全自动酶联免疫法与手工酶联免疫法的结果比较(修改稿)
化学发光免疫分析
糖尿病
Albumin C-peptide Insulin
唐氏筛查
PAPP-A free βHCG HCG＋β AFP
心肌标志
骨标志
肝纤维
CK-MB
ß-Crosslaps
LN
Digoxin
25-(OH) Vit. D
HA
Digitoxin
Intact PTH
PIIINP
Myoglobin
Intact PTH
试剂有效期长 有效期可长达1年以上，放射免疫分析由
于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一 个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化 学发光相比，有效期长可以降低使用成本， 利于推广应用。
梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
3 化学发光免疫分析的优越性
➢ 中国免疫诊断现状
中国
国际（欧美为主）
种类
方法
检测原理
酶联免疫
酶与样本反应，依据颜色变化程度确定结果
免疫 化学发光
诊断
将抗原抗体同样本结合，由磁珠捕捉反应物，加入 发光促进剂加大反应发光速度与强度，进而诊断
根据镧系元素螯合物发光特点，用时间分辨技术测 时间分辨荧光
量荧光，检测波长和时间两个参数进行信号分辨
分子 诊断
PCR 基因芯片
DNA高温变成单链，低温互补配对链合成
激发态ν
的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出
光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样
品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测
能量
h.ν
物质的含量。
基态ν0 梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
期刊编辑修改文稿应重视的5种表述
期刊编辑修改文稿应重视的5种表述作者：贾明王虹白永利来源：《编辑之友》2012年第07期摘要：为了加强对作者修改稿的质量管理，不断提高期刊文稿质量，医学期刊编辑加工修改文稿应重视表述严谨简明：“一般资料”避免与“引言”重复，“结果”避免与图表重复，“方法”避免与“一般资料”重复，讨论避免与“结果重复”。
关键词：医学期刊编辑修改严谨简明科学研究要主次分明，论文表述要删繁就简。
我们在审稿与编辑加工过程中发现很多论文在表述上出现大量的重复，有的甚至整篇被反复表述。
因此，编辑在加工修改文稿过程中，应该彰显严谨、简明的风格。
一、“摘要”表述要求严谨完整，简明扼要“摘要”是对论文内容的简短而全面的概括，能够让读者迅速总揽论文内容。
简洁、具体的“摘要”要反映论文的实质性内容，展现其重要梗概；它以主题概念不遗漏为原则，要表述严谨、逻辑性强，结构完整。
“摘要”的开头要提出最重要的信息。
它可以是目的或论题，也可以是结果或结论，最多只需包括4个或5个最重要的观点、结果或含意。
例如：“目的：血栓闭塞性脉管炎（Thromboangitis obliterans，TAO）是一种以中、小动脉节段性，非化脓性炎症和动脉腔内血栓形成为特征的慢性疾病。
本文探讨静脉动脉化手术治疗下肢血栓闭塞性脉管炎的治疗经验。
”修改时首先应删除血栓闭塞性脉管炎概念的解释，其次应删除血栓闭塞性脉管炎的英文全称（应置于正文中首次出现时），只保留简称，最后还要删除主语“本文”。
修改结果为“目的：探讨静脉动脉化对下肢血栓闭塞性脉管炎治疗效果”。
二、“一般资料”避免与“引言”重复叙述“引言”对正文起提纲挈领和引导阅读兴趣的作用，语句要简洁、开门见山。
它的内容应包括：立题的理论或实践依据是什么？有何创新？实践意义是什么？“引言”的写作应注意：内容不宜空泛，篇幅不宜过长。
对过去工作成就和论文的价值的评价要遵循实事求是的原则。
对教科书或者众所周知的内容不要重复。
内容只需说明研究的设计方案即可，而不必叙述具体的数据、结果和结论。
肿瘤相关抗原 CA125 定量检测试剂盒 （酶联免疫法） 说明书
肿瘤相关抗原CA125定量检测试剂盒（酶联免疫法）CanAg CA125 EIA产品编号： 400-10产品说明书编号：400-10 酶联免疫试剂盒用于体外诊断2007年11月规格：96人份/盒用途CanAg CA125 EIA试剂盒用于定量检测人血清中CA125的含量。
检测方法说明CA125是一种高分子量的粘蛋白型糖蛋白，最初是由Bast等人建立的Oc125单克隆抗体命名的。
现已表明，在CA125抗原上的不同表位可同时表达Oc125单抗系列的识别位点，故可应于建立针对CA125抗原不同位点的检测方法。
CanAg CA125 EIA试剂盒是建立在两株鼠单克隆抗体的基础上，Ov197和Ov185，它们直接结合CA125抗原蛋白核心的两个独立位点。
实验原理CanAg CA125 EIA 试剂盒采用直接夹心技术基础上的固相、非竞争性检测法。
标准品，质控品，病人标本与生物素标记的抗CA125抗体以及辣根过氧化酶标记的抗CA125示踪液，在链亲和素包被的微孔中一起温育。
清洗后，加入底物/显色缓冲液(过氧化氢和3,3',5,5'四甲基联苯胺)使其发生酶反应。
如果血清中存在抗原，就会显示为蓝色。
颜色的深度与标本中的CA125浓度呈正比。
颜色的深度可用酶标仪在620nm (也可选择加入终止液后在 405 nm )进行检测。
每次试验均需根据每个标准液的浓度与其相对应的吸光度绘制标准曲线，病人标本中的CA125浓度即可从标准曲线上读出。
试剂●CanAg CA125 EIA试剂盒能检测 96人份标本。
●试剂盒的有效期标示于包装盒外标签上。
●禁止使用过期的试剂。
●不同批号的试剂禁止混用。
●试剂盒贮于+ 2℃至+ 8℃贮存，避免冷冻。
●打开包装的试剂其稳定性如下表，避免污染。
试剂使用后，用原包装密封好试剂并立即于+ 2℃至+ 8℃贮存。
不稳定性说明TMB HRP 缓冲液应该为无色或呈很浅的蓝色。
溶液完全变为蓝色则提示试剂被污染了，应丢弃，禁止使用。
人类免疫陷病毒(HIV)1+2型抗体(酶联免疫法)标准操作程序SOP文件
3．分别在每孔加入酶标记抗原100ul ,轻拍混匀，封口胶封好，置于37 C温育60分钟。
4．用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完毕后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
页码：第2页，共2页
[结果判断]
1,阴阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值.
2,若阴性对照OD均值小于0.02按0.02计算.
3,临界值(cut off值)的设定:
cut off值=阳性对照均值X 0.10+阴性对照OD均值
4,被检样本的D值>=临界值应判为HIV抗体阳性反应,<临界值为阴性反应.
[试剂厂家]
华美生物工程公司
[试剂组成]
1．HIV微孔板4．HIV阴阳对照
2．HIV酶标抗原5.底物液A.B
3．浓缩洗涤液6.终止液
[试剂的稳定性与贮存]
试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,有效期内（六个月）稳定。
[标本的收集与处理]
标本为新鲜无溶血血清或血浆。
[操作步骤]
1．取出试剂盒平衡至室温，将浓缩洗涤液用蒸溜水或去离子水按1：19稀释后备用。
待测样本的OD值>=临界值判为HIV抗体阳性,应重新取样双孔复试,复试阳性者应按照"全国HIV检测管理规范"送"HIV确认实验室"进行确认实验.
[质量控制]
为确保测试结果准确可靠，每批测试均应放置阳性质控血清与被检样品同时测试，用以检查试剂性能。
[临床意义]
人体受到免疫缺损病毒（HIV）感染后，试验呈阳性反应，如男性同性恋、静脉药瘾者（吸毒者）、血友病患者、艾滋病人的配偶。个别献血员中也有阳性反应的报告。
ELISA、TPPA和CLIA三种检测方法在血清梅毒螺旋体特异性抗体检测中的应用观察
ELISA、TPPA和CLIA三种检测方法在血清梅毒螺旋体特异性抗体检测中的应用观察朱纯刚【期刊名称】《《当代医学》》【年(卷),期】2019(025)025【总页数】3页(P34-36)【关键词】梅毒螺旋体特异性抗体; CLIA; TPPA; ELISA【作者】朱纯刚【作者单位】瑞昌人民医院输血科江西瑞昌 332200【正文语种】中文梅毒是一种由梅毒螺旋体感染导致的性传播疾病,传染性较强,严重危害患者的生命健康,且研究表明近年来梅毒在我国发病率有上升趋势[1].故在输血及各种创伤性检查中需进行梅毒螺旋体检测,以控制梅毒的传播.血清学检测是诊断梅毒的重要依据之一[2],而检测方法的敏感性、特异性关系到梅毒早期诊断的准确性,因此检测方法的选择十分重要.在我国多数实验室及医院采用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)和酶联免疫法(ELISA)进行检测,而磁微粒化学发光法(CLIA)是国内近年来开发的一种检测梅毒螺旋体的新方法[3],为探讨该方法与传统方法的检测效果,本研究拟通过采用CLIA法对10 600份血清标本进行梅毒螺旋体特异性抗体初筛试验,并采用ELISA法对200份初筛阳性标本进行检测,以TPPA法对检测结果进行确认分析,旨在比较3种检测方法的应用价值,为临床诊断提供参考依据,现报道如下.1 资料与方法1.1 临床资料 2016年2月至2018年2月本院住院和门诊共检测了10 600个标本,首先用磁微粒化学发光法检测到梅毒特异性抗体阳性200例左右,其中男90例,女110例,年龄17~78岁,平均(41.36±5.24)岁.所有患者均同意参与本研究且签署知情同意书,排除精神异常、药物过敏病例.1.2 方法采集患者静脉血5 ml,以3 000 r/min离心10 min后取上清液分别首先进行TPPA检测,对阳性标本进行ELISA、CLIA法复检.①CLIA检测:仪器采用郑州安图Autolumo A2000型全自动化学发光检测仪,试剂由郑州安图生物工程股份有限公司提供.采用双抗原夹心一步法免疫分析模式,测定发光值,依据临界值对抗体存在与否进行判断.②TPPA检测:TPPA试剂盒来自日本富士瑞必欧株式会社,将抗原设定为梅毒螺旋体Nichols株,结合血清中特异性抗体后有凝集反应出现.③ELISA 检测:采用北京普朗酶标分析仪和全自动洗板机,以及英科新创(厦门)科技有限公司生产的梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒.运用双抗原夹心ELISA检测血清梅毒螺旋体抗体.1.3 观察指标及结果判读①3种方法检测阳性率比较;②梅毒螺旋体特异性抗体检测结果.①CLIA法:S/CO≥1.0为阳性,S/CO<1.0为阴性.②ELISA法:显色过程中利用TMB系统,通过全自动酶联免疫分析仪判断结果,S/CO≥1.0为阳性,S/CO<1.0为阴性.以上所有检测方法的结果均由至少两位检验科医师独立判读.③TPPA检测结果可直接由肉眼观察.1.4 统计学方法用SPSS 22.0软件系统完成数据分析,计数资料用n和%表示,阳性率比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义.2 结果2.1 3种方法检测阳性率比较 CLIA法检测阳性率虽较高,但CLIA、TPPA及ELISA3种检测方法对梅毒螺旋体特异性抗体阳性检测率比较差异无统计学意义,见表1. 表1 3种方法检测阳性率比较[n(%)]Table 1 Comparison on positive rates among the three detection methods[n(%)]方法CLIA(n=10 600)TPPA(n=10 600)ELISA(n=10 600)阳性数200 190 189阴性数10 400 10 410 10 411阳性率(%)1.89 1.79 1.78 χ2P 0.3900.8232.2 梅毒螺旋体特异性抗体检测结果 CLIA检测敏感性显著高于ELISA法(P<0.05),但两种检测方法的特异性比较差异无统计学意义,见表2.表2 梅毒螺旋体特异性抗体检测结果Table 2 Test results of Treponema pallidum-specific antibodiesTPPA CLIA ELISA阳性(n=190)+189 177-11 3阴性(n=10 410)+11 12-10 399 10 398阳性符合率(灵敏度)99.47 93.16阴性符合率(特异度)99.89 99.88总符合率99.89 99.763 讨论近年来梅毒发病率显著升高[3],对其进行早期诊断和早治疗是控制其扩散的关键环节,因此提高检测的准确率至关重要.梅毒血清学诊断的主要方法是进行特异性抗体检测[4].TPPA是目前临床最常使用的方法,有文献报道[5]TPPA除对一期梅毒敏感性稍低外,对其余各期梅毒敏感性和准确性均较高.但一期梅毒患者是梅毒迅速传播最主要的传染源,多数方法对一期梅毒诊断敏感性仅在50%~80%之间[6].本研究显示TPPA 检测的总符合率为98.50%,高于文献报道值.其原因可能与本研究采用的检测仪不同以及样本量偏小,阳性检测率较高有关.CLIA检测梅毒特异性抗体是近年来发展应用的一项新技术,有报道CLIA检测各期梅毒患者梅毒抗体的敏感性、特异性均较高,敏感性为98.7%~100.0%,特异性为99.9%[7-8].本研究发现CLIA检测法对梅毒螺旋体特异性抗体的敏感性为99.47%,在文献报道范围值内.而特异性为99.89%,与相关文献研究结果基本一致.TPPA检测法是梅毒螺旋体抗体的金标准,是目前较为公认的梅毒特异性抗体的准确检测方法,但试剂较为昂贵,操作费时,而且结果依靠目测读取,易受主观因素的影响,难以用于大规模的筛查[9].本研究将TPPA检测与ELISA及CLIA检测方法对比发现TPPA检测阳性率为1.79%,高于ELISA检测阳性率,但低于CLIA检测阳性率.CLIA检测阳性病例中,有11例假阳性,1例假阴性,而ELISA检测阴性病例中,有13例假阴性,12例假阳性.由此可见CLIA检测法对梅毒螺旋体特异性抗体检测灵敏度较高,特异性与ELISA法近似.且CLIA检测能在全自动分析仪上进行,操作简便,适合临床大批量检测,检测时间短,效率高,更方便患者,有研究认为CLIA既可作为筛查试验,又可作为确证试验[10].ELISA检测法由于操作简便,成本低,可手工检测亦可上机检测,被广泛应用于梅毒螺旋体特异性抗体大批量筛查检测,但该方法也存在假阳性,本研究也显示如此,因此存在一定的局限性,尤其在老年人中较为严重[11],需结合其他试验进一步确认分析.综上所述,在梅毒螺旋体特异性抗体检测中,CLIA法检测阳性率高于ELISA法和TPPA法,CLIA检测特异度和灵敏度均较高,但易存在假阳性,临床可结合实际情况,联合CLIA与TPPA进行检测.参考文献【相关文献】[1] 段爱华,施纪文,温惠萍,等.CLIA法联合TPPA法在临床梅毒血清学筛查中的应用评价[J].中国艾滋病性病,2016,5(1):42-43.[2] 刘静,刘婕,巩瑜,等.5种血清学方法检测梅毒螺旋休抗体的评价[J].现代检验医学杂志,2014,29(4):103-105.[3] 赵晓慧.3种方法在梅毒螺旋体特异性抗体检测中的意义[J].检验医学与临床,2016,13(9):1260-1261.[4] 武强,柯文才,唐思叶,等.化学发光法检测梅毒特异性抗体进行逆向产前梅毒筛查的评价[J].中国卫生检验杂志,2017,6(21):3151-3153.[5] 武强,章双虎,柯文才,等.化学发光法检测梅毒特异性抗体进行梅毒筛查的可行性评价[J].中华医院感染学杂志,2014,24(3):769-771.[6] 贾敏利,田慧芳,王瑞军.三种常用的不同血清学诊断方法对梅毒螺旋抗体的检测效果分析[J].中国性科学,2017,8(5):72-74.[7] 吕志军.不同检测方法检测梅毒螺旋抗体的效果比较分析[J].临床与病理杂志,2014,34(6):693-696.[8] 刘静,于静波,王玉红,等.两种方法联合检测梅毒螺旋体抗体的应用价值[J].检验医学与临床,2015,8(20):3026-3027.[9] 邵春燕,王海平,卓海龙,等.化学发光法检测输血前梅毒特异性抗体复查策略的研究[J].临床输血与检验,2015,17(1):46-48.[10] 张士君.CLIA、ELISA与TPPA三种方法对梅毒螺旋体特异性抗体检测的意义[J].中国现代药物应用,2015,9(16):41-42.[11] 甄珠,刘克芹.三种临床常用的梅毒螺旋体抗体检测方法的比较和评价[J].海南医学院学报,2015,21(4):553-555.。
抗-HIV不同检测方法的结果比较
６６ ５
检 验 医学 与 临床 ２ ０ ０ ８年 ６月 第 ５卷 第 １ 期 １
Ｌ ｂ Ｍｅ ｌ ，ｕ ｅ２ ０ ， １５ Ｎ ． １ ａ ｄＣ ｉ Ｊ ｎ ０ ８ Ｖｏ ， ｏ １ ｎ ．
抗－ Ｖ 不 同检 测 方 法 的结 果 比较 ＨＩ
胡京辉 ， 王 瑞 ， 孙
【 要】 目的 摘
莉 （ 京 市 血 液 中 心检 验 科 北
１０ ８ ） ０ ０ ８
探 讨 不 同 检 测 方 法 、 同检 测 试 剂 对 献 血 者 人 类 免 疫 缺 陷 病 毒 抗 体 （ 一 Ｖ） 测 结 果 的 影 不 抗 ＨＩ 检
响 。方 法 采 用 不 同 试 剂 使 用 酶 联 免 疫 吸 附试 验 （ Ｌ Ｓ 对 献 血 者 血 浆 标 本 进 行 抗 一 Ｖ 分 析 ， 反 应 性 血 浆 标 本 Ｅ ＩＡ） ＨＩ 呈 采 用 免 疫 学 蛋 白印 迹 法 进 行 确 证 分 析 。 结 果 Ｅ ｓ 再 次 检 测 抗一 Ｖ 阳性 率 显 著 低 于 初 次 检 测 阳性 率 ， 异 有 ｕ Ａ ＨＩ 差 统 计 学 意 义 （ ＯＯ ）确 证 试 验 阳性 率 显 著 低 于 初 次 检 测 和 再 次 检 测 的 阳 性 率 ， 异 有 统 计 学 意 义 （ Ｐ＜ ． １ ， 差 Ｐ＜ Ｏ Ｏ ） ．１ 。 结论 采 用 不 同 试 剂 检 测 抗一 Ｖ 对 于 保 证 血 液 安 全 是 非 常 必 要 的 。 ＨＩ 【 关键 词 】 艾 滋病 ； 人 类 免 疫 缺 陷病 毒抗 体 ； 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 中圈 分 类 号 ： １ ． １ Ｒ５２ ９ 文献标志码 ： Ａ 文章 编 号 ：６ ２９ ５ （０ ８ １－５ —２ １ ７—４ ５ ２０ ） １６ ６０
(仅供参考)ELISA(酶联免疫吸附测定)实验报告
ELISALin Chengyu Bio 04 2010030007Experiment Date: 2012-03-12 Submitting Date: 2012-03-211Introduction1.1Background informationELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) is a solid-phase assay for antibodiesemploying ligands labeled with enzymes which is widely used for immunological assays.This technique can be applied to detect antigens or antibodies for qualitative orquantitative purpose. Since enzyme reactions are very well known amplificationprocesses, the signal is generated by enzymes which are linked to the detection reagentsin fixed proportions to allow accurate quantification.11.2Major principlesFigure 1 Schematic diagram of ELISA2Figure 2 Procedure of indirect ELISA3As shown in Figure 1 & 2, the general procedure of indirect ELSIA is to: incubate theplate well with antigen, wash off unbounded antigen, incubate with 1st antibody, washoff unbounded 1st antibody, incubate with labeled 2nd antibody, wash off unbounded 2ndantibody, incubate with enzyme substrate solution, and detect optical density or otherindex showing enzyme activity.2Experiment Operation2.1Antigen coating(1)Prepare an antigen solution in coating buffer (human IgG at 0.025mg/ml);(2)Pipette 200 μl antigen solution to each well (Row: B~G; Column: 2~10; Column 11is negative control without antigen) of the microtiter plate;(3)Incubate the plate at 37 ℃for 30 min;(4)Remove the antigen solution;(5)Wash each well with 200 μl with PBS-T for 3 times;(6)Block each well (Row: B~G; Column: 2~11) with 200 μl 0.5% BSA-PBS, andincubate the plate at 37 ℃for 30 min;(7)Remove the blocking solution;(8)Wash each well with 200 μl with PBS-T for 3 times.2.2Primary antibody reaction(1)Dilute the primary antibody (rabbit-anti-human IgG antiserum) in PBS-T fordifferent dilution (from 1:400 to 1:51,200 in 2-folds dilution);(2)Add 200 μl diluted antibody solution to each well following Table 1;Table 1 Scheme to add primary antibody(3)Incubate the plate at 37 ℃for 1 hour;(4)Remove the primary antibody solution;(5)Wash each well with 200 μl PBS-T for 3 times.2.3Application of secondary antibody(1)Dilute the peroxidase conjugated secondary antibody (Goat-anti-rabbit IgG-HRP) inPBS-T at the dilution of 1:20,000 and 1:40,000;(2)Add 200 μl secondary antibody solution to each well following Table 2;(3)Incubate the plate at 37 ℃for 1 hour;(4)Remove the secondary antibody solution;(5)Wash each well with 200 μl PBS-T for 3 times.2.4Substrate development(1)Add 200 μl substrate solution to each well (Row: B~G ,Column: 2~11);(2)Incubate for approximately 3 min;(3)Add 50 μl 2 M H2SO4 to each well to terminate the reaction;(4)Measure optical density at 490 nm.3Raw data and its processing3.1Raw data3.2Data processingSet Row B, C, and D as Group I, and Row E, F, and G as Group II. The processed datais shown in Table 4Table 4 Processed data: optical density of each groupSet different dilutions of primary antibody as x axis, optical density as y axis, drawFigure 3 to illustrate their relation.Figure 3 Relationship between optical density and dilutions of primary antibodyFor the reason that the curve cannot illustrate the relationship enough, change the x axis to nature logarithm of different dilutions of primary antibody. See Figure 4:Figure 4 Relationship between optical density and natural logarithm of dilutions of primary antibodyUsing linear fit for each group, we can figure out that two lines are approximately parallel.In the black curve in Figure 3, there is an oblivious point of inflection which corresponds with the dilution of 1:800. The curve after this point becomes flat, which indicates that the binding between antigens and primary antibodies is saturated in the dilution of 1:800 and higher. This data can suggest that in other immunoenzymatic experiment, the proper dilution of primary antibody will be around, and no higher than 1:800.What’s more, from the red line in Figure 4 we can figure out that the optical density hasa linear relation with natural logarithm of dilutions of the primary antibody.As for comparison between Group I and Group II, from Figure 3 we can figure out thatthe point of infection of blue curve, which corresponds with the dilution of 1:40,000, ison the left, about 1:1600.In Figure 4, the green line (1:40,000) is positioned lower than the red line (1:20,000),which is easy to understand. Lower concentration of secondary antibody means lessbinding with primary antibody during application of secondary antibody.4Results and discussion4.1Results(1)The optical density has an approximately linear relation with the natural logarithmof the dilutions of the primary antibody;(2)For secondary antibody in the dilution of 1:20,000, the proper dilution of primaryantibody is 1:800; for secondary antibody in the dilution of 1:40,000, primaryantibody is recommended to be 1:1600;(3)With the same dilution of antigen and primary antibody, higher concentration ofsecondary antibody will get a higher optical density;4.2Discussion(1)What is the significance of the negative control groups?I.The no primary antibody groups proved that there is no specific bindingbetween antigen and secondary antibody, and provided a background ofnon-specific binding between secondary antibody and antigen;II.The no antigen groups can provide a background of non-specific binding between primary antibody and BSA.(2)Why washing step is essential?Washing each well with PBS-T, which contains tween-20 as detergent, can wash offunbounded antigens and antibodies, including those non-specifically binding. Ifwashing step is omitted, the background index will be higher, and might causeinterference to the result.(3)Why blocking step is essential?After the antigen coating step, the surface of the well is not covered by antigenentirely, i.e. there is still some site leaving blank, which allows other proteins bindto them. Blocking step is to block those blank sites with non-specific bindingmaterial that will not cause interference to the experiment. Thus, the primaryantibody will only bind to the antigen coated in the first step, rather than coat on thesurface as well.(4)What’s the advantage of indirect ELISA comparing with direct ELISA?I.Indirect ELISA can amplify the optical density which we measure.Compared to direct ELISA, the number of secondary antibody binding tothe primary antibody is way larger than the number of primary antibodybinding to the antigen. Thus, optical density will be higher and easier tomeasure, which means a lower error;II.The secondary antibody contains HRP, which is essential for substrate development. Compared to direct ELISA, indirect ELISA need only onekind of antibody contains HRP to perform many kinds of experiment, ratherthan one antibody linked to enzyme for one experiment, which isinconvenient.5Reference【1】/wiki/ELISA【2】/post/9314400054【3】/indirect_elisa。
核酸检测与酶联免疫检测血液病毒的比较分析
病是经血液传播而感染人体的，会对人体产生严重 的危害 ，以 乙肝病毒、丙型肝 炎病毒、人类 免疫缺陷病毒最 为严重 。据世 界卫生组织（ ＷＨ Ｏ） 统计 ，每年 由输血和非安全注射导致的乙肝
病毒 、 丙 型肝 炎 病 毒 、 人 类 免疫 缺 陷 病 毒 感染 分 别 达８ ０ ０ — １ ６ ０ ０ 万人 、２ ０ ０ － ４ ７ ０ 万人 、８ — １ ６ 万 人 ，因此 对 住 院 患 者术 前进 行 血
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
样检测才 能有 效预 防乙肝病 毒、丙型肝炎病毒 、 人类 免疫缺 陷
有梅毒 、乙肝病毒或谷丙转氨酶 的检测不合格 ，因此对 １ ０ ０ ０ 例患者分别进行Ｎ Ａ Ｔ 与酶联 免疫检测分 析。 对 以上患者取全血４ ｍＬ 与Ｅ Ｄ Ｔ Ａ 按４： １ 的比例混 合， ２ ４ ｈ
型肝炎病毒抗体 、梅毒特异性抗体 、人类免疫缺 陷病 毒抗 原， 抗体的筛查，观察对 比两种检测结果的准确性 。 结果 与结论 ： 酶联 免疫法 检测 结果显示，９ ０ ０ 例合格血液标本 中有 ８例血样检测为乙型肝炎表面抗原 、 人类免疫缺 陷病毒抗 原， 抗体 阳性， 而 １ ０ ０例不合格血液标本中检测 出 ５ 例合 格， 漏（ 误） 检率为 １ ． ３ ％； 而核酸检验中 出现 １ 例误检 ， 无漏检情 况， 检测 失误率 为 ０ ． １ ％，两组 的失误率差异有显著性 意义（ 尸 ＝ Ｏ ． Ｏ Ｏ １ ） 。结果证实 ，与酶联免疫检测血液病毒相 比， 核 酸法检测准
１ ＿ ２ ＿ ２ 核酸法 罗 氏核酸 定性 检测首 先对血样 采用６ 份样本 混和检测模式 ， 若混合标本检测 出现 阳性反应 ， 则分拆 为单血 样标本 ，采用单血样标本检测 ，即所谓分拆 检测 。 分拆检测 后 呈 阳性反应性 的标本 ， 即可判为不合格血样 ， 否则为合格血样 。
外周血HBsAb的酶联免疫吸附测定与＂HOOK效应＂
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
ELISA法检测乙肝五项的影响因素与临床意义
ELISA法检测乙肝五项的影响因素及临床应用【摘要】众所周知，乙肝的致病原是乙肝病毒，乙肝病毒在肝细胞内生存、复制后，再排出到血液中。
所以不仅血流中病毒高负荷，而且肝脏的大多数肝细胞都被感染。
当今社会谈乙肝色变，主要有下列几个方面：长期病毒携带或患病怕传染给亲属和周边的人群，同时亦担心受到社会的歧视；治疗乙肝和各种护肝药名目繁多，且各有利弊而不知所从；长期病毒携带或久治不愈而演化成肝硬化甚至肝癌。
作为检测乙肝五项的工作人员应该慎重操作，对每一个结果负责，不能因假阳性引起患者的心理压力和精神痛苦，造成不必要的纠纷。
【关键词】ELISA法；乙肝两对半；乙肝两对半又称乙肝五项，为国内常用的乙肝病毒(HBV)感染的检测血清标志物。
乙肝病毒免疫学标记有表面抗原(HBsAg)、表面抗体(抗-HBs或HBsAb)、e抗原(HBeA g)和e 抗体(抗-HBe或HBeAb)、核心抗原(HBcAg)和核心抗体(抗-HBc或HBcAb)”。
可检测患者是否感染乙肝及感染的具体情况。
随着现代临床免疫学的发展，酶联免疫吸附试验(ELISA) 因其操作简单、灵敏度高、特异性高等特点而广泛应用于乙肝五项的检测。
但由于乙肝标志物检测生产试剂厂家较多，各种试剂诊断灵敏度及特异性相差很大，因此，如何选择灵敏度高、特异性好的乙肝标志物检测试剂成为乙肝检测中至关重要的问题之一。
本研究分别选择3家国产ELISA试剂盒对来甘肃省武威肿瘤医院参加健康体检患者血液样品进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测，乙肝表面抗原(HBsAg)检测试剂盒，通过ELISA法检测300例健康体检患者血清中HBsAg水平，检测出的阳性标本再用免疫胶体金试纸条检测，比较三个不同公司生产试剂盒检测阳性率及与金标试纸条法检测的一致性，现报道如下：1资料与方法1 ．1一般资料选择我院2013年7月——2 013年11月健康体检患者300例，其中，男170例，女130例；年龄20～54岁，平均30岁。
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全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法的检测结果比较王胜虎1）陈琪 1）李媛 2）1）昆明医科大学附属延安医院检验科，云南昆明 650051； 2）昆明医科大学海源学院基础部，云南昆明650500[摘要] 目的通过比对全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法检测临床标本结果的相关性及符合率，探讨更科学可靠的检验方法。
方法随机抽取90份临床与体检标本，经Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪和手工加样操作的IMARK2酶标仪测定甲肝、乙肝5项、丙肝、戊肝2项、TP及HIV的结果，并对结果进行相关性及合率的分析。
结果对所检测项目中的HBsAg、HBsAb、HBeAg、TP、HIV的相关性系数r2>0.9 ，其数据显示相关性较好；而HAV-IgM、HBeAb、HBcAb、HCV、HEV-IgM、HEV-IgG、的相关性系数为 0.9>r 2>0.6 ；Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法操作比对90个样本的11项检测结果总符合率达96.9％。
结论全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法有较好的相关性。
全自动酶联免疫分析仪的使用还大大的减轻了实验室人员的劳动负担，提高工作效率，应加强临床推广。
[关键词] 全自动酶联免疫分析仪、手工酶联免疫法、ELISA的影响因素Automatic enzyme-linked immunity analyzer test results compared with those ofmanual enzyme-linked immunoassay1) Yanan hospital affiliated to Kunming medical university clinical laboratory, Kunming Yunnan 650051；2) Kunming major medical university institute of source base, Kunming，Yunnan,650500[Abstract] Objective alignment Tecan Freedom Evolyzer-2200 automated enzyme immunoassay analyzer and manual ELISA method to detect the consistencyof the results of clinical specimens to explore more scientific and reliable inspection party. Methods 90 randomly selected samples from clinical and physical examination, the IMARK2 microplate reader and the instrument operating manual sample measurement hepatitis A, hepatitis B 5, hepatitis C, hepatitis E 2, TP and HIV results, and the results are correlated and linear regressionanalysis. Results the test items of HBsAg, HBsAb, HBeAg, TP, HIV correlation coefficient r2> 0.9, their data show a good correlation; and HAV-IgM, HBeAb, HBcAb, HCV, HEV-IgM, HEV-IgG , the correlation coefficient was 0.9> r 2> 0.6; compared with manual method is to detect 90 of 11 samples of the results of the total coincidence rate was 96.9%. Conclusions automatic and manual ELISA method has a good correlation. Automatic ELISA also greatly reduce the labor burden of laboratory personnel, improve efficiency, should be strengthened in clinical practice.[Key words] automatic ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay manual, factors of ELISA.随着我国医疗技术和临床诊断技术的不断发展，简便、快速和敏感的诊断才能适应疾病诊断的要求。
而中国临床免疫检测仪器则不断发展进步，从之前的手工检测到现在的全自动酶联免疫分析仪[1]。
目前许多检验科的免疫室都在使用全自动酶联免疫分析仪同时辅助使用手工酶联免疫法检测，但由于检测系统的不同，结果是否具有可比性关系到检验免疫室的检测质量。
本研究针对此现象，应用Tecan Freedom Evolyzer-2200全全自动酶联免疫分析仪检测临床血清标本，并与手工加样操作酶标仪IMARK2方法比对，以便选择更稳定、可靠的检测系统。
1 材料与方法1.1 一般资料随机选取90份新鲜血清标本，来源于昆明市延安医院临床患者及正常体检人群。
1.2 仪器和试剂仪器：瑞士TECAN公司生产的Tecan Freedom Evolyzer-2200型全自动酶联免疫分析仪。
美国伯乐公司生产的IMARK-2酶标仪；基波科技公司生产的JB-1离心式洗板机；试剂：甲型肝炎病毒抗体检测试剂盒、乙型肝炎病毒5项诊断试剂盒、人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（上海科华生物工程股份有限公司生产、试剂批号分别为201408142、201409312、201410161)、丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（英科新创科技公司、试剂批号2014115826）、戊型肝炎2项诊断试剂盒、梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒均为（北京万泰生物药业股份有限公司、试剂批号EG20150101、N20141017）。
1.3 测定方法对90份随机新鲜标本分别采用全自动酶联免疫分析仪与手工操作同时进行。
两种方法对比检测，手工操作严格按照试剂说明书进行,保障其检测的质量还需能较熟练的进行检测[7]；全自动酶联免疫分析仪操作程序严格按试剂说明书设置。
并对全自动酶联免疫分析仪与手工操作的测定结果进行对比。
1.4 统计学处理本研究采用SPSS17统计软件包进行统计描述与分析，统计方法为相关性分析及线性回归，使用四线表对两种方法进行结果符合率的比较。
2 结果对于90份临床及体检标本，全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法检测结果的阴性、阳性、空白，均在起检测的规定范围内。
随机选取的90例标本手工操作与全自动酶免分析仪检测结果相关性系数r ²及线性回归分析比较，见表1 。
对90份标本全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法的测定结果符合率，见表2-1及表2-2。
表1 90个随机标本11个检测项目的线性回归方程及相关性系数r ²Table 1 90 random samples 11 test items of linear regression equation and correlationcoefficient r ²检测项目线性回归方程r ²HAV Y=0.4756X+0.0066 0.6625HBsAg Y=1.343X-0.1151 0.9505HBsAb Y=0.977X+0.1521 0.9451HBeAg Y=0.9219X-0.1279 0.9999HBeAb Y=0.487X+1.0578 0.8091HBcAb Y=0.65X+0.0878 0.7037HCV Y=0.7626X+0.1499 0.8659 HEV-IgG Y=0.5529X+0.4454 0.7097HEV-IgM Y=0.7418X+0.0015 0.7922TP Y=1.5681X-0.0409 0.9795HIV Y=0.7992X+0.0053 0.9018表2-1 90份标本全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法的测定结果符合率Table 2-1, 90 specimens automatic enzyme-linked immunity analyzer with manual determination results coincidence rate of enzyme-linked immunoassay全自动酶联免疫分析仪手工操作HAV-IgM HCV HEV-IgM HEV-IgG TP HIV + - + - + - + - + - + -+ 2 0 10 0 0 0 26 4 8 4 0 0 - 0 88 0 80 0 90 0 60 0 78 0 90 符合率％100 100 100 95 95 100表2-2 90份标本全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法的测定结果符合率Table 2-2, 90 specimens automatic enzyme-linked immunity analyzer with manual determination results coincidence rate of enzyme-linked immunoassay全自动酶联免疫分析仪手工操作HBsAg HBsAb HBcAg HBcAb HBeAb 总符合率 + - + - + - + - + - + - + 4 4 50 0 8 0 12 0 8 4 128 16 - 0 82 4 36 0 82 10 68 0 78 14 832 符合率％95 95 100 88 95 96.93 讨论本研究通过比对试验对Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪的与手工操作，IMARK2酶标仪检测90份随机标本进行相关性系数及线性回归分析。
所检测项目中HBsAg、HBsAb、HBeAg、TP、HIV的相关性系数r²>0.9；而HAV-IgM、HBeAb、HBcAb、HCV、HEV-IgM、HEV-IgG、的相关性系数在0.6-0.9之间；且11项检测项目的总体符合率达到96.9％。