生物化学实验期末试题及答案
1. 电泳时，醋酸纤维薄膜点样的一端靠近哪一电极？为什么？
答：点样的一端负极。因为缓冲液的PH8.6，而血清蛋白的等电点PI小于PH8.6，故在PH8.6缓冲液中，各蛋白质带负电，所以在电场中，各蛋白质分子从负极向正极泳动。
2. 用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照组的意义是什么？
答：起校正作用：排除实验中其他因素对实验的影响，减小误差。
空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度
但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响
3. 简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳的原理
答：血清中各种蛋白质分子在电场中向与其电性相反的电极方向泳动的现象称为电泳。由于各种蛋白质分子等电点不同，带电荷不同，以及分子大小差异，所以在电场中泳动的速度不同，从而被分离。
4. 何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么?
答：Rf为比移值，Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。可鉴定糖的种类
它与温度，大气压强，薄层板的规格，扩张剂的组成，糖的种类有关
5. 什么是盐析？盐析会引起蛋白质变性吗?一般我们用什么试剂做盐析的实验?
答; 盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性。一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析
6. 简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？
答：还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度计 测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度
7. 依据我们所做的实验沉淀和变性有何关系？用实验事实说明。
答：沉淀的蛋白质不一定变性，如盐析实验先沉淀，后加水，沉淀消失
变性的蛋白质不一定沉淀，如实验中，当卵清蛋白变性后加入氢氧化钠溶液，不产生沉淀。，
8. 简述薄层层析法分离糖类原理？
答：薄层层析的实质就是吸附层析，也就是在铺有吸附剂的薄层上，经过反复地被吸附剂吸附以及被扩展剂扩展的过程。而吸附剂对不同的物质的吸附力不同，从而使糖在薄层上的泳动速度不同达到分离的目的
9. 在蛋白质显色实验的黄色反应中，反应原理是什么？实验结果为什么会出现深浅不一的黄色？
答：含有苯环的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黄色的物质，而且不同蛋白质中所含
的苯环数量不同，造成与试剂反应的程度不同，因此呈现颜色深浅不一，其次是所用试剂浓硝酸量不同，并且材料本身的颜色对实验也有干扰。
10. RNA水解后的三大组分是什么？怎样各自验证的？
答：核糖，磷酸，嘌呤碱。 核糖+苔黒酚—Fe（浓HCI）绿色物；磷酸+钼酸铵——蓝色； 嘌呤碱+硝酸银——白色
11. 等电点的定义？在等电点时，蛋白质的溶解度为什么最低？
答：当溶液的ph达到一定时，蛋白质的正负电荷相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不想阳极移动，此时溶液的ph为该蛋白质的等电点。在等电点时，蛋白质在溶液中净电荷为零。蛋白质分子失去了电荷的排斥作用，因分子运动聚集而沉淀下来子
12. 鸡蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂，为什么？
答;因为蛋白质可与重金属离子汞、铅等结合成不溶于水的复合物。则鸡蛋清可以代替机体组织与重金属反应，从而减少汞、铅对机体的损害。
13. 离心管如何在天平上平衡？操作离心机时应注意什么？
答：把放在小烧杯中的离心管（包括盖子）和管套放在平衡的天平上，用胶头滴管取离心液调平。注意点：配平，等重的试管放在对称的位置；启动时要先盖好盖子，停止后才能开盖；有不正常的声音时应按STOP键
14. 血清醋酸纤维薄膜电泳可将小牛血清蛋白质依次分为哪几条区带？那条带泳动最快？影响蛋白质泳动速度的因素有哪些？
答:从正到负看：血清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、β-球蛋白、r-球蛋白；其中血清清蛋白点最快。影响因素：蛋白质所带电荷数，分子大小与形状以及缓冲液浓度
15. 简述橘皮中提取果胶的原理？
答: 原果胶是果胶在植物中的主要形式，而其不溶于水。故利用酸将原果胶水解为水溶性果胶并浓缩，然后利用果胶不溶于乙醇的特点，使其沉淀出来。
16. 蛋白质含量测定的常用方法有哪些？
答：凯氏定氮法，双缩脲法，folin-酚试剂法，紫外分光光度法，考马斯亮蓝染色法。
17. 如何证明提取到的某核酸是DNA还是RNA？
答:先用碱液处理某核酸，取一定量的水解液加入几滴苔黑酚试剂和一定量的三氧化铁浓盐酸溶液，水浴加热，若出现绿色，则为RNA反之，则为DNA。
18. 有5种已知的糖样品，分别为葡萄糖，果糖，麦芽糖，半乳糖，现要测定一未知单糖为这5种糖中的哪一种，该如何测定，设计实验？
答：采用薄层层析法。点样：去一块薄层板，在距离底边1.5厘米左右画一条直线，在直线中连取6个点，分别标上6种糖名，然后点样。层析：将点样的薄层板放入层析缸中，让有样品的一端接近层析液，进行层析。染色：取出薄层板，放入染色
剂中几秒，显色：再放入烘箱中，然后计算各比移值，就知道未知糖是哪一种
19. 现有一未知蛋白，如何确定其等电点？
答：取几支试管，用醋酸与醋酸钠配制成各种不同PH的缓冲液，然后分别向各试管中加入等量未知蛋白，沉淀出现最多的缓冲液ph，则为该蛋白质的等电点。
20. 某蛋白质中有3种蛋白质组分，蛋白质1的PI值为8.0，蛋白质2的PI值为7.5，蛋白质3的PI值为6.0，请选用合适的方法把这三种蛋白质分离开？
答：醋酸纤维薄膜电泳：预处理，用缓冲液将薄膜泡20min
点样：用盖玻片蘸取样品于薄膜粗糙面上
电泳：点样面向下，靠近负极在110v，电泳30min
显色：将膜条放入染液中浸泡几分钟。然后漂洗几次。
然后比较各区段到点样处的距离，由远到近，依次为;蛋白质3，蛋白质2，蛋白质1.
21. 在PH小于等电点的溶液中，蛋白质带什么电荷？为什么？
答：小于等电点时，带正点，小于等电点时，说明溶液中氢离子较多，蛋白质吸附氢离子，也就带正电荷。
22. 什么是标准曲线法？举例说明在我们实验中的标准曲线是如何绘制的？
答：标准曲线：是直接用标准液制作的曲线是用来表述被测物质的的浓度与分析仪器响应值之间的关系。
绘制方法;先配置一系列浓度由小到大的标准溶液，测出吸光度，以各管的吸光度无为纵坐标浓度为横坐标，绘制出曲线图。
23. 从不同生物钟提取出来的唾液淀粉酶，如何衡量其酶活力的高低
答：取相同规格的试管若干，向各试管中加入等量的淀粉溶液，并将从不同生物中提取出来的唾液淀粉酶等量的加入各试管中，在37水浴锅中保温一段时间，然后取出，向各试管中加入几滴碘化钾-碘溶液，然后观察试管中溶液颜色的变化。颜色由深到浅，可知各酶的活力由低到高。