博士生基因工程实验技术试题

浙江大学研究生考试用纸

课程名称：基因工程实验技术

考试时间：2008年1月16日成绩:

学号: 姓名: __________________

一、名词解释(24分，每题3分)

1.Cosmid(粘粒）

2.RT-PCR

3.Klenow片段

4.AFLP

5.IPTG诱导

6.启动子

7.转基因技术

8.报告基因（reporter gene）

二、简答题（36分，每题3分）

1.RNA 琼脂糖凝胶电泳与DNA琼脂糖凝胶电泳相比有什么不同？

2.在用碱法提取质粒DNA时，溶液Ⅲ的作用是什么？

3.外源DNA片段与经限制性内切酶切割后的质粒载体连接时，如何防止质粒的自身

连接？

4.十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)在核酸提取中的作用及原理是什么？

5.为什么DNA溶液加了2倍体积的无水乙醇后仍无法使DNA沉淀？

6.如何检测DNA样品的纯度和浓度？

7.以下为DNA模板部分序列：

5’ GACATCTTGAACTAGCTAGAC…AGTTGTAAGAGCATAGAAGAG…GGAGTCGCAGACACTCGTGAG 3’3' CTGTAGAACTTGATCGATCTG….TCAACATT CTCGTA TCTTC T C…CCTCAGCGTCTGTGAGCACTC 5’请判断以下哪二条DNA片段最合适作为PCR 反应的一对引物？说明理由。

(1). 5’GACATCTTGAACTAGCTAGAC 3’(2 ). 3’ CTGTAGAACTTGA TCGATCTG 5’

(3) 5’ AGTTGTAAGAGCA TAGAAGAG 3’(4 ). 3’ TCAACATT CTCGTATCTTCTC 5’

(5) 5’ GGAGTCGCAGACACTCGTGAG 3’(6 ). 3’ CCTCAGCGTCTGTGAGCACTC 5’

8.农杆菌Ti质粒的各功能区及其在转基因过程中所起的作用。

9.基因枪介导转化法的优缺点。

10.举一例说明营养标记基因筛选转化子的作用原理及其优点。

11.镍离子柱子纯化带6×His的目的蛋白的原理是什么？

12.GST融合表达蛋白的纯化原理

三、判断题（20分，每小题2分。正确的打“√” ; 错误的打“X”并说明理由）

1.提取质粒DNA时，常用氯仿/苯酚来破碎细胞（）

2.Southern杂交实验中，在DNA转移前凝胶用0.2mol/L HCl处理使DNA断裂。

（）

3.T4 多核苷酸激酶可用于DNA 3’端的标记（）

4.利用X-gal和麦康凯进行重组质粒的筛选是由于β-半乳糖苷酶能分解乳糖，产生乳

酸，使pH下降。（）

5.SDS覆盖于蛋白质表面，把蛋白质原来的电荷封闭，并使蛋白质表面带正电荷，从

而使蛋白质在电泳时向负极移动。（）

6.Southern 杂交实验中，DNA转移如用尼龙膜则可用0.4mol/L 的NaOH代替20XSSC

作为转移液。（）

7.基因的信号肽整体上往往是亲水性的，没有毒性，在基因表达时不应除去。

（）

8.Western blot时，根据使用的第一抗体选择二抗，如第一抗体为兔抗体，则可使用羊

抗鼠二抗，若为鼠抗体，则可使用羊抗兔二抗。（）

9.所有的植物转基因都必须依赖植物组织培养。（）

10.转化了NPT II基因的植株必须用卡那霉素（Kanamycin）来筛选。

四、论述题（20分）

请结合本人的专业和研究实际，设计一个分子生物学方面研究的课题计划。在该

计划中请简要说明研究目的与意义（5分）、研究内容与步骤（8分）及预期结果（2分），同时简要说明在研究过程中可能遇到的最主要的技术难题或取得研究成功的关

键因素（5分）。