盐酸小檗碱前体脂质体的制备及理化性质研究
盐酸小檗碱前体脂质体的制备及理化性质研究目的制备盐酸小檗碱前体脂质体，并对其理化性质进行考察。方法采用
薄膜载体沉积法制备盐酸小檗碱前体脂质体，正交实验优选处方；透射电镜观察形态；马尔文激光粒度仪测定粒径；高效液相色谱法测定包封率。结果电镜下观察脂质体形态多为圆形或椭圆形，平均粒径为741 nm，包封率为（29.93±1.32）%。结论该方法制备工艺简单，易于工业化生产。
[Abstract] Objective To prepare berberine hydrochloride proliposomes and investigate its physicochemical properties. Methods Proliposomes were prepared by film-deposition oncarriers. Orthogonal design was used to select the optimum formulation. The shape and particle size of proliposomes were investigated by transmission electron microscope and laser scatter. The encapsulation efficiency was determined by HPLC. Results The berberine hydrochloride liposome vesicles were globular or elliptic under the electronic microscopy. The average size of the liposomes was 741nm. The encapsulation efficiency was(29.93±1.32)%. Conclusion The preparation method is simple and easily industrialized preparation .
[Key words] Berberine hydrochloride;Proliposomes;Liposomes
小檗碱（berberine）又称黄连素，常用于治疗肠道炎症。现代研究发现它对于心律失常、高血压、高脂血症、糖尿病和肿瘤等也具有较好的治疗作用[1]。但由于盐酸小檗碱口服血药浓度低，维持时间短，难以达到有效的治疗浓度，若长期大剂量给药，又会产生诸多不良反应。1986年，英国学者Payne等[2]首次提出了前体脂质体（proliposomes）这一概念，是指将脂质材料吸附于水溶性载体上，制备成的干燥颗粒或粉末。当口服给药时，与体液接触，脂质溶胀而载体迅速溶解，在水相中形成脂质体，能促进药物的吸收[3]。为解决盐酸小檗碱吸收差及生物利用度低和普通脂质体不稳定等问题，本实验首次探讨了盐酸小檗碱前体脂质体的制备工艺并对其理化性质进行研究。
1仪器与试药
日本岛津高效液相色谱仪（LC-20AT四元泵、CTO-10ASVP柱温箱、SPD-20A 紫外检测器）；752紫外可见分光光度计（上海现科分光仪器有限公司）；RE-2000A型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（III）循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；pHS-3C精密酸度计（上海伟业仪器厂）；BSl10S 型1/万电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；JEM-1230透射电子显微镜（日本电子公司）；Zetasize Nano ZS纳米粒度仪（英国马尔文）；Olympus CX21 型显微镜（日本）。
盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号
110713-200911）；盐酸小檗碱提取物（四川什邡鸿鸣药物原料有限公司）；
脂质体制备方法
微脂体(又称脂质体)及其制备方法一二 微脂体(又称脂质体) 微脂体起源于1960 年代中期，Bangham博士等人首先提出，在磷酸脂薄膜上加入含盐分的水溶液后，再加以摇晃，会使脂质形成具有通透性的小球；196 8年，Sessa 和Weissmann 等人正式将此小球状的物体命名为微脂体（liposo me）并做出明确的定义: 指出微脂体是由一到数层脂质双层膜(lipid bilayer) 所组成的微小的囊泡，有自行密合（self-closing）的特性。微脂体由脂双层膜包裹水溶液形成，由于构造的特性，可同时作为厌水性（hydrophobic）及亲水性（hydrophilic）药品的载体，厌水性药品可以嵌入脂双层中，而亲水性药品则可包覆在微脂体内的水溶液层中。如同细胞膜，微脂体的脂质膜为脂双层构造，由同时具有亲水性端及厌水性端的脂质所构成，脂双层由厌水性端相对向内而亲水性端面向水溶液构成，组成中的两性物质以磷酸脂质最为常见。微脂体的形成是两性物质在水溶液中，依照热力学原理，趋向最稳定的排列方式而自动形成。微脂体的性质深受组成脂质影响，脂质在水溶液的电性，决定微脂体是中性或带有负电荷、正电荷。此外，磷酸脂碳链部分的长短，不饱和键数目，会决定微脂体的临界温度(transition temperature, Tc)，影响膜的紧密度。一般来说，碳链长度越长临界温度越高，双键数越多则临界温度越低，常见的DPPC(dipalmitoylp hosphatidylcholine)与DSPC(distearoylphosphatidylcholine)的临界温度分别是42℃与56℃，而Egg PC(egg phosphatidylcholine)与POPC(palmitoyl oleoyl phosphatidylcholine)的Tc 则低于0℃。临界温度影响微脂体包裹及结合药物的紧密度，当外界温度高于Tc时，对膜有通透性的药物，较容易通过膜；此外，当外界温度处于临界温度时，微脂体脂质双层膜中的脂质，会因为流动性不一致而使微脂体表面产生裂缝，造成内部药物的释出。在磷脂质内加入胆固醇，会对微脂体性质产生下列影响：增加微脂体在血液中的安定性，较不易发生破裂；减少水溶性分子对微脂体脂膜的通透性；增加微脂体的安定性，使其在血液循环中存在的时间较长。 微脂体可依脂双层的层数或是粒子大小，加以命名或分类： (1) Multilamellar vesicle（MLV）是具有多层脂双层之微脂体，粒子大小介于100-1000 nm，特色是粒子内具多层脂质膜，一般而言，干燥后的脂质薄膜，
简述亲水性药物脂质体的制备
一，前言 脂质体作为一种新型的载药系统，今年来得到广泛的应用和研究。评价脂质体质量的指标有外观、粒径分布和包封率等。其中包封率是衡量脂质体内在质量的一个重要指标。对于亲脂性药物，由于其对磷脂膜的亲和性，可以在制备过程中得到很高的包封率，且不易渗漏。而亲水性药物在制备时则必须包封在脂质体囊内部或多层脂质体层间的水性介质中，除一些特殊药物外包封率普遍不高，且易泄露。制备中为了得到更大的包封率，不得不增加囊内的容积，而这与控制脂质体在有效的粒径范围内又相互矛盾。以下将介绍一些用于提高亲水性药物在脂质体中的包封率的方法。 二，制备方法 1，常规方法 对于一些亲水性药物，使用常规的制备方法也可以得到满意的包封率。胡静等（1）用简单的薄膜水化-机械分散法研究了硫唑嘌呤（Aza）脂质体包封率的影响因素。这些因素包括卵磷脂与胆醇摩尔比、缓冲液(PBS)pH值、水相用量及药脂重量比。通过正交设计得到最佳处方所制得的3批硫唑嘌呤脂质体形态圆整，大小均匀，粒度范围0.01～0.42μm，包封率均达30%以上。但在实验中发现药脂重量比增加时，包封率反而下降，这说明Aza的利用率在减少。 吴骏等（2）使用逆相蒸发法制备阿昔洛韦ＡＣＶ脂质体，经过正交优化后，得到阿昔洛韦脂质体的平均粒径为219.8ｎｍ，多分散系数为0.158，包封率为65%，且具有良好的稳定性。作者将卵磷脂、胆固醇、油酸和去氧胆酸钠溶于乙醚，于室温搅拌下滴入ＡＣＶ水溶液，使形成稳定的Ｗ/Ｏ型乳剂。25℃减压蒸去乙醚，得乳白色混悬液，通过微孔滤膜后，即得ＡＣＶ脂质体。产品经离心加速实验表现出良好的稳定性。此实验通过选择适当的油水体积比可使内相体积增加，提高包封率；同时加入了乳化剂可以防止脂质体的粒径增大。 翟光喜等（3）也将表面活性剂胆酸钠引入脂质体的处方中制备了低分子肝素的柔性纳米脂质体，此类脂质体具有高度的形变性，可由于经皮给药系统。制备方法就是简单的将处方混合后至冰水浴中超声处理，再通过微孔滤膜即得。经正交优化后包封率可达到33.1%。但该制剂的稳定性和储存中的渗漏作者并没有做进一步研究。陈鹰等（4）也研究了双氯芬酸钠的柔性脂质体，试验将磷脂等脂溶性成分和胆酸盐溶于乙醚中，药物则溶解在磷酸缓缓冲液中，混合后减压旋转挥干后再超声过滤。得到的脂质体包封率为73.12%。 侯新朴等对低包封率的水溶性药物(如甲硝唑)进行疏水衍生化，其疏水链将药物分子插入脂质体膜，包封率和稳定性都提高十多倍（5）。 在这些常规的制备方法中，首先应该对药物的性质有充分的了解。同时工艺参数的选择，尤其是合适的油水相比及乳化剂的用量对于水溶性药物的包封率有很大的影响。在制备过程中采用超声，加乳化剂的方法都可以有效地控制脂质体的粒径。
多西他赛简介及抗肿瘤
多西他赛简介 1.简介 多西他赛（Docetaxol）是由欧洲浆果紫杉的针叶中提取的化合物半合成的紫杉醇衍生物，由法国的Rhone-Poulenc Rorer公司开发并上市。其作用机理与紫杉醇类似，通过促进微管双聚体装配成微管，同时防止去多聚化过程而使微管稳定，阻滞细胞于G2和M期，抑制细胞进一步分裂，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖。多西他赛的药理作用比紫杉醇强，在细胞内浓度比紫杉醇高3倍，并在细胞内滞留时间长。其对微管亲和力是紫杉醇的2倍；作为微管稳定剂和装配促进剂，活性比紫杉醇大2倍；作为微管解聚抑制剂，活性比紫杉醇大2倍。在体外抗瘤活性试验中，已证实多西他赛的抗瘤活性是紫杉醇的1.3~12倍。多烯紫杉醇抗瘤谱广、抗肿瘤作用强，对难治性的乳腺癌、非小细胞肺癌等的疗效均较突出，临床应用潜力深厚。 然而多西他赛难溶于水，且脂溶性也不大，严重影响了其临床应用。目前上市品种仅为多西他赛注射液，是用吐温-80及乙醇作溶剂配制而成，易引起较多不良反应，如刺激、溶血、过敏反应、神经毒性、心血管毒性等等。且使用前要使用抗过敏药物，给患者带来了极大的不便和痛苦。 本项目旨在解决多西他赛水溶性及稳定性问题，进而避免因使用吐温-80而引起的溶血、过敏等不良反应问题。 本项目的意义在于为临床提供一种安全有效的多西他赛静脉给药新制剂，同时对脂质体的制备工艺进行创新，在提高载药量的同时解决其稳定性问题，也为其它同性质药物制剂的制备提供借鉴作用。 2.研究现状及创新性 中国专利CN1931157A公开一种可以注射或口服的多西他赛脂质体及其固体制剂。其以磷脂、胆固醇为基本膜材，加入适当的附加剂，采用多种方法制备了各种类型的脂质体，制得的脂质体粒径小，包封率高，稳定性好且毒副作用低，基本达到了临床注射要求。但制备的脂质体浓度较低，生产时需容积较大的容器，成本高，不适合大剂量给药。
《妇科恶性肿瘤聚乙二醇化脂质体多柔比星临床应用专家共识》(2020)要点
《妇科恶性肿瘤聚乙二醇化脂质体多柔比星临床应用专家共识》 （2020）要点 妇科恶性肿瘤是严重威胁女性健康的重大疾病，以子宫颈癌、子宫内膜癌和卵巢癌最常见，手术治疗、放射治疗（放疗）和化学药物治疗（化疗）是其主要治疗方法，其中化疗因其具有全身治疗的特点而在综合治疗中占有重要地位。聚乙二醇化脂质体多柔比星（PLD）是妇科恶性肿瘤常用化疗药物，尤其对卵巢癌具有显著的疗效。 1 聚乙二醇化脂质体多柔比星的药学特性 蒽环类药物是由微生物产生的具有抗肿瘤活性的化学物质，属于抗肿瘤抗生素，包括柔红霉素、多柔比星、表柔比星、吡柔比星、米托蒽醌和卡柔比星等。 2 临床应用 2.1 卵巢恶性肿瘤 卵巢恶性肿瘤以上皮性卵巢癌最常见，手术和化疗是其最主要的治疗方法。
2.1.1 初始化疗初始化疗包括手术前新辅助化疗和手术后一线化疗。卡铂＋紫杉醇（CP）方案是卵巢癌初始化疗的标准方案。推荐CD方案用于卵巢癌的初始化疗（2A类），尤其适用于对紫杉类药物过敏、周围神经病变和顾虑脱发的患者。 2.1.2 挽救化疗卵巢癌复发后化疗又称挽救化疗。 2.1.2.1 铂敏感复发卵巢癌铂敏感复发卵巢癌患者一般继续选用以铂类药物为基础的联合化疗方案。 本共识推荐PLD联合或不联合BEV作为治疗铂耐药复发卵巢癌的首选方案之一 （2A类）。对于铂敏感复发卵巢癌患者，推荐PLD联合铂类化疗加或不加BEV为首选治疗方案之一（1类）。 2.1.2.2 铂耐药复发卵巢癌铂耐药复发卵巢癌对含铂化疗方案不敏感，临床上一般推荐非铂化疗疗，但反应率一般不足30%。 本共识推荐PLD联合或不联合BEV作为治疗铂耐药复发卵巢癌的首选方案之一
盐酸多柔比星脂质体注射液说明书--楷莱
盐酸多柔比星脂质体注射液说明书 【药品名称】 通用名：盐酸多柔比星脂质体注射液 商品名：楷莱 英文名：Doxorubicin Hydrochloride Liposome Injection 汉语拼音：Yan Suan Duo Ruo Bi Xing Zhi Zhi Ti Zhu She Ye 【成份】 本品主要成分及其化学名称为：盐酸多柔比星，(1S,3S)-3-乙醇酰-1,2,3,4,6,11-六氧-3,5,12-三羟基-10-甲氧基-6,13-二氧并四苯-1-基-3-氨基-2,3,6-三去氧-α-L-来苏吡喃糖苷。 其结构式为： 分子式：C27H29NO11.HCl 分子量：579.99 CAS No.：25316-40-9 【性状】 本品是一种脂质体制剂，系将盐酸多柔比星通过与甲氧基聚乙二醇的表面结合包封于脂质体中。这种工艺被称作为空间稳定或隐匿，可以保护脂质体免受单核巨噬细胞系统（MPS）识别，从而延长其在血液循环中的时间。 本品为无菌、半透明的红色混悬液，每瓶10 mL，含盐酸多柔比星2 mg/mL，是用于单剂量静脉滴注给药的浓缩液。本品的活性成分为盐酸多柔比星，是从一种波塞链霉菌表灰变种（strep tomyces peucetius var. caesius）培养液中提取得到的蒽环类细胞毒性抗生素。 【适应症】 本品可用于低CD4（<200 CD4淋巴细胞/mm3）及有广泛皮肤粘膜内脏疾病的与艾滋病相关的卡波氏肉瘤（AIDS-KS）病人。 本品可用作一线全身化疗药物，或者用作治疗病情有进展的AIDS-KS病人的二线化疗药物，也可用于不能耐受下述两种以上药物联合化疗的病人：长春新碱、博莱霉素和多柔比星（或其他蒽环类抗生素）。 【规格】20mg/ml/支 【用法用量】 本品应为每2-3周静脉内给药20 mg/m2，给药间隔不宜少于10天，因为不能排除药物蓄积和毒性增强的可能。病人应持续治疗2-3个月以产生疗效。为保持一定的疗效，在需要时继续给药。本品用250毫升5%葡萄糖注射液稀释，静脉滴注30分钟以上。禁止大剂量注射或给用未经稀释的药液。建议本品滴注管与5%葡萄糖滴注管相连接以进一步稀释并最大限度地减少血栓形成和外渗危险。 本品禁用于肌肉和皮下注射。
盐酸多柔比星脂质体注射液说明书--楷莱
盐酸多柔比星脂质体注射液说明书--楷莱
盐酸多柔比星脂质体注射液说明书 【药品名称】 通用名：盐酸多柔比星脂质体注射液 商品名：楷莱 英文名：Doxorubicin Hydrochloride Liposome Injection 汉语拼音：Yan Suan Duo Ruo Bi Xing Zhi Zhi Ti Zhu She Ye 【成份】 本品主要成分及其化学名称为：盐酸多柔比星，(1S,3S)-3-乙醇酰-1,2,3,4,6,11-六氧-3,5,12-三羟基-10-甲氧基-6,13-二氧并四苯-1-基-3-氨基-2,3,6-三去氧-α-L-来苏吡喃糖苷。 其结构式为： 分子式：C27H29NO11.HCl 分子量：579.99 CAS No.：25316-40-9
【性状】 本品是一种脂质体制剂，系将盐酸多柔比星通过与甲氧基聚乙二醇的表面结合包封于脂质体中。这种工艺被称作为空间稳定或隐匿，可以保护脂质体免受单核巨噬细胞系统（MPS）识别，从而延长其在血液循环中的时间。 本品为无菌、半透明的红色混悬液，每瓶10 mL，含盐酸多柔比星2 mg/mL，是用于单剂量静脉滴注给药的浓缩液。本品的活性成分为盐酸多柔比星，是从一种波塞链霉菌表灰变种（strep tomyces peucetius var. caesius）培养液中提取得到的蒽环类细胞毒性抗生素。 【适应症】 本品可用于低CD4（<200 CD4淋巴细胞/mm3）及有广泛皮肤粘膜内脏疾病的与艾滋病相关的卡波氏肉瘤（AIDS-KS）病人。 本品可用作一线全身化疗药物，或者用作治疗病情有进展的AIDS-KS病人的二线化疗药物，也可用于不能耐受下述两种以上药物联合化疗的病人：长春新碱、博莱霉素和多柔比星（或其他蒽环类抗生素）。 【规格】20mg/ml/支
实验十五 脂质体的制备
实验十五 脂质体的制备 一、实验目的 1. 掌握注入法制备脂质体的工艺。 2. 掌握脂质体包封率的测定方法。 二、实验原理 60年代初Banghan等发现磷脂分散在水中可形成多层囊，并证明每层囊均为双分子脂质膜组成且被水相隔开，称这种具有生物膜结构的囊为脂质体。197l年Ryman等人提出将脂质体作为药物载体，即将酶或药物包囊在脂质体中。近年来脂质体作为药物载体在传递给药系统中的研究有了迅速的发展。 脂质体系一种人工细胞膜，它具有封闭的球形结构，可使药物被保护在它的结构中，发挥定向作用。特别适于作为抗癌药物载体，以改善药物的治疗作用，降低毒副作用等。 脂质体系由磷脂为骨架膜材及附加剂组成。用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂，卵磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。磷脂在水中能形成脂质体是由其结构决定的。磷脂具有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团。当较多的磷脂加至水或水性溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此对向缔合形成双分子层，并进一步形成椭圆形或球状结构——脂质体。常用的附加剂为胆固醇，它也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制备稳定的脂质体，其作用是调节双分子层流动性，减低脂质体膜的通透性。其它附加剂有十八胺，磷脂酸等，这两种附加剂可改变脂质体表面电荷的性质。 脂质体可分为三类：小单室(层)脂质体，粒径在20～50nm，凡经超声波处理的脂质体混悬液，绝大部分为小单室脂质体；多室(层)脂质休，粒径约在400～1000nm；大单室脂质，粒径约为200～1000nm，用乙醚注入法制备的脂质体多属这—类。 脂质体包封率的测定 包封率的定义可用下式表示： 包封率％ =（W总 - W游离）/ W总 x 100 式中W总——脂质体混悬液中总的药物量。W游离——未包入脂质体中的药物量。 影响脂质体包封率的因素有多种，如磷脂质的种类，组成比例，制备方法及介质的离子强度等。 包封率的测定方法有凝胶过滤法（常用凝胶为Sephadex G50、Gl00或Sephrous4B、6B）、超速离心法、透析法、超滤膜过滤法等，根据条件加以选择。 脂质体的制法有多种，可按药物性质或需要进行选择。薄膜分散法是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声处理，可得到小单室脂质体。此法特点是操作简便，但包封率较低。注入法，根据所用溶解磷脂质的溶剂，可分为乙醚注入法和乙醇注入法。乙醚注入法是将磷脂，胆固醇和脂溶性药物及抗氧剂等溶于适量的乙醚中，在搅拌下慢慢滴入50～65°C水性溶液中，蒸去乙醚，即可形成脂质体。此法适于实验室小量制备脂质体。乙醇注入法制备脂质体，脂质体混悬液一般可保留10％乙醇。反相蒸发法，是制备大单室脂质体的方法，此法包封率高。冷冻千燥法，适于在水中不稳定的药物制备脂质体。熔融法，此法适于制备多相脂质体，制得的脂质体稳定，可加热灭菌。本实验乙醚注入法制备安定脂质体，用薄膜分散法制备钙黄绿素脂质体。
脂质体及其制备方法的选择
脂质体及其制备方法的选择 1.脂质体概述 1965年，英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现了脂质体。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为４纳米。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。此两位学者曾获得过诺贝尔奖提名。 某些磷脂分散在过量的水中形成了脂质体，该脂分子本身排成双分子层，在磷脂的主要相变温度(Tm)以上，瞬间形成泡囊，且泡囊包围水液，根据磷脂种类及制备时所用温度，双分子层可以是凝胶或液晶状态。在凝胶态时磷脂烃链是一种有规律的结构，在液态时烃链是无规律的，每一种用来制备脂质体的纯磷脂由凝胶状态过渡到液晶状态时均具有特征的相变温度。这种相变温度(Tin)是根据磷脂性质而变(见下表)，它可在-20～+90℃之间变化，双分子层的不同成分混合物可引起相变温度的变化或相变完全消失，当双分子层通过相变温度时，被封闭的水溶性标示物的漏出量增加。 脂质体的相变行为决定了脂质体的通透性、融合、聚集及蛋白结合能力，所有这些都明显影响脂质体的稳定性和它们在生物体系中的行为。
脂质体根据其脂质膜的层数和腔室的数量，可以分为单层脂质体，多层脂质体和多囊脂质体，单层脂质体。不同类型的脂质体其结构特点各不相同，见下图表。 1971年，英国Rymen等人开始将脂质体用作药物载体。所谓载体，可以是一组分子，包蔽于药物外，通过渗透或被巨嗜细胞吞噬后载体被酶类分解而释放药物，从而发挥作用。它具有类细胞结构，进入动物体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。脂质体技术是被喻为“生物导弹”的第四代靶向给药技术，也是目前国际上最热门的制药技术。至于药物在脂质体中的负载定位，其取决于所载药物的性质，见下图。
脂质体的制备
实验十五 脂质体的制备
一实验目的 1.了解脂质体（liposome）在细胞 工程技术中的应用及其制备方法。 2.掌握采用超声波法、冰冻干燥法 和冻融法三种不同的方法制备脂 质体的方法并了解该技术在细胞 工程中的应用。
二实验原理 脂质体（liposome）的制备技术，一般采用超声波法、振荡法、乙醚蒸发法、去污剂透析法、冰 冻干燥法和冻融法等。制备方法 不同，所得脂质体结构、大小不 同，性质和用途也就不同（表15-1）。
种类制备方法大小(m)特性 多层大脂质体(MLV)乙醚蒸发法、醇醚水 法、振荡法、液相快 速混合振荡法 0.1~50易制备，包被物释放 速度慢 单层小脂质体(SUV)直接超声波法、溶剂 超声波法、乙醚注射 法 0.02~0.05体积小，适合包被离 子、小分子药物等 单层大脂质体(LUV)递相蒸发法、去污剂 （胆酸纳等）透析法、 冰冻干燥法 0.05~0.5 适合包被蛋白质、 RNA、DNA片段、 大分子药物及细胞融 合 单层巨大脂质体(GUV)冻融法5~30适合包被蛋白质、 RNA、DNA片段， 除菌处理较难
本实验采用超声波法、冻融法、冰冻干燥 法三种不同类型的方法，超声波法的原理是：在超声波作用下，磷脂类双亲媒性分子被打碎为分子或分子团，并自动重新排布成类似生物膜的双分子层囊泡。冻融法是在超声波法形成的小脂质体基础上，通过冷冻和融解过程使其破裂，重组为大体积脂质体，在通过透析时膜内外渗透压的变化而膨胀为更大体积的脂质体。冰冻干燥法语原理与冻融法基本一致，只在处理条件上有所不同。
三实验用品 1.器材 超声波清洗机、光学显微镜、荧光显微镜、荧光分光光度计、漩涡混合器、核酸蛋白检测仪、柱层析装置、冰冻干燥机。 2.试剂 １）磷脂液：100mg经丙酮-乙醚法纯化的卵磷 脂，57.2mg胆固醇，溶于1ml氯仿。 ２）荧光液：钙黄绿素（calcein）47mg溶于 100ml Tris缓冲液。 ３）Tris 缓冲液：称取Tris 0.12g，EDTA 0.288mg，溶于80ml去离子水中，用0.1 mol/L 盐酸调Ph7.2，再加水至100ml。
合理用药总结
药物的合理使用 一、溶媒限制： 1.多烯磷脂酰胆碱针：严禁用电解质溶液（0.9%氯化钠、复方氯化 钠、乳酸钠林格氏液）稀释，可用葡萄糖或转化糖。 2.只能用葡萄糖溶解：紫杉醇（力扑素）、奥沙利铂（乐沙定、艾恒、 艾克博康）、洛铂、卡铂（波贝、齐鲁）、福莫司汀、达卡巴嗪（菏泽）、胺碘酮、多柔比星脂质体（凯莱、里堡多）、去甲斑蝥酸钠、肝水解肽、多巴胺、脱氧核苷酸钠、氢化泼尼松、苦参碱、两性霉素B、消癌平注射液、参麦、参附、丹参。注：糖尿病患者使用参麦、参附可用生理盐水溶解。 3.只能用盐水溶解：培美曲塞二钠、蔗糖铁、依托泊苷、替尼泊苷、 奈达铂、吉西他滨、泮托拉唑、羟基喜树碱、曲妥珠单抗（赫赛汀）、贝伐单抗、西妥昔单抗（爱必妥）、血管内皮抑制素（恩度）、血必净、氨磷汀、氟达拉滨、长春瑞滨、甘氨双唑钠、奥曲肽。 4.异甘草酸镁（天晴甘美）：溶媒只能用10%葡萄糖250毫升。 5.异环磷酰胺（全菲那）：溶媒须用生理盐水或复方氯化钠（林格氏 液），不能用乳酸钠林格氏液稀释。 6.头孢地嗪（高德、汕头）：溶媒为40ml注射用水、生理盐水或林 格氏液中，20-30分钟内输注。 7.肌苷氯化钠、转化糖电解质、混合糖电解质、钠钾镁葡萄糖不作 为溶媒使用。 二、给药浓度限制：
1.复合磷酸氢钾：每支2ml需要加入至少400ml溶媒中； 2.依托泊苷溶液浓度不超过0.25mg/ml； 3.表柔比星溶液浓度不超过2mg/ml； 4.蔗糖铁注射液每5ml最多只能稀释到100ml0.9%氯化钠溶液中（即 最多只能稀释20倍，浓度稀溶液不稳定）； 5.氯化钾静脉给药浓度不应超过0.3%； 6.门冬氨酸鸟氨酸溶液终浓度不超过2%； 7.多西他赛（艾素）：浓度不超过0.9mg/ml,即100毫升溶媒最多加 90毫克该药； 8.多西他赛（多帕菲、泰索帝）终浓度不得超过0.74mg/ml。 9.门冬氨酸钾针：浓度小于0.68%，即一支最少加250毫升溶媒。 10.氢化泼尼松：溶媒只能5%糖，最好用500毫升，实际审方时，3 支以下可以用100毫升，6支以下可以用250毫升，6支以上必须用500毫升。 三、配伍禁忌： 1.维生素C和维生素K1属于配伍禁忌。 2.复合磷酸氢钾与葡萄糖酸钙混合滴注易析出沉淀。 3. 昂丹司琼与地塞米松合用会产生沉淀。 四、给药途径： 1.凝血酶粉针（无锡）只能口服用于局部止血，严禁静脉给药； 2.香菇多糖4mg，只能肌肉注射； 3.香菇多糖1mg，只能静脉滴注；
盐酸多柔比星脂质体注射液说明书楷莱样本
盐酸多柔比星脂质体注射液说明书楷 莱
盐酸多柔比星脂质体注射液说明书 【药品名称】 通用名：盐酸多柔比星脂质体注射液 商品名：楷莱 英文名：Doxorubicin Hydrochloride Liposome Injection 汉语拼音：Yan Suan Duo Ruo Bi Xing Zhi Zhi Ti Zhu She Ye 【成份】 本品主要成分及其化学名称为：盐酸多柔比星，(1S,3S)-3-乙醇酰-1,2,3,4,6,11-六氧-3,5,12-三羟基-10-甲氧基-6,13-二氧并四苯-1-基-3-氨基 -2,3,6-三去氧-α-L-来苏吡喃糖苷。 其结构式为： 分子式：C27H29NO11.HCl 分子量：579.99 CAS No.：25316-40-9 【性状】 本品是一种脂质体制剂，系将盐酸多柔比星经过与甲氧基聚乙二醇的表面结合包封于脂质体中。这种工艺被称作为空间稳定
或隐匿，能够保护脂质体免受单核巨噬细胞系统（MPS）识别，从而延长其在血液循环中的时间。 本品为无菌、半透明的红色混悬液，每瓶10 mL，含盐酸多柔比星 2 mg/mL，是用于单剂量静脉滴注给药的浓缩液。本品的活性成分为盐酸多柔比星，是从一种波塞链霉菌表灰变种（strep tomyces peucetius var. caesius）培养液中提取得到的蒽环类细胞毒性抗生素。 【适应症】 本品可用于低CD4（<200 CD4淋巴细胞/mm3）及有广泛皮肤粘膜内脏疾病的与艾滋病相关的卡波氏肉瘤（AIDS-KS）病人。 本品可用作一线全身化疗药物，或者用作治疗病情有进展的AIDS-KS病人的二线化疗药物，也可用于不能耐受下述两种以上药物联合化疗的病人：长春新碱、博莱霉素和多柔比星（或其它蒽环类抗生素）。 【规格】20mg/ml/支 【用法用量】 本品应为每2-3周静脉内给药20 mg/m2，给药间隔不宜少于10天，因为不能排除药物蓄积和毒性增强的可能。病人应持续治疗2-3个月以产生疗效。为保持一定的疗效，在需要时继续给药。本品用250毫升5%葡萄糖注射液稀释，静脉滴注30分钟以上。禁止大剂量注射或给用未经稀释的药液。建议本品滴注管与5%葡萄糖滴注管相连接以进一步稀释并最大限度地减少血栓形成
国外部分公司脂质体药物研发现状
国外部分公司脂质体药物研发现状 摘要：目的介绍国外脂质体药物的开发现状。方法综述了14 家外国公司所发展的脂质体技术平台和正在开发的脂质体药物。结果和结论目前主要有3 类脂质体药物正在被开发：化疗药物\疫苗和核酸类药物。并且国外从事脂质体药物研发的公司都有自己的专利技术。关键词：药剂学；研究进展；综述；脂质体 中图分类号：R94 文献标识码：A 自从1965 年Bangham 等人发现脂质体，近40 年已经过去了。在这40 年中，经过众多科研人员的不懈努力，脂质体领域出现了许多里程碑式的工作，如：pH 梯度法的发明，长循环脂质体的制备及主动靶向脂质体的发明等。作为一种先进的药物传递系统，脂质体的优势已经被越来越多的人所承认（这里讲的药物是一个广义的概念，既包括化学药物，也包括蛋白质类及核酸类药物）。 作者将简要介绍国外脂质体药物的研发现状。所谓脂质体药物，指的是以脂质体为载体的治疗或预防性药物。由于在国外，新药的研发工作主要由制药公司完成，所以将着重介绍国外从事脂质体药物开发的公司，它们所采用的新技术和开发的脂质体药物。 1 ALZA ALZA 是一个专门从事药物传递系统（drug delivery systems，DDSs）开发的公司[1,2]。它的主要技术平台就是隐型脂质体（STEALTH. liposomes，实际上就是长循环脂质体）技术。众所周知，尽管传统的脂质体可以提高药物的疗效，降低药物的不良反应，但是它们在体内很容易被免疫系统识别和吞噬；因此脂质体可能还没有到达靶区，就已经被机体清除掉了。采用STEALTH.技术，则可以避免这种情况。由于长循环脂质体表面覆盖着一层 PEG(polyethylene glycol)凝胶，它可以成功的逃脱免疫系统的吞噬和破坏。并且，如果长循环脂质体的粒径小于150 nm，它可以有效的穿透肿瘤区的血管，在肿瘤区富集，这样就改变了药物在体内的分布，降低了毒性。 ALZA 采用STEALTH.技术，已经成功的开发了阿霉素脂质体注射液Doxil.。Doxil.主要用于治疗复发性卵巢癌和AIDS 相关的Kaposi’s肉瘤。 2 Antigenics 目前Antigenics 正在开发两个脂质体产品[3,4]：Aroplatin. 和ATRA-IV.。ATRA-IV. （又名ATRAGEN. ）是全反式维甲酸（all-trans-retinoic acid）的脂质体注射制剂。全反式维甲酸主要用于治疗急性早幼性骨髓性白血病（acute promyelocytic leukemia）, 但是它的口服制剂存在一个重要缺陷，那就是药效的持续时间太短。将其制成脂质体制剂后，药物的血药浓度增加，起效时间明显延长。现在Antigenics 受FDA 委托，正在研究用ATRA-IV. 治疗T 细胞非Hodgkin 氏淋巴瘤（T cell non-Hodgkin’s lymphoma）的可行性。Aroplatin. 是第三代铂类抗癌药物，它的结构和奥沙利铂(Oxaliplatin.) 相似。细胞实验表明， Aroplatin. 可能用于治疗对其他铂类药物（卡铂 carboplatin, 顺铂cisplatin）产生耐药性的肿瘤。用Aroplatin. 脂质体治疗结肠癌的实验正在进行中。 3 Aphios Aphios 之所以在脂质体公司中拥有一席之地[5,6]，主要是由于它发展了一种独特的脂质体
盐酸小檗碱前体脂质体的制备及理化性质研究
盐酸小檗碱前体脂质体的制备及理化性质研究目的制备盐酸小檗碱前体脂质体，并对其理化性质进行考察。方法采用 薄膜载体沉积法制备盐酸小檗碱前体脂质体，正交实验优选处方；透射电镜观察形态；马尔文激光粒度仪测定粒径；高效液相色谱法测定包封率。结果电镜下观察脂质体形态多为圆形或椭圆形，平均粒径为741 nm，包封率为（29.93±1.32）%。结论该方法制备工艺简单，易于工业化生产。 [Abstract] Objective To prepare berberine hydrochloride proliposomes and investigate its physicochemical properties. Methods Proliposomes were prepared by film-deposition oncarriers. Orthogonal design was used to select the optimum formulation. The shape and particle size of proliposomes were investigated by transmission electron microscope and laser scatter. The encapsulation efficiency was determined by HPLC. Results The berberine hydrochloride liposome vesicles were globular or elliptic under the electronic microscopy. The average size of the liposomes was 741nm. The encapsulation efficiency was(29.93±1.32)%. Conclusion The preparation method is simple and easily industrialized preparation . [Key words] Berberine hydrochloride;Proliposomes;Liposomes 小檗碱（berberine）又称黄连素，常用于治疗肠道炎症。现代研究发现它对于心律失常、高血压、高脂血症、糖尿病和肿瘤等也具有较好的治疗作用[1]。但由于盐酸小檗碱口服血药浓度低，维持时间短，难以达到有效的治疗浓度，若长期大剂量给药，又会产生诸多不良反应。1986年，英国学者Payne等[2]首次提出了前体脂质体（proliposomes）这一概念，是指将脂质材料吸附于水溶性载体上，制备成的干燥颗粒或粉末。当口服给药时，与体液接触，脂质溶胀而载体迅速溶解，在水相中形成脂质体，能促进药物的吸收[3]。为解决盐酸小檗碱吸收差及生物利用度低和普通脂质体不稳定等问题，本实验首次探讨了盐酸小檗碱前体脂质体的制备工艺并对其理化性质进行研究。 1仪器与试药 日本岛津高效液相色谱仪（LC-20AT四元泵、CTO-10ASVP柱温箱、SPD-20A 紫外检测器）；752紫外可见分光光度计（上海现科分光仪器有限公司）；RE-2000A型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（III）循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；pHS-3C精密酸度计（上海伟业仪器厂）；BSl10S 型1/万电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；JEM-1230透射电子显微镜（日本电子公司）；Zetasize Nano ZS纳米粒度仪（英国马尔文）；Olympus CX21 型显微镜（日本）。 盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号 110713-200911）；盐酸小檗碱提取物（四川什邡鸿鸣药物原料有限公司）；
盐酸多柔比星脂质体注射液
盐酸多柔比星脂质体注射液 【药品名称】 通用名称：盐酸多柔比星脂质体注射液 英文名称：Doxorubicin Hydrochloride Liposome Injection 【成份】 盐酸多柔比星脂质体。 【适应症】 用于低CD4（小于200CD4淋巴细胞/mm3）广泛皮肤粘膜内脏疾病的艾滋病相关的卡波氏肉瘤（AIDS-KS）病人。本品可用作一线全身化疗药物，或者用作治疗病情有展进的AI... 【用法用量】 本品应为每2-3周静脉内给药20 mg/m2，给药间隔不宜少于10天，因为不能排除药物蓄积和毒性增强的可能。病人应持续治疗2-3个月以产生疗效。为保持一定的疗效，在需要时继续给药。本品用250毫升5%葡萄糖注射液稀释，静脉滴注30分钟以上。禁止大剂量注射或给用未经稀释的药液。建议本品滴注管与5%葡萄糖滴注管相连接以进一步稀释并最大限度地减少血栓形成和外渗危险。本品禁用于肌肉和皮下注射。肝功能不全病人：对少数肝功能不全病人（胆红素值达4 mg/dl）给予20 mg/ m2本品，血浆清除率和清除半衰期未见变化。然而在取得进一步的经验之前，根据以往盐酸多柔比星的使用经验，对于肝功能不全的病人本品的给药量要减少。建议当胆红素高于以下数值时考虑减少用量：血清胆红素1.2-3.0 mg/dl，用常用量的? ；大于3 mg/dl时用常用量的。 【不良反应】 对AIDS-KS病人的临床开放和对照研究显示，与本品相关的最常见的不良反应是骨髓抑制，白细胞减少是病人最常见的不良反应，也可见贫血和血小板减少。这些反应一般在治疗早期
便可见，而且是暂时的。其他发生率较高（≥(greater than or equal to) 5%）的不良反应有：恶心，无力，脱发，发热，腹泻，与滴注有关的急性反应和口腔炎。其他不很常见的不良反应（ 【禁忌】 1.对本品活性成份或其他成份过敏的病人禁用; 2.对于使用α干扰素进行局部或全身治疗有效的AIDS-KS病人禁用; 3.孕妇禁用。 【注意事项】 1 禁止使用有沉淀物或其他杂质的器材。 2 根据推荐剂量和病人的体表面积确定本品的剂量。 3 用灭菌注射器吸取适量本品。由于本品中未加防腐剂或抑菌剂，故必须严格遵守无菌操作。 4 在给药前须取出所需量用250毫升5%葡萄糖注射液稀释。 5 除5%葡萄糖注射液外的其他稀释剂或任何抑菌剂都可能使本品产生沉淀。 6 建议将本品滴注管与5%葡萄糖静脉滴注管相连通。 7 使用本品溶液时要谨慎，需戴手套。如果药液与皮肤或粘膜发生接触，应立即用肥皂水清洗。本品的运送和处理的方法与其他抗癌药物相同。 【特殊人群用药】 妊娠与哺乳期注意事项： 孕妇禁用。 【药物相互作用】 未对本品正式进行相互作用研究。但对于已知与多柔比星可产生相互作用的药物，在合用时就注意。虽无正式的研究报告，但本品与其他盐酸多柔比星制剂一样，会增强其他抗癌治疗的毒性。已有报道合用盐酸多柔比星会加重环磷酰胺导致的出血性膀胱炎，增强巯嘌呤的肝
脂质体制备试验
实验十脂质体的制备及包封率的测定 一、实验目的 1．掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。 2．掌握用阳离子交换树脂法测定脂质体包封率的方法。 3．熟悉脂质体形成原理，作用特点。 4．了解“主动载药”与“被动载药”的概念。 二、实验指导 脂质体是由磷脂与（或不）与附加剂为骨架膜材制成的具有双分子层结构的封闭囊状体。常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团，将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂质体。用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂、卵磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。常用的附加剂为胆固醇。胆固醇也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制得稳定的脂质体，其作用是调节双分子层的流动性，减低脂质体膜的通透性。其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂能改变脂质体表面的电荷性质，从而改变脂质体的包封率、体内外其他参数。 脂质体可分为三类：小单室（层）脂质体，粒径为20~50nm，经超声波处理的脂质体，绝大部分为小单室脂质体；多室（层）脂质体，粒径约为400~3500nm，显微镜下可观察到尤如洋葱断面或人手指纹的多层结构；大单室脂质体，粒径约为200~1000nm，用乙醚注入法制备的脂质体多为这一类。 脂质体的制法有多种，根据药物的性质或需要进行选择。（1）薄膜分散法：这是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声处理后得到小单室脂质体。此法优点是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。（2）注入法：有乙醚注入法和乙醇注入法等。“乙醚注入法”是将磷脂等膜材料溶于乙醚中，在搅拌下慢慢滴于55~65℃含药或不含药的水性介质中，蒸去乙醚，继续搅拌1~2h，即可形成脂质体。（3）逆相蒸发法：系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂，如氯仿中，再按一定比例与含药的缓冲液混合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。该法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的脂质体制备，可提高包封率。（4）冷冻干燥法：适于在水中不稳定药物脂质体的制备。（5）熔融法：采用此法制备的
近年我国肿瘤药物相关政策及市场分析(2018)
- 近年我国肿瘤药物相关政策及市场分析近年我国肿瘤药物相关政策及市场分析上月底，国务院 目录 一、我国肿瘤药物市场背景 (2) 二、肿瘤药物相关政策 (3) 1.零关税+增值税下调 (3) 2.国家谈判入医保 (4) 三、我国肿瘤药物总体情况分析 (4) 1.类别 (5) 2.价格 (6) 3.独家 (7) 四、国内未上市品种 (10) 五、专利保护即将到期品种 (12)
一、我国肿瘤药物市场背景 近年来，因为环境污染、生活压力加大以及不良生活习惯等因素导致全球肿瘤疾病患病率逐年较快增长，我国也不例外。据2017年国家癌症中心发布的《2017中国肿瘤登记年报》显示，在中国，每年新发癌症病例达429万例，癌症死亡281万例。正因为如此，我国对于抗肿瘤药物的需求也在逐年增加。据了解，自上世纪90年代初至今，抗肿瘤药销售额的年增长率始终保持在2位数，大大高于其它药物的增长率。即使是近几年，在总体药品市场增速放缓的背景下，抗肿瘤药依旧保持着高速增长。 （数据来源于网络） 但从癌症患者的药物治疗现状来看，该类药物价格普遍较高，尤其是进口肿瘤药物的可及性不高。救命药用不起，成为大部分普通收入患者家庭的苦恼。正因为如此，国家致力出台相关政策，旨在降低
药价，进一步降低国内患者，特别是癌症患者的负担，用药有了更多选择。 二、肿瘤药物相关政策 1.零关税+增值税下调 4月12日，李克强总理主持召开国务院常务会议，确定发展“互联网+医疗健康”措施，其中，提到一点“决定对进口抗癌药实施零关税并鼓励创新药进口”，备受业内关注。会上决定，从2018年5月1日起，将包括抗癌药在内的所有普通药品、具有抗癌作用的生物碱类药品及有实际进口的中成药进口关税降至零，使我国实际进口的全部抗癌药实现零关税。 4月27日，财政部等四部门联合发布《关于抗癌药品增值税政策的通知》，宣布自2018年5月1日起，增值税一般纳税人生产销售和批发、零售抗癌药品，可选择按照简易办法依照3%征收率计算缴纳增值税；同时，对进口抗癌药品，减按3%征收进口环节增值税。该通知还附上第一批抗癌药品清单，包含了103个抗癌药品制剂与51个抗癌原料药。 据了解，在今年5月1日前，中国进口药品，包括进口抗癌药物最惠国税率为2%—4%，而进入销售则还需要在此基础上再征17%的增值税。此次两项政策的相继出台，对于相关药物的税费下调幅度还是比较大的，其目的是为了减轻医疗负担，提高抗癌药物等救命药物的可及率。所以新出台的系列举措中，将“零关税”与“较大幅度降低增值税”结合起来，以真正实现惠民的目的。
脂质体的制备方法及其研究进展
脂质体的制备方法及其研究进展 作者：穆筱梅，梁世强 【摘要】介绍了目前常用脂质体的两大类制备方法：被动载药法和主动载药法，并对其优缺点进行比较。被动载药法适于脂溶性强的药物，包封率高且不易泄露；而主动载药法适于两亲性药物。 【关键词】脂质体；被动载药；主动载药 脂质体作为药物载体具有提高药物疗效、减轻药物不良反应及靶向作用的特点。三十多年来，人们就其制备方法进行了大量的研究。脂质体是由磷脂分子在水相中通过疏水作用形成的，因此制备脂质体所强调的不是膜组装，而是如何形成适当大小、包封率高和稳定性高的囊泡。制备的方法不同，脂质体的粒径可从几十纳米到几微米，并且结构也不尽相同。目前，制备脂质体的方法较多，常用的有薄膜法、反相蒸发法、溶剂注入法和复乳法等，这些方法一般称为被动载药法，而pH梯度法，硫酸铵梯度法一般被称为主动载药法。 1 被动载药法 脂质体常用制备方法主要有薄膜分散法、反相蒸发法、注入法、超声波分散等。在制备含药脂质体时，首先将药物溶于水相或有机相中，然后按适宜的方法制备含药脂质体，该法适于脂溶性强的药物，所得脂质体具有较高包封率。 1.1 薄膜分散法 此法最初由Bangham 等报道，是最原始但又是迄今为止最基本和应用最广泛的脂质体的制备方法。将磷脂和胆固醇等类脂及脂溶性药物溶于有机溶剂，然后将此溶液置于一大的圆底烧瓶中，再旋转减压蒸干，磷脂在烧瓶内壁上会形成一层很薄的膜，然后加入一定量的缓冲溶液，充分振荡烧瓶使脂质膜水化脱落，即可得到脂质体。这种方法对水溶性药物可获得较高的包封率，但是脂质体粒径在0.2～5 μm 之间，可通过超声波仪处理或者通过挤压使脂质体通过固定粒径的聚碳酸酯膜，在一定程度上降低脂质体的粒径。 1.2 超声分散法 将磷脂、胆固醇和待包封药物一起溶解于有机溶剂中，混合均匀后旋转蒸发去除有机溶剂，将剩下的溶液再经超声波处理，分离即得脂质体。超声波法可分为两种“水浴超声波法和探针超声波法”，本法是制备小脂质体的常用方法，但是超声波易引起药物的降解问题。 1.3 冷冻干燥法 脂质体混悬液在贮存期间易发生聚集、融合及药物渗漏，且磷脂易氧化、水解，难以满足药物制剂稳定性的要求。1978 年Vanleberghe 等首次报道采用冷冻干燥法提高脂质体的贮存稳定性。目前，该法已成为较有前途的改善脂质体制剂长期稳定性的方法之一。 脂质体冷冻干燥包括预冻、初步干燥及二次干燥 3 个过程。冻干脂质体可直接作为固体剂型，如喷雾剂使用，也可用水或其它溶剂化重建成脂质体混悬液使用，但预冻、干燥和复水等过程均不利于脂质体结构和功能的稳定。如在冻干前加入适宜的冻干保护剂，采用适当的工艺，则可大大减轻甚至消除冻干过程对脂质体的破坏，复水后脂质体的形态、粒径及包封率等均无显著变化。单糖、二糖、寡聚糖、多糖、多元醇及其他水溶性高分子物质都可以用做脂质体冻干保护剂，其中二糖是研究最多也是最有效的，常用的有海藻糖、麦芽糖、蔗糖及乳糖。本法适于热敏型药物前体脂质体的制备，但成本较高。陈建明等［1］以大豆磷脂为膜材，以甘露醇为冻干保护剂，采用冻干法制备了维生素A前体脂质体，复水化后平均粒径为0.615 1 μm ，包封率98.5%。林中方等［2］采用冻干法制备了鬼臼毒素体脂质体，复水化后平均粒径为 1.451 μm ，包封率72.3%，但是这种方法仍然存在着不足之处，例如脂质体复水化后粒径分布不够均匀。 1.4 冻融法 此法首先制备包封有药物的脂质体，然后冷冻。在快速冷冻过程中，由于冰晶的形成，使形成的脂质体膜破裂，冰晶的片层与破碎的膜同时存在，此状态不稳定，在缓慢融化过程中，暴露出的脂膜互相融合重新形成脂质体。何文等［3］分别用反相蒸发法、乳化法和冻融法制备了甲氧沙林脂质体。通过研究发现，冻融法制备的脂质体的包封率最高，但是粒径最大。反复冻融可以提高脂质体的包封率，王健松［4］