复合酶酶解蜈蚣粉工艺优化

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复合酶法优化地黄多糖的提取工艺研究

复合酶法优化地黄多糖的提取工艺研究发表时间：2018-09-05T14:40:29.487Z 来源：《医药前沿》2018年8月第24期作者：王润珍1 利楚云1 黄小龙2（通讯作者）[导读] 复合酶法提取地黄多糖工艺操作简便、快捷，重复性、稳定性良好。

（1广东省中医院药剂科广东广州 510030）（2广州采芝林药业有限公司广东广州 510145）【摘要】目的：探讨复合酶法优化提取地黄多糖工艺的方法。

方法：通过单因素和 L9（34）正交实验设计，以地黄多糖含量为考察指标，以酶解温度、酶浓度、酶解时间及酶解pH对多糖得率的影响为试验因素，优选地黄多糖的提取工艺。

结果：最佳酶解提取工艺条件为：酶解温度55℃，酶浓度4.5%，酶解时间2.0h，酶解pH 6.0。

在此提取工艺条件下，地黄多糖含量占原药材的7.58%。

结论：复合酶法提取地黄多糖工艺操作简便、快捷，重复性、稳定性良好。

【关键词】复合酶法；地黄多糖；提取工艺；正交试验【中图分类号】R94 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）24-0369-02 Optimization of Extraction Technology of Radix Rehmanniae Preparata with Mixed EnzymesWang Runzhen1,Li Chuyun1,Huang Xiaolong2.1 Guangdong Province Traditional Chinese Medical Hospital . GuangZhou, 510030 , China;2 Guangzhou Caizilin Pharmaceutical Co., Ltd. GuangZhou, 510145 , China【Abstract】Objective To optimize the extraction technology of Radix Rehmanniae Preparata with Mixed Enzymes. Methods The effects of temperature,enzyme concentration,extraction time,and pH on yield of polysaccharides were investigated,on the basis of single-factor experiments and orthogonal test for enzymatic action in Radix Rehmanniae Preparata extraction, and there were three levels for each of the factor. The Mixed Enzymes of Radix Rehmanniae Preparata was optimized by L9（34） orthogonal test using Radix Rehmanniae Preparata content as assessing index.Results The optimum extraction conditions were as followed: extraction temperature of 55 ℃，enzyme concentration of 4.5%,pH 6.0,extraction time of 1.5 h,the yield of polysaccharides were 7.58%. Conclusion The optimized extraction technology of Radix Rehmanniae Preparata is simple and quick to operate and has good repeatability and stabilization. 【Key words】Mixed Enzymes;Radix Rehmanniae Preparata;Extraction technology;Orthogonal test 熟地黄（Radix Rehmanniae Preparata）为中药中常用的补血药，为玄参科植物地黄的新鲜或干燥块茎经加工炮制而成[1]。

昆虫酶解蛋白粉企标号

昆虫酶解蛋白粉企标号（原创实用版）目录1.昆虫酶解蛋白粉的概念和背景2.昆虫酶解蛋白粉的制备方法和原理3.昆虫酶解蛋白粉的应用领域4.昆虫酶解蛋白粉的优势和前景正文一、昆虫酶解蛋白粉的概念和背景昆虫酶解蛋白粉是一种新型的营养补充剂，主要以昆虫为原料，通过酶解技术将昆虫体内的蛋白质转化为更易被人体吸收的小分子蛋白质。

昆虫酶解蛋白粉具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇的特点，同时含有丰富的氨基酸、矿物质和维生素，是一种理想的营养补充剂。

二、昆虫酶解蛋白粉的制备方法和原理昆虫酶解蛋白粉的制备过程主要分为以下几个步骤：1.昆虫的收集和处理：选择优质的昆虫资源，如蝇蛆、蚕蛹等，经过清洗、灭菌等处理，确保原料的卫生和安全。

2.昆虫的酶解：将处理好的昆虫进行酶解，使用特定的酶解酶将昆虫体内的蛋白质分解为小分子蛋白质。

3.提取和分离：将酶解后的昆虫蛋白进行提取和分离，去除杂质，得到纯净的昆虫酶解蛋白粉。

4.灭菌和包装：对昆虫酶解蛋白粉进行灭菌处理，确保产品的卫生和安全，最后进行包装。

三、昆虫酶解蛋白粉的应用领域昆虫酶解蛋白粉作为一种新型的营养补充剂，具有广泛的应用领域，主要包括：1.运动营养：昆虫酶解蛋白粉可作为运动员的补充蛋白质来源，有助于提高运动表现和促进肌肉修复。

2.健康营养：昆虫酶解蛋白粉可作为普通消费者的营养补充剂，提高蛋白质摄入，促进身体健康。

3.动物营养：昆虫酶解蛋白粉可作为动物饲料的蛋白质补充剂，提高饲料的营养价值，促进动物生长。

四、昆虫酶解蛋白粉的优势和前景昆虫酶解蛋白粉具有以下几个优势：1.资源丰富：昆虫资源丰富，且繁殖迅速，具有可持续利用的优势。

2.营养价值高：昆虫酶解蛋白粉具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇的特点，同时含有丰富的氨基酸、矿物质和维生素。

3.环保：昆虫酶解蛋白粉的制备过程无污染，符合绿色环保的要求。

超声波协同复合酶法提取锦灯笼宿萼多糖工艺优化

Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｒｏｍＰｈｙｓａｌｉｓａｌｋｅｋｅｎｇｉＬ．ｖａｒ．Ｆｒａｎｃｈｅｔｉｉ
ＰｈｙｓａｌｉｓａｌｋｅｋｅｎｇｉＬ．ｖａｒ．Ｆｒａｎｃｈｅｔｉｉ（Ｍａｓｔ．）Ｍａｋｉｎｏｂｙ
ｌ－－ｌ ● ● ■ ■ ｌ
ｃｏｍＤｉｎｉｎｇｕｌｔｒａｓ０ｎｌＣＷｎｎＣ０ｍＯｌｅｘｅｎｚｙｍｅｓ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓａｓｉｎｄｅｘ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆｃｏｍｐｌｅｘｅｎｚｙｍｅｓｗａｓｃｏｎｉｆｍｅｒｄｂａｓｅｄｏｎｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｓａｎｄｏｔｈｒｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｓ．Ａｎｄｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｓｏｍｅｆａｃｔｏｓｒｖ／ｚ．，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓｔｉｍｅ，ｓｙｓｔｅｍｐＨ，ｓｏｌｉｄ — ｌｉｑｕｉｄｒａｔｉｏ，ｅｔｃ．ｏｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ

复合酶法提取蛹虫草类胡萝卜素工艺优化及其抗氧化能力测定

第4期
周翔宇等:复合酶法提取蛹虫草类胡萝卜素工艺优化及其抗氧化能力测定
Байду номын сангаас
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is 4.096 U/mg. In other words, the antioxidant activities of cordyceps militaris carotenoids obtained by the two extraction methods were not significantly different in vitro.
样品制备的方法参照邵颖等[21] 的方法并进行改进。新鲜蛹虫草子实体于 60 ℃ 下烘干至恒重，粉碎过 60 目筛，低温干燥避光条件下密封保存备用。 1.3.2 提取溶剂的确定
为使得样品定量测定时溶剂体系与标准品保持一致，以便用酶标仪直接测定样品提取液吸光度时直接定量。本实验以溶解度为表征，参照 Dong 等[9] 的方法用乙醇溶液对色素粗提物进行溶解度试验，结果显示其在体积分数为 60% 以下的乙醇溶液中具有良好的溶解性。再选择丙酮、乙醇、甲醇、二甲亚砜（DMSO）、乙腈、60% 乙醇溶液和丙酮与 60% 体积分数的乙醇混合溶液（2∶1）作为研究对象，将蛹虫草子实体色素粗提物分别溶解于上述 7 种溶剂中，最终通过颜色辨别判断其溶解性从而确定最佳提取溶剂。结果显示丙酮和 60% 体积分数的乙醇混合溶液（2∶1）能够溶解标准品 β-类胡萝卜素，同时蛹虫草子实体当中的类胡萝卜素在其中能够很好地提取出来，因而最终确定本试验开展的提取溶剂为丙酮和 60% 体积分数的乙醇混合溶液，两者的比例为 2∶1，在此条件下提取得率最高，为2 256 μg/g。 1.3.3 复合酶的选择以及添加比例的确定
法的原理主要是利用生物酶破坏细胞壁结构从而将色素较温和且带有选择性地释放出来[14]，生物酶的专一性保证其不会对底物外物质造成破坏，这一特性使酶辅助提取法更适合于提取稳定性较差且含量较低的化学成分[15 − 16]。2019 年国内学者汪建红[17] 利用木瓜蛋白酶辅助提取荸荠当中的色素，高效的获得荸荠色素且其稳定性较高。除此之外，采用酶辅助提取法相对于其他常规溶剂提取法拥有更多的优点，提取过程对环境十分友好，提取效率更高，对提取设备及环境的要求更低且能耗低，开展性较强适应于工业化生产[18]。采用酶辅助提取法提取色素有许多优势，但单一的酶可能不能满足要求，所以有的研究者尝试用两种以上的酶采用复合酶提取法提取色素。 2019 年国外学者 Gizem 等[19] 采用纤维素酶和果胶酶共同作用提取土豆废弃基质中的番茄红素并对其提取工艺进行了优化。

复合酶法小麦淀粉制糖工艺探索

蛋白酶 0．04 0．05
0．06 0．07 0．07 0．06 0．05 0．04 0．05 0．04 0．07 0．06 0．06 0．07 0．04 0．05 25 ．20 0 25 ．45 0 24 ．97 5 25 ．050 0．05 0．475
试验结果 24．1 24．9
25．5 25．2 24．9 24．6 26．O 25．8 25．6 25．4 25．2 25．2 25．6 24．9 25．5 25 _ 3
发酵科技制糖工艺探索
刘云艳 ( 河南莲花味精股份有限公司项城466200)
摘要：对小麦淀粉双酶法制糖工艺进行改进，A+B淀粉液化后加入复合酶糖化，使粉糖转化率、糖水含量、透光、糖化周期等指标都有了显著提高。
关键词：复合酶小麦A+B淀粉制糖工艺
在小麦A+B淀粉制糖生产中，传统工艺是双酶法制糖，但该工艺采用单一性质的仪一淀粉酶和糖化酶，制出的葡萄糖收率低、质量较差，在谷氨酸发酵领域只能作为底糖使用，制约了小麦淀粉的生产。
表1 复合酶配比正交试验结果分析
普鲁兰酶 0．06 O．07
0．08 O．09 O．06 0．07 O．08 0．09 0．06 0．07 O．08 0．09 O．06 O．07 O．08 O．09 24 ．800 24 ．95 0 25 ．55 0 25 ．375 O．08 0．7 50
木聚糖酶
10 21．2 28 24．8 46 26．3
12 22．0
30 25． 1 48 26．3
14 22．6
32 25．3 50 26．2
16 23．O 34 25．5 52 26．2
4 15．9 22 24．0 40 26．1

昆虫酶解蛋白粉企标号

昆虫酶解蛋白粉企标号摘要：1.昆虫酶解蛋白粉的企标号介绍2.昆虫酶解蛋白粉的原料来源3.昆虫酶解蛋白粉的生产工艺4.昆虫酶解蛋白粉的营养价值5.昆虫酶解蛋白粉的应用领域正文：昆虫酶解蛋白粉是一种以昆虫为原料，通过酶解技术生产出的高蛋白营养补充剂。

在我国，昆虫酶解蛋白粉的生产企业需遵循相应的企业标准来确保产品质量。

这些企标号涵盖了昆虫酶解蛋白粉的生产工艺、原料来源、营养成分等方面，为企业生产提供指导。

昆虫酶解蛋白粉的原料主要来源于昆虫，如蝇蛆、蝗虫、蟋蟀等。

这些昆虫含有丰富的蛋白质、氨基酸和脂肪酸等营养成分，是生产昆虫酶解蛋白粉的理想原料。

在选择原料时，企业需关注昆虫的种类、生长环境、捕获时间和处理方法等因素，以保证原料的品质。

昆虫酶解蛋白粉的生产工艺主要包括原料收集、预处理、酶解、脱色、脱臭、干燥和粉碎等步骤。

其中，酶解是关键环节，通过特定的酶对昆虫蛋白质进行降解，形成小分子肽和氨基酸，提高蛋白质的消化率和利用率。

此外，生产过程中还需严格控制温度、pH 值、酶解时间等条件，以保证昆虫酶解蛋白粉的品质。

昆虫酶解蛋白粉富含蛋白质、氨基酸、脂肪酸等多种营养成分，具有较高的营养价值。

研究发现，昆虫酶解蛋白粉中的蛋白质含量可达50% 以上，且含有全部必需氨基酸。

此外，昆虫酶解蛋白粉中的脂肪酸以不饱和脂肪酸为主，有利于人体健康。

昆虫酶解蛋白粉广泛应用于食品、保健品、饲料等领域。

在食品领域，昆虫酶解蛋白粉可作为营养补充剂，提供人体所需的蛋白质和氨基酸；在保健品领域，昆虫酶解蛋白粉具有提高免疫力、抗疲劳等功效；在饲料领域，昆虫酶解蛋白粉可作为优质蛋白质来源，提高饲料的营养价值。

总之，昆虫酶解蛋白粉是一种具有较高营养价值和广泛应用领域的产品。

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收稿日期：2017-12-01基金项目：山东中医药大学大学生研究训练（SRT）计划资助项目（校编号：2017044）作者简介：王彦多，研究方向：中药学 E-mail: m17864190855@163.com*通讯作者：王集会，教授，研究方向：虫类中药发酵及活性成分研究 E-mail: wangjihui10@126.com

复合酶酶解蜈蚣粉工艺优化王彦多1，桑晓1，方园1，刘颖1，曹广超1，毛会秀1，刘金虎1，王集会2*（1. 山东中医药大学药学院，山东济南 250355；2. 山东中医药大学实验中心，山东济南 250355）

摘要：目的优化复合酶酶解蜈蚣粉最佳酶解工艺。方法采用正交试验法探究酶解温度、酶解时间、pH值及单个酶酶活力对蜈蚣复合酶酶解液冻干粉对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制率的影响，并确定最佳酶解工艺条件。结果蜈蚣复合酶最佳酶解工艺条件为酶解温度35 ℃、酶解时间3 h、pH值为8.0及单个酶酶活力2000 U/g，在此工艺条件下，蜈蚣复合酶酶解液冻干粉对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率为61.67 %。结论通过实验验证此工艺可行，蜈蚣复合酶酶解液冻干粉对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率较高。关键词：蜈蚣；复合酶；酶解工艺；抑制率中图分类号： R284.2 文献标识码：A 文章编号：1672-979X（2018）05-0367-04DOI：10.3969/j.issn.1672-979X.2018.05.013

Optimization of Enzymatic Hydrolysis of Centipede Powder with Complex EnzymeWANG Yan-duo1, SANG Xiao1, FANG Yuan1, LIU Ying1, CAO Guang-chao1, MAO Hui-xiu1, LIU Jin-hu1, WANG Ji-hui2(1. College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China; 2. Experiment Center of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China)Abstract: Objective To optimize the enzymatic hydrolysis process of centipede powder with complex enzyme.

Methods The orthogonal test was adopted to explore the effects of enzymatic hydrolysis temperature, enzymatic

hydrolysis time, pH value and activity of single enzyme on the inhibition rate on the breast cancer MCF-7 cells and determine the optimum enzymatic hydrolysis conditions. Results The optimum conditions were as follows: the enzymatic hydrolysis temperature was 35 ℃, the enzymatic hydrolysis time was 3 h, the pH value was 8.0 and activity of single enzyme was 2000 U/g. Under these conditions, the lyophilized powder of the enzymatic hydrolysate showed the inhibition rate on the proliferation of the breast cancer MCF-7 cells of 61.67 %. Conclusion This enzymatic hydrolysis process is feasible, and the lyophilized powder of the enzymatic hydrolysate has a strong inhibition effect on the breast cancer MCF-7 cells.Key Words: centipede; compound enzyme; enzymatic hydrolysis; inhibition rate

蜈蚣入药首载于《神农本草经》，味辛，性温，有毒，归肝经[1]。蜈蚣于《本草纲目》中记载具有祛风止痉，通络止痛，攻毒散结的功效[2]。现阶段研究发现蜈蚣的毒性主要集中于其牙部[3]。蜈蚣虽具有一定毒性，但其具有较强的通络散结攻毒之效。因此，近现代以来，许多国医大师都善用蜈蚣治疗恶性肿瘤[4]，认为其独特的“以毒攻毒”疗

效具有不可替代的作用。现阶段蜈蚣抗肿瘤效果成为其药理作用的研究热点，研究发现，蜈蚣具有抑制肿瘤细胞增殖、

食品与药品 Food and Drug 2018年第20卷第5期 367增强机体免疫力等作用[5]。其主要通过破坏癌细胞细胞膜使其破裂的方式杀死癌细胞[6]。现阶段对蜈蚣的研究主要集中于蜈蚣全虫，而对蜈蚣生物转化后的产物活性研究则鲜有文献报道。刘春雨等[7]探讨了不同酶解产物对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制效果，结果显示半仿生酶解方法可提高蜈蚣抗肿瘤效果。因此，本实验在已筛选出有效用酶的基础上进行复合酶酶解工艺的优化，探究各因素对蜈蚣粉酶解的影响，并期望通过工艺优化达到提高蜈蚣粉酶解产物对乳腺癌MCF-7细胞抑制率的效果。1 仪器与材料1.1 仪器FA1004N型电子分析天平（上海精密仪器公司）；HWLC型电热恒温水温箱（北京医疗设备厂)；PHS-25型pH计（上海仪电科学仪器公司）；KDN-2C定氮仪配四孔消化炉（上海纤检仪器公司）；UV9100B可见分光光度计（北京莱伯泰科仪器公司）；EL340i型全自动酶标仪（Molecular Davices）；TS100型倒置显微镜（日本尼康）。1.2 材料蜈蚣冻干粉自制（批号：20160703）；胰蛋白酶（5×104 U/g，国药集团）；胰凝乳蛋白酶（上海源叶，批号：G2207Y23138）；弹性蛋白酶（3×104 U/g，上海源叶，批号：Y30M8T32945）；RPMI-1640培养基，胎牛血清（赛默飞世尔）；胰凝乳蛋白酶（106 U/g，上海碧云天）；注射用顺铂（齐鲁制药，纯度：20 mg/支）；MTT（武汉盖云天）。1.3 细胞株乳腺癌MCF-7细胞株由山东省立医院提供。2 方法2.1 正交试验水平设计根据刘春雨等[7]前期单因素筛选试验并参考焦方文等[8]方法，确定以酶解温度、酶解时间、pH值及单个酶酶活力为考察因素，按L16（44）正交表进行正交试验。取蜈蚣粉1.0000 g，以对蜈蚣粉复合酶酶解液对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率为指标，进行4因素4水平的正交试验。因素水平设计见表1。表1 蜈蚣粉酶解工艺正交试验设计水平因素A酶解温度/℃B酶解时间/hC pH值D 单个酶酶活力/U·g-1

13027.0100023537.5150034048.0200044558.52500

2.2 蜈蚣粉酶解方法精密称取蜈蚣粉3份，每份1.0000 g，分别置入100 ml具塞锥形瓶，按料液比1:40加入蒸馏水。超声提取30 min，然后按各正交试验条件进行酶解，复合酶比例为胰蛋白酶:弹性蛋白酶:胰凝乳蛋白酶=1:1:1。酶解结束后，以3000 r/min 转速离心，取复合酶酶酶解上清，冷冻干燥。2.3 乳腺癌MCF-7细胞的培养2.3.1 细胞复苏从液氮罐中取出冻存的MCF-7细

胞，置于37 ℃ 水浴锅中使其融化。取出细胞，1000 r/min离心。离心后向离心管中加入1640 培养基，吹打使其混匀，转移至培养瓶中，加入适量1640培养基，24 h后换液[9]。

2.3.2 细胞传代待细胞增殖至80 %~90 % 时，进行

细胞传代。首先用0.01 mol/L pH 7.4的PBS缓冲溶液清洗3次，然后加入500 μl 0.25 %胰蛋白酶溶液进行消化。将培养瓶于超净台中放置一段时间，至细胞蜷缩不贴壁时加入1640培养基，轻轻吹打使其成单细胞悬液，分装至培养瓶中。放置于37 ℃，含5 % CO2和适宜湿度的培养箱中继续培养。

2.4 MTT法测定蜈蚣粉酶解液冻干粉对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率2.4.1 提取物溶液配制精密称取10.00 mg酶解液冻

干粉，溶于5 ml 1640培养基，0.22 μm滤膜过滤，用l640培养基依次稀释，配成2，1，0.5，0.25，0.125 mg/ml溶液。2.4.2 抑瘤实验将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7

细胞消化后稀释成1×106个/ml的肿瘤细胞悬液，

将其接种于96孔培养板，每孔100 μl，于37 ℃、5 % CO2培养箱中培养。培养24 h后弃掉培养基，空白

对照组加不含血清的1640培养基100 μl，阳性对照组加100 μg/ml顺铂100 μl，其他给药组每孔分别加入不同浓度的药物100 μl，每个浓度的药物重

368 食品与药品 Food and Drug 2018年第20卷第5期