免疫组化指标在卵巢支持—间质细胞瘤与卵巢子宫内膜样腺癌鉴别诊断中的意义

免疫组化指标在卵巢支持—间质细胞瘤与卵巢子宫内膜样腺癌鉴别
诊断中的意义
摘要目的探讨免疫组化指标在卵巢肿瘤诊断中的应用价值。

方法选取病理诊断为支持-间质细胞瘤、卵巢子宫内膜样腺癌的石蜡标本各44例，分别为实验组和对照组，进行常规石蜡制片，用肌酸激酶（CK）、波形蛋白（Vimentin）、CD99、抑制素-α（Inhibin-α）进行免疫组化染色并对染色结果进行镜下观察分析。

结果CK、Inhibin-α及CD99在两种不同肿瘤细胞中的表达率差异具有统计学意义（P＜0.05），而Vimentin表达率差异无统计学意义（P>0.05）。

结论CD99、CK、Inhibin-α在卵巢支持-间质细胞瘤和卵巢子宫内膜样腺癌的诊断及鉴别诊断中具有重要意义和临床应用价值，而Vimentin意义不大。

关键词CD99；肌酸激酶；免疫组化
支持细胞-间质细胞瘤又称为卵巢睾丸母细胞瘤或者卵巢男性母细胞瘤，属于一类较为罕见的卵巢间质细胞肿瘤，根据肿瘤细胞类型可以分为纯支持细胞肿瘤、纯间质细胞肿瘤和支持细胞-间质细胞肿瘤三种。

卵巢子宫内膜样腺癌是发生于卵巢的与子宫体的子宫内膜样癌相似的恶性肿瘤。

在临床的病理分析中有少数卵巢子宫内膜样癌出现局灶或广泛的、与支持-间质细胞瘤类似的区域，表现为小的、分化良好的、中空性的、实性的小管，或与性索类似的细胞索，容易造成诊断上的困难，特别是当肿瘤间质黄素化且患者有男性化表现时常易误诊为支持-间质细胞瘤，一旦出现误诊会延误治疗时间造成病情拖延。

单单靠普通HE染色进行病理诊断结果并不十分准确，对于有些不典型的病例应运用特定的敏感性高以及特异性强的免疫组化标记物来增加诊断及鉴别诊断的准确性，因此如何准确找到标记物对医疗工作者来说就是重中之重。

本实验旨在探讨CK、Vimentin、CD99、Inhibin-α在卵巢支持-间质细胞瘤与卵巢子宫内膜样腺癌诊断中的应用价值及鉴别诊断意义，现报告如下。

1 材料与方法
1. 1 材料选取山东省枣庄市立医院病理科2008年1月～2011年12月常规石蜡切片病理诊断为支持-间质细胞瘤的石蜡标本44例，作为实验组，选取病理诊断为子宫内膜样腺癌的石蜡标本44例，作为对照组，进行常规石蜡制片和免疫组织化学染色。

将石蜡标本冷却处理后切片，每个标本分别切取用于常规HE染色的片子一张和用于免疫组化染色的片子八张以备用。

两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1. 2 方法①常规制片：第一步是烤片：将用于HE染色的玻璃片插入至染色架中于80℃烘箱0.5 h进行烤片使石蜡溶化组织牢固贴于载玻片上；第二步是脱蜡：0.5 h后从烘箱取出，为了避免石蜡在室温中再次凝固影响脱蜡效果必须迅速将染色架放入二甲苯中进行脱蜡5 min共三缸；第三步是水化：将脱蜡后的组织依次浸入浓度梯度分别为100%、95%、85%、75%和50%的乙醇，最后用
水洗去残余乙醇；第四步是苏木染色：先用哈氏苏木素染色10 min，清洗洗去残余苏木染料，将染色架放入浓度为0.4%盐酸酒精中进行分化，除去胞浆中的苏木染色和细胞核上过多的苏木染料，迅速入水洗去盐酸以防过度脱色，流水中冲洗10 min进行返蓝处理，然后入伊红浸泡10 s，75%乙醇浸泡10 s使伊红均匀着色；第五步是脱水：依次进入85%、95%、95%、100%、100%的乙醇中各3 min；第六步是透明：最后浸泡三缸二甲苯透明；第七步是中性树脂封片。

②免疫组化：第一步烤片：将常规石蜡切片插入至染色架中，放入温度为60℃的烘箱40 min；第二步脱蜡：40 min后从烘箱取出，将染色架放入三缸二甲苯中进行脱蜡各5 min；第三步水化：将脱蜡后的组织依次浸入与常规制片水化步骤相同浓度梯度的乙醇，最后用水洗去残余乙醇，最后用蒸馏水洗涤3次；第四步抗原修复：将切片转移小盒内并放入柠檬酸三钠溶液，煮沸水浴99℃10 min，保温10 min；第五步加入一抗：自然冷却后用TBS溶液洗涤3～5次，将载玻片上组织周围的水分擦干后放入湿盒内，加入第一抗体，要注意抗体的加入量应该比组织面积稍大一点，目的是防止组织干燥产生非特异性染色，盖上湿盒盖子并孵育1 h；第六步加入二抗：1 h后用TBS溶液沖洗掉组织切片上的第一抗体，然后继续用TBS洗涤3次，将组织周围水分擦干后加入第二抗体并孵育40 min；第七步DAB显色：用TBS冲洗掉第二抗体，继续洗涤3次，将组织周围擦干后加入DAB显色剂，肉眼结合镜下检查控制显色；第八步观察：对比观察各种免疫组化指标在卵巢支持-间质细胞瘤和卵巢子宫内膜样腺癌细胞中的染色情况并记录阳性表达率。

1. 3 统计学方法采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。

计量资料以均数±标准差（x-±s）表示，采用t检验；计数资料以率（%）表示，采用χ2检验。

P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果
实验组卵巢支持-间质细胞瘤中CD99表达阳性36例，占81.8%，阴性8例，占18.2%；CK表达阳性25例，占56.8%，阴性19例，占43.2%；Inhibin-α表达阳性26例，占59.1%，阴性18例，占40.9%；Vimentin表达阳性42例，占95.5%，阴性2例，占4.5%。

对照组卵巢子宫内膜样腺癌细胞中CD99、Inhibin-α表达均呈阴性，CK均呈弥漫胞浆阳性表达，Vimentin表达阳性38例，占86.4%，阴性6例，占13.6%。

结果显示CK、Inhibin-α及CD99在两种不同肿瘤细胞中的表达率比较差异具有统计学意义（P＜0.05），而Vimentin 表达率差异无统计学意义（P>0.05）。

3 讨论
本次试验研究选取4种常见免疫组化指标，对符合诊断标准的病理切片进行免疫组化染色，然后对染色结果进行镜下观察和记录，统计和分析各指标的阳性率并对常见的与支持-间质细胞瘤容易在形态学上相互混淆的内膜样腺癌的相同免疫组化指标的表达情况进行对比，明确这些免疫指标在两种不同肿瘤诊断及鉴别诊断中的意义。

支持-间质细胞瘤即卵巢支持-间质细胞瘤，最早被命名为男性母细胞瘤，是一種显示向睾丸方向分化的性索间质细胞瘤，瘤细胞的细胞学特征和生长方式与睾丸支持细胞和睾丸间质细胞相类似[1]。

其发病率不超过所有卵巢肿瘤的0.5%，而且大多数是良性，局限于单侧。

在显微镜下肿
瘤组织结构较为复杂，可见不同分化程度的支持细胞及间质细胞。

卵巢子宫内膜样腺癌在临床上较为罕见，属于卵巢上皮性肿瘤，其组织学和子宫内膜癌相类似，大约占卵巢恶性肿瘤的3.1%～24.4%，且大部分合并子宫内膜癌。

在临床上及病理学上均很难鉴别原发癌或转移癌。

卵巢子宫内膜样腺癌主要包括以下几种分型：①单纯型卵巢子宫内膜样腺癌，肿瘤细胞形态可为单层立方或柱状或者为复层，细胞核深染，多呈圆形或卵圆形，核染色质较粗，分布不均匀，核膜增厚不规则，可见核分裂象，胞质丰富、嗜碱性，高分化的卵巢子宫内膜样腺癌间质细胞为棱形，胞质丰富，核多为圆形，低分化的卵巢子宫内膜样腺癌间质细胞数量变少，偶可在肿瘤间质中见到砂粒体；②复合型子宫内膜样腺癌，在区域内可见鳞状上皮化生，也可以称为角化腺癌或腺棘癌，有时也可见灶性腺鳞癌成分；③混合型子宫内膜样腺癌，包括：纯型子宫内膜样癌可同时混合黏液性癌、浆液性癌、未分化癌、透明细胞癌的一种或几种癌成分，子宫内膜样腺癌伴有梭形细胞，梭形细胞成分达到1/3以上可诊断为此种类型，可见呈阅兵样或编织状排列的梭形细胞，类似于神经鞘瘤或者纤维瘤的病理图像；④类似性索间质肿瘤的卵巢子宫内膜样腺癌，对于低分化的卵巢子宫内膜样癌，由于肿瘤细胞体积较小而均匀很难确定是否有核沟，肿瘤细胞可以呈现出酷似支持细胞肿瘤的条索、小梁或小管状结构，若是伴有微腺腔，类似于粘层细胞的call-Exner小体，如果仔细寻找常可发现纯型子宫内膜样腺癌；⑤卵巢嗜酸细胞型子宫内膜样腺癌，肿瘤细胞嗜酸性变，细胞肥大呈柱状或多角形，细胞核位于中央或偏位，核仁明显，胞浆丰富嗜酸性，核分裂象较多见。

有研究证实子宫内膜腺癌与高浓度雌激素的刺激有关。

卵巢子宫内膜样腺癌是否与子宫内膜癌相同，增生和恶变也受雌激素影响，对于卵巢子宫内膜样腺癌中雌激素受体的表达情况研究较少。

在本次实验研究中免疫组化指标CD99、CK、Inhibin-α在卵巢支持-间质细胞瘤和卵巢子宫内膜样腺癌细胞的表达率差异具有统计学意义（P＜0.05），而Vimentin在以上两种肿瘤细胞的表达率差异无统计学意义（P>0.05），换而言之，从应用免疫组化鉴定两种细胞的来源上CD99、CK、Inhibin-α可以作为免疫指标，在两种不同肿瘤诊断及鉴别诊断中具有重要意义和潜在应用价值。

通过以上讨论和分析，利用免疫组化方法通过测定免疫指标的表达情况，对鉴别和诊断卵巢支持-间质细胞瘤和卵巢子宫内膜样腺癌具有重要的临床应用价值。

之后可以通过增加符合诊断标准的标本数量来进行大样本的研究，以取得更加准确并让人满意的结果，借此在临床上更好的鉴别这两种卵巢恶性肿瘤，以降低临床误诊率，提高患者的生存质量，改善预后情况。

参考文献
[1] 庞晓燕，张颐.卵巢支持-间质细胞瘤的临床分析.中国现代医学杂志，2009，19（19）：2968-2971.。