纤维素分解菌的分离筛选和产酶条件优化
秸秆纤维素分解真菌产酶条件优化及高酶活突变株诱变选育
变后 ， 得 来 自 Ｆｌ和 Ｆ３的 ４个 正 突 变 株 ， 中 Ｆ１ＵｌＦ３Ｕ 获 － ・ 其 －一 、 －－ｌ的 Ｃ ａｅ分 别 达 到 ３ ８２ ＭＣｓ ４ ．２和 ２ ２ ０ ／ ， 出发 菌 的 １８ ８ ．７Ｕ ｍＬ 为 ． ５和
２２ ．５倍 。
关键词 ： 真菌； 纤维素酶 ； 产酶条件 ； 紫外诱变 中图分类 号：１４ ２ Ｓ ５ ． 文献标识码： Ａ
Ａ ｓｒｃ ： ｒｅｓａｎ ｃｌ ｌｓ—ｅｏ ｐｓ ｇｆｎｕ ， ｉ ， 一，－ ｎ － ｗ ｌ ｌｃｅ ｓ ｘｅｉｅ ｔ ｔｒｌ．Ｂ ｊｓ ｎ Ｈ， ｂｔａｔｎＩ ｒ ｓ ｅ ｕｏｅｄｃｍ ｏｉ ｇｓ ｖ ． Ｆ１ Ｆ２ａｄＦ３， ｅｅｓ ｅｔ ａ ｐｒ ｎａｍａ ｉ ｓ ｙａ ｕｆ ｇｐ Ｉ ｔｉ ｏ ｌ ｅ ｆ ｎ ｕ ｚ ＇ｅ ｄ ｅ ｍ ｌ ｅａ ｄ ｉ
ｐ Ｈ分别为 ８０ ７ Ｏ ７ ０ 培养一段 时间后 ， ． 、 ． 、． ； 各菌株发酵液 的 ｐ Ｈ值均有一定的下降。 其中以 Ｆ － 降幅度最大； ２下 对纤维素酶活力相
对最高 的Ｆ１进行不同无机 盐和碳源培养后发现 ， 一 适合该菌株产纤维素酶的碳源为谷壳粉 ， 无机盐组分为 Ｂ ； 真菌经紫外诱 Ａ １３株
ｗａ ｐ ｍｉ ｄ Ｆ ｒ ｅ ｍｏ ｅ，ｔ ｅ ｒｍｕ ａ ｔｓ ａｎ ｒ ｂａ ｎ ｙ ＵＶ ｔｔ ｎ ｈ ｅ ｕ ｔ ｈ ｗｅ ｈ ｔ ｆｅ ｅｎ ｕ ｔ ｒ ｄ ｉ ｅ ｍｅ ｔ— ｓｏ ｔ ｚ ． ｕｔ ｒ ｒ ｈ ｉ ｉ ｅ ｈ ｔ ｎ ｔ ｉ ｓｗｅ ｅ ｏ ｔ ｉｅ ｂ ｒ ｄ ｍｕ ｉ ．Ｔ ｅ ｒ ｓ ｌｓｓ ｏ ｄ ｔ ａ ，ａｔ ｒｂ ｉ ｇ ｃ ｌ ｅ ｎ ｆ ｒ ｎ ａ ａ ｏ ｕ
高产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件优化
傅科鹤，范莉莉，陈慧颖，等．高产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件优化［Ｊ］．江苏农业科学，２０２１，４９（３）：２１４－２１８．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２１．０３．０３８高产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件优化傅科鹤１，２，范莉莉１，２，陈慧颖１，黄 颖１，张同林１（１．南昌师范学院生物系，江西南昌３３００３２；２．地方鸡种遗传改良省级重点实验室／南昌师范学院生物技术研究所，江西南昌３３００３２） 摘要：纤维素是自然界中分布最广泛的一种生物质能源，筛选能够高效降解纤维素的菌株对于开发利用这类物质具有重要意义。
从土壤中分离纯化获得一株高产纤维素酶的菌株ＴＷ０６３－３，通过形态学结合分子生物学鉴定得出，该菌株为草酸青霉。
通过单因素优化试验寻找最佳培养条件，然后通过正交试验确定关键因子的最佳参数。
筛选得出最佳培养条件：１５ｇ／Ｌ羧甲基纤维素钠＋２ｇ／Ｌ硝酸铵，ｐＨ值为３．０，２００ｒ／ｍｉｎ培养６ｄ。
在最佳培养条件下，酶活性比优化前提高了３４．１％，达到５２４．４Ｕ／ｍＬ。
研究结果可为生物降解纤维素酶提供一定的理论及应用价值。
关键词：纤维素酶；草酸青霉；培养基优化 中图分类号：Ｓ１８２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２１）０３－０２１４－０５收稿日期：２０２０－０３－１０基金项目：江西省教育厅项目（编号：１５１２５２、ＧＪＪ１６１２３３）；国家自然科学基金地区项目（编号：３１６６００２０）。
作者简介：傅科鹤（１９７６—），男，江西南昌人，博士，讲师，主要从事微生物土壤修复研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｋｈｆｕ０１１２＠１６３．ｃｏｍ。
通信作者：范莉莉，博士，讲师，主要从事木霉菌分子遗传研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｌｆａｎ３１＠１６３．ｃｏｍ。
纤维素酶能够将自然界中最丰富的生物质能源———纤维素类物质分解成可溶性单糖，从而为大批量生产生物燃料乙醇提供廉价原料［１］。
产纤维素酶细菌的筛选鉴定及产酶条件研究
产纤维素酶细菌的筛选鉴定及产酶条件研究⼴西轻⼯业GUANGXI JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY2009年7⽉第7期（总第128期）⾷品与⽣物纤维素是地球上分布最⼴，含量最丰富的碳源物质，对⼈类⽽⾔，它⼜是⾃然界中数量最⼤的可再⽣资源，是永不枯竭的⽣物资源。
纤维素可被纤维素酶降解⽣成葡萄糖，因此纤维素酶研究开发和应⽤是植物质资源再利⽤的主要途径。
微⽣物是纤维素酶的主要来源，据不完全统计，迄今为⽌，国内外共记录了产纤维素酶的菌株⼤约53个属的⼏千个菌株[1]，其中主要有细菌、放线菌和真菌，⽬前研究的最清楚的是霉菌中的⾥⽒⽊霉T.reesei 。
细菌产纤维素酶的产量较少，主要是葡聚糖内切酶，⼤多数对结晶纤维素⽆降解活性，且所产⽣的酶多是胞内酶或吸附在细胞壁上，不分泌到培养液中，增加了提取纯化的难度[1]，因此对细菌的研究较少。
但由细菌产⽣的纤维素酶⼀般为中性或碱性，近⼗年来随着中性纤维素酶和碱性纤维素酶在洗涤、纺织等⽅⾯应⽤前景⼴阔，细菌纤维素酶制剂已显⽰出良好的应⽤性能和巨⼤的经济价值[2]。
我们从青藏⾼原牦⽜粪中分离到⼀株⾰兰⽒阴性菌Ti-bet-YD4600-2，经16S rDNA 序列⽐对分析，Ti-bet-YD4600-2为鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas sp.)菌株。
鞘氨醇单胞菌属是Yabuuchi （1990）[3]等通过研究16S rDNA核苷酸序列，胞内脂质中出现的特殊鞘糖脂和辅酶Q 的主要类型，确定的⼀个新属，该属细菌具有着极强的⽣命⼒，分布⼴泛，对除草剂、偶氮染料、多环芳烃等具有较好的降解作⽤，近年来受到⼴泛重视和研究[4]。
１材料和⽅法1.1材料来源通天河（34°49.753N,92°56.142E ）海拔4604m 处取牦⽜粪样品。
1.2培养基[5]分离平板培养基，复筛培养基，滤纸崩解实验培养基，液体摇瓶培养基。
1.3初筛取样品1g 置于装有100mL ⽆菌⽔的三⾓瓶中，摇匀，从三⾓瓶中取1mL 转移到另⼀盛有100mL ⽆菌⽔的三⾓瓶，在25℃和150r /min 下振荡培养2h ，取0.1mL 振荡培养液涂布筛选到以CMC 为唯⼀碳源的培养基平板，倒置恒温25℃培养3~4d ，注意观察菌的⽣长情况，挑取单菌落⽤斜⾯保存。
产耐高温纤维素酶放线菌的筛选与鉴定及菌株发酵条件优化开题报告
产耐高温纤维素酶放线菌的筛选与鉴定及菌株发酵条件优化开题报告1.选题的背景和意义纤维素是植物细胞壁的主要构成成分，是一种难以降解的高分子物质，具有广泛的应用前景。
产耐高温纤维素酶的微生物可以在高温条件下分解纤维素，实现高效的纤维素降解，具有在生物质能源利用、造纸工业和食品加工等领域的重要应用价值。
因此，筛选和鉴定产耐高温纤维素酶的微生物菌株，优化其发酵条件，对于探究高效纤维素降解机制、开发高效生物质能源利用技术具有重要意义。
2.研究的目的和内容本研究的目的是通过对产耐高温纤维素酶的微生物菌株进行筛选和鉴定，分析其酶学特性，并通过优化发酵条件提高产酶量和酶活力。
具体内容包括：（1）从野外土壤或其他资源中筛选能够产生耐高温纤维素酶的放线菌。
（2）对筛选得到的菌株进行鉴定和分类，确定其真菌属及种类。
（3）分析所筛选菌株纤维素酶的酶学特性，如酶活力、热稳定性、pH稳定性等。
（4）采用单因素试验和响应曲面法等方法，优化所选菌株的发酵条件，提高酶产量和酶活力。
3.研究的方法和步骤（1）菌株筛选和鉴定：采用土样平板法、色谱法或PCR技术等方法筛选获得产耐高温纤维素酶的放线菌菌株，并通过形态学、生理生化和分子生物学分析，确定其真菌属及种类。
（2）酶学特性测定：通过基于联合胆囊素法的改进波动消光法或滴定法等方法，测定筛选菌株生产的耐高温纤维素酶的酶活力及其温度、pH值等影响因素。
（3）发酵条件优化：采用单因素试验和响应曲面法等方法，优化所选菌株的发酵条件，包括发酵温度、发酵时间、碳源和氮源等条件，提高酶产量和酶活力。
4.预期结果和意义本研究预期可以筛选出产耐高温纤维素酶的放线菌菌株，并确定菌株的酶学特性和最适发酵条件，从而建立一套有效的高效纤维素降解与利用技术，为生物质能源的可持续利用和开发提供具有参考价值的理论基础和实际应用技术。
纤维素酶高产菌的分离筛选与培养基优化
纤维素酶高产菌的分离筛选与培养基优化李荣杰（安徽丰原集团有限公司，安徽蚌埠233010）摘要：以纤维素粉为惟一碳源，从取自某木材公司木材堆放处的土样中筛选出92株能够分解纤维素的菌株，采用刚果红鉴别培养基进行鉴定，选取透明圈较大的菌株10株进行液体培养，并测定它们的酶活，获得一株酶活高的里氏木霉FYFJ928，其发酵水平为8.3IU/mL 。
进一步研究培养基组分及培养条件对里氏木霉FYFJ928摇瓶发酵产纤维素酶的影响，在培养温度28℃，转速为200r/min 条件下进行培养，其最佳培养基组成：0.5%酵母粉，0.06%硫酸镁，0.5%磷酸二氢钠，2%葡萄糖，2%玉米浆，0.5%硫酸铵和8%纤维素粉，培养6d 后，其发酵水平可达到15.6IU/mL ，比优化前提高了近1倍。
关键词：里氏木霉；筛选；纤维素酶中图分类号：Q939.5文献标识码：A文章顺序编号：1672-5190（2009）06-0009-03Isolation of High Producing Cellulase Strain and Its Culture Medium OptimizationLI Rong-jie（Anhui Fengyuan Co.,Ltd.,Bengbu 233010,China ）Abstract ：The 92strains of cellulose-decomposing microorganisms were isolated from soil with timber plant stacked,ten colonies with distinct red zones were selected from them by congo red agar medium.By measuring the enzyme activity of liquid culture filtrates ，A strain （Trichoderma reesei FYFJ928）was obtained with higher cellulase activity ，and the filter paper enzyme （FPA ）was 8.3IU/mL.T.reesei was cultured in different medium to study the ability of producing cellulase at 28℃with rotate speed at 200r/min.The optimum medium was determined as follows:0.5%yeast extract,0.06%MgSO 4,0.5%NaH 2PO 4,2%glucose,2%corn steep liquor,0.5%（NH 4）2SO 4and 8%cellulose powder,the FPA was 15.8IU/mL under the optimized culture medium after cultured for 6days ．Key words ：Trichoderma reesei ;screening;Cellulase纤维素是自然界中含量最丰富的碳水化合物，是一类可再生的资源和能源。
基于微生物分离的分解纤维素酶活性筛选与评价
基于微生物分离的分解纤维素酶活性筛选与评价随着环境问题的愈发突出，生物技术的发展成为解决这些问题的重要手段之一。
分解纤维素酶作为一类重要的生物催化剂，在生物质能源转化、生物制纤等领域具有广泛的应用前景。
因此，基于微生物分离的分解纤维素酶活性筛选与评价成为了一个研究热点。
本文将探讨该过程的方法与意义。
一、微生物分离与筛选方法1.1 微生物样品采集微生物是一类极小的生物体，因此在分离之前需要采集样品。
采集样品时，应注意避免污染，并选择生长环境中富含纤维素的地点，以增加微生物分离的成功率。
1.2 微生物分离将采集到的样品进行稀释，再通过平皿法或滴定法进行分离，最终得到纯净的微生物单菌落。
分离时要注意将纯净菌落转移到适宜的培养基上进行后续的培养。
1.3 筛选方法借助培养基的初始筛选，根据微生物在不同培养基上的生长情况，迅速筛选出对纤维素可降解的微生物。
二、分离微生物产酶与测定酶活性2.1 生物体内酶的提取通过适当的方法提取微生物产生的酶，常用的方法包括超声波破碎法、渗透法等，提取酶液。
2.2 酶活性测定采用适当的测定方法（如糖酶活性检测法、电泳法等），对酶液中的活性进行测定。
通过测定可以了解微生物酶的活性水平，为后续的评价与筛选提供参考。
三、分解纤维素酶活性评价指标3.1 酶活性酶活性是评价微生物分解纤维素能力的重要指标之一。
通常通过酶解底物与反应液中产生的产物量的测定来间接反映酶活性的强弱。
3.2 温度稳定性微生物酶活性的温度稳定性对于实际应用有着重要的影响。
通过在不同温度下对酶活性的测定，可以评价微生物酶在不同温度下的活性变化。
3.3 pH稳定性pH稳定性是评价微生物酶活性的重要指标之一。
通过对酶活性在不同pH值下的测定，可以了解微生物酶对不同pH值的适应能力。
3.4 抑制剂对酶活性的影响加入适量的抑制剂，在不同条件下测定酶活性的变化，可以了解微生物酶对不同抑制剂的敏感性。
四、应用前景与展望纤维素酶在生物质能源转化、生物制纤等领域具有广阔的应用前景。
纤维素菌分离和鉴定的方法
纤维素菌分离和鉴定的方法一、概述纤维素由于其特殊的生化性质，一直是微生物学和食品工业研究的关注焦点。
特别是纤维素的分解，除了传统的化学方法，生物法也是目前广泛采用的技术之一。
对纤维素酶活性和产酶微生物的分离和鉴定，是纤维素生物技术研究的重要内容。
纤维素分解酶是产生于微生物体内的一类酶，广泛存在于真菌和细菌中，可划分为纤维素酶和半纤维素酶两大类，规律的利用这些微生物菌种，开发新型的纤维素分解酶。
纤维素的微生物分解菌种较多，其中许多菌种能分泌出多种细胞外酶，如单糖的转化酶、纤维素酶、半纤维素酶、葡萄糖氧化酶、木糖酶、果糖酶和葡聚糖酶等。
多种新型有机物的产生依赖于工业生产中微生物的应用技术，目前各国纤维素降解的菌株和发酵产物分离和鉴定方法越来越多。
纤维素菌的分离可采用筛选、稀释和富集等方法。
实际应用中，常用的分离方法有：（一）厌氧富集法：根据纤维素菌能够在厌氧条件下进行生长和代谢的特点，采用富集培养方法，利用耐氧性微生物限制氧气的供应，引起产生厌氧性纤维素分解菌类，然后推广领域固定化、发酵和应用。
可根据繁殖时间将厌氧富集法分为短时间富集法和长时间富集法。
（二）筛选法：在纤维素富含的自然环境或人工培养环境中进行筛选。
先用一些微生物菌株做为预培养菌种，加入富含纤维素的培养基，通过短期采取接种、稀释、摇动等处理方式，寻找纤维素分解酶活力最高的培养物，然后进行分离纯化、性质鉴定。
（三）稀释法：将样品依一定比例进行稀释，将稀释后的液体均匀地均匀的加入纤维素培养基中，用深层培养的方式进行发酵，进行分离鉴定纯化。
稀释法适用于富含纤维素且菌株较多的培养基的菌群筛选。
（一）形态学特征鉴定法：根据菌株的形态学特征进行鉴定。
此方法是最基本也是最重要的鉴定方法之一。
菌株的形态学特征包括形状、结构、颜色和大小等，进一步对分离的菌株进行正确定义。
常用的形态学特征包括：形态特征、结构特征、色素特征和大肠杆菌。
（二）生理生化特征鉴定法：通过菌株的生长特性在不同培养基中的表现，或菌体在不同生长条件下表现的生化过程，如碳源利用情况，氮源利用情况，温度和pH值的影响等，进行鉴定。
产纤维素酶真菌的分离、筛选及酶活测定
产纤维素酶真菌的分离、筛选及酶活测定摘要产酶纤维素微生物在纤维素资源的再生转化，提高牲畜饲料利用率，堆肥的使用以及环境污染等方面具有很高的应用价值。
而分离高效纤维素降解菌是这一内容的前提与基础。
本研究利用选择培养基CMC培养基，从学校周围的土壤中分离得到6株降解纤维素的真菌。
它们都具有较强的纤维素降解能力，尤其以编号为纸绿和江白活性最高。
随后对这6种菌株进行酶活测定，从中得到一株高酶活的菌株,其在CMC培养条件下酶活达到40 U。
关键词：纤维素降解菌；筛选；纤维素酶活；鉴定Separation, screening and enzymatic activity of cellulase producedby fungiAbstractMicrobial fermentation of cellulose micro-organisms, especially fungi in the conversion of cellulose into renewable resources and improve utilization of livestock feed, compost use and environmental pollution has a high application value. And efficient cellulose degradation bacteria can provide useful help in this regard. In this study, selective medium CMC medium, Shaoyang University straw isolated six soil fungi degrade cellulose. They have a strong ability of cellulose degradation, particularly in the number of paper green and White River the highest activity. And the 6 strains with a high activity were morphological, physiological and biochemical identification. Key Words: Cellulose degrading bacteria; Filter; Cellulase activity; Identification.目录摘要 (I)ABSTRACT (II)1前言 (1)1.1纤维素概述 (2)1.2纤维素酶 (2)1.3 纤维素分解菌类 (4)1.4本文研究的目的与意义 (6)2 实验部分 (7)2.1材料 (7)2.2主要试剂与仪器 (7)2.3培养基 (8)2.4菌种的分离与筛选 (9)2.5纤维素酶活性测定 (10)2.6形态特征观察 (12)2.7生理生化特性鉴定 (13)2.8菌种保藏 (14)3 结果与讨论 (14)3.1初筛选得到的各菌株的菌落形态特征描述 (14)3.2复筛获得的菌株图片 (14)3.3葡萄糖标准曲线的绘制 (16)3.4各菌的酶活力测定结果 (17)4 结论 (18)参考文献 (19)致谢 (20)1前言纤维素是自然界中存量最大的一类可再生资源。
筛选产纤维素酶菌株及其产酶条件的优化
筛选产纤维素酶菌株及其产酶条件的优化作者：葛江丽施汉钰刘瑰琦刘芳曹昊来源：《安徽农业科学》2014年第30期摘要[目的]筛选降解菌糠纤维素的菌株，并且优化其发酵条件。
[方法]采用纤维素-刚果红培养基进行筛选，筛选出纤维素酶活较高的菌株。
通过比较不同氮源、碳氮比例等条件下CMC酶活，研究其最佳发酵条件。
[结果]选出一株酶活较高的菌株，命名为N3。
其最适有机氮源为豆饼粉，无机氮源是（NH4）2SO4。
最适合N3 产酶的（NH4）2SO4∶豆饼粉比例为2∶4。
最适碳源氮源比例为 5∶2。
[结论]N3是一株具有研究价值的产纤维素酶的菌株。
关键词纤维素酶；筛选；发酵优化中图分类号S188+.4文献标识码A文章编号0517-6611（2014）30-10441-02基金项目黑龙江省财政预研项目。
作者简介葛江丽（1981- ），女，山东郓城人，工程师，硕士，从事植物生理、微生物和细胞生物学方面的研究。
我国是食用菌生产消费大国。
2010年我国食用菌总产量达2 000万t，占世界的70%。
在食用菌产业迅猛发展的势头下，随之而来的大量废弃菌糠如何处理又是摆在我们面前亟需解决的问题。
长期以来，废弃菌糠一般被废弃、焚烧，这样既浪费资源又污染环境。
另外，能源问题已成为人类社会发展的重要制约因素。
为了缓解这一危机，发展新型的可再生能源已成为世界各国主要的发展目标。
燃料乙醇是目前国际上运用较成功的替代能源之一。
有关燃料乙醇的研究和应用已被许多国家摆到重要的战略地位。
要想将木质纤维素转化为生物燃料，就要先将其分解成单糖。
具有优良性状的产纤维素酶活性菌株的使用，是纤维素资源能否高效利用的关键。
国内虽然有了大量筛选纤维素酶的研究[1]，来自自然界中的土壤、水体、腐殖质及生物体内等环境条件下纤维素酶不断被发掘，但迄今为止，我国仍未很好地解决规模生产纤维素酶的难题。
长期以来，酶的产量、比活力低一直是制约纤维素酶实际应用的一个重要原因[2]。
产酶微生物的筛选与分离
产酶微生物的筛选与分离产纤维素酶微生物的分离与筛选设计方案一、取样产纤维素酶细菌的采集选择在纤维素含量较高的地方，如花园表层土壤，腐烂的木头、造纸厂废水及反刍动物的瘤胃及其排泄物等。
本次试验拟从森林土及朽木中获得产酶菌株。
取该地区土壤10g. 二、配置培养基本次试验选用纤维素刚果红培养基，其配方是：硝酸钠0.5g磷酸氢二钠0.6g磷酸二氢钾0.45g硫酸镁0.25g氯化钾0.25g酵母浸出粉0.25g酸水解酪蛋白0.25g刚果红0.1g纤维素粉 2.5g琼脂7.5gpH值7.0 ± 0.1 25℃加热溶解于500ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,备用。
三、接种将选取的土样10全部溶至100ml无菌水中，摇匀，取悬浊液1ml，标注为原液，用移液枪从原液中取0.1ml加到0.9ml无菌水中，吹吸数次混匀，标注为10-1，依次梯度稀释至10-3，每个梯度分别取稀释液0.1ml涂布到配置好的刚果红培养基上，每个梯度涂3块平板。
涂布后的平板于28℃倒置培养5天。
四、纯化在刚果红培养基上选择透明圈较大的菌株，然后采用平板划线的方法分离纯化但菌落。
五、检测（1）形态观察：将分离的纯化的产纤维素酶菌株接种至含马铃薯葡萄糖固体培养基的平板上，30℃倒置培养，期间观察菌丝生长状态和菌落形态。
培养5天后，用接种针挑选少量菌丝制片，在光学显微镜下观察分生孢子梗和孢子的形态特征。
（2）酶活性的测定：实验仪器：721型分光光度计，恒温水浴锅，分析天平。
实验试剂：1%的3,5-二硝基水杨酸显色剂，0.2mol/L、pH4.6d 的HAc-NaAc缓冲液，0.5%的羧甲基纤维素钠溶液，0.1mg/mL葡萄糖标准溶液。
实验步骤：取一定量的酶样品，在PH4.6的缓冲溶液中（中性酶用PH7的缓冲液），与CMC在一定温度下反应30min，煮沸15min失活，加入显色剂沸水浴显色15min，在550nm处测其光密度，同时用葡萄糖标准溶液做标准曲线，如果活性较大，超出了测量范围，可将酶样进行适当稀释。
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长 、 维素 酶复合 物 的分子 量十分 庞 大 、 纤 单个 酶组 分 没有水 解纤 维素 的能力 等原 因一直 是 阻碍纤 维素 酶 大规模 生产 应 用 的瓶 颈 问 题 ． 为此 ， 试 验 利 用 本
收 稿 日期 ：０ ０— ７—１ ２１ ０ ９ 修 回 日期 ：０ ０ ９— ８ ２ １ —０ ２
术， 利用 工农业 废弃 物等 发酵 生产人 类急 需 的燃料 、 饲 料及化 工 产 品 ， 即化 工 原 料 的 “ 色 化 ” 具 有 极 绿 ，
１ ２ １ 选 择富集 培 养基 ： 维 素粉 ５ｇ Ｎ Ｎ ．． 纤 ，ａＯ
１ ｇ， ２ Ｎａ ＨＰＯ４ ・７Ｈ２ ０． ＫＨ２ Ｏ ５ ｇ， ＰＯ４０． ９ｇ
的挑 战 ， 找再生 能 源 替 代不 可 再 生 能 源是 应 对 这 寻
一
纤 维 素刚果 红鉴 别培养 基从 不 同分 离源 分离筛 选 出 对 纤维 素具 有 良好分 解 效 果 的纤 维 素 分解 菌 ， 对 并 其 酶活 力进行 了测 定 ， 选 出 １株纤 维 素 酶 活力 较 筛
关键词： 纤维素 分解 菌 ； 离； 分 筛选 ； ＭＣ酶 活 ； 纸酶 活 Ｃ 滤
中 图 分 类 号 ：Ｑ ２ Ｔ ９０ 文献标识码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ ９ ９ ２ ２ １ ）６— ０ ７ ４ １０ —７０ （ ００ ０ ０ ３ —０
资源 和环境 问 题 是人 类 在 ２ ｌ世 纪 面临 最 主要
Ｍ Ｓ ４・ Ｈ Ｏ ０ ５ｇ Ｋ １ ． ， 母 膏 ０ ５ｇ ｇ Ｏ ７ ２ ． ， Ｃ ５ｇ 酵 ０ ． ， 水解 酵 素 ０ ５ｇ 将 上述 物 质 溶解 后 ， 蒸馏 水定 容 ． ． 用
到 １ ０ ． ０ｍ１ ０
其 重要 的意义 和光 明的发 展前 景． 目前 ， 纤 维素 的 对 降解 利用 主要采 用 生 物手 段 ， 利用 微 生 物 可将 纤 维 素材料 转 化为上 述 饲 料 、 工 原料 等 ， 景 巨大 ， 化 前 而
Ｃ ＭＣ酶活 和 Ｆ Ａ 滤纸酶 活 ， Ｐ 并进 行 了产 酶条件 的单 因素优 化 实验 ． 结果 ： 集的 样 品 中共 分 离到 ４ 采
个菌株 ， 为 细 菌 ， 中 Ｈ 一３ 的羧 甲基 纤 维 素 （ ＭＣ） 活 和 滤 纸 （ Ｐ 酶 活 最 高 ， 别 是 均 其 Ｃ 酶 Ｆ Ａ） 分 ０ ５ ０ Ｕ ｍ 一１ ０ ２ ２ Ｕ ｍ 一１ 结 论 ： 一３菌 分 解 纤 维 素 的 能 力 最 强 ， 佳 产 酶 条 件 为 温 度 ． ４ １ ． ｌ 、． ９ ３ ． ｌ ． Ｈ 最 ３ ℃ ，Ｈ ． ． ０ ｐ ４ ５ 不含尿 素 ， 葡萄糖 和 纤维素含 量 为 ０ ４％和 ０ ６％ ． ． ．
１２ ３ 复 筛 平 板 培 养 基 ： Ｍ ．． ＪＣ Ｃ—Ｎ ０ ｇ ａ １ ，
Ｎ ２ Ｐ ４ ．５ｇＫ ２Ｏ ． ， 白胨 １２ ， ａＨ Ｏ ２ ， Ｈ Ｐ ４ ２ ｇ蛋 １ １５ ． ｇ 酵母 膏 ５ ０２ ， ． ｇ蒸馏水 ５０ｍ ， ５ ０ ｌ自然 ｐ １１ Ｈ， ℃灭菌 ２ ｉ． ２ ０ｍ ｎ
％ ２ 』
．
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材料 常年堆 积秸秆 的腐 殖土 ． １ ２ 培 养基 ．
目前 这 部 分 资 源 尚 未 得 到 充 分 的 开 发 利
用 ． 随着 世界人 １ 速增 长 ， 产 资 源 日渐枯 竭 ， ５迅 矿 开 发高效 转化 木质 纤维 素类 可再生 资源 的微 生物技
周红 霞， 江海 涛 ， 红琳 ， 张 陈聪 颖
（ 京 晓庄 学 院 生 物 化 工 和环 境 工 程 学 院 ， 苏 南 京 ２ １７ ） 南 江 １ １ １
摘 要： 目的 ： 究纤 维素分 解 菌的 分 离及 产 酶 条 件 优 化．方 法 ： 研 以含 茵秸秆 、 腐木 叶和 玉 米地
土壤 为 原料 ， 富集 、 筛培 养后 ， 据 水解 圈直 径／ 养 天数 进 行 纤 维素 分 解 菌的 复 筛培 养 ， 经 初 根 培 测定
高的优 良菌株 ．
挑 战的惟 一途 径 ． 物 质 能 是 再 生 能 源 ¨ ， 界 生 世
上约有 ２ ５万 种生 物 ， 力 巨大． 推算 ， 潜 据 地球 上每 年
光合作 用 的产物 高达 １ ５×１ ” ２ ０×１ 吨 ， 人 ． ０－ ． ０ 是
类 社会 赖 以生存 的基本 物质 资源 ， 中 ９ 其 ０％ 以上 为 木 质纤 维 素 类 物 质 ， 占 植 物 干 重 的 ３ 它 ５％＿ ５ ０
２１ ０ ０年 ｌ １月
南 京 晓 庄 学 院 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＮＡＮ Ｉ Ａ０Ｚ Ｊ ＮＧ ＸＩ ＨＵＡＮＧ ＵＮ ＶＥＲ Ｉ Ｙ Ｉ ＳＴ
ＮＯ ． ０１ Ｖ２ ０ Ｎｏ ６ ．
第 ６期
纤维 素分 解 菌 的 分 离 筛选 和 产 酶 条 件优 化
这一应 用前 景Βιβλιοθήκη 的前提 是要 首先分 离 到能够有 效 分解
１２ ２ 初筛 分离平 板培 养基 ： ．． 采 用文 献介 绍 的方 法配 制初 筛 分 离 平板 培
养 基
纤维 素的微 生物 菌 种 ， 目前 得 到 的纤 维 素酶 无 论 但
是来 自动物 、 植物 还是 微生 物 的 ， 都不 能满 足大规 模 工业生 产 的需 要 ． 维 素 酶 比活 力 较 低 、 产 周 期 纤 生
１ ２ ４ 扩大培 养基 ： ．． 马铃薯 １０ｇ 蔗糖 １ ， ０ ， ０ｇ琼
脂 ８５ｇ蒸馏水 ５０ｍ ， ． ， ０ ｌ 自然 ｐ １１℃灭菌 ２ ｉ． Ｈ， ２ ０ｍ ｎ １ ２ ５ 产 酶 发 酵 培 养 基 ： 皮 ８ ｇ 秸 秆 ． ． 麸 ０ ，
基 金 项 目 ： 苏省 农 业 三 项 工 程 （ 号 ： （ ０９ １７ 资 助 江 编 Ｓ ２ ０ ）７ ） Ｘ