平板划线法与稀释涂布平板法的区别
专题2《微生物的培养与应用》sy1
二.无菌技术：防止外来杂菌的污染
1.消毒与灭菌：
2.无菌范围：实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程
酒精灯旁操作 超净工作台
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒 或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。
②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液。
③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线用力 大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
微量 移 液器 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液：
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
101
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大纲要求 （1）微生物的分离和培养 （2）培养基对微生物的选择作用 （3）利用微生物进行发酵来生产特定的产物 考试的能力要求 2．实验与探究能力
（1）能独立完成生物实验，包括理解实验目的、原理、 方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实 验涉及的方法和技能进行综合运用。 （2）具备验证简单生物学事实的能力，并能对实验现 象和结果进行解释、分析和处理。 （3）具有对一些生物学问题进行初步探究的能力，包 括运用观察、实验与调查、假说演绎、建立模型与系统 分析等科学研究方法。 （4）能对一些简单的实验方案做出恰当的评价和修订。
5. 配制原则
生产
科研
第1章 发酵工程(考点串讲课件)高二生物单元复习(人教版2019选择性必修3)
发酵温度为18-30 ,酿酒酵母最适生长温度约为28
最适生长温度为30-35℃
重点难点
制作流程
清洗、消毒装置
清洗原材料
榨汁、装瓶
酒精发酵
果酒
果醋发酵
果醋
将发酵瓶、榨汁机等器具用洗洁精洗干净，并用体积分数为70%的酒精消毒，晾干备用
取新鲜葡萄，用清水冲洗1-2次，再去除枝梗和腐烂的籽粒，沥干
榨汁，将葡萄汁装入发酵瓶中，留约1/3的空间，盖好瓶盖
①将温度控制在18-30℃②每隔12h左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧瓶盖③发酵时间为10-12d④从发酵瓶口取样，随时对发酵情况进行检测
a.葡萄酒制作完成后，打开瓶盖，盖上一层纱布b.发酵温度为30-35℃c.发酵时间为7-8d
三、果酒和果醋的制作
（2）在灼烧接种环之后,要等其冷却再进行划线,以免温度过高杀死菌种
（3）除第一次划线外,每次划线都从上一次划线的末端开始,这样能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最后一次划线不能和第一次划的线相接触
（4）划线时用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破
1.平板冷凝后,要将平板倒置,原因是防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；避免培养基水分过快挥发
知识梳理
一、发酵与传统发酵技术4.实例
知识梳理
项目
菌种
生物类群
代谢类型
菌种来源
腐乳制作
主要为毛霉
真核生物
异养需氧型
主要是空气中的毛霉孢子
泡菜制作
乳酸菌
原核生物
异养厌氧型
主要是附着在蔬菜
主要是附着在葡萄皮上的酵母菌
果醋制作
醋酸菌
原核生物
第1章 第2节 第1课时 微生物的基本培养技术 讲义【新教材】人教版(2019)高中生物选择性必修3
第2节微生物的培养技术及应用第1课时微生物的基本培养技术课标内容要求核心素养对接1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。
2．阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。
3．概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室进行微生物分离和纯化的常用方法。
1.科学思维：根据微生物的代谢类型分析培养基的组成。
2．科学探究：讨论并掌握无菌技术的实验操作方法；讨论并掌握微生物的纯培养的方法。
一、培养基的配制1．培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
2．培养基的种类3．培养基的营养组成各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
二、无菌技术1．获得纯净的微生物培养物的关键：防止杂菌污染。
2．消毒和灭菌(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。
三、微生物的纯培养1．纯培养：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。
由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。
2．微生物纯培养的步骤：微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。
3．酵母菌的纯培养(1)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。
(2)获得单菌落的方法：平板划线法和稀释涂布平板法。
判断对错(正确的打“√”，错误的打“×”)1．液体培养基含有水，而固体培养基不含水。
(×)提示：液体培养基和固体培养基都含有水，它们的区别为是否含有凝固剂。
2．获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。
第二章微生物纯培养
毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微 生物。
显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢 子以获得纯培养。
小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在
显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的
分离。
第二章微生物纯培养
五、选择培养
为了从混杂的微生物群体中分离出某种 微生物，可以根据该微生物的特点，包括营 养、生理、生长条件等，采用选择培养的方 法进行分离。
1、涂布平板法（Spread Plate method）
步骤： 制板 稀释 加菌液 涂布 特点：简单易行，但易造成机械损伤
培养 挑菌落
第二章微生物纯培养
2、稀释倒平板法
步骤： 稀释 加菌液 浇培养基 培养
挑菌落
第二章微生物纯培养
1.取样
25g或25ml 检样
稀释样品的取样和倾注平皿
1mL
1mL
第二章微生物纯培养
2、富集培养
主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同， 制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物 旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，更 容易从混杂的群体中分离到特定的微生物。
富集条件可从多方面选择，如温度、pH、紫外 线、高压、光照、氧气、营养等等。
例如：分离产芽孢细菌，可以对样品进行高温处 理，然后再进行培养。
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
六、微生物的保藏技术
基本要求：
保证菌种经过较长时间后仍保持生活能力，防止被 杂菌污染，形态特征和生理形状尽可能不发生变异。
用于长期保藏的原始菌种称为
保藏菌种或原种（stoch culture）。
第二章微生物纯培养
第39讲 微生物的培养技术和应用(练习)(解析版)
第39讲微生物的培养技术和应用1．（2023秋·江苏扬州·高三扬州中学校考阶段练习）平板接种常用在微生物培养中。
下列说法正确的是（）A．平板涂布时需在酒精灯火焰旁，打开皿盖放在一边，用灭菌后的涂布器进行涂布B．空白平板使用前需进行无菌鉴定，接种后未长出菌落的平板可以直接丢弃C．采用稀释涂布平板计数时，统计结果往往多于原始菌液中微生物数量D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物【答案】D【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。
在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；①稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，A错误；B、接种后未长出菌落的培养基，也可能有少量微生物，为避免污染环境，不能直接丢弃，B错误；C、采用稀释涂布平板计数法获得的菌落有可能是由多个细胞聚集在一起繁殖形成的，所以往往少于实际的活菌数，C错误；D、利用以尿素为唯一氮源的平板上，若微生物可以产生脲酶，则可以利用脲酶分解尿素氨而获得氮源生长，其它不能产生脲酶的微生物则不能生长，可以把合成脲酶的微生物分离出来，D正确。
故选D。
2．（2022·湖北武汉·统考二模）在生活饮用水中如果大肠杆菌含量超标，会造成细菌性痢疾，严重时会造成脱水，甚至会危及生命。
可利用表中的培养基对生活饮用水中的大肠杆菌进行分离和计数，下列叙述正确的是（）B．在配制培养基时应先调节pH值，再灭菌后倒平板C．使用后的培养基在丢弃前一定要经过消毒处理，以免污染环境D．为防止杂菌污染，还可以向培养基中添加适量抗生素【答案】B【分析】分析表格可知，该培养基中加入了显色剂，属于鉴别培养基，该培养基中的碳源有蔗糖、乳糖和蛋白胨，蛋白胨还可提供氮源，在配制培养基时应先调节pH，再灭菌后倒平板，若先灭菌，后调PH，可能在调PH的过程中再次引发杂菌污染。
微生物实验—三平板分离技术1
实验三微生物分离纯化技术一、目的要求掌握浇注平板法、平板涂抹法和平板划线法分离微生物的基本原理和具体操作二、实验材料1、菌种2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基3、试剂和仪器：无菌水、无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、接种环、酒精灯、火柴、标签纸、水浴锅2人一组，每人分别用三种方法操作三个培养皿三、实验原理平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
浇注平板法和涂布平板法是两种最常用的菌种分离纯化方法，它们不仅可用于分离纯化，还可用于计数等。
浇注平板法是将待分离的试样用生理盐水等稀释液作梯度系列稀释后，取其中一合适稀释度的少量菌悬液加至无菌培养皿中，立即倒入融化的固体培养基，经充分混匀后，置室温下培养。
最后可从其表面和内层出现的许多单菌落中选取典型代表，将其转移至斜面培养后保存，此即为初步分离的纯种。
涂布平板法是指取少量梯度稀释菌悬液，置于已凝固的无菌平板培养基表面，然后用无菌的涂布棒把菌液均匀地徒步在装个平板表面，经培养后，在平板培养基表面会形成多个独立分布的单菌落，然后挑取典型的代表移接至斜面，经培养后保存。
四、实验过程（1）稀释平板法A 每组取培养皿2只，即每个同学做1只。
先在无菌培养皿底部贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。
B 另取一吸管，以无菌操作法吸取10-3或10-4稀释液0.2mL，加在无菌培养皿的一边；C 取已熔化的在水浴锅中保温45－50 ℃左右的培养基，分别倒入上述培养皿中（见图－2），轻轻转动培养皿，使菌液、培养基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于37 ℃恒温培养。
高中生物新人教版选择性必修3微生物的选择培养和计数(49张)课件
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第1章 发酵工程
8
[提醒] 显微镜直接计数法统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。
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第1章 发酵工程
9
四、实验设计
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第1章 发酵工程
10
(1)筛选分解尿素的细菌的培养基以尿素为唯一氮源且为固体培养基。 (√ )
(2)利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际 数。( × ) (3)统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行 统计。( × )
(2)在培养基上进行划线操作时，操作的第一步及________之前都要灼烧 接种环。在第二次及以后的划线，总是从上一次划线的________开始。 同时注意最后一区(图甲中5区)的划线与第一区(图甲中1区)__________。
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第1章 发酵工程
21
(3) 接 种 过 程 的 所 有 操 作 一 定 要 在 火 焰 附 近 进 行 的 原 因 是 _____________________________________________________________。
点
以得到单菌落
接种工具
接种环
涂布器
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第1章 发酵工程
15
比较项目 单菌落 的获得
不 用途
同 点
操作难 易程度
平板划线法
稀释涂布平板法
单菌落从最后划线的区域 只有稀释度合适，才能得到单
挑取
菌落
分离纯化菌种，获得单菌 ①分离纯化菌种，获得单菌落；
落
②用于计数
操作较简便，细菌的数目 操作比较复杂，需将菌液进行
人教(2019)生物选择性必修三(学案+练习)：微生物的选择培养和计数
人教(2019)生物选择性必修三(学案+练习)微生物的选择培养和计数1．微生物的选择培养(1)选择培养基：将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
(2)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释后，将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。
①系列稀释操作系列稀释：移液管需要经过灭菌。
操作时，试管口和移液管应离火焰1～2 cm 。
操作过程如下：②涂布平板操作 序号图示 操作 1取0.1 mL 菌液，滴加到培养基表面2将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 3将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧，待酒精燃尽后，冷却8～10 s 4用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
涂布时可转动培养皿，使菌液涂布均匀 ③培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入℃的恒温培养箱中培养1～2 d 。
2．微生物的数量测定(1)稀释涂布平板法①计数原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计数标准：为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。
③计数方法：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。
在同一稀释度下，至少应对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
④统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计结果一般用菌落数表示。
(2)显微镜直接计数法①计数原理：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。
②优点：是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。
③缺点：统计的结果一般是死菌数和活菌数的总和。
3．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数。
(×) 2．培养分解尿素的细菌，培养基的pH会增大。
第一章 第二节 第1课时 目标微生物的分离和纯化
判断正误
(1)采用划线的方法接种时，每划一条线前都要用接种环蘸取菌液( × ) (2)多次连续平行划线时，接种环已灭菌，整个划线过程中不再灭菌( × ) (3)用浸泡在75%酒精中的涂布器直接涂布( × ) (4)与平板划线法相比，稀释涂布平板法更容易得到单菌落( √ )
核心探讨
突破重难 强化素养
D.图乙中连续划线的起点是上一次划线的末端(除第一次划线外)
解析 平板划线法中多次划线的目的是降低菌种浓度，经过连续划线才 有可能得到由单一的细胞繁殖而成的菌落，这种菌落才符合要求，C错 误。
二、活动：接种、培养并分离酵母菌
教材梳理
预习新知 夯实基础
1.目的要求
(1)用 平板划线 法或稀释涂布平板法接种酵母菌。
③多次连续平行划线：划线分 3～4 次进行。将培养皿旋转一定角度后， 不需再次蘸取菌种，只需在上一次划线的 末端区域 直接开始划线即可。 (2)培养结果 经过培养，在划线的 尾部 就能得到单菌落。 3.稀释涂布平板法 (1)涂布方法 先将菌液进行 梯度稀释，并在培养皿侧面或底面做好标记后，将稀释度 不同菌液各取 0.1 mL ，加在固体培养基表面，然后用涂布器将菌液均匀 地涂布在培养基平面上进行培养。 (2)涂布结果 在稀释度适当的固体培养基表面能得到单菌落。
第1课时 目标微生物的分离 和纯化
学习目标 1.概述分离和纯化微生物的平板划线法和稀释涂布平板法。 2.尝试分离和纯化酵母菌。
素养要求
1.生命观念：认识平板划线法和稀释涂布平板法是分离 和纯化微生物的重要方法。
2.科学探究：学会平板划线法和稀释涂布平板法。
内容索引
一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的 分离和纯化
4.判断液体培养基中接种酵母菌成功的依据是什么？ 提示 和对照组相比，培养基变浑浊。 5.平板倒置的目的是什么？ 提示 防止水分过快挥发，防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
常用培养基制备灭菌与消毒
分生孢子丝
气生菌丝 琼脂表 面 基内菌丝
The cross section of an actinomycete colony showing the substrate mycelium（基内菌丝） and aerial mycelium （气 生菌丝）with chains of conidiospores（分生孢子）
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝 分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生 成串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、 弯曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。 孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等 等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定 的重要依据。 放线菌的菌落早期绒状同细 菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈 粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验 日期。
2、划线方法
稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
微生物培养技术
1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种 将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培
养箱 中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃
冰箱中
查氏合成培养基
查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的 培养基,其配方如下：
NaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl 0.5g, MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖 30g, H2O 1000ml,pH自然
麦芽汁培养基
用来培养酵母菌,干麦芽粉加4倍水,在5060℃保温糖化3-4小时，用碘液试验检查至 糖化完全为止,调整糖液浓度,煮沸后，过滤， 调pH为6.0。
有二层小梗
青霉
青霉的形态结构 A单轮型 B非对称型 C对称二轮型
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平板划线法与稀释涂布平板法的区别
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平板划线法与稀释涂布平板法的区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他
形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划
线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
用途：一般多用于从菌种的纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成
这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成
均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落
就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布
于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算
出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般
用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染
程度的检验。
用途：一般多用于筛选菌株。一般用于平板培养基的回收率计数。
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度大的话，长不
出单菌落。