血小板抗体检测妇科篇4稿
100例孕妇血清中血小板抗体的检测
100例孕妇血清中血小板抗体的检测
赵茹;查勇
【期刊名称】《临床输血与检验》
【年(卷),期】1999(001)002
【摘要】众所周知．母婴间红细胞Rh系或ABO系血型不合，可引起Rh或ABO 新生儿溶血病。
同样母婴间血小板血型不合的妊娠免疫可导致早期流产和新生儿同种免疫血小板减少性紫癜症(NAITP)[1]。
为了预防新生儿同种免疫血小板减少性紫癜以及对早期流产进行实验诊断，我们对100例不同妊娠期的孕妇进行了血小板抗体检查。
现报告如下。
【总页数】1页(P36)
【作者】赵茹;查勇
【作者单位】芜湖市中心血站，芜湖市241000
【正文语种】中文
【中图分类】R457
【相关文献】
1.应用分子杂交技术检测孕妇血清中CMV、DNA片段及孕妇CMV感染对胎儿的影响 [J], 梁国平
2.妊娠11~14周孕妇血清PAPP-A与血清CA125、TM联合检测在早期诊断胎盘早剥中的价值 [J], 曲慧延;李茂珍;彭伟
3.血清sICAM-1、sVCAM-1和TNF-α在糖尿病合并妊娠孕妇血清中的检测及意义 [J], 胡志坚;徐炜;卢敏;杨人勋
4.不同乙肝血清学指标阳性孕妇血清中HBV-DNA定量检测结果分析 [J], 金春子;李萍;朱童
5.无创产前检测技术在不同血清学筛查风险值及不同年龄孕妇中检测染色体异常的价值 [J], 裴元元;胡亮;冉健;温丽娟;朱雁媚;魏凤香
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血小板特殊配血检测
血小板特殊配血检测针对存在HLA抗体、HPA抗体或血小板自身抗体的患者进行的血小板配血称为血小板特殊配血。
（一）SEPSA1.该技术在血小板抗体检测中首次介绍，此处介绍在血小板特殊配血检测时的检验方法。
（1）原理：同SEPSA在血小板抗体检测中的原理。
器材：平板离心机，95×16mm尖底离心管（以下称“尖底管”），96孔脱卸式U型板，滴管，加样器。
（2）试剂：生理盐水、ACD-A保养液、甲醛、阴阳对照试剂、PBS及Tween20-PBS（以下称“T-PBS”）试剂。
（3）操作：1）与患者ABO同型的献血者富含血小板血浆（PRP）中加入1/10量的ACD-A液，混合，1100g（2800r/min），离心10分钟，弃去上清液。
2）同血小板抗体检测SEPSA操作3）～8）。
3）每孔中加入25μl被检者血清，室温湿盒1小时。
4）同血小板抗体检测SEPSA操作10）。
5）同血小板抗体检测SEPSA操作12）。
6）结果判定与记录：凝集强度判读见表。
阳性表明受检者血清中存在和献血者血小板反应的抗体，为血小板特配不相合；阴性表明受检者血清中未检出和献血者血小板反应的抗体，为血小板特配相合。
2.方法学评价同血小板抗体检测中的SEPSA方法学评价。
3.质量保证（1）检测前：将被检血清4000r/min（2800g）离心10分钟，以去除沉淀。
被检标本不能使用血浆。
被检血清不需要灭活补体。
（2）检测中：为了防止静电干扰，宜在室温湿润状态下操作。
设立阴阳性对照以进行质量控制，以正常人AB血清为阴性对照，已知阳性血清为阳性对照。
4.参考范围阴性。
5.临床意义对于有指征的患者，在明确血小板抗体性质的基础上，其输注血小板时应通过血小板特殊配血获得配合性血小板输注，以避免血小板输注无效和输血后紫癜。
当患者被高度同种免疫，存在多种同种抗体时，比较难以获得相容性血小板，血小板特殊交叉试验往往难以成功。
这种情况下，可以通过选择HLA匹配的血小板来得以解决。
血小板抗体(固相凝集法)检测标准操作规程
1目的为规范血小板抗体检测操作，保证检测的有效性及临床用血的安全性，依据《输血实验室管理规程》4.19.4条款的要求制定本规程。
2适用范围适用于医疗机构输血科（血库）进行血小板抗体检测。
3职责医疗机构输血科(血库)技术人员负责血小板抗体的检测。
4原理微孔板反应孔中包被有抗血小板单克隆抗体（针对血小板表面糖蛋白IIb/IIIa、Ib/V/IX），血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部表面形成血小板单层。
加入受检血清或血浆，在孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体和反应孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。
加入抗IgG及IgG致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。
5设备与材料5.1材料血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）。
5.2设备平板离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱。
6检测环境室温应控制在18-25℃，湿度应控制在30%-70%。
7操作步骤7.1血标本采集及处理7.1.1检测样本准备7.1.1.1采集患者静脉血2ml，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）或枸橼酸钠抗凝，经3000rpm离心5分钟，分离出血浆进行检测。
7.1.1.2如果患者血标本为如果患者血标本为不抗凝血，经3000rpm离心5-10分钟，取上清进行检测。
7.1.1.3如果患者血标本为血浆（血清），3000转离心5-10分钟。
7.1.2血标本处理样本4℃可保存7天。
若需长期保存，应离心后分离血清或血浆，－20摄氏度冻存。
7.2平衡室温取出血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）放在室温中平衡至室温。
7.3制备血小板悬液7.3.1商品化的冻干血小板稀释后直接使用。
妊娠期妇女血小板抗体检测结果的影响因素分析
妊娠期妇女血小板抗体检测结果的影响因素分析涂飞;毕雅坤;王应辉;杨永莲;左丽【期刊名称】《贵州医科大学学报》【年(卷),期】2024(49)2【摘要】目的检测血小板(PLT)抗体在妊娠期妇女血清中的表达情况,探讨分析该人群PLT抗体阳性的相关影响因素。
方法选取2 790例妊娠期妇女为研究对象,采用红细胞固相凝集法进行PLT抗体筛查,抗体阳性者进一步检测血小板抗-人类白细胞抗原(HLA)与抗-人类血小板抗原(HPA),分别按有无输血史、有无既往妊娠史、民族、孕周进行分组,分析妊娠期妇女PLT抗体阳性的影响因素。
结果 2 790例妊娠期妇女中检出PLT抗体367例(总阳性率13.15%),其中抗-HLA、抗-HPA和抗-HLA+抗-HPA占比分别为47.96%、39.24%和12.80%;有无输血史组间、有无既往妊娠史组间PLT抗体总阳性率分别比较,差异有统计学意义(P<0.05);汉族与少数民族组间PLT抗体总阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);按孕周分组发现,随着孕周增加,抗-HLA阳性率随之升高(P<0.05),且有9例孕早期PLT抗体阴性孕妇,孕晚期PLT抗体转阳;其中输血史和既往妊娠史是PLT抗体产生的危险性因素。
结论妊娠期妇女PLT抗体阳性分型结果以抗-HLA为主,PLT血型抗体的产生与既往妊娠史和输血史密切相关,根据输血史和妊娠史,可对妊娠期妇女PLT抗体进行更有效的动态监测。
【总页数】6页(P261-266)【作者】涂飞;毕雅坤;王应辉;杨永莲;左丽【作者单位】贵州医科大学基础医学院;贵阳市妇幼保健院输血科;贵州医科大学医学检验学院【正文语种】中文【中图分类】R446.62【相关文献】1.凝血参数及血小板参数在妊娠期妇女中的联合检测意义分析2.湛江市血小板输注无效患者血小板抗体检测及影响因素分析3.习惯性流产妇女的抗心磷脂抗体（ACA）与血小板检测结果分析4.免疫层析法与PCR法对妊娠期妇女B族链球菌的检测效能比及阳性病例影响因素分析5.妊娠期妇女血小板抗体阳性率特征分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血小板抗体检查及配血操作规程
【口的】Capture-?®是设计用来检测血小板IgG抗体的固相系统。
可为血小板输注无效患者进行血小板配血。
【适用范圉】血小板输注无效患者血小板输注前配血【检测原理】Capture-P是一个固相抗体检测系统，是曲Rachel等人4、Juji等人5和Sh让毗&等人6发表的检测过程改良而来。
患者或供体血小板首先结合于聚苯乙烯微孔表面。
然后用它们来捕获患者或供体血浆中的血小板抗体。
血清在结合有血小板的微孔中进行简短孵育，使抗体与血小板结合（如果抗体存在）。
把微孔中游离的IgG 冲洗掉，并加入结合抗IgG指示红细胞。
进行离心，这样会使指示红细胞与结合于固定的血小板上的抗体接触。
阳性检测中，在指示红细胞和结合血小板抗体间形成了抗免疫球蛋口G桥联，从而阻止了指示红细胞向微孔底部的移动。
作为这种桥联的结果，指示红细胞会形成一个汇合单层从而覆盖固定的血小板。
相反，如果是阴性检测，当不存在血小板抗原-抗体反应时，指示红细胞的移动就不会被阻止，就会被离心到微孔底部，进而形成紧密圧缩、清晰的细胞扣。
可以使用事先经过冲洗和保存的血小板，这个步骤是可以选择的。
使用血小板冲洗和储存洛液洗涤血小板，使之不含污染性血浆蛋口和非血小板细胞成分，这样的血小板可以用来制备Capture-P检测微孔的单分子层。
【主要组成成份】Capture-P检测微孔板：1X8微带板，坚硕U型底部，表面覆盖特异性血小板粘合剂。
每个微带板可以进行8个单独的检测。
这些微带板保存于一个可重复性密封的铝箔袋中，铝箔袋中含有干燥剂和湿度计。
微带板可以单使用，也可以多个使用。
未使用的微带板.干燥剂和湿度计要立即谨慎重新密封于铝箔袋中，以免暴露于湿气中使粘合剂失效。
Capture检测微孔的辅助试剂：（另行购买）Capture LISS：低离子强度溶液，含有甘氨酸、漠甲酚紫染料和防腐剂叠氮化钠（0. 1%）* OCapture-P指示红细胞：结合有兔抗人IgG抗体的红细胞悬液。
不同性别、临床科室患者血小板抗体筛查结果分析
㊃论著㊃不同性别㊁临床科室患者血小板抗体筛查结果分析*陆乐1,李平1ә,刘婷婷1,王树亚1,周勤21.南京大学医学院附属鼓楼医院输血科,江苏南京210008;2.江苏师范大学数学与统计学院,江苏徐州221116摘要:目的调查血小板抗体在住院患者中的阳性率,分析血小板抗体在性别之间的差异及在临床科室的分布情况,从而进一步保障临床患者输注血小板的有效性与安全性㊂方法选取2019年3-5月在南京大学医学院附属鼓楼医院有输血可能的入院患者8250例作为研究对象,采用固相凝集法检测其血小板抗体㊂计算抗体阳性率,并利用R3.4.1软件进行统计分析㊂结果女性患者的血小板抗体阳性率(6.60%)显著高于男性患者(4.43%),差异有统计学意义(P<0.05)㊂聚类分析结果显示风湿免疫科㊁血液内科和中医科患者的血小板抗体阳性率显著高于其他临床科室,差异有统计学意义(P<0.05)㊂结论女性患者及血液病㊁风湿免疫疾病患者应重视血小板抗体筛查,以便阳性患者在血小板输注前进行血小板交叉配型,避免出现血小板输注无效㊂关键词:固相凝集法;血小板抗体;血小板输注无效;输血安全D O I:10.3969/j.i s s n.1673-4130.2021.03.002中图法分类号:R446.6文章编号:1673-4130(2021)03-0263-04文献标志码:AA n a l y s i s o f p l a t e l e t a n t i b o d y s c r e e n i n g r e s u l t s i n p a t i e n t sw i t h d i f f e r e n t g e n d e r a n d c l i n i c a l d e p a r t m e n t s*L U L e1,L I P i n g1ә,L I U T i n g t i n g1,WA N G S h u y a1,Z H O U Q i n21.D e p a r t m e n t o f B l o o d T r a n s f u s i o n,G u l o u H o s p i t a l A f f i l i a t e d t o M e d i c a l C o l l e g eo f N a n j i n g U n i v e r s i t y,N a n j i n g,J i a n g s u210008,C h i n a;2.S c h o o l o f M a t h e m a t i c s a n d S t a t i s t i c s,J i a n g s u N o r m a l U n i v e r s i t y,X u z h o u,J i a n g s u221116,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e p o s i t i v e r a t e o f p l a t e l e t a n t i b o d y i n h o s p i t a l i z e d p a t i e n t s,a n a l y z e t h e d i f f e r e n c e o f p l a t e l e t a n t i b o d y b e t w e e n g e n d e r s a n d t h e d i s t r i b u t i o n o f c l i n i c a l d e p a r t m e n t s,s o a s t o f u r t h e r e n s u r e t h e e f f e c t i v e n e s s a n d s a f e t y o f p l a t e l e t t r a n s f u s i o n i n c l i n i c a l p a t i e n t s.M e t h o d s A t o t a l o f8250h o s p i-t a l i z e d p a t i e n t s w i t h t h e p o s s i b i l i t y o f b l o o d t r a n s f u s i o n i n G u l o u H o s p i t a l A f f i l i a t e d t o M e d i c a l C o l l e g e o f N a n j i n g U n i v e r s i t y f r o m M a r c h t o M a y2019w e r e s e l e c t e d a s t h e r e s e a r c h o b j e c t s,a n d t h e i r p l a t e l e t a n t i b o d i e s w e r e d e t e c t e d b y s o l i d p h a s e a g g l u t i n a t i o n m e t h o d.T h e a n t i b o d y p o s i t i v e r a t e w a s c a l c u l a t e d a n d a n a l y z e d b y R3.4.1s o f t w a r e.R e s u l t s T h e p o s i t i v e r a t e o f p l a t e l e t a n t i b o d y i n f e m a l e p a t i e n t s(6.6%)w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n m a l e p a t i e n t s(4.43%),t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P<0.05).T h e r e s u l t s o f c l u s t e r a n a l y s i s s h o w e d t h a t,t h e p o s i t i v e r a t e o f a n t i b o d y i n r h e u m a t o l o g y d e p a r t m e n t,h e m a t o l o g y d e p a r t-m e n t a n d t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i c i n e d e p a r t m e n t w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n o t h e r d e p a r t m e n t s,t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P<0.05).C o n c l u s i o n F e m a l e p a t i e n t s a n d p a t i e n t s w i t h h e m a t o l o g i c d i s e a s e s a n d r h e u m a t i c i mm u n e d i s e a s e s s h o u l d p a y a t t e n t i o n t o p l a t e l e t a n t i b o d y s c r e e n i n g,s o t h a t p o s i t i v e p a t i e n t s c a n c a r r y o u t p l a t e l e t c r o s s m a t c h i n g b e f o r e p l a t e l e t t r a n s f u s i o n t o a v o i d i n e f f e c t i v e p l a t e l e t t r a n s f u s i o n.K e y w o r d s:s o l i d p h a s e a g g l u t i n a t i o n;p l a t e l e t a n t i b o d y;i n e f f e c t i v e p l a t e l e t t r a n s f u s i o n;t r a n s f u s i o n s a f e t y血小板是巨核细胞胞质裂解脱落下来的具有生物活性的小块胞质,在伤口愈合㊁止血及器官移植排斥等生理和病理过程中有着十分重要的作用㊂近年来随着输血技术的提高,血小板输注已成为提高临床㊃362㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第3期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.3*基金项目:国家自然科学基金项目(11671178);江苏省输血协会英科新创科研基金项目(J s2018028)㊂作者简介:陆乐,女,主管技师,主要从事输血免疫学研究㊂ә通信作者,E-m a i l:g l y y s x k@163.c o m㊂本文引用格式:陆乐,李平,刘婷婷,等.不同性别㊁临床科室患者血小板抗体筛查结果分析[J].国际检验医学杂志,2021,42(3):263-265.患者(特别是血液疾病和肿瘤患者)血小板计数,防止出血最为快速㊁有效的方法,是现代成分输血技术领域的重要内容[1]㊂通过输注血小板可以有效降低血小板疾病导致的病死率,对于临床上反复输血的患者,其体内易产生血小板抗体[2],经常出现血小板输注无效㊂血小板抗体对血小板的破坏还会严重影响患者的生命健康与安全[3]㊂导致血小板输注无效的原因包括非免疫因素和免疫因素,非免疫包括发热㊁感染㊁脾大等[4],免疫因素为血小板抗体[5],其中最主要的原因为血小板同种抗体㊂现将南京大学医学院附属鼓楼医院8250例患者血小板抗体检测结果与分析报道如下㊂1资料与方法1.1一般资料选择2019年3-5月南京大学医学院附属鼓楼医院有输血可能性的入院患者,排除临床诊断不明确㊁病历资料不完整的患者,共计8250例为研究对象㊂其中男性3975例,女性4275例;发病年龄1~101岁,平均(51.0ʃ18.26)岁㊂1.2试剂与仪器1.2.1试剂血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)㊁血小板抗体筛检细胞㊁血小板抗体检测用指示红细胞均购自长春博德生物技术有限责任公司㊂1.2.2仪器T D58低速离心机购自长沙湘智离心机有限公司,P W-812全自动酶标洗板机购自深圳汇松科技发展有限公司㊂1.3检测方法1.3.1标本前处理采集患者2m L左右静脉血,采用乙二胺四乙酸二钾抗凝,1500ˑg离心10m i n㊂1.3.2固相凝集法(1)血小板抗体检测试剂盒平衡至室温(18~25ħ),制备洗涤液,将浓缩洗涤液用蒸馏水按1ʒ24体积比稀释㊂(2)稀释商品化的冻干血小板,每支血小板冻干粉加入0.5m L生理盐水,溶解混匀㊂(3)反应板条上标记患者编号㊁阳性对照和阴性对照㊂每个反应孔中加入1滴(50μL)血小板悬液,轻摇反应板10s㊂(4)平板式离心机50ˑg离心5m i n,将血小板固定在反应孔底部㊂(5)轻轻倒出反应孔中的液体,洗涤液清洗反应板3次㊂(6)每个反应孔中加入2滴(100μL)低离子强度溶液,并按编号向相应反应孔中加入1滴(50μL)患者血浆㊁阳性对照液及阴性对照液㊂(7)用封口胶将反应孔封好,混匀,平放入湿盒中,37ħ温浴30m i n后,弃封口胶,清洗反应板5次㊂(8)加入1滴抗人I g G及1滴指示红细胞试剂,混匀,观察记录结果㊂1.4统计学处理利用R3.4.1统计软件对结果进行分析,计量资料不满足正态分布以M(P25~P75)表示;计量资料满足正态分布以xʃs表示,采用t检验;计数资料以率表示,率的比较采用χ2检验;采用聚类分析对临床科室进行分组;以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1不同性别血小板抗体筛查结果比较本研究中女性患者血小板抗体阳性率(6.60%)显著高于男性(4.43%),差异有统计学意义(χ2=18.478,P<0.05)㊂见表1㊂表1不同性别的血小板抗体筛查结果比较性别检测例次(n)阳性例次(n)阳性率(%)男39751764.43女42752826.602.2不同临床科室血小板抗体阳性率比较不同临床科室的血小板抗体阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=86.513,P<0.05)㊂见表2㊂表2不同临床科室的血小板抗体阳性率比较编号科室检测例次(n)阳性例次(n)阳性率(%) 1产科232198.192耳鼻咽喉头颈外科493244.873风湿免疫科671725.374妇科760516.715感染科3738.116骨科1399755.367呼吸内科3026.678急诊中心1417.149老年科6035.00 10泌尿外科869424.83 11男科800.00 12内分泌科5135.88 13普通外科1477664.47 14烧伤整形外科7745.19 15神经内科800.00 16神经外科458183.93 17肾科7556.67 18疼痛科100.00 19消化内科1030545.24 20心胸外科665375.56 21心血管内科1317.69 22血管外科182105.49 23血液内科1121715.18 24中医科17211.76 25肿瘤科4424.55 26重症医学科7122.82 2.3聚类分析利用最长距离法对表2中的所有临床科室的血小板抗体阳性率进行聚类分析㊂依照血小板抗体阳性率将样本分成两类,第一类是血小板抗㊃462㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第3期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.3体阳性率高的科室,包括风湿免疫科㊁血液内科和中医科;第二类为其他科室,即这些科室血小板抗体阳性率较低㊂比较第一类样本的血小板抗体阳性率,结果显示差异无统计学意义(χ2=3.447,P>0.05);比较第二类样本的血小板抗体阳性率,结果显示差异无统计学意义(χ2=14.536,P>0.05)㊂说明聚类后,每一类中的各科室血小板抗体阳性率无显著差别㊂聚类后对两类样本的阳性率进行比较,利用均值t检验,差异有统计学意义(t=3.0276,P<0.05),表明第一类科室(3个)和第二类科室(23个)聚类后两类间存在明显差异,即第一类科室风湿免疫科㊁血液内科和中医科的血小板抗体阳性率显著高于其他科室,同时也表明聚类是有意义的㊂见图1㊂注:图中两个矩形内的科室分别归类为两类样本,数字代表科室编号㊂图1不同科室血小板抗体阳性率的聚类树状图3讨论血小板表面存在着复杂的抗原系统,一般可分为血小板相关抗原与血小板特异性抗原㊂血小板相关抗原主要有红细胞血型抗原和人类白细胞抗原(H L A)㊂红细胞血型抗原包括A B H抗原,此外还有其他血型抗原,如L e a㊁L e b等㊂血小板膜表面表达的H L A主要为H L A-Ⅰ类抗原,包括H L A-A㊁H L A-B 和少量的H L A-C㊂而血小板特异性抗原由血小板特有的抗原决定簇组成,表现出血小板独特的遗传多态性㊂血小板特异性抗原主要分布于血小板膜糖蛋白上,构成血小板膜结构的一部分,同时还分布于血管内皮细胞㊁结缔组织和平滑肌细胞等㊂妊娠㊁骨髓移植和反复输血都会刺激机体产生同种血小板抗体㊂这些抗体引起机体产生一系列血小板抗原抗体免疫反应[6],当患者进行血小板输注治疗时就可能导致血小板输注无效㊂特别是有些反复多次接受血小板输注的患者,血小板输注无效发生率明显增高,呈正比关系[1,7]㊂根据原卫生部颁布的‘临床输血技术规范“[8]中成分输血指南的规定,临床输注单采血小板必须进行A B O同型输注,因此,避免了因为A B O血型抗体导致的血小板输注无效,但H L A-Ⅰ类抗体与血小板特异性抗体导致的输注无效尚无法避免㊂固相凝集法中的血小板筛检细胞上同时有H L A抗原和人类血小板抗原,可以及时检测出患者体内对应的血小板同种抗体,从而提示可能出现的血小板输注无效㊂本次试验选取8250例住院患者检测体内血小板抗体,临床科室基本覆盖㊂结果显示,血小板抗体阳性率在不同的临床科室分布有显著差异,风湿免疫科㊁血液内科和中医科血小板抗体阳性率明显高于其他临床科室,这与临床科室患者疾病有关㊂本次研究中血液内科患者均为血液肿瘤患者,其血小板抗体阳性率为15.18%,略高于董晓锋等[9]报道的血液肿瘤患者的阳性率(10.02%)㊂究其原因可能与患者治疗原发病反复输注血液制品有关,输注的血液制品(包括血小板)刺激自身免疫系统产生除A B O血型抗体外的抗-H L A或抗-H P A等同种抗体[10]㊂血小板输注次数越多,血小板抗体阳性率越高[11-12]㊂有研究报道,当患者免疫力低下时抗原抗体反应减弱,即便抗体筛查阳性的患者输注血小板后也会有效果[13]㊂在本研究中,风湿免疫科患者血小板抗体阳性率达25.37%,高于血液病患者,其中血小板抗体阳性率排在前3位的疾病为系统性红斑狼疮㊁干燥综合征㊁类风湿关节炎㊂其他自身免疫系统性疾病也有阳性患者,如抗中性粒细胞胞质抗体相关血管炎㊁弥散性(混合性㊁未分化)结缔组织病及系统性硬皮病等,但这些病例数较少㊂国内较少见对风湿免疫科患者血小板抗体的研究,此类患者自身免疫系统功能紊乱,容易导致存在抗血小板的自身抗体,使其血小板数量低下,引起出血风险,应引起重视㊂中医科患者样本例数少,在此不作讨论㊂女性患者血小板抗体阳性率高于男性患者,与女性患者妊娠史密切相关㊂妊娠是女性患者产生血小板抗体的主要原因[14]㊂在我国二孩政策下,妊娠次数的增加会使血小板抗体阳性率也增高[15]㊂另外,也有研究表明,女性患者血小板抗体阳性率高与女性患者流产也有相关性,随着流产次数增加,血小板抗体阳性率也会相应升高㊂在统计数据时,男科㊁神经内科和疼痛科这3个科室的样本量很小,而样本量的大小可能会影响血小板抗体阳性率的估计㊂如删掉样本量低于30例的临床科室数据,重新考虑上述问题,总体结论与之前一致,即临床科室之间的血小板抗体阳性率存在显著差别,而性别依然会影响血小板抗体阳性率㊂血小板抗体的存在会导致临床患者出现血小板输注无效㊁输血后紫癜㊁新生儿血小板减少性紫癜等多种免疫反应,当患者发生血小板输注无效后,可通过血小板抗体检测判断输注无效的原因是否由免疫因素引起[16]㊂女性,风湿免疫疾病㊁血液病的患者在进行血小板输注治疗前应考虑进行血小板抗体筛查,如果条件允许可以进一步做血小板交叉配型试验,从而选择最适合患者的供者血小板,达到临床治疗的目的㊂(下转第269页)㊃562㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第3期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.3内的高凝状态影响了胎盘的正常血供,从而导致不良的结局㊂R O C曲线分析结果显示,H c y单独检测预测难免流产的灵敏度最高,为96.70%,但是其特异度较低,仅为55.70%,所以H c y单独检测用于难免流产的预测价值较低㊂C A125单独检测预测难免流产的灵敏度和特异度均较高,分别为88.69%和88.66%,其A U C为0.946㊂但是β-H C G㊁C A125㊁H c y㊁D-D㊁F I B联合检测预测难免流产的灵敏度和特异度分别为96.50%和98.50%,A U C为0.997,均显著优于各指标单独检测㊂参考文献[1]毕艳慧.先兆流产孕妇同型半胱氨酸㊁叶酸及凝血功能与妊娠结局的相关性研究[J].锦州医科大学学报,2018,39(5):22-25.[2]廖琪.凝血功能㊁同型半胱氨酸㊁B族维生素与早期先兆流产相关性[J].中国计划生育学杂志,2019,27(12): 1600-1603.[3]黄烨,陈纬,刁军成.C A125㊁H C G和P对早期先兆流产患者妊娠结局预测的比较[J].重庆医科大学学报,2016, 41(3):253-258.[4]林涛,沈晓露,潘豪杰,等.D-二聚体在孕早期不明原因复发性流产患者中临界值的探讨[J].生殖医学杂志,2018, 27(4):339-344.[5]谢幸.妇产科学[M].8版.北京:人民卫生出版社,2013: 48-49.[6]W A D A H.P r e-t h r o m b o t i c(h y p e r c o a g u l a b l e)s t a t e/h y p e r c o-a g u l ab l e d i s e a s e[J].R i n s h o B y o r,2015,63(5):1405-1411.[7]WA N G Y,L I N X,WU Q,e t a l.T h r o m b o p h i l i a m a k e r s i n p a t i e n t s w i t h r e c u r e n t e a r l y m i s c a r i a g e[J].C l i n L a b, 2015,61(8):1787-1794.[8]N E L E N W L,B U L T E N J,S T E G E R S E A,e t a l.M a t e r-n a l h o m o-c y s t e i n e a n d c h o r i o n i c v a s c u l a r i z a t i 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血小板抗体检测方法及配型应用与血小板输注的疗效
世界最新医学信息文摘 2019年 第19卷 第95期203投稿邮箱：zuixinyixue@·医学检验·血小板抗体检测方法及配型应用与血小板输注的疗效窦广刚（苏州弘慈血液病医院 检验科，江苏 苏州 215000）0 引言血小板输注是当前临床治疗各种恶性肿瘤或者血液性疾病放化疗的重要支持治疗方法，Rh 血型以及ABO 血型同型输注是当前临床常用的血小板输注制品，但是部分患者在骨髓移植、妊娠、输血之后，会产生HPA （人类血小板抗原）、HLA （人类白细胞抗原）抗体，造成血小板输注无效[1]。
临床有研究表明：将近30-70%的慢性血小板减少患者在接受多次输血之后，会出现血小板输注无效、紫癜等，病情严重的患者会出现DIC （弥漫性血管内凝血）、颅内出血等，对患者生命安全构成巨大威胁[2]。
由此可知，对于血小板输注患者在输注之前进行血小板抗体检测，根据检测结果进行配合性血小板输注，对于提升血小板输注临床疗效意义重大。
鉴于此，本文纳入本院2017年1月至2019年1月接受的200例输注血小板治疗者，回顾性分析上述病例临床资料，现将具体研究情况汇报如下。
1 资料与方法1.1 一般资料。
本次研究从2017年1月至2019年1月，纳入该时间段内本院接受的200例输注血小板治疗者，将无输血史100例作为甲组，有输血史100例作为乙组。
甲组女性、男性病例数之比分别是42:58，年龄在3-74岁，平均（38.52±6.25）岁。
乙组女性、男性病例数之比分别是44:56，年龄在4-73岁，平均（38.49±6.21）岁。
一般资料两组相比，P>0.05，可比较。
1.2 方法。
仪器、试剂：TD5 台式低速离心机、血球计数仪（型号：BC6900；生产企业：深圳迈瑞科技有限公司），试剂均由长春博德生物技术有限责任公司提供。
血小板抗体检测：①制备血小板悬液：对冻干血小板稀释处理之后，即可直接使用，浓度在50-150×109，贮于塑料容器中，在20-25℃环境下保存8 h 待检。
血小板抗体检测及交叉配血
血小板抗体检测及交叉配血The pony was revised in January 2021邹平县人民医院血小板抗体检测及交叉配血一、目前血小板输注状况随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或输多次及多人份的血小板可以导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR),这也引起了全世界的关注。
血小板上的非特异性抗原中HLA-I类抗原及ABH抗原在血小板输注中具有临床意义。
供者与受者之间HLA抗原不合可能产生HLA抗体，而HLA抗体是导致PTR最常见的免疫性原因。
血小板特异性抗体（HPA抗体）常和HLA抗体共存，单独由血小板特异性抗体引起的PTR比较少见。
由于本院输注血小板的病人多为血液病病人，这些病人输注血小板的量大且比较频繁，但长期输注后由于免疫因素或其他因素（如发热、严重感染、脾肿大和脾功能亢进、DIC、消耗性凝血障碍等）导致PTR的发生频率也比较高，这为开展血小板抗体检测提供了条件。
由于ABO、HLA、HPA等抗原不合是引起PTR的主要免疫因素，因此对于存在HLA和HPA抗体的患者，比较满意的治疗方案是选择ABO同型、血小板HLA和HPA交叉配型相合的单一供者的血小板输注，即相容性血小板输注，取代目前临床上普遍采用的随机血小板输注。
二、输血科开展的新项目1.血小板抗体筛查：使用HLA抗体筛查试剂盒，采用ELISA方法筛查HLA I类IgG抗体。
2.血小板交叉配型：采用双抗体夹心ELISA方法检测针对血小板GP IIb/IIIa和HLA I类抗原的IgG抗体，方法快速、灵敏，并可区分血小板特异抗体和HLA I类抗体。
三、临床意义1. HLA抗体检测（1）对于血小板输注无效的病人，通过检测血小板HLA I类抗体，可以协助医生寻找病人血小板输注无效的原因。
血小板配型及相关性抗体检测操作规程
血小板配型及相关性抗体检测操作规程 SXYJ-GZ-02131目的规范血小板交叉配型或血小板抗体检测，保证检测结果准确及时。
2适用范围临床血小板输注无效患者及习惯性流产患者。
3职责检测者负责依据此程序进行血小板配型及相关性抗体检测操作。
4材料与设备血小板配型试剂盒、ACD/CPD红细胞保存液（成分手分室提供）、0.9%无菌生理盐水； KUBOTA KA-2200型离心机、KUBOTA KA-5100型离心机、DK-8A型电热恒温水槽（37℃）、观察灯、湿盒；一次性使用滴管、试管等。
5操作方法5.1试验前将试剂从4℃取出置室温平衡30min以上，或37℃平衡10 min以上；5.2待检标本的准备患者血清或EDTA抗凝血浆、血小板悬液(血小板交叉配型供者血小板悬液标本由检测者到发血室、或包装组自取检测结果合格的血小板血辫、血小板抗体检测的血小板悬液按5.3方法制备)；5.3制备血小板悬液5.3.1富血小板血浆的制备室温保存的新鲜EDTA抗凝全血(当天)2～3ml，800rpm离心10min，取上层富血小板血浆备用；5.3.2血小板悬液的制备取0.5-1ml浓缩机采血小板或富血小板血浆，用ACD/CPD红细胞保存液洗涤1次，3400rpm离心2分钟，弃上清，用生理盐水调节血小板浓度，肉眼观察稍透明似毛玻璃状；5.4每孔加入1d（约50µl）相对应的血小板悬液，并设阳性对照、阴性对照、待检孔，离心600rpm5分钟；5.5轻轻倒出未结合的血小板，并用PBS液洗6次，每孔约150µl。
每次加洗液时要缓慢加入，并旋转轻摇微孔板，然后再倒掉清洗液；倒时切勿用力过大，以免将包被好的血小板倒出；5.6每孔加入Liss液2d，加入相应的阳性对照血清、阴性对照血清、检测血清各1d，轻轻振荡微孔板条至紫色Liss试剂变成蓝色（约10秒钟）；5.7将反应微孔板放于湿盒内，置37℃孵育30分钟；5.8用PBS液洗6次，各孔立即加抗-IgG1d、指示红细胞1d，2000rpm离心5分钟；6结果判断根据指示红细胞分布情况进行判读阳性——红细胞粘附在微孔整个底部；阴性——红细胞呈紧密细胞扣附于微孔底部中央；弱阳性——介于阴性和阳性之间。
血小板抗体检查及配血操作规程
血小板抗体检查及配血操作规程【目的】 Capture-P®是设计用来检测血小板IgG抗体的固相系统。
可为血小板输注无效患者进行血小板配血。
【适用范围】血小板输注无效患者血小板输注前配血【检测原理】Capture-P是一个固相抗体检测系统，是由 Rachel等人4、Juji等人5和Shibata 等人6发表的检测过程改良而来。
患者或供体血小板首先结合于聚苯乙烯微孔表面。
然后用它们来捕获患者或供体血浆中的血小板抗体。
血清在结合有血小板的微孔中进行简短孵育，使抗体与血小板结合（如果抗体存在）。
把微孔中游离的IgG 冲洗掉，并加入结合抗 IgG 指示红细胞。
进行离心，这样会使指示红细胞与结合于固定的血小板上的抗体接触。
阳性检测中，在指示红细胞和结合血小板抗体间形成了抗免疫球蛋白G 桥联，从而阻止了指示红细胞向微孔底部的移动。
作为这种桥联的结果，指示红细胞会形成一个汇合单层从而覆盖固定的血小板。
相反，如果是阴性检测，当不存在血小板抗原-抗体反应时，指示红细胞的移动就不会被阻止，就会被离心到微孔底部，进而形成紧密压缩、清晰的细胞扣。
可以使用事先经过冲洗和保存的血小板，这个步骤是可以选择的。
使用血小板冲洗和储存溶液洗涤血小板，使之不含污染性血浆蛋白和非血小板细胞成分，这样的血小板可以用来制备 Capture-P检测微孔的单分子层。
【主要组成成份】Capture-P检测微孔板：1X8 微带板，坚硬 U 型底部，表面覆盖特异性血小板粘合剂。
每个微带板可以进行8个单独的检测。
这些微带板保存于一个可重复性密封的铝箔袋中，铝箔袋中含有干燥剂和湿度计。
微带板可以单使用，也可以多个使用。
未使用的微带板、干燥剂和湿度计要立即谨慎重新密封于铝箔袋中，以免暴露于湿气中使粘合剂失效。
Capture检测微孔的辅助试剂：（另行购买）Capture LISS：低离子强度溶液，含有甘氨酸、溴甲酚紫染料和防腐剂叠氮化钠 (0.1%)* 。
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1 血小板抗体检测项目推广要点（妇产科） 近年来研究发现母婴间血小板血型不合导致的同种异体抗体免疫因素是造成不明原因早期流产、死胎以及新生儿罹患血小板同种免疫性减少症的主要因素。在妇女怀孕前和怀孕期的常规体检中进行血小板抗体筛查特别对有反复多次复发性早期流产史妇女尤为重要，它能有效地探讨早期流产的病因、早期预测及预防NAITP的发生。 一、临床背景： 据文献报道，近年来研究发现母婴间血小板血型不合，孕妇有多次妊娠史、流产史、输血史，以及孕妇患有自身免疫性疾病是导致孕早期（14周左右）不明原因流产和胎儿出生后罹患新生儿血小板同种免疫性疾病（发病率约1‰）的主要因素。这些病症的发生皆与孕妇体内存在或由于同种免疫刺激产生血小板抗体相关。 二、血小板抗体检测的临床意义及项目优势： 1.反复流产、不孕不育查因：对于反复和习惯性流产史（尤其是孕早期）和不孕不育史的患者，检测患者血清和血浆中血小板抗体的水平，可对其造成流产和不孕不育的原因作出辅助诊断。 2.产检（尤其针对高龄和二胎产妇） 1）孕早期检测：在孕早期（三个月）产检中常规检测母亲与胎儿的血小板相容性，对于孕早期出现流产和死胎的风险评价具有非常重要的意义 2）孕晚期检测：在孕晚期（胎儿出生前）检测母体血清或血浆 2
中血小板抗体水平，对胎儿出生后罹患新生儿血小板同种免疫性疾病风险评价具有非常重要的意义。 3.妊娠期血小板降低的查因：孕妇在妊娠期血小板减少是一种常见现象，如是生理性降低则危害不大，往往生产后会恢复正常。但如果血小板的降低是由于孕妇自身免疫性疾病引起的则会引起流产、死胎、以及新生儿相关的血小板减少性疾病，危害严重。 项目优势：风险小、收益大 1、很少涉及血小板输注，减少了很多麻烦； 2、流产查因、不良孕产史查因、不孕不育查因、辅助生殖等项目皆为自费，不占医保费用； 3、优生优育每个家庭都很重视，多一项检测则多一份保障； 4、没有过度医疗风险； 5、临床患者量巨大，无须担心临床标本量和科室收益。 三、应用科室： 输血科（首选）、检验科、妇产科实验室、优生优育实验室、中心实验室 四、检测方案： 通常路径分三步 先做流产和不孕不育查因，再向高龄和二胎产妇优生优育宣教拓展，最后力争普及常规产检。 1.反复和习惯性流产以及不孕不育查因； 2.产检（尤其针对高龄产妇和二胎产妇）： 1）孕早期：由于胎儿和母亲血小板不相容所产生的同种抗体在 3
14孕周即可致胎儿血小板的破坏，建议孕12-14周检测孕妇体内血小板抗体的水平，如阳性则提示临床医生胎儿有流产和死胎的风险； 2）孕晚期：在胎儿出生前再检测一次孕妇体内血小板抗体的水平，如阳性则提示临床医生要做好胎儿患新生儿血小板相关性疾病的治疗预案。 3.妊娠期血小板降低的查因：对于妊娠期血小板减低的孕妇（尤其是罹患或有自身免疫性疾病史）建议进行血小板抗体检测以对其孕期流产、死胎以及新生儿罹患血小板相关免疫性疾病的风险作出评估并提示临床医生尽早制定相应治疗方案。 五、检测内容： 1）血小板同种异体抗体检测：检测患者血清或血浆中是否含有血小板抗体，包括HLA抗体，HPA抗体及其它血小板反应性抗体。患者样本要求是72小时内血清样本或EDTA或枸橼酸钠抗凝血浆样本，无溶血，无乳糜，无杂物。 2）血小板自身抗体检测：检测患者自身血小板结合抗体和自身游离抗体。患者样本要求是8小时内EDTA或枸橼酸钠抗凝全血，室温（18℃~25℃）放置，无溶血，无乳糜，无杂物。 3）血小板交叉配型：采用多个供者血小板与患者进行交叉配型，为患者筛选相容性血小板进行输注，减少血小板输注无效症的发生。患者样本要求是72小时内血清样本或EDTA或枸橼酸钠抗凝血浆样本，无溶血，无乳糜，无杂物。 六、临床治疗方案参考 4
妊娠合并血小板减少及血小板抗体阳性的治疗推荐使用大剂量丙球或糖皮质激素。治疗方案应结合患者孕周及其他合并症综合考虑。有出血倾向者推荐以下治疗方案： （1）轻微出血倾向：同妊娠前治疗，使用激素者维持妊娠前用量。（2）明显出血倾向：起始剂量为泼尼松 10~20 mg/d，起效后逐渐减至维持量 5~10 mg。 （3）妊娠前首次诊断者出现明显血小板减少及出血倾向：起始剂量为泼尼松 0.5~1 mg/（kg·d），血小板计数维持（20~30）×10 9 /L以上且出血倾向改善后 2 周可逐渐减量。 （4）严重出血倾向：期待快速起效时，可考虑大剂量的丙球0.4 g/（kg·d）持续 3~5 d，或甲基泼尼松龙 1 g/d持续 3 d，同时可输注血小板。 （5）糖皮质激素和丙球可同时使用。 七、血小板抗体阳性导致相关病症的免疫学机理： 同种免疫性（抗-HLA、HPA 抗体）、被动免疫性及自身免疫性因素是引起孕妇早期流产，死胎，胎儿出生后罹患新生儿血小板同种免疫性疾病的主要原因。 1.同种免疫性因素：多由于母婴间血小板血型不合引起。由于胎儿血小板表面表达的抗原种类既有父亲的，也有母亲的，这种表达同种异体抗原的血小板通过胎盘屏障进入母亲体内，刺激母体免疫系统产生针对同种异体抗原的血小板抗体，这种血小板抗体再通过胎盘屏障进入胎儿体内，致敏胎儿血小板，激活胎儿免疫系统发生抗原抗体 5
反应，使胎儿血小板减少引起相应的病症。 2.被动免疫性因素：孕妇在妊娠前如有多次妊娠史、流产史、输血史等，那么孕妇体内存在高效价血小板同种免疫性抗体的几率大大增加，这种同种免疫性抗体同样有通过胎盘屏障进入胎儿体内刺激并激活胎儿免疫系统发生抗原抗体反应引起相应病症的风险。 3.自身免疫性因素：据文献介绍孕妇如患有自身免疫性疾病，妊娠后导致流产、死胎、胎儿出生后罹患新生儿血小板同种免疫性疾病的风险大大增加。 八、血小板抗体检测项目 检测原理：采用先进的固相红细胞吸附试验技术（solid-phase red cell adherence, SPRCA），反应板中已包被抗血小板单克隆抗体，血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部形成血小板单层。加入血清或血浆，在孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体与反应孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。加入抗人IgG及人IgG致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗人IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞平铺在反应孔底部表面。而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。示意图如下： 6
该方法不仅可以进行血小板抗体定性检测（包括同种异体抗体和自身抗体），还可以进行血小板交叉配型。该方法灵敏度高，特异性好，结果准确，并且1小时内完成检测，满足了临床快速配血要求，目前日本及欧美地区发达国家广泛采用该方法进行血小板抗体检测和交叉配型，效果显著。
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