养基上 生长
HAT选择系统
• HAT是含一定浓度次黄嘌呤（H）、氨基喋呤 （A）及胸腺嘧啶核苷（T）的一种选择性培养 基，其中三种成分与细胞DNA合成有关。
40度的范围内生长，但温度敏感突变型的细胞能 在高温或低温下生长。由此筛选杂种细胞。
如，亲本一：具有卡那霉素抗性但只能在37度左 右生长。
亲本二：高温敏感突变型，但不能抗卡娜霉 素。
杂种细胞能在高温和含卡娜霉素的培养基上 生长。
荧光激活细胞分选仪：用不同荧光素标
记的脂质染料分别处理参与融合的亲本细 胞，在激光的激发下，融合细胞能发射两 种荧光，由此筛选杂种细胞。
四、杂交瘤细胞的制备
（周期长，技术性要求强）
制备MAb涉及一系列实验技术方法及 试剂的选择，包括抗原、免疫动物、免疫 方案、筛选检测抗体的方法、骨髓瘤细 胞、饲养细胞、血清、融合剂、细胞融合 方案、杂交瘤细胞克隆化、细胞的扩大培 养和冻存等。
单抗的制备过程：
• 动物免疫与亲本细胞的选择 • 细胞融合：淋巴细胞杂交瘤
杂交细胞遗传表型的控制过程：
遗传表型的动态观察和定期分析 （核型与带型）
建立种子细胞库，定期传代分种， 避免细胞过度生长
稳定的染色体数（或倍性、个数变化） 与带型，能有稳定的产物
第二节 杂交瘤技术与 单克隆抗体的生产
一、基本概念 二、杂交瘤技术的基本原理 三、单克隆抗体的特性 四、杂交瘤细胞的制备 五、单克隆抗体的应用
简述杂交瘤技术生产单克隆抗体的原理。
简述杂交瘤技术生产单克隆抗体的原理。
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杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术是一种常用的遗传学实验方法，用于研究基因的功能和调控。
其基本原理是将两个不同品系或物种的细胞或组织相互融合，生成杂交细胞或杂交瘤。
这些杂交细胞或瘤细胞会融合两个品系或物种的基因信息，同时保留着两个母细胞的细胞器和细胞质基因。
杂交瘤技术的基本步骤如下：
1.选择母细胞：选择具有所需特性的两个不同来源的细胞或组织作为杂交的母细胞。
一般选择一个无能力生长但含有所需基因的细胞（称为donor细胞）和一个能够快速增殖但缺乏所需基因的细胞（称为host细胞）。
2.处理细胞：将两个细胞进行特定处理，使其融合在一起。
一种常用的方法是使用化学物质（如聚乙二醇）或电脉冲来增加细胞融合的效率。
3.筛选和培养：将融合后的细胞进行筛选，通常是通过添加相应抗生素或培养基来筛选并培养合适的杂交细胞或杂交瘤。
4.分离纯化：通过稀释法或细胞克隆等方法，将杂交瘤细胞分离并纯化，以获得纯的杂交细胞系或杂交瘤。
杂交瘤技术的应用非常广泛，主要用于以下方面：
1.产生单克隆抗体：通过杂交瘤技术，可以融合具有所需抗体的B细胞与快速增殖的癌细胞，得到能够大规模产生特定抗体的杂交瘤细胞系。
2.研究基因功能：将疾病相关的基因或调控元件与高增殖性的癌细胞融合，可以研究相关基因的功能及其在疾病中的作用机制。
3.生产重组蛋白：将所需基因与杂交瘤细胞融合，可以实现大规模生产特定蛋白质，并用于医药和生物工程领域。
总之，杂交瘤技术是一种有效的遗传学实验方法，通过细胞融合的方式结合两种细胞的特性，用于研究基因功能、产生单克隆抗体和生产重组蛋白等多个领域。
药学类毕业论文范文
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下文是店铺为大家整理的关于药学类毕业论文的内容，欢迎大家阅读参考!药学类毕业论文篇1细胞大规模培养技术在生物制药中的应用【摘要】动物细胞培养基是体外细胞培养的重要因素,能够影响细胞生长。
它是利用动物细胞体外培养和扩增来生产生物产品，或者作为发现和测试新的工具。
为此本文就动物细胞培养基的发展及应用进行了简要的介绍。
【关键词】生物制药;动物细胞培养;应用一、动物细胞的特点及生长特性动物细胞虽可像微生物细胞一样，在人工控制条件的生物反应器中进行大规模培养，但其细胞结构和培养特性与微生物细胞相比，有显著差别：①动物细胞比微生物细胞大得多，无细胞壁，机械强度低，对剪切力敏感，适应环境能力差;②倍增时间长，生长缓慢，易受微生物污染，培养时须用抗生素;③培养过程需氧量少;④培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在;⑤原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡;⑥代谢产物具有生物活性，生产成本高，但附加值也高。
二、动物细胞大规模培养技术的发展动物细胞大规模培养技术生产大分子的生物制品起始于20世纪60年代，当时是为了满足生产疫苗的需要。
后来随着大规模培养技术的逐渐成熟和转基因技术的发展与应用，人们发现利用动物细胞大规模培养技术来生产大分子药用蛋白质比原核细胞表达系统更有优越性。
因为重组DNA技术修饰过的动物细胞能够正常地加工、折叠、糖基化、转运、组装和分泌由插入的外源基因所编码的蛋白质，而细菌系统的表达产物则常以没有活性的包含体形式存在。
随着大量永生性细胞株的创建，在商业利益的刺激下，动物细胞大规模培养技术也迅速发展起来，并被应用到生产实际。
动物细胞培养主要用于生产激素、疫苗、单克隆抗体、酶、多肽等功能性蛋白质，以及皮肤、血管、心脏、大脑、肝、肾、肠等组织器官。
它在医药工业和医学工程的发展中占重要地位。
细胞培养
细胞培养接种病毒的应用及进展摘要：病毒不具有细胞结构，也不进行蛋白质、糖和脂类的代谢活动，对抗生素具有明显的抵抗力，而且缺乏完整的酶系统，不具备能量合成系统，也不具有核糖体，是绝对的细胞内寄生。
以上特点表明：病毒必须在活的组织细胞中才能正常生长，通过细胞病变的观察来判断病毒的增殖。
这样看来体外细胞培养就显得尤其重要。
关键词：病毒、细胞培养、接种病毒病毒只具有一种类型的核酸[1]（DNA或RNA），并且只能在宿主细胞内通过复制的方式进行繁殖，形状大体上分为三种：球形颗粒、杆状颗粒和复杂形状颗粒。
病毒必须在活的组织细胞中生长繁殖，因此病毒培养的宿主系统主要有实验动物、鸡胚、体外培养的器官和组织细胞。
与传统的鸡胚接种相比，利用体外动物细胞培养[2]的方法具有很多优势，如抗原匹配性好，能够实现大规模生产和自动化控制，可以在短时间内使病毒大量增殖，解决疫苗制备中的很多难题，减少过敏反应等。
1 体内、外细胞的差异和分化差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。
因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。
实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。
分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体内不同。
细胞是否表现分化，关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。
2 细胞的分类根据细胞培养物的生长类型：粘附细胞和悬浮型细胞根据细胞培养物的生物学特性：原代细胞、继代细胞和传代细胞原代细胞：应用胰酶等分散剂将动物组织消化成单个细胞悬液，适当洗涤以后，加入营养液，使其贴附于玻璃瓶壁上，并生长增殖。
精品解析：2023届安徽省黄山市高三一模理综生物试题-A4答案卷尾
黄山市2023届高中毕业班第一次质量检测一、选择题1．关于真核细胞线粒体的起源，科学家提出了一种解释：约十几亿年前，有一种真核细胞吞噬了原始的需氧细菌，被吞噬的细菌不仅没有被消化分解，反而在细胞中生存下来了。
在共同生存繁衍的过程中，需氧细菌进化为宿主细胞内专门进行细胞呼吸的细胞器。
以下证据不能．．支持这一论点的是（）A．线粒体内的蛋白质，大多数是由核DNA指导合成B．线粒体内存在与细菌DNA相似的环状DNAC．线粒体内核糖体的化学组成和结构特征与某些细菌的核糖体相似D．线粒体能像细菌一样进行分裂增殖2．“半叶法”测定光合速率时，将对称叶片的一部分（A）遮光，另一部分（B）不做处理，设法阻止两部分之间的物质运输。
适宜光照下4小时，在A、B截取等面积的叶片，烘干称重，分别记为a、b。
下列说法错误．．的是（）A．若要测定叶片的呼吸速率，需要在光照前截取同等面积的叶片烘干称重B．选择叶片时需注意叶龄、着生部位、叶片对称性及受光条件等的一致性C．分析实验数据可知，该叶片的净光合作用速率的数值为：（b-a）/4D．若用“半叶法”探究光合作用的产物是否为淀粉，则实验前需要对植物做饥饿处理3．如图是某哺乳动物细胞分裂过程中三个细胞部分染色体及其上的基因示意图，乙、丙均来自甲细胞，下列叙述正确的是（）A．甲细胞产生的突变基因一定通过卵细胞传递给子代B．乙细胞的染色体组数是丙细胞的两倍C．丙细胞是次级卵母细胞或次级精母细胞D．等位基因的分离只能发生在乙细胞所示的时期中4．科学家以果蝇为研究对象揭示了“被热醒”的原因。
研究发现夜间环境温度升高时，果蝇的AC神经元感知温度变化产生兴奋。
该信号通过神经传导，最终抑制脑间PI神经元的活动（PI的功能相当于哺乳动物体温调节中枢的作用），从而促进夜晚觉醒，具体过程如图所示。
下列相关分析正确的是（）A．递质CNMa与CNMa受体结合可使PI神经元相应的膜发生Na+内流B．若某药物能促进突触间隙中CNMa的分解，则可降低高温对夜晚睡眠质量的影响C．AC神经元接受高温刺激产生的兴奋在神经纤维上双向传导D．PI相当于哺乳动物的脑干5．洪泛区是指江河两岸、湖周、海滨易受洪水淹没的区域，这些地区土地肥沃、生物种类丰富，合理利用这些地区发展生产、缩小洪灾是十分必要的。
生物技术制药试题及答案
生物技术制药试题及答案一、名词解释1. 生物技术（biotechnology）：有时也称为生物工程（bioengineering），是指人们以现代生命科学为基础，结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理，利用生物得体或其体系或它们的衍生物来制造人类所需要的各种产品或达到某种目的的一门新兴的、综合性的学科。
2．基因工程（gene enginerring）：是指在基因水平上的操作并改变生物遗传特性的技术。
即按照人们的需要，用类似工程设计的方法将不同来源的基因（DNA 分子）在体外构建成杂种DNA分子，然后导入受体细胞，并在受体细胞内复制、转录和表达的操作，也称DNA重组技术。
3．细胞工程（cell engineering）：是指在细胞为基本单位，在体外条件下进行培养、繁殖或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而达到改良生物品种和创造新品种的目的，加速繁育动植物个体，或获得某种有用物质的技术。
4．酶工程（enzyme engineering）：是利用酶、细胞器或细胞所具有的特异催化功能或对酶进行修饰改造，并借助生物反应器和工艺过程来生产人类所需产品的技术。
5．发酵工程（fermentation engineering）：是指利用包括工程微生物在内的某些微生物或动、植物细胞及其特定功能，通过现代工程技术手段（主要是发酵罐或生物反应品的自动化、高效化、功能多样化、大型化）生产各种特定的有用物质；或把微生物直接用于某些工业化生产的一种技术。
由于发酵多与微生物密切联系在一起，所以又称之为微生物工程或微生物发酵工程。
6. 生物反应器（bioreactor）：主要包括微生物反应器、植物细胞培养反应器，动物细胞培养反应器以及新发展起来的有活体生物反应器之称的转基因植物生物反应器，转基因动物生物反应器等。
7. 转基因动物：是指在基因组中稳定地整合有导入的外源基因的动物。
8. 转基因植物：是指通过体外重组DNA技术将外源基因转入到植物细胞或组织，从而获得新遗传特性的再生植物。
动物细胞大规模培养技术
大规模培育技术应用简介通过大规模体外培育技术培育哺乳类动物细胞是生产生物制品的有效方法。
20 世界 60-70年月，就已创立了可用于大规模培育动物细胞的微载体培育系统和中空纤维细胞培育技术。
近十数年来，由于人类对生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素等生物制品的需求猛增，以传统的生物化学技术从动物组织猎取生物制品已远远不能满足这一需求。
随着细胞培育的原理与方法日臻完善，动物细胞大规模培育技术趋于成熟。
所谓动物细胞大规模培育技术〔large-scale culture technology〕是指在人工条件下〔设定ph、温度、溶氧等〕，在细胞生物反响器〔bioreactor〕中高密度大量培育动物细胞用于生产生物制品的技术。
目前可大规模培育的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、cho〔中华仓鼠卵巢〕细胞、BHK-21(仓鼠肾细胞)、Vero 细胞(非洲绿猴肾传代细胞，是贴壁依靠的成纤维细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。
在过去几十年来，该技术经有了很大进展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube 等贴壁细胞培育，进展为生物反响器〔Bioreactor〕进展大规模细胞培育。
第一代细胞培育技术核心问题是难以产业化或者说是规模化生产：一是在工艺生产时不能大规模制备产品；二是非批量生产简洁导致产品质量的不均一性；三是难以对同批生产进展生产和质量控制。
随着生物技术的进展，迫切需要大规模的细胞培育，特别是培育表达特异性蛋白的哺乳动物细胞，以便获得大量有用的细胞表达产物。
承受玻璃瓶静置或旋转瓶的培育方法，已不能满足所需细胞数量及其分泌产物。
因而必需为工业化生产开创一种的技术方法。
自 70 年月以来，细胞培育用生物反响器有很大的进展，种类越来越多，规模越来越大，较常见的细胞培育生物反响器有空气提升反响器，中空纤维管反响器，无泡搅拌反响器及篮式生物反响器等。
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杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值，是免疫检验中的新型试剂，是生物治疗的导向武器。
作为医学检验试剂，单克隆抗体可以充分发挥其优势，如特异性好，灵敏度高，更便于质量控制，利于标准化和规范化。
传统的方法是利用小鼠腹水制备单克隆抗体，但是近几十年杂交瘤细胞体外大规模培养制备单克隆抗体技术也在不断发展。
特别是单克隆抗体在疾病诊断和治疗方面的需求，更进一步促进了杂交瘤细胞体外培养生产技术的发展，体外培养杂交瘤细胞生产的单克隆抗体已应用到许多方面。
由于杂交瘤细胞的半贴壁性质，无论是悬浮培养还是贴壁培养，均可进行杂交瘤细胞的体外大规模培养。
针对应用于体外诊断试剂的杂交瘤细胞体外培养制备单克隆抗体进行综述，主要包括中空纤维细胞培养和生物反应器细胞培养方法，以及不同培养方法优化的进展。
1975 年，英国科学家Milstein和Kohler发明单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb)，开创了多克隆抗体走向单克隆抗体的新时代，与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有无可比拟的优越性，它具有特异性高、效价高、纯度高、理化性状均一、重复性强、成本低并可大量生产等优点。
单克隆抗体杂交瘤技术是当代免疫学中最重要的技术革命，它的问世极大地推动了医学-生物学的发展。
单克隆抗体具有非常广泛的应用，特别是在体外诊断和疾病治疗等方面。
人用治疗的抗体药物主要采用基因工程重组抗体，由CHO、SP20、NS0等细胞表达，而基于杂交瘤细胞培养生产的单克隆抗体目前主要应用于诊断试剂及动物治疗。
目前大部分体外诊断用单克隆抗体的制备主要采用体内法，将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内，杂交瘤细胞在小鼠腹腔内生长，并产生腹水，因而可得到大量的且抗体浓度很高腹水单抗。
小鼠体内杂交瘤细胞培养，腹水中抗体含量浓度高，产量大，可持续抽取，不需要培养基等成本，不需要重复无菌操作，快速简便，但腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白(包括IgG) 和脂类物质等，在很多情况下必须要提纯后才能使用，还有动物病毒污染的危险，另外由于小鼠个体差异较大，导致产品批间差较大。
因此在无/低血清条件下的杂交瘤细胞的体外大量培养成为当前研究的主要方向。
杂交瘤细胞体外培养法制备单克隆抗体工艺的建立，通常需要经过以下4个阶段:小鼠骨髓瘤细胞的选择、细胞融合和单克隆筛选;鼠杂交瘤细胞体外培养方式的选择;杂交瘤细胞体外培养的工艺优化;纯化工艺的建立和优化。
体外培养鼠杂交瘤细胞制备单克隆抗体主要有两种方式，中空纤维系统培养和生物反应器培养，中空培养系统的优势有:①细胞密度高(＞108cells /ml) ，②营养物质能有效地分布，代谢废物能及时除去，③维持时间长，可达数月，特别适于长期连续培养，④培养系统占用空间小;劣势有:①放大困难，适用于年需求量小于10g 的产品，②耗材为一次性的且价格稍高，一旦出现污染，就必须废弃耗材，增加成本。
生物反应器培养的优势有:①易放大，几升到几百升甚至几千升均可，②工艺成熟稳定，③根据不同的需求，可以选择不同的培养工艺，批式培养，流加补料培养或者灌流培养;劣势有:①培养液抗体浓度偏低;②下游纯化体积较大。
针对体外诊断用单克隆抗体，综述杂交瘤细胞两种培养系统的特点、选择、培养工艺的优化以及目前的研究进展和应用成果。
1 杂交瘤细胞的特点和培养方式鼠杂交瘤细胞系是由小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞融合形成的。
一般来讲，鼠杂交瘤细胞不是一种严格的贴壁依赖性细胞(anchorage dependent cell，ADC)，属于半贴壁性质的细胞，既可以贴壁培养，也可以悬浮培养，但不同的细胞系之间的贴壁依赖性有差异。
中空纤维系统主要是贴壁培养，生物反应器培养既可进行悬浮培养，又可借助微载体进行贴壁培养。
体外诊断用单克隆抗体与治疗用单克隆抗体的需求量不同，体外诊断用抗体的年需求量比较少，一般10 ～100g /年，但是细胞株种类较多，个别特殊用途抗体如阻断剂的年需求量最多可达1～2kg /年，而生物制药用抗体需求量一般100～1 000kg /年。
生物反应器是最常用的制备单克隆抗体方法，在诊断试剂行业，转瓶和中空纤维系统也较常用。
培养方式包括批式培养、流加补料培养和灌流培养，灌流培养是最有效的生产小规模单克隆抗体的方法，中空纤维系统是灌流培养，生物反应器系统既可以进行批式培养或者流加补料培养，也可进行灌流培养。
灌流培养可以不断加入新鲜的培养基，排出代谢废料，从而使细胞快速达到高密度，高细胞密度可以实现高抗体分泌和高产能，有研究表明，灌流培养的产能比批式或流加培养高10倍多。
RaisaV 等统计比较了生物反应器和中空纤维系统制备单克隆抗体的区别，包括成本区别(如图1和图2所示)和产能区别(如表1所示)。
成本包括直接成本和间接成本，直接成本包括核心原材料、耗材、杂项、人力、QA/QC，间接成本包括通用设备、维持费用和折旧费，两者的主要区别是生物反应器设备折旧费占比较高，达39%，而中空系统设备折旧费占25%，中空系统比生物反应器系统多出10%的耗材成本;产能区别，10L生物反应器灌流培养年产能425g，抗体浓度0.17mg/ml，单根70ml中空纤维柱批产能10.6g，年生产5批，每批次同时培养8根中空纤维柱子，可实现年产能425g，每克抗体的成本，两者差别不大，生物反应器比中空纤维系统高7%。
2 中空纤维系统培养杂交瘤细胞20世纪70年代初期出现中空纤维细胞培养技术，1972年Knazek 等报道了他们设计、制造的小型中空纤维细胞培养装置及细胞培养的实验结果，证实细胞能在中空纤维上形成类似组织的多层细胞。
目前美国有多家公司在进行中空纤维系统的研发和生产，如FiberCell公司、CellCulture Company 公司等。
中空纤维系统可以在很小的体积内提供非常大的表面积，FiberCell公司有柱腔体积为15ml的中号中空纤维生物反应器(C2011 and C2008，FiberCellSystems) ，能提供2200cm2的表面积，也有柱腔体积为60ml的较大的反应器(C2018 和C2003)可以提供1.2m2的表面积。
CellCulture Company 可以提供柱腔体积为150ml的反应器，可以提供2.1m2的表面积。
中空纤维生物反应器的一个特点是培养的细胞密度可以超过108cells /ml，可以获得较高浓度抗体;中空纤维生物反应器和其他细胞培养技术的另一个基本区别在于:中空纤维能形成易于细胞附着的多孔渗滤支撑，最类似于活体内的细胞生长方式，由于营养输送是由下至上的，因此细胞很容易彼此堆积，形成一个具有多层细胞的层面。
中空纤维生物反应器的第三个特点是可通过中空纤维膜孔径(或截留分子量)选择性地控制不同分子量物质进出中空纤维膜，营养物物质和代谢废物进行交换，带进来营养物质，排出代谢废物，而目标产物一直累积，不能透过中空纤维膜。
最常见的例子是用于杂交瘤细胞株生产单克隆抗体，这是中空纤维生物反应器的第一次大规模应用。
功能型的中空纤维膜的孔径是20～30kDa，中空纤维柱内循环是含血清的培养基，不断提供营养物质，外循环是细胞生长的空间，内循环培养基中的氨基酸、无机盐、维生素以及血清中的小分子物质可以透过中空纤维膜供细胞利用，外循环细胞代谢产生的乳酸以及葡萄糖等代谢废物可以通过中空纤维膜被带走，每天更换内循环培养基，收获外循环抗体，从而实现杂交瘤连续培养，长期收获目标抗体。
由于中空纤维系统表面积大而培养体积小，且细胞数量可达109以上，因此收获的抗体浓度相对较高。
中空纤维培养系统的培养周期较长，根据需求一般在1～6 个月不等。
Legazpi 等用分子截留量为30kDa，表面积为2050cm2的中空纤维柱培养HB-8852杂交瘤细胞，在整个培养过程中，葡萄糖的含量从4.5g/L 逐渐降低到3g/L，谷氨酰胺的含量从0.4g/L 逐渐降低到0.2g/L，连续培养16天，抗体分泌0.27mg/ml，揭示了中空纤维系统培养杂交瘤细胞的代谢动力学，但此细胞株的抗体分泌能力相对偏低，摇瓶培养抗体分泌0.03mg/ml。
R van Erp 等应用中空纤维系统培养鼠杂交瘤细胞制备2株hCG 单克隆抗体，转瓶培养制备细胞种子，制备种子时用含10%血清的DMEM/F12培养基，将处于对数期的细胞以5× 106 cells /ml 的密度接种到中空纤维系统外腔，接种后2周，以2次/周的频率收获中空纤维系统外腔液，可以连续培养80天，细胞密度平均可达到7× 107 cells /ml，抗体分泌平均可达到4mg/ml。
Jackson等评价了用体外法中空纤维系统培养杂交瘤细胞制备单克隆抗体替代体内腹水法制备单克隆抗体的可行性，选取3株杂交瘤细胞，分别用体内法和体外法中空纤维系统制备单克隆抗体，制备周期65天，结果表明，细胞株2B11，体内法产量455mg，体外法产量211mg，细胞株3C9，体内法产量446mg，体外法产量565mg，细胞株RMK，体内法产量997mg，体外法产量1023mg，体内腹水法平均的抗体浓度为4.07～8.37mg/ml，体外中空纤维培养平均的抗体浓度0.71～11.1mg/ml，证明了中空纤维可以用于年需求量5g以下抗体的体外制备。
3 生物反应器培养杂交瘤细胞杂交瘤细胞培养系统有多种不同的类型和规模，包括滚瓶细胞培养系统、搅拌式生物反应器、气升式生物反应器和一次性生物反应器，每一种生物反应器都有其自身的特点和应用，培养规模从几升、几十升、几百升到几千升不等，目前行业应用最广泛的是搅拌式生物反应器。
但由于不同株的杂交瘤细胞的抗体分泌能力不同，对营养需求的需求也可能有差别，最适应的培养基也可能不同。
鼠杂交瘤细胞体外培养产生单克隆抗体，受很多因素的影响，促进剂、抑制剂以及添加物等，许多科学采取多种方式提高体外杂交瘤细胞培养生产单抗的能力，如基因工程改造、单克隆重新筛选、营养物质优化等。
用生物反应器培养杂交瘤细胞需对生物反应器控制参数和营养物质进行双重调控。
3.1 生物反应器参数调控最经济有效的单抗制备过程，需要充分理解生物反应器程参数对细胞生理过程的影响，因此必须评估细胞生长、营养消耗和抗体分泌的动力学参数，这些参数对工艺放大也是十分有用的。
Ayyildiz等比较了滚瓶培养系统(modular cell production roller culture apparatus ) 、搅拌式生物反应器(Biostat B plus cc，Sartorius，5L) 和一次性细胞静止培养系统(CELLine CL350，Sartorius) 培养A5A8株杂交瘤细胞，制备抗沙门氏菌O型特异性抗原的单克隆抗体，以期了解不同的生物反应器过程参数对单抗制备的影响，如细胞密度、细胞活率、葡萄糖和谷氨酰胺消耗、乳酸和氨的产生以及抗体的分泌等。